药物分析第八章课件.ppt

1、包括包括紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法无菌实验器材无菌实验器材无菌环境无菌环境无菌操作无菌操作1 1、无菌环境、无菌环境 （1 1）定义）定义用各种方法控制实验空间内微生物数量，用各种方法控制实验空间内微生物数量，使其达到无菌要求。使其达到无菌要求。（2 2）净化工作台净化工作台包括包括无菌实验室无菌实验室无菌柜无菌柜2 2、无菌实验器材、无菌实验器材包括包括灭菌器材灭菌器材消毒器材消毒器材玻璃器皿、接种玻璃器皿、接种针、注射器、试针、注射器、试管、培养基等管、培养基等凳子。试管架、凳子。试管架、天平、工作台、天平、工作台、容器、工作人容器、工作人员手等员手等一、概述一、概述1 1、概念

2、、概念指检查药典要求无菌药品、医疗器具、指检查药典要求无菌药品、医疗器具、原料、辅料、及其它品种是否无菌的一原料、辅料、及其它品种是否无菌的一种方法。种方法。2 2、检查意义检查意义是药品安全性检查项目之一是药品安全性检查项目之一 ，保证人，保证人民用药安全民用药安全 无菌检查无菌检查 包括包括紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法烧伤或严重创伤的软烧伤或严重创伤的软膏剂与乳膏剂膏剂与乳膏剂植入剂植入剂注射剂注射剂眼用制剂眼用制剂烧伤或创伤气雾剂、烧伤或创伤气雾剂、喷雾剂、散剂喷雾剂、散剂3 3、范围、范围不得检出细菌、放线菌、霉菌及酵母菌等活菌。不得检出细菌、放线菌、霉菌及酵母菌等活菌。包括包

3、括需氧菌、厌氧菌培养基需氧菌、厌氧菌培养基（硫乙醇酸盐培养基）（硫乙醇酸盐培养基）选择性培养基选择性培养基一、检查前的准备工作一、检查前的准备工作（一）培养基（一）培养基真菌培养基真菌培养基（一）相关规定（一）相关规定1.1.检验数量检验数量 一次试验所用供试品最小包一次试验所用供试品最小包装容器的数量装容器的数量2 2。检验量。检验量 一次检验所用供试品总量一次检验所用供试品总量三、供试品的检查三、供试品的检查 3 3、阳性对照、阳性对照目的：是检查阳性菌在加入供试品的培目的：是检查阳性菌在加入供试品的培养基中能否生长养基中能否生长,以验证供试品有无抑菌以验证供试品有无抑菌活性物质和试验条件

4、是否符合要求。活性物质和试验条件是否符合要求。4 4、阴性对照、阴性对照 不得有菌生长不得有菌生长包括包括直接接种法直接接种法薄膜过滤法薄膜过滤法（二）检查方法（二）检查方法（一）直接接种法（一）直接接种法1 1、供试品制备供试品制备液体试样液体试样固体试样固体试样青霉素类药青霉素类药放射性药试样放射性药试样2 2、检查操作、检查操作 取供试品接种取供试品接种需氧菌、厌氧菌培养基需氧菌、厌氧菌培养基6 6管管阳性对照：金黄色葡萄球菌对照用菌液阳性对照：金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml1ml另供试品接种另供试品接种真菌培养基真菌培养基5 5管管3030353520202525培培养养7 7天天观察

5、记录观察记录：是否有菌生长：是否有菌生长阳性对照管在阳性对照管在2424小时內应有菌生长小时內应有菌生长（二）薄膜过滤法（二）薄膜过滤法1 1、滤器准备滤器准备全封闭过滤系统全封闭过滤系统开放式薄膜过滤器开放式薄膜过滤器 2 2、过滤操作、过滤操作 有抗菌供试品有抗菌供试品0.90.9NaClNaCl 薄膜过滤薄膜过滤无抗菌供试品无抗菌供试品薄膜过滤薄膜过滤阳性对照管：阳性对照管：细菌细菌：30303535培养培养242448h48h真菌真菌：20202525培养培养242472h72h有菌有菌生长生长四、无菌检查结果判定四、无菌检查结果判定1 1、若供试品均、若供试品均澄清澄清或虽或虽显混浊

6、，显混浊，但经证明无菌生长但经证明无菌生长阳性对照管显混浊有菌生长，阴性对照管澄清阳性对照管显混浊有菌生长，阴性对照管澄清符合规定符合规定2.2.如供试品中任何如供试品中任何1 1管显混浊管显混浊并并确证有菌生长确证有菌生长不符合规定不符合规定第二节第二节 药品的微生物限度检查药品的微生物限度检查 一、概述一、概述 1 1、定义、定义系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法。染程度的一种检查方法。2 2、检查意义、检查意义是保证药品有效性、安全性，保证药品质量的是保证药品有效性、安全性，保证药品质量的重要错施。重要错施。3 3、范

7、围、范围包括常用口服制剂与一般外用制剂及其原、辅料包括常用口服制剂与一般外用制剂及其原、辅料。4 4、检查内容、检查内容（1 1）染菌量检查）染菌量检查:细菌数、霉菌数及酵母菌数测细菌数、霉菌数及酵母菌数测定定（2 2）控制菌检查：大肠杆菌、沙门菌、金黄色控制菌检查：大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌葡萄球菌及铜绿假单胞菌 5 5、限度标准、限度标准 不得捡出控制菌不得捡出控制菌 二、供试液制备二、供试液制备 1 1、取样、取样随机抽样，一般为检验量的随机抽样，一般为检验量的3 3倍量。倍量。每批供试品检验量一般为每批供试品检验量一般为10g10g或或10ml10ml2 2、方法、

8、方法 ：稀释处理：稀释处理 三、检查法三、检查法 1 1、细菌、霉菌及酵母菌计数、细菌、霉菌及酵母菌计数通常以每通常以每g g或每或每mlml供试药品作为计量单位供试药品作为计量单位 计数方法计数方法 ：平皿菌落计数法：平皿菌落计数法取系列稀释的供试品接种在适宜的琼脂平板取系列稀释的供试品接种在适宜的琼脂平板培养基上，以适宜的温度进行培养，观察肉培养基上，以适宜的温度进行培养，观察肉眼可见的细菌霉菌及酵母菌菌落数眼可见的细菌霉菌及酵母菌菌落数 2 2、控制菌检查、控制菌检查（1 1）大肠杆菌检查）大肠杆菌检查 药品中检出大肠杆菌表明该药受粪便污染，药品中检出大肠杆菌表明该药受粪便污染，服用后有

9、可能被肠道致病菌或寄生虫卵等病服用后有可能被肠道致病菌或寄生虫卵等病原体感染原体感染 原理原理 利用目标菌所共有的限定酶作用底物利用目标菌所共有的限定酶作用底物产生的分解产物具有颜色或荧光，以此作为指示系产生的分解产物具有颜色或荧光，以此作为指示系统来鉴定目标菌统来鉴定目标菌 左左:供试品管供试品管 中中:阳性对照管阳性对照管 右右:MUG:MUG培养基本底对照管培养基本底对照管3 3、结果判断、结果判断 （2 2）铜绿假单胞菌检查（绿脓杆菌）铜绿假单胞菌检查（绿脓杆菌）常见化脓性感染菌，可造成眼角膜溃疡、失常见化脓性感染菌，可造成眼角膜溃疡、失 明，引起败血症等严重疾患明，引起败血症等严重疾

10、患 检验程序检验程序增菌增菌分离分离纯培养纯培养革兰染色镜检革兰染色镜检生化生化实验实验 （3 3）金黄色葡萄球菌检查（绿脓杆菌）金黄色葡萄球菌检查（绿脓杆菌）致病力最强，能引起局部及全身化脓性炎症，致病力最强，能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症严重时可导致败血症 所以抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍所以抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要地位，且短期内化学分析法不可能取占有重要地位，且短期内化学分析法不可能取代微生物检定法。代微生物检定法。毫克单位/7984.14571000258.5813)(1000242212739211273921SOHONHCONHC抗生素微

11、生物检定方法比较：抗生素微生物检定方法比较：3.13.1管碟法的操作步骤管碟法的操作步骤注意标准品、供试品高、低剂量注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序，保证滴加速度和加溶液滴加顺序，保证滴加速度和加量的均匀一致。每组双碟至少为量的均匀一致。每组双碟至少为8 8个，一般为个，一般为1010个。个。在每个双碟的在每个双碟的4 4个钢管中，对角个钢管中，对角的两个钢管分别滴加高浓度和低浓的两个钢管分别滴加高浓度和低浓度的标准品溶液，其余两个对角位度的标准品溶液，其余两个对角位置的钢管分别滴加相应的高、低浓置的钢管分别滴加相应的高、低浓度的供试品溶液。度的供试品溶液。0 0个（个（cp2000)cp2000)1 1个（个（cp2005cp2005）2222个（个（cp2010)cp2010)比浊法比浊法 化学药物化学药物 生化药物生化药物 生物药物生物药物 生物技术药物生物技术药物 生物制品生物制品 中药中药生化药物：动植物及微生物提取、分离的天生化药物：动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生命基本物质然生物活性物质及半合成得到生命基本物质及其衍生物等。及其衍生物等。应用前景：方便临床应用；弥补某些药物的应用前景：方便临床应用；弥补某些药物的市场空缺；有利于临床治疗；有利于人体健市场空缺；有利于临床治疗；有利于人体健康，前景非常广阔。康，前景非常广阔。