第二十九章-疱疹病毒课件.ppt

1、四、微生物检验四、微生物检验 HSV HSV感染已有疗效显著的抗病毒治疗方法。感染已有疗效显著的抗病毒治疗方法。临床上迫切需要快速准确的诊断方法。临床上迫切需要快速准确的诊断方法。(一一)标本采集标本采集 一般采集病损皮肤粘膜的拭子。新鲜水一般采集病损皮肤粘膜的拭子。新鲜水 疱液含有高浓度的病毒，可用棉签吸取残疱液含有高浓度的病毒，可用棉签吸取残 存的水疱液后，用力擦拭病损部位的基底存的水疱液后，用力擦拭病损部位的基底 部，以采集感染的上皮细胞。部，以采集感染的上皮细胞。HSVHSV能在病毒能在病毒 运送液中存活运送液中存活2 23 3天。不得在天。不得在-20-20冻存。冻存。（二）标本直接

2、检查（二）标本直接检查 1.1.直接显微镜检直接显微镜检 查用荧光素标记查用荧光素标记 或酶标记单克隆抗体检测或酶标记单克隆抗体检测HSVHSV抗原。抗原。2.2.核酸检测核酸检测 也可采用也可采用DNADNA杂交或者杂交或者 PCRPCR法直接检测标本中的法直接检测标本中的HSVDNAHSVDNA，敏感性、敏感性、特异性高。特异性高。（三）病毒分离和鉴定（三）病毒分离和鉴定是最为敏感的方法，并且可对是最为敏感的方法，并且可对HSVHSV分离株分离株进行分型，能在许多培养细胞产生进行分型，能在许多培养细胞产生CPECPE。常用原代人胚细胞和人二倍体细胞分离常用原代人胚细胞和人二倍体细胞分离HS

3、VHSV。CPECPE的特点是，感染细胞肿大、变的特点是，感染细胞肿大、变圆，折光性强，有细胞融合，形成多核圆，折光性强，有细胞融合，形成多核巨细胞，巨细胞，CPECPE出现快而明显。可在接种出现快而明显。可在接种后后181824h24h出现出现CPECPE，病毒含量如在细胞，病毒含量如在细胞培养液中加地塞米松，可加快培养液中加地塞米松，可加快CPECPE的出的出现，增加现，增加CPECPE病灶的数量。病灶的数量。通常采用特异性的通常采用特异性的MoAbMoAb进行组化染色，进行组化染色，可进行鉴定和分型。也可用型特异性可进行鉴定和分型。也可用型特异性DNADNA探针进行的鉴定和分型。探针进行

4、的鉴定和分型。(四四)抗体检测抗体检测双份血清双份血清HSVHSV抗体阳转，可诊断抗体阳转，可诊断为原发感染，但无法区分为原发感染，但无法区分HSVHSV型别。型别。抗抗HSVIgMHSVIgM抗体的检测无法用于区抗体的检测无法用于区分原发感染和复发感染。复发感分原发感染和复发感染。复发感染时抗染时抗HSVIgMHSVIgM抗体也升高，单份抗体也升高，单份血清检出血清检出HSVIgGHSVIgG抗体表明个体曾抗体表明个体曾感染过感染过HSVHSV。常用的检测方法是常用的检测方法是ELISAELISA。微生物检验微生物检验临床标本主要有疱疹病损部位的临床标本主要有疱疹病损部位的涂片、皮肤刮取物、

5、水疱液、活涂片、皮肤刮取物、水疱液、活检组织和血清。主要通过病毒分检组织和血清。主要通过病毒分离、免疫荧光和原位杂交或者离、免疫荧光和原位杂交或者PCRPCR等检测技术，在患者的组织或者等检测技术，在患者的组织或者体液中证实体液中证实VZVVZV或者其成分的存在。或者其成分的存在。微生物检验微生物检验 病原学诊断方法包括直接检查、病原学诊断方法包括直接检查、病毒分离和鉴定以及血清学诊断。病毒分离和鉴定以及血清学诊断。（一）直接检查（一）直接检查 包括检测病毒颗粒、病毒包涵体包括检测病毒颗粒、病毒包涵体 或者抗原或者核酸。或者抗原或者核酸。1 1检测病毒颗粒检测病毒颗粒 可采用假复制方法可采用假

6、复制方法 对对HCMVHCMV先天性感染患儿的尿液和先天性感染患儿的尿液和 口腔标本进行电镜检查，敏感性口腔标本进行电镜检查，敏感性 为噬斑形成单位为噬斑形成单位/ml/ml，优点是快速，优点是快速 缺点是不敏感。缺点是不敏感。2 2检测病毒包涵体检测病毒包涵体 活检组织标活检组织标 本切片或者脱落细胞涂片，以本切片或者脱落细胞涂片，以 HEHE等常规染色，观察巨细胞以等常规染色，观察巨细胞以 及细胞核内嗜碱性包涵体。可及细胞核内嗜碱性包涵体。可 用于快速诊断，但敏感性较低。用于快速诊断，但敏感性较低。3 3检测病毒抗原检测病毒抗原 活检组织标本活检组织标本 切片、脱落细胞或者周围血白切片、脱

7、落细胞或者周围血白 细胞涂片、接种标本并培养数细胞涂片、接种标本并培养数 日的盖玻片细胞培养物。进行日的盖玻片细胞培养物。进行 免疫荧光染色，检测特异性抗免疫荧光染色，检测特异性抗 原。该法敏感特异快速，可用原。该法敏感特异快速，可用 于快速诊断。于快速诊断。4 4检测病毒核酸检测病毒核酸 用用PCRPCR法检测法检测 核酸。敏感性高，能检出活核酸。敏感性高，能检出活 动性感染和潜伏感染。动性感染和潜伏感染。(二二)病毒分离和鉴定病毒分离和鉴定是诊断最可靠的金标准。将标本接种人胚是诊断最可靠的金标准。将标本接种人胚成纤维细胞，观察成纤维细胞，观察4 46 6周，期间盲传周，期间盲传2 2次。次

8、。产生特征性的产生特征性的CPECPE，细胞肿胀变圆，形成巨，细胞肿胀变圆，形成巨大细胞，可作出初步诊断。经过大细胞，可作出初步诊断。经过MoAbMoAb免疫免疫染色作出最终鉴定。改良快速诊断法是培染色作出最终鉴定。改良快速诊断法是培养养24h24h后用荧光素标记的后用荧光素标记的MoAbMoAb直接检测表达直接检测表达的早期抗原，在接种后的早期抗原，在接种后24h24h即可检出。即可检出。(三三)抗体检测抗体检测 常用常用ELISAELISA检测特异性检测特异性IgGIgG和和IgMIgM抗体。抗体。(四四)结果分析结果分析1 1先天性感染的诊断先天性感染的诊断 在出生最初在出生最初 3 3

9、周内从新生儿尿液、呼吸道分泌周内从新生儿尿液、呼吸道分泌 物或者其他体液分离出物或者其他体液分离出HCMVHCMV是最是最 敏感和特异的确诊依据。敏感和特异的确诊依据。2 2血清学试验结果的分析血清学试验结果的分析 6 6个月个月 以上的患儿，母体抗体已经消失，以上的患儿，母体抗体已经消失，如果出现双份血清抗体阳转，可如果出现双份血清抗体阳转，可 作出原发感染的诊断，可诊断为作出原发感染的诊断，可诊断为 近期感染。近期感染。3 3免疫功能缺损个体免疫功能缺损个体HCMVHCMV感染检感染检 测结果的分析测结果的分析 检出检出HCMVHCMV提示提示 存在活动性感染，但不能确定存在活动性感染，但

10、不能确定 HCMVHCMV感染与疾病的相关性。感染与疾病的相关性。（五）评价（五）评价HCMVHCMV检测结果分析必须结合患者的临检测结果分析必须结合患者的临床评价，才能对床评价，才能对HCMVHCMV感染和疾病提供感染和疾病提供准确的诊断，及时进行对应的抗病毒准确的诊断，及时进行对应的抗病毒治疗。治疗。抗原分类抗原分类潜伏期抗原，为潜伏感染细胞所潜伏期抗原，为潜伏感染细胞所 合成，包括合成，包括EBVEBV核抗原核抗原(EBNA)(EBNA)和潜和潜 伏期膜蛋白伏期膜蛋白(LMP)(LMP)。这类抗原的表。这类抗原的表 达表明存在达表明存在EBVEBV基因组。基因组。早期抗原早期抗原(EA)

11、(EA)，属于病毒非结构蛋，属于病毒非结构蛋 白，其合成不依赖于病毒白，其合成不依赖于病毒DNADNA的复制。的复制。EAEA的表达显示开始病毒复制，是增的表达显示开始病毒复制，是增 殖标志。殖标志。晚期抗原晚期抗原(LA)(LA)，包括衣壳抗原，包括衣壳抗原(VCA)VCA)和包膜抗原和包膜抗原(MA)MA)。微生物检验微生物检验 病原学诊断方法包括直接检测病病原学诊断方法包括直接检测病 毒抗原或者核酸、病毒分离和鉴毒抗原或者核酸、病毒分离和鉴 定以及定以及抗体抗体检测。检测。(一一)直接检查直接检查 在病变组织中检测在病变组织中检测EBVEBV抗原或者抗原或者 核酸是核酸是EBVEBV感染

12、诊断的重要方法。感染诊断的重要方法。大部分病变组织中存在大部分病变组织中存在EBVEBV的核蛋的核蛋 白和膜蛋白等病毒产物以及白和膜蛋白等病毒产物以及EBVEBV基基 因组核酸。用核酸杂交和因组核酸。用核酸杂交和PCRPCR或者或者 RT-PCRRT-PCR可检出基因组核酸及其转录可检出基因组核酸及其转录 产物。产物。（二）病毒分离和鉴定（二）病毒分离和鉴定分离分离EBVEBV的标本可以是唾液、咽漱液的标本可以是唾液、咽漱液及血细胞等，咽漱液中分离率最高，及血细胞等，咽漱液中分离率最高，可达可达8080以上。将咽漱液接种人脐以上。将咽漱液接种人脐带血淋巴细胞，培养带血淋巴细胞，培养4 4周，如

13、果出现周，如果出现大量的转化淋巴细胞，则提示病毒大量的转化淋巴细胞，则提示病毒培养阳性，鉴定通过免疫荧光技术培养阳性，鉴定通过免疫荧光技术检测检测EBVEBV核抗原。核抗原。(三三)抗体检测抗体检测是最常用的诊断方法。由于不同病人是最常用的诊断方法。由于不同病人体内针对体内针对EBVEBV不同的抗原成分所产生的不同的抗原成分所产生的抗体的组成及水平均有一定的特征性，抗体的组成及水平均有一定的特征性，为疾病诊断提供了参考指标。为疾病诊断提供了参考指标。（四）结果分析与评价（四）结果分析与评价根据抗体模式和滴度，可归为根据抗体模式和滴度，可归为3 3大类：大类：易易感：抗感：抗VCAVCA抗体阴性

14、；抗体阴性；原发感染：抗原发感染：抗VCAVCA抗体阳性，抗体阳性，EBNAEBNA 抗体阴性；抗体阴性；既往感染且具有免疫力：抗既往感染且具有免疫力：抗VCAVCA抗抗 体和抗体和抗EBNAEBNA抗体均阳性。抗体均阳性。8080的的 EBVEBV活动性感染的患者产生抗活动性感染的患者产生抗EAEA D D抗体。抗体。第五节人疱疹病毒第五节人疱疹病毒6 6、7 7、8 8型型 一、人疱疹病毒一、人疱疹病毒6 6型型 感染在人群中十分普遍。少数发生感染在人群中十分普遍。少数发生 幼儿急疹或婴儿玫瑰疹。在器官移幼儿急疹或婴儿玫瑰疹。在器官移 植等患者，可发生重症感染，如脑植等患者，可发生重症感染

15、，如脑 炎和肺炎等。炎和肺炎等。为疱疹病毒科中的一个独特成员。为疱疹病毒科中的一个独特成员。基因组基因组DNADNA为为160160170170kbkb，G+C molG+C mol 为为43434444。在。在CD4CD4+T T细胞中增殖细胞中增殖 良好。良好。微生物学检验微生物学检验包括病毒分离和鉴定、病毒核酸检测包括病毒分离和鉴定、病毒核酸检测和抗体检测。和抗体检测。采集患者外周血单个核细胞，与经过采集患者外周血单个核细胞，与经过PHAPHA刺激的脐带血淋巴细胞共同培养。刺激的脐带血淋巴细胞共同培养。出现肿大的气球样细胞提示存在病毒，出现肿大的气球样细胞提示存在病毒，可用免疫荧光法鉴定

16、。可用免疫荧光法鉴定。是是HHV-6HHV-6活动性感染的强有力的诊断活动性感染的强有力的诊断依据。依据。采用核酸杂交技术检出采用核酸杂交技术检出HHV-6HHV-6核酸。核酸。用血清学方法检出患者血清中的特用血清学方法检出患者血清中的特异性异性IgMIgM和和IgGIgG抗体。抗体。从患者外周血中检出病毒或者病毒从患者外周血中检出病毒或者病毒DNADNA是是HHV-6HHV-6活动性感染的强有力的活动性感染的强有力的诊断依据。诊断依据。二、人疱疹病毒二、人疱疹病毒7 7型型从慢性疲劳综合征患者的外周血单个从慢性疲劳综合征患者的外周血单个核细胞、幼儿急疹患者、肾移植患者核细胞、幼儿急疹患者、肾

17、移植患者以及各种免疫抑制治疗病人中分离出以及各种免疫抑制治疗病人中分离出HHV-7HHV-7。在健康人的唾液中大量存在。在健康人的唾液中大量存在HHV-7HHV-7。目前认为。目前认为HHV-7HHV-7是一种普遍存是一种普遍存在的人类疱疹病毒，但除了幼儿急疹在的人类疱疹病毒，但除了幼儿急疹外，还没有发现其他任何疾病和外，还没有发现其他任何疾病和HHV-7HHV-7存在着必然的联系。存在着必然的联系。三、人疱疹病毒三、人疱疹病毒8 8型型是从伴发卡波济肉瘤的艾滋病患者的病灶是从伴发卡波济肉瘤的艾滋病患者的病灶中通过分子生物学途径发现的，中通过分子生物学途径发现的，HHV-8HHV-8具具有典型的疱疹病毒颗粒的形态和结构。病有典型的疱疹病毒颗粒的形态和结构。病毒毒dsDNAdsDNA基因组为约为基因组为约为165165kbkb。HHV-8HHV-8主要感染淋巴细胞，尤其是主要感染淋巴细胞，尤其是B B淋巴细淋巴细胞，具有嗜胞，具有嗜B B细胞的特性。细胞的特性。目前认为，目前认为，HHV-8HHV-8是以潜伏的形式存在的一是以潜伏的形式存在的一种新人类肿瘤病毒。种新人类肿瘤病毒。