尿液3~尿液化学检验课件.ppt

1、Section 2尿液化学检验尿液化学检验Chemical examination of urine2.pH2.pH试纸法试纸法:1.1.试带法试带法:模块有模块有甲基红甲基红(pH4.6-6.2),(pH4.6-6.2),溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝(pH6.0-7.6).(pH6.0-7.6).变色范围：黄变色范围：黄(5.0)-(5.0)-绿绿(7.0)-(7.0)-蓝蓝(9.0)(9.0)，仪器或肉眼判读仪器或肉眼判读多种混合指示剂多种混合指示剂(棕红色棕红色-深黑色深黑色),),与标准色板比较。与标准色板比较。（一）测定原理（一）测定原理一、一、尿尿酸碱度酸碱度测定测定（urine ac

2、idity）3.3.指示剂法指示剂法:5.pH5.pH计法计法:4.4.滴定法滴定法:0.4g/L0.4g/L溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝滴于尿液滴于尿液黄黄-酸酸性性,绿绿-中性中性,蓝蓝-碱性碱性.受黄疸尿及血尿的影响受黄疸尿及血尿的影响.pHpH电极电极.精确度较高精确度较高,需仪器需仪器,烦琐烦琐,少用少用.标准标准NaOHNaOH滴定滴定,测总酸度测总酸度.复杂复杂,少用少用（一）测定原理（一）测定原理一、一、尿尿酸碱度酸碱度测定测定（urine acidity）（二）（二）尿酸度测定的方法学评价尿酸度测定的方法学评价方方 法法评评 价价试带法试带法配套应用于尿液分析仪，是目前满足临床对

3、尿配套应用于尿液分析仪，是目前满足临床对尿pHpH检查检查需要最广泛应用的一种筛检方法需要最广泛应用的一种筛检方法pHpH试纸法试纸法 操作简便，采用操作简便，采用pHpH精密试纸可提高检测的灵敏度，但精密试纸可提高检测的灵敏度，但试纸易吸潮而失效试纸易吸潮而失效指示剂法指示剂法 溴麝香草酚蓝变色范围为溴麝香草酚蓝变色范围为pH 6.0pH 6.07.67.6，当尿，当尿pHpH偏离此偏离此范围时，检测结果不准确；黄疸尿、血尿将直接影响范围时，检测结果不准确；黄疸尿、血尿将直接影响结果判读结果判读滴定法滴定法可测定尿酸度总量。临床上用于尿酸度动态监测，但可测定尿酸度总量。临床上用于尿酸度动态监

4、测，但操作复杂操作复杂pHpH计计 结果精确可靠结果精确可靠,需特殊仪器，操作繁琐。可用于肾小管需特殊仪器，操作繁琐。可用于肾小管性酸中毒定位诊断、分型、鉴别诊断时尿性酸中毒定位诊断、分型、鉴别诊断时尿pHpH精确测定精确测定标本新鲜标本新鲜;操作规范操作规范;试带保存试带保存;试剂配制标准试剂配制标准;pHpH计校准计校准.（三）质量保证（三）质量保证一、一、尿尿酸碱度酸碱度测定测定（urine acidity）正常饮食正常饮食晨尿晨尿pHpH：5.55.56.56.5，平均，平均6.0;6.0;随机尿随机尿pHpH：4.64.68.08.0；可滴定酸度：可滴定酸度：202040mmol/2

5、4h40mmol/24h尿尿（四）参考值（四）参考值一、一、尿尿酸碱度酸碱度测定测定（urine acidity）(1)(1)生理变化生理变化:食物影响：食物影响：蛋白类蛋白类酸性酸性;果蔬类果蔬类碱性碱性.碱潮碱潮:餐后胃酸餐后胃酸,肾泌肾泌H H+,Cl,Cl-重吸收重吸收 尿尿pHpH一过性一过性.生理活动：生理活动：运动运动,饥饿饥饿,出汗出汗,应急应急,夜间入睡呼吸夜间入睡呼吸 变慢变慢体内酸性代谢产物体内酸性代谢产物pH.pH.（五）临床意义（五）临床意义一、一、尿尿酸碱度酸碱度测定测定（urine acidity）(2)(2)病理变化病理变化:酸性尿：酸中毒酸性尿：酸中毒,高热高

6、热,慢性肾炎慢性肾炎,白血病白血病,糖尿病酮症酸中毒糖尿病酮症酸中毒,低钾血症低钾血症,痛风痛风碱性尿：碱中毒碱性尿：碱中毒,呕吐呕吐,尿路感染尿路感染,型肾型肾 小管性酸中毒小管性酸中毒,原发性醛固酮增多症原发性醛固酮增多症一、一、尿尿酸碱度酸碱度测定测定（urine acidity）（五）临床意义（五）临床意义（3 3）药物影响：）药物影响：NaHCONaHCO3 3,K,K2 2COCO3 3,枸橼酸钠枸橼酸钠碱化尿液碱化尿液防止酸性结防止酸性结晶晶(尿酸及胱氨酸尿酸及胱氨酸)形成形成;促进酸性药物排泄促进酸性药物排泄.氯化钙氯化钙(铵、钾铵、钾)、稀盐酸、稀盐酸酸化尿液酸化尿液防止碱性

7、防止碱性结晶结晶(磷磷/碳碳/草酸钙草酸钙)形成形成;促进碱性药物排泄促进碱性药物排泄;预防预防细菌生长细菌生长.溶血时口服溶血时口服NaHCONaHCO3 3碱化尿液碱化尿液促进溶解及排泄促进溶解及排泄HbHb.一、一、尿尿酸碱度酸碱度测定测定（urine acidity）（五）临床意义（五）临床意义二、二、尿液蛋白质检查尿液蛋白质检查健康人尿液中蛋白含量很少，定性为阴性。健康人尿液中蛋白含量很少，定性为阴性。尿液中蛋白质含量尿液中蛋白质含量150mg/24h150mg/24h或尿中蛋白质浓度或尿中蛋白质浓度100mg/L100mg/L蛋白定性为阳性，即蛋白定性为阳性，即 proteinur

8、ia.1.1.蛋白尿蛋白尿 (proteinuria,PRO)(一一)概述概述二、二、尿液蛋白质检查尿液蛋白质检查2.2.蛋白尿形成的原因蛋白尿形成的原因(1)(1)肾小球滤过膜破坏或电荷屏障改变肾小球滤过膜破坏或电荷屏障改变(2)(2)肾小管重吸收障碍肾小管重吸收障碍(3)(3)溢出性溢出性(4)(4)肾组织性肾组织性(一一)概述概述【原理原理】指示剂的蛋白质误差原理指示剂的蛋白质误差原理 溴酚蓝溴酚蓝阴离子阴离子(1)(1)干化学试带法干化学试带法【评价评价】肉眼和仪器肉眼和仪器；对清蛋白灵敏对清蛋白灵敏(70-100mg/L)(70-100mg/L)，与与HbHb/Mb/BJP/Mb/B

9、JP基本不反应；基本不反应；简便快速，易标准化，简便快速，易标准化，应用普遍应用普遍。健康普查、肾病筛查健康普查、肾病筛查。pH3.2pro+复合物复合物(淡黄淡黄绿色绿色兰色兰色)(二二)尿蛋白定性检查尿蛋白定性检查1.1.测定原理与评价测定原理与评价表表5-7 5-7 试带法检测的干扰因素及评价试带法检测的干扰因素及评价干扰因素干扰因素评评 价价标本因素标本因素 尿尿pHpH9 9，可假阳性；尿，可假阳性；尿pHpH3 3，可假阴性。最适尿，可假阴性。最适尿pH pH 5 56 6，故必要时可先调标本，故必要时可先调标本pHpH值。尿液新鲜。值。尿液新鲜。食物因素食物因素 尿酸碱度与摄入食

10、物有系，检查前尿酸碱度与摄入食物有系，检查前1 1天应避免单一摄入天应避免单一摄入过多肉类或蔬菜、水果，进食应均衡过多肉类或蔬菜、水果，进食应均衡药物因素药物因素 假阳性：服奎宁、奎宁丁、嘧啶等或尿中含聚乙烯、假阳性：服奎宁、奎宁丁、嘧啶等或尿中含聚乙烯、吡咯酮、洗必泰、磷酸盐、季胺盐消毒剂吡咯酮、洗必泰、磷酸盐、季胺盐消毒剂 等，尿呈强碱（等，尿呈强碱（pH9.0pH9.0）。）。假阴性：大剂量滴注青霉素或用庆大霉素、磺胺、假阴性：大剂量滴注青霉素或用庆大霉素、磺胺、含碘造影剂含碘造影剂操作过程操作过程 假阳性：试带浸渍时间过长，反应颜色变深。假阳性：试带浸渍时间过长，反应颜色变深。假阴性：

11、试带浸渍时间过短反应不完全或浸渍时间过假阴性：试带浸渍时间过短反应不完全或浸渍时间过 长膜块中试剂流失长膜块中试剂流失(二二)尿蛋白定性检查尿蛋白定性检查【评价评价】(2)(2)磺基水杨酸法磺基水杨酸法【原理原理】propro+磺基水杨酸根磺基水杨酸根-不溶性蛋白沉淀不溶性蛋白沉淀简便快速，简便快速，灵敏度高灵敏度高0.05-0.1g/L0.05-0.1g/L；与清与清/球球/本周蛋白反应本周蛋白反应；假阳性。假阳性。干化学法的参考方法，干化学法的参考方法，NCCLSNCCLS推荐的推荐的 确证实验。确证实验。H+(二二)尿蛋白定性检查尿蛋白定性检查1.1.测定原理与评价测定原理与评价1尿尿2

12、-3ml+试剂试剂0.1ml，立即混匀，立即混匀，1min内观察内观察结果结果.(2)(2)磺基水杨酸法磺基水杨酸法【干扰因素干扰因素】(二二)尿蛋白定性检查尿蛋白定性检查1.1.测定原理与评价测定原理与评价 干干 扰扰 因因 素素假阳性假阳性高浓度尿酸、尿酸盐、草酸盐高浓度尿酸、尿酸盐、草酸盐碘造影剂、大剂量青霉素碘造影剂、大剂量青霉素混入生殖系统分泌物混入生殖系统分泌物假阴性假阴性pH pH 9 9或或 9 9或或 0.4g/L.0.4g/L.药物因素药物因素假阴性：假阴性：VitCVitC、左旋多巴、左旋多巴.【原理原理】CuCu2+2+-CuCu+兰色兰色 黄色黄色至砖红色至砖红色.【

13、评价评价】缺乏特异性缺乏特异性,灵敏度低灵敏度低(8.33mmol/L(8.33mmol/L弱阳性弱阳性)-CHO,OH1.1.测定方法与评价测定方法与评价班氏试剂班氏试剂1ml,1ml,煮沸不变色煮沸不变色+尿尿2 2滴滴煮沸煮沸1-2min 1-2min 冷冷却后观察却后观察.(一一)尿糖定性检查尿糖定性检查【干扰因素干扰因素】1.1.测定方法与评价测定方法与评价(一一)尿糖定性检查尿糖定性检查标本因素标本因素假阳性：还原性糖假阳性：还原性糖假阴性：假阴性：大量铵盐，预先加碱煮沸去氨后再检验；大量铵盐，预先加碱煮沸去氨后再检验；PROPRO0.5g/L,0.5g/L,加热乙酸法去蛋白取滤液

14、检验加热乙酸法去蛋白取滤液检验;药物因素药物因素 假阳性：假阳性：VitCVitC,青青/链霉素链霉素,头孢菌素头孢菌素,异烟肼异烟肼,水杨酸水杨酸 盐盐,氨苄西林氨苄西林(3)(3)薄层层析法薄层层析法(thin-layer chromatography,TLC)【评价评价】鉴别、鉴别、确证尿糖种类确证尿糖种类的特异、灵的特异、灵敏的方法；操作烦琐，很少应用。敏的方法；操作烦琐，很少应用。(一一)尿糖定性检查尿糖定性检查1.1.测定方法与评价测定方法与评价【原理【原理】吸附剂作固定相；有机溶剂作流动相；吸附剂作固定相；有机溶剂作流动相；两相间作相对移动。两相间作相对移动。各组分各组分流动相流

15、动相固定相固定相反复吸附反复吸附-解析解析-亲和作用亲和作用展开展开分离。分离。比移值（比移值（RfRf）=斑点距离斑点距离/溶剂距离溶剂距离(1)(1)检验前：检验前：(2)(2)检测中：检测中：容器清洁，不含氧化性物质；一次性尿杯容器清洁，不含氧化性物质；一次性尿杯.消除消除VitCVitC干扰：尿液煮沸几分钟干扰：尿液煮沸几分钟.(3)(3)检测后：检测后：报告审核报告审核,结果不符查找原因结果不符查找原因;与临床沟通与临床沟通.2.2.质量控制质量控制(一一)尿糖定性检查尿糖定性检查室内质控室内质控.试带法注意反应时间和温度试带法注意反应时间和温度;阴凉干燥阴凉干燥,保质期保质期.班式

16、法遵守操作规程班式法遵守操作规程,注意判读时间注意判读时间.定性：阴性定性：阴性3.3.参考值参考值【测定方法【测定方法】葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法,己糖激酶法己糖激酶法(二二)尿糖尿糖定量定量检查检查【评价评价】测血糖方法。药物和尿液中的自然物质测血糖方法。药物和尿液中的自然物质对对己糖激酶法几乎无干扰；对葡萄糖氧己糖激酶法几乎无干扰；对葡萄糖氧化酶法有不同程度的干扰。化酶法有不同程度的干扰。2.2.参考值：参考值：0.560.565.0 mmol5.0 mmol/L/L1.1.测定方法与评价测定方法与评价非葡萄糖尿非葡萄糖尿葡萄糖尿葡萄糖尿血糖增高性糖尿血糖增高性糖尿血糖正常性糖尿血糖正

17、常性糖尿-肾性肾性糖尿病糖尿病-代谢性代谢性内分泌性糖尿内分泌性糖尿饮食性糖尿饮食性糖尿应激性糖尿应激性糖尿饥饿饥饿-糖耐量糖尿糖耐量糖尿糖尿糖尿乳糖尿：乳糖尿：半乳糖尿半乳糖尿果糖尿果糖尿肝功障碍肝功障碍哺乳期哺乳期(三三)临床意义临床意义暂时性暂时性(胰岛素分泌不足胰岛素分泌不足)饥饿饥饿-糖耐量糖尿：见于晚期食道肿瘤、低营养状态和妊娠剧吐者糖耐量糖尿：见于晚期食道肿瘤、低营养状态和妊娠剧吐者 做糖耐量试验。做糖耐量试验。四、四、尿液酮体定性检查尿液酮体定性检查-羟丁酸羟丁酸78%78%乙酰乙酸乙酰乙酸20%20%丙酮丙酮2%2%脑脑心脏心脏肌肉肌肉尿酮体定性为阳性，即尿酮体定性为阳性，即

18、ketonuriaketonuria.正常血浆含量正常血浆含量 2 24mg/L4mg/L正常正常24h24h尿含量尿含量:乙酰乙酸乙酰乙酸-羟丁酸羟丁酸mg,mg,丙酮丙酮3mg3mg(2)(2)乙酰乙酸测定法乙酰乙酸测定法(Gerhardt(Gerhardt法法)2.2.检测原理检测原理四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查+亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠紫色化合物紫色化合物丙酮丙酮乙酰乙酸乙酰乙酸OH(1)(1)亚硝基铁氰化钠法亚硝基铁氰化钠法乙酰乙酸乙酰乙酸+氯化高铁氯化高铁乙酰乙酸铁乙酰乙酸铁 (赭赭/酒红色酒红色)表表5-12 5-12 基于亚硝基铁氰化钠的尿酮体检测方法基于亚硝基

19、铁氰化钠的尿酮体检测方法方法类别检测过程试带法含甘氨酸、碱缓冲剂、亚硝基铁氰化钠。在碱性条件下，后者与尿乙酰乙酸、丙酮起紫色反应。朗格法尿中先加固体亚硝基铁氰化钠后,后加少量冰乙酸,反复振荡使其溶解、混匀，再沿管壁徐徐加入氢氧化铵液，尿中丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠反应，在与氨接触面上形成紫色环。Rothera法 尿中加50%乙酸溶液,再加200g/L亚硝基铁氰化钠溶液,混匀,沿管壁徐徐加入浓氢氧化铵溶液,尿中丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠反应，尿液表面出现紫色环改良Rothera法又称酮体粉法，将亚硝基铁氰化钠、硫酸铵、无水碳酸钠混合研磨成粉。在碱性条件下，丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠和

20、硫酸铵作用，生成紫色化合物。片剂法含甘氨酸（与丙酮反应）和其他物质，可检测尿液、血清、血浆或全血酮体。于片剂上加尿1滴,片剂呈色在规定时间内与标准色板进行比色。3.3.方法学评价方法学评价四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查片剂法片剂法 本法对乙酰乙酸的灵敏度本法对乙酰乙酸的灵敏度50100mg/L，丙酮为，丙酮为200250mg/L Rothera法法 本法对乙酰乙酸的灵敏度本法对乙酰乙酸的灵敏度1050mg/L，丙酮为，丙酮为100250mg/L Gerhardt法法 本法对乙酰乙酸的灵敏度本法对乙酰乙酸的灵敏度250700mg/L表表5-13 5-13 尿酮体不同检测方法尿酮体不同检

21、测方法灵敏度灵敏度比较比较化学成分化学成分朗格法朗格法RotheraRothera法法改良改良Roth Roth-era-era法法片剂片剂法法试带法试带法 GerhardtGerhardt法法乙酰乙酸乙酰乙酸（mg/Lmg/L）50501010505080805050l00l005050l00l00250250700700丙酮丙酮（mg/Lmg/L）20020010010025025010001000200200250250400400700700不反应不反应-羟丁酸羟丁酸（mg/Lmg/L）不反应不反应不反应不反应不反应不反应不反不反应应不反应不反应不反应不反应3.3.方法学评价方法学评价

22、【灵敏度【灵敏度】四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查【干扰因素干扰因素】假阳性假阳性较多肌酐、肌酸，高色素尿，较多肌酐、肌酸，高色素尿，酞、苯丙酮、左旋多巴代谢物酞、苯丙酮、左旋多巴代谢物假阴性假阴性标本收集和保存不当；标本收集和保存不当；亚硝基铁氰化钠对温度、热度或光线很灵敏；亚硝基铁氰化钠对温度、热度或光线很灵敏；试带受潮失活。试带受潮失活。3.3.方法学评价方法学评价四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查(1)(1)检测前：标本新鲜检测前：标本新鲜,及时检测；密闭冷藏及时检测；密闭冷藏/冷冷冻冻(2)(2)检测中：检测中：阴阳对照；阴阳对照；加入少量冰乙酸防止肌酐、肌酸加入少量冰

23、乙酸防止肌酐、肌酸 过多引起的假阳性过多引起的假阳性 试带阴凉干燥，保质期。试带阴凉干燥，保质期。4.4.质量保证质量保证四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查(3)(3)检测后：检测后：注意方法灵敏度注意方法灵敏度.不同病程的酮体成分的影不同病程的酮体成分的影响响.(1)(1)早期诊断早期诊断：糖尿病酮症酸中毒昏迷糖尿病酮症酸中毒昏迷四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查 5.5.临床意义临床意义酮体阳性酮体阳性见于见于:鉴别鉴别:低血糖、心脑血管病酸中毒、高血糖渗低血糖、心脑血管病酸中毒、高血糖渗 透性糖尿病昏迷透性糖尿病昏迷酮体不增高酮体不增高.糖尿病酮症者肾功能严重障碍而肾阈值糖尿

24、病酮症者肾功能严重障碍而肾阈值 尿酮体尿酮体-消失消失.糖尿病酮症酸中毒糖尿病酮症酸中毒缓解缓解时时,-,-羟丁酸羟丁酸乙酰乙酸乙酰乙酸,分析结果时必须密切结合临床分析结果时必须密切结合临床.(2)(2)治疗监测治疗监测:糖尿病酮症酸中毒糖尿病酮症酸中毒早期早期主要为主要为-羟丁羟丁 酸酸;测定血测定血-羟丁酸有利于早期诊断羟丁酸有利于早期诊断.5.5.临床意义临床意义酮体阳性酮体阳性见于见于:四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查 5.5.临床意义临床意义酮体阳性酮体阳性见于见于:四、尿液酮体定性检查四、尿液酮体定性检查 5.5.临床意义临床意义酮体阳性酮体阳性见于见于:(5)(5)药物影

25、响：降糖药抑制细胞呼吸作用药物影响：降糖药抑制细胞呼吸作用(3)(3)非糖尿病性酮症：感染、严重呕吐非糖尿病性酮症：感染、严重呕吐 腹泻、长期饥饿、禁食、子痫腹泻、长期饥饿、禁食、子痫(4)(4)中毒中毒:氯仿、乙醚、磷中毒氯仿、乙醚、磷中毒五、尿液胆红素五、尿液胆红素(BIL)(BIL)定性检查定性检查(2)(2)氧化法氧化法(1)(1)试带法（重氮法）试带法（重氮法）胆红素胆红素+二氯苯胺重氮盐二氯苯胺重氮盐-紫紫红色红色偶氮化合物偶氮化合物强酸强酸胆红素胆红素+氯化钡氯化钡沉淀沉淀+三氯化铁三氯化铁胆青胆青/绿绿/黄素黄素 (蓝蓝/黄黄绿色绿色)H+2.2.检测原理检测原理 五、尿液胆红

26、素定性检查五、尿液胆红素定性检查Harrison法法Smith碘环法碘环法胆红素胆红素+碘碘胆绿素胆绿素(绿色绿色)（接触面）（接触面）(1)(1)试带法：试带法：简单，分析仪，定性筛检简单，分析仪，定性筛检 2,4-2,4-二氯苯胺试带灵敏度二氯苯胺试带灵敏度5-10mg/L5-10mg/L 二氯重氮氟化硼酸盐试带灵敏度二氯重氮氟化硼酸盐试带灵敏度2-5mg/L2-5mg/L3.3.方法学评价方法学评价五、尿液胆红素定性检查五、尿液胆红素定性检查【干扰因素干扰因素】假阳性假阳性大量大量氯丙嗪氯丙嗪治疗，治疗，尿含有尿含有盐酸苯偶氮吡啶代谢产物盐酸苯偶氮吡啶代谢产物假阴性假阴性 标本标本保存不

27、当保存不当，BILBIL遇光分解；遇光分解；高高VitCVitC和和亚硝酸盐亚硝酸盐抑制偶氮反应抑制偶氮反应Harrison法法:烦琐烦琐,灵敏度高灵敏度高(0.9umol/L)/0.5mg/L(0.9umol/L)/0.5mg/L3.3.方法学评价方法学评价五、尿液胆红素定性检查五、尿液胆红素定性检查(2)(2)氧化法氧化法:Smith碘环法碘环法:简便简便,灵敏度低灵敏度低(17.1umol/L)(17.1umol/L)，少用，少用【干扰因素干扰因素】假阳性假阳性水杨酸、阿司匹林、牛黄水杨酸、阿司匹林、牛黄紫红色紫红色干扰干扰HarrisonHarrison法法.假阴性假阴性标本标本保存不

28、当（未避光）保存不当（未避光）(1)(1)检测前：标本新鲜检测前：标本新鲜,棕色瓶避光保存棕色瓶避光保存.(2)(2)检测中：检测中：试带避光干燥；规范，高低质控，定检。试带避光干燥；规范，高低质控，定检。HarrisonHarrison法法:加入加入FeClFeCl3 3后未见足够的后未见足够的BaClBaCl2 2沉淀沉淀,可加适量硫酸铵。可加适量硫酸铵。五、尿液胆红素定性检查五、尿液胆红素定性检查4.4.质量控制质量控制 5.5.参考值参考值(3)(3)检测后：试带法定性，可疑用检测后：试带法定性，可疑用HarrisonHarrison法验证法验证阴性阴性(1)(1)肝细胞性黄疸肝细胞性

29、黄疸(2)(2)梗阻性黄疸梗阻性黄疸hepatocellular jaundiceobstruct jaundice(3)(3)溶血性黄疸溶血性黄疸hemolytic jaundice(+)(+)(+)(+)(-)(-)五、尿液胆红素定性检查五、尿液胆红素定性检查6.6.临床意义临床意义黄疸的诊断与鉴别诊断黄疸的诊断与鉴别诊断六、尿胆原和尿胆素定性检查六、尿胆原和尿胆素定性检查(1)(1)改良改良Ehrlich法法(湿化学法湿化学法)(2)(2)干化学试带法干化学试带法尿胆原尿胆原+对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛樱红色樱红色化合物化合物 Ehrlich醛反应醛反应尿胆原尿胆原+重氮化合物重氮

30、化合物红色红色化合物化合物1.1.尿胆原尿胆原(URO)(URO)测定方法测定方法H+Urobilinogen,URO/UBG 立即呈立即呈深红色深红色 放置放置10min10min呈呈樱红色樱红色 放置放置10min10min呈呈微红色微红色 放置放置1010分钟后分钟后不显色不显色2.2.尿胆素尿胆素(urobilin(urobilin)测定方法测定方法无胆红素尿液无胆红素尿液+碘液碘液尿胆原尿胆原尿胆素尿胆素Zn2+复合物复合物(绿色荧光绿色荧光)六、尿胆原和尿胆素定性检查六、尿胆原和尿胆素定性检查 Schleisinger法法:氧化氧化 试带法：试带法：改良改良EhrlichEhrli

31、ch法：简单快速，分析仪，定性或定量；法：简单快速，分析仪，定性或定量；不同试带灵敏度不同（不同试带灵敏度不同（1-4mg/L1-4mg/L）。）。偶氮反应试带不受胆红素影响，对尿胆原特异偶氮反应试带不受胆红素影响，对尿胆原特异。(2)(2)尿胆素最低检出量为尿胆素最低检出量为0.05mg/L0.05mg/L。3.3.方法学评价方法学评价六、尿胆原和尿胆素定性检查六、尿胆原和尿胆素定性检查干扰因素干扰因素评评 价价标本因素标本因素标本久置，尿胆原氧化为尿胆素。标本久置，尿胆原氧化为尿胆素。药物因素药物因素假阳性：吩噻嗪类、氯丙嗪类、磺胺类、普鲁卡因假阳性：吩噻嗪类、氯丙嗪类、磺胺类、普鲁卡因假

32、阴性：大量假阴性：大量VitCVitC、长期服用光谱抗生素。、长期服用光谱抗生素。内源性物质内源性物质假阳性：卟胆原、吲哚、胆红素假阳性：卟胆原、吲哚、胆红素红色。红色。【干扰因素干扰因素】EhrlichEhrlich醛反应醛反应(1)(1)检测前：标本新鲜检测前：标本新鲜,避光保存；避光保存；口服口服NaHCONaHCO3 3碱化尿液碱化尿液,午餐后午餐后2-4h2-4h尿标本。尿标本。(2)(2)检测中检测中:口服口服NaHCONaHCO3 3碱化尿液碱化尿液,先用乙酸调节先用乙酸调节 为弱酸性为弱酸性.试带法试带法:规范规范,高低室内质控高低室内质控,定检定检.阴凉干燥阴凉干燥,密闭避光

33、密闭避光,有效期有效期.4.4.质量控制质量控制六、尿胆原和尿胆素定性检查六、尿胆原和尿胆素定性检查(3)(3)检测后：正确评价尿三胆检测后：正确评价尿三胆;尿胆原阴性可疑尿胆原阴性可疑尿胆素定性验证尿胆素定性验证.尿胆原：阴性或弱阳性；尿胆原：阴性或弱阳性；1:201:20稀释阴性稀释阴性.尿胆素：阴性尿胆素：阴性(1)(1)鉴别黄疸种类鉴别黄疸种类.尿二胆尿二胆正常正常溶血性黄疸溶血性黄疸肝细胞性黄疸肝细胞性黄疸阻塞性黄疸阻塞性黄疸尿胆红素尿胆红素+尿胆原尿胆原少量少量 (+)(+)(+)(+)(-)(-)(2)(2)反映肝细胞损伤敏感指标反映肝细胞损伤敏感指标.(3)(3)长期便秘易使尿

34、胆原阳性程度增加长期便秘易使尿胆原阳性程度增加.六、尿胆原和尿胆素定性检查六、尿胆原和尿胆素定性检查5.5.参考值参考值6.6.临床意义临床意义 尿液中尿液中HbHb来源：来源：血管内溶血血管内溶血 尿路出血尿路出血七、尿血红蛋白定性检查七、尿血红蛋白定性检查 正常人血浆中游离正常人血浆中游离HbHb微量微量(50mg/L),(50mg/L),与结合与结合珠蛋白形成珠蛋白形成HbHb-Hp-Hp复合物，在单核复合物，在单核-巨噬细胞巨噬细胞系统代谢，故尿中系统代谢，故尿中HbHb极微。定性：阴性极微。定性：阴性 验证尿液潜在出血的试验验证尿液潜在出血的试验:隐血试验隐血试验(occult bl

35、ood test)1.1.概述概述(1)(1)试带法试带法(2)(2)湿化学法湿化学法(3)(3)免疫法：单克隆抗体法免疫法：单克隆抗体法利用胶体金标记的抗人利用胶体金标记的抗人HbHb单克隆抗体检测。单克隆抗体检测。2.2.测定方法测定方法原理相同原理相同七、尿血红蛋白定性检查七、尿血红蛋白定性检查H H2 2O O2 2 亚铁血红素亚铁血红素O(1)(1)试带法：试带法：(2)(2)湿化学法：湿化学法：(3)(3)免疫法：免疫法：试剂稳定性差试剂稳定性差,特异性较低特异性较低,假阳性多假阳性多.0.3-0.6mg/L.0.3-0.6mg/L简便快速简便快速,灵敏度高灵敏度高(0.15-0.

36、3mg/L),(0.15-0.3mg/L),影响多影响多,筛检筛检.简便简便,灵敏度高灵敏度高(0.2mg/L0.2mg/L),特异性强，特异性强，验证验证3.3.方法学评价方法学评价七、尿血红蛋白定性检查七、尿血红蛋白定性检查3.3.方法学评价方法学评价七、尿血红蛋白定性检查七、尿血红蛋白定性检查方法方法干扰因素干扰因素试带法试带法 假阳性：热不稳定酶、氧化剂污染、尿路感染假阳性：热不稳定酶、氧化剂污染、尿路感染假阴性假阴性：大量大量VitCVitC、甲醛、亚硝酸盐，还原剂、甲醛、亚硝酸盐，还原剂化学法化学法假阳性：热不稳定酶及过氧化物酶，铁剂、硝酸、铜锌、假阳性：热不稳定酶及过氧化物酶，铁

37、剂、硝酸、铜锌、碘化物碘化物免疫法免疫法不受鸡牛猪羊兔不受鸡牛猪羊兔Hb(500ug/ml)Hb(500ug/ml)、辣根过氧化物酶、辣根过氧化物酶(200ug/ml)(200ug/ml)干扰干扰.【干扰因素干扰因素】阴性阴性(1)(1)检测前：标本新鲜检测前：标本新鲜,煮沸煮沸2 2分分破坏破坏WBCWBC过氧化物酶过氧化物酶 和其他对热不稳定酶和其他对热不稳定酶.(2)(2)检测中：高低室内质控，阳性对照；检测中：高低室内质控，阳性对照；3%H3%H2 2O O2 2或试或试 带验证所用试剂的有效期和可靠性。带验证所用试剂的有效期和可靠性。4.4.质量控制质量控制5.5.参考值参考值七、尿

38、血红蛋白定性检查七、尿血红蛋白定性检查(3)(3)检测后：审核，沟通，验证。检测后：审核，沟通，验证。(2)(2)辅助诊断泌尿系统疾病辅助诊断泌尿系统疾病.(1)(1)辅助诊断肾前性溶血性疾病辅助诊断肾前性溶血性疾病.各种血管内溶血性疾病各种血管内溶血性疾病:PNH,:PNH,血型不合输血血型不合输血,AIHA,AIHA,行军性行军性HbHb尿尿;各种病毒感染、疟疾各种病毒感染、疟疾;大面大面积烧伤、体外循环、术后所致的积烧伤、体外循环、术后所致的RBCRBC大量破坏大量破坏.隐匿性肾炎隐匿性肾炎尿中少量尿中少量RBC破坏破坏隐血试验隐血试验(););镜检时镜检时RBCRBC少少.6.6.临床

39、意义临床意义七、尿血红蛋白定性检查七、尿血红蛋白定性检查八、亚硝酸盐八、亚硝酸盐(NIT)(NIT)硝酸盐硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐(nitrate)(nitrite)硝酸盐还原酶硝酸盐还原酶G杆菌杆菌对氨基苯磺对氨基苯磺(砷砷)酸酸重氮盐重氮盐3 3羟基羟基-四氢并喹啉四氢并喹啉偶氮化合物偶氮化合物 (红色红色)1.1.检测原理：亚硝酸盐还原法检测原理：亚硝酸盐还原法(1)(1)亚硝酸盐检出率的亚硝酸盐检出率的3 3个影响因素个影响因素:？尿中尿中G G-杆菌要有硝酸盐还原酶杆菌要有硝酸盐还原酶;尿尿潴留时间潴留时间4h;4h;尿中有尿中有硝酸盐硝酸盐.八、亚硝酸盐八、亚硝酸盐(NIT)(NIT

40、)2.2.方法学评价方法学评价(2)(2)灵敏度：灵敏度：0.3-0.6mg/L0.3-0.6mg/L(3)(3)干扰因素干扰因素表表5-16 5-16 亚硝酸盐检测的干扰因素及评价亚硝酸盐检测的干扰因素及评价因因 素素评评 价价标标 本本高比重尿使试验灵敏度降低；高比重尿使试验灵敏度降低；假阳性：陈旧尿、偶氮剂污染尿假阳性：陈旧尿、偶氮剂污染尿食食 物物尿中硝酸盐主要来源于尿中硝酸盐主要来源于正常饮食、体内蛋白质代谢、正常饮食、体内蛋白质代谢、或由氨内源性合成或由氨内源性合成。不能正常饮食的患者，体内缺乏。不能正常饮食的患者，体内缺乏硝酸盐，即使有细菌感染，也可出现阴性硝酸盐，即使有细菌感染

41、，也可出现阴性致病菌致病菌常见致病菌：大肠杆菌属（致病率最高）、常见致病菌：大肠杆菌属（致病率最高）、KlebsKlebs杆菌杆菌属、变形杆菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属等。属、变形杆菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属等。阳性阳性：大肠埃希菌感染大肠埃希菌感染符合率约为符合率约为80%80%。阴性：肠球菌属、粪链球菌属感染阴性：肠球菌属、粪链球菌属感染药药 物物假阳性：非那吡啶假阳性：非那吡啶假阴性假阴性：利尿剂、：利尿剂、硝基呋喃硝基呋喃、大量维生素大量维生素C C；尿停留膀尿停留膀胱内时间胱内时间晨尿晨尿标本较好，尿在膀胱内停留时间长，细菌有充分标本较好，尿在膀胱内停留时间长，细菌有充分作用时间，

42、否则，试验呈假阴性作用时间，否则，试验呈假阴性(1)(1)检测前：晨尿，尽快检测。检测前：晨尿，尽快检测。八、亚硝酸盐八、亚硝酸盐(NIT)(NIT)3.3.质量控制质量控制(2)(2)检测中：高低室内质控检测中：高低室内质控,定时阳性标本验证定时阳性标本验证;试带干燥避光，有效期。试带干燥避光，有效期。(3)(3)检测后：审核检测后：审核,结合结合LEULEU、镜检分析。、镜检分析。阴性阴性4.4.参考值参考值快速筛检尿路感染快速筛检尿路感染NITNIT阳性阳性:泌尿系统有细菌感染泌尿系统有细菌感染.(.(排除假阳性排除假阳性)NITNIT阴性阴性:不能排除泌尿系统有细菌感染不能排除泌尿系统

43、有细菌感染.八、亚硝酸盐八、亚硝酸盐(NIT)(NIT)5.5.临床意义临床意义NITNIT试带试带LEULEU镜检镜检准确诊断准确诊断.确证试验：尿细菌培养阳性确证试验：尿细菌培养阳性九、白细胞九、白细胞(WBC,LEU)(leukocyte(WBC,LEU)(leukocyte)1.1.检测原理：酯酶检测原理：酯酶(esterase)(esterase)法法吲哚酚酯吲哚酚酯 吲哚酚吲哚酚+有机酸有机酸粒细胞酯酶粒细胞酯酶 +重氮盐重氮盐 重氮色素重氮色素（紫红色紫红色缩合物）缩合物）九、白细胞九、白细胞(WBC,LEU)(WBC,LEU)2.2.方法学评价方法学评价(1)(1)灵敏度灵敏度

44、10102525个个/ul/ul或或5 51515个个/HPF./HPF.特异性强：特异性强：中性粒细胞中性粒细胞.(2)(2)【干扰因素干扰因素】假阳性假阳性污染阴道分泌物、甲醛；污染阴道分泌物、甲醛；高浓度高浓度BILBIL、非那吡啶、呋喃坦啶、非那吡啶、呋喃坦啶.假阴性假阴性WBC10WBC1025/l,PRO25/l,PRO5g/L,GLU30g/L;5g/L,GLU30g/L;大量青霉素、先锋霉素大量青霉素、先锋霉素、庆大霉素；、庆大霉素；VitCVitC?尿尿pH4.4pH4.0pH4.0时内源性酚、巯基化合物、半胱时内源性酚、巯基化合物、半胱氨酸、硫代硫酸钠氨酸、硫代硫酸钠.假阴

45、性假阴性碱性尿（碱性尿（VitCVitC易氧化分解破坏）易氧化分解破坏）3.3.质量控制质量控制(1)(1)检测前：检测前：随机尿随机尿。(2)(2)检测中：检测中：规范规范操作和试带操作和试带质控质控。(3)(3)检测后：审核检测后：审核,分析对分析对OB/HbOB/Hb、BILBIL、GLUGLU、NITNIT、LEULEU是否产生影响。是否产生影响。阴性阴性4.4.参考值参考值5.5.临床意义临床意义判断试带法判断试带法OB/HbOB/Hb、BILBIL、GLUGLU、NITNIT、LEULEU等等结果是否可靠。结果是否可靠。表表5-17 5-17 维生素维生素C C对干化学检测项目的干扰对干化学检测项目的干扰检测项目检测项目干扰试验项目所需干扰试验项目所需尿抗坏血酸浓度尿抗坏血酸浓度(mg/L)(mg/L)反应物反应物隐血隐血/血红蛋白血红蛋白9090试剂膜块浸渍的试剂膜块浸渍的H H2 2O O2 2胆红素胆红素250250试剂膜块浸渍的重氮盐试剂膜块浸渍的重氮盐亚硝酸盐亚硝酸盐250250反应过程中产生的重氮反应过程中产生的重氮盐盐葡萄糖葡萄糖500500反应过程中产生的反应过程中产生的H H2 2O O2 2