基因毒性杂质优质推荐课件.pptx

1、基因毒性杂质基因毒性杂质一、药品杂质研究评估策一、药品杂质研究评估策略略二、痕量杂质定量分析方法的建二、痕量杂质定量分析方法的建立立提提 纲纲三、案例分析与讨论三、案例分析与讨论四、未知杂质分离鉴定案例分析四、未知杂质分离鉴定案例分析一、药品杂质研究评估策略一、药品杂质研究评估策略1.药品杂质研究的法规依据2.药品杂质评估一般步骤3.药品杂质来源途径分析4.药品杂质毒性判别方法5.药品杂质研究限度策略6.药品杂质风险评估的分析方法建立策略6杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、疗效，甚至对人体的健康有害的物质产品质量重点关注杂质产品质量重点关注杂质：工艺杂质、降解杂质安全性重点关

2、注高毒性安全性重点关注高毒性杂杂质质：致癌、致突变类杂杂质中国药典、美国药典、欧洲药典、日本药典等各国药典ICH Q3A(R2):新型原料药中的杂质问题(2006.10)ICH Q3B(R2):新型药品中的杂质问题(2006.06)ICH Q3C(R6):杂质：残留溶剂的指导原则(2016.10)ICH Q3D:元素杂质的指导原则(2014.12)ICH Q11:原料药开发和生产（化学实体和生物技术生物实体药物）(2012.05)ICH M7(R1):评估和控制药物中 DNA 反应性（致突变）杂质以限制潜在的致癌风险(2017.03)化学药品注射剂与包装材料相容性研究技术指导原则（塑料、玻璃、

3、弹性体密封件）杂 质 研 究 相 关 法 规1.1.药品杂质研究的法规依据药品杂质研究的法规依据重点关注：法规适用范围2.2.药品杂质评估一般步药品杂质评估一般步骤骤杂质引入方式杂质引入方式限度制定限度制定 已有研究的文献报道 警示结构提示 计算机模拟毒性评估 体外点突变和染色体畸变试验 动物毒性评估 起始物料及其杂质 溶剂及其杂质 中间体 反应副产物 辅料杂质 降解杂质 生产设备引入 包装材料引入 环境污染引入一般杂质致癌致畸杂质PDE控制（存在报道）PDE控制（存在报道）TTC控制ICH Q3 A/B/C/D杂质毒性分类判定杂质毒性分类判定致癌、致突变关于关于PDE法与法与TTC法法PDE

4、法适用于有阈值效应的遗传毒性杂质；已有证据表明，该物质只有在超过一定限度时才会产生遗传毒性。杂质安全性限度的确定可以参照残留溶剂限度的计算方法，根据相关动物的无可见效应剂量（No-Observed Effect Level）计算其可接受的日暴露量（Permissible Daily Exposure）,再根据药品的最大日剂量计算出杂质的接受限度。关于关于PDE法与法与TTC法法TTC法无阈值效应的遗传毒性杂质；引入了毒理学关注的阈值（Threshold of Toxicological Concern）。TTC是在接受患者终生用药的癌症发生概率不超过10万分之一的基础上，从高浓度下进行的致癌性

5、实验数据线性外推倒极低浓度得到的一个理论值。对于无阈值效应的遗传毒性杂质，如果每日摄入量低于1.5ug，那么患者因服药导致癌症发生的额外风险可以忽略不记。8按属性按属性 有机杂质有机杂质 无机杂质无机杂质按来源按来源 工艺杂质工艺杂质 降解杂质降解杂质3.3.药品杂质来源途径分药品杂质来源途径分析析路线1 路线2 路线3溶剂1，催化剂A+BA+BC C(A A)时间、温度、pH(C)(C)SI 溶剂杂质溶剂2，试剂RI 试剂杂质DSDS(D DS)S)(D1,D2)(D1,D2)(BP1,BP2)(BP1,BP2)辅料制剂(D3,D4,E11,E1(D3,D4,E11,E12,)2,)容器中的

6、浸出物A，B=起始物料C=中间体R=试剂/催化剂 DS=药用辅料A=潜在的起始物料杂质产生C和DSBP=反应副产物 D=降解产物 SIRI IE=溶剂杂质=试剂杂质=辅料杂质EI 辅料杂质9药品杂质来源途径分析药品杂质来源途径分析-容器中的浸出物来容器中的浸出物来源源10药物杂质致癌致畸信息获取来药物杂质致癌致畸信息获取来源源 常见报道高毒性杂质 具有警示结构杂质11药物杂质致癌致畸信息获取来药物杂质致癌致畸信息获取来源源 毒理学实验 毒理学计算软件 各类毒理学数据库 已有文献报道 获取TD50、NOEL、ADI、PMTDI NOEL值与致癌致畸没有必然联系 查询的毒性研究文献全面性以及毒性

7、实验数据的解读需要专家的确认 The Carcinogenic Potency Database(CPDB)联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂专家委员会评价（JECFA）加利福尼亚州65号提案(安全饮用水和有毒物质强制法令)欧洲化学品管理局（ECHA）12常见物质的常见物质的PDE数值举例数值举例 在检索剂量数据前需要全面检索该物质是否有致癌致畸性，例如氯乙酸CPDB数据TD50显示阴性 盐酸盐的药物在重结晶过程中的接触醇类容易产生氯代烷烃，单一卤代物在M7中有36ug/day指导规则 关注环氧丙醇、环氧氯丙烷、3-氯-1,2-丙二醇三者之间的转化关系 毒性数据会被不断的更新，更多的研究数

8、据会被不断的上传NameNameCASCASPDE(ug/day)PDE(ug/day)NoteNote氯甲烷氯甲烷74-87-31361ICH M7氯乙烷氯乙烷75-00-31810ICH M7氯异丙烷氯异丙烷75-29-655500ECHA氯乙酸氯乙酸79-11-83000ECHA/CPDB甲醛甲醛50-00-01.35 or 10000CPDB/ICH M7乙醛乙醛75-07-0153CPDB丙二醛丙二醛542-78-9122CPDB（钠盐）环氧丙醇环氧丙醇556-52-54ICH M7环氧氯丙烷环氧氯丙烷106-89-82.96CPDB（TD50）3-3-氯氯-1,2-1,2-丙二醇丙

9、二醇96-24-2PMTDI：4ug/kg/dayWHO/FAO1,3-1,3-二氯二氯-2-2-丙醇丙醇96-23-110NTP13最大日剂量最大日剂量报告限度报告限度鉴定限度鉴定限度界定限度界定限度2g0.05%0.10%或1.0mg（取最小值）0.15%或1.0mg（取最小值）2g0.03%0.05%0.05%报告限度最大日剂量1g1g限 度0.1%0.05%最大日剂量10mg 2g2g鉴定限度限 度1.0%或5ug(取最小值)0.5%或20ug(取最小值)0.2%或2mg(取最小值)0.10%最大日剂量100mg2g2g界定限度限 度1.0%或50ug (取最小值)0.5%或200ug

10、 (取最小值)0.2%或3mg (取最小值)0.15%原料药原料药Q3AQ3A药物杂质的控制限度计算（药物杂质的控制限度计算（）制剂制剂Q3BQ3B新药与仿制药研究策略有显著差异 限度=PDE/日最大剂量 PDE=TD50*体重/50000 PDE=NOEL*体重/(F1*F2*F3*F4*F5)限度=TTC/日最大剂量 由ppm推算NOEL（ICH Q3C）由LD50推算NOEL其他其他ICHQ3&M7ICHQ3&M714PDE法计算限度实例法计算限度实例(以三乙胺浓度限度计算为以三乙胺浓度限度计算为例例)（错误案例解析错误案例解析）公式公式1.1.NOEL=LD50NOEL=LD5070/

11、200070/2000（该该公式公式来来源于源于 EMEAEMEA关关于于清洁清洁验验证的证的指指导原导原则则）公式解释：NOEL（NOAEL）数据如果能直接查到就不需要计算了，直接进入到第2个公式；其中60是指的人体平均体重为60Kg；2000 是一个安全系数。查询美国TOXNET数据库，大鼠经大鼠经口的口的LD50=460mg/KgLD50=460mg/Kg，则NOEL=46070/2000=16.1 mg/Kg/day（错误推算）PDE=NOELPDE=NOEL（mg/Kg/daymg/Kg/day）WeightWeight AdjustmentAdjustment（KgKg）/(F1/

12、(F1F2F2F3F3F4F4F5)F5)PDE=16.1PDE=16.1 mg/Kg/daymg/Kg/day50Kg/(550Kg/(510105 51 11)=3.22mg/day1)=3.22mg/day浓度限浓度限度（）度（）PDEPDE（mg/daymg/day）/（10001000dosedose（g/dayg/day）100100对于原料药而言，dose均定为10g/day浓度限度（）=3.22/(100010)100=0.0322%（322ppm）F1F1：种种属属之间之间的的换算换算系系数，数，代代表由表由物物种差种差异异推导推导的的变异变异系系数，数，与与体表体表面面积相

13、关积相关 F1=5:从大鼠剂量推断人用剂量的系数；F1=12:从小鼠剂量推断人用剂量的系数 F1=2:从狗剂量推断人用剂量的系数；F1=2.5:从兔剂量推断人用剂量的系数F1=3:从猴子剂量推断人用剂量的系数；F1=10:从其他动物剂量推断人用剂量的系数 对于三乙胺，上述LD50是以大鼠为试验得来的数据，所以F1=5。F F2 2：代：代表表个体个体间间的变的变异异系数系数，其值其值为为F F2=2=1 10 0；F3F3：为为短短期接期接触触急性急性毒毒性研性研究究的可的可变变系数：系数：F3=1，研究时间至少为动物寿命的一半（鼠、兔1年，猫、狗、猴7年）F3=1，器官形成的整个过程的生殖研

14、究F3=2，对啮齿类动物个月研究或非啮齿类动物3-5年的研究 F3=5，对啮齿类动物个月研究或非啮齿类动物年的研究 F3=10，更短时间的研究。在所有情况下，对研究时间介于上述时间点之间的研究，应用较大的系数，如对啮齿类动物个月毒性研究，其系数用。以上大鼠经口的LD50值为急毒数据，根据欧盟数据经验，这个研究时间在3-6个月之间，因此，F3=5。F4F4：产产生生严重严重毒毒性情性情况况的系的系数数，如，如非非遗传遗传致致癌毒癌毒性性、神、神经经毒性毒性或或致畸致畸性性，研，研究生究生殖殖毒毒性性时时，用用以以下下系系数：数：F4=1 与母体毒性有关的胎儿毒性;F4=无母体毒性的胎儿毒性 F4

15、=受母体毒性影响的致畸反应;F4=10 无母体毒性影响的致畸反应 因为三乙胺为非严重毒性，所以这里F4=1。F5F5：一一个个可变可变系系数，数，用用在无在无毒毒性反性反应应的剂的剂量量（NOELNOEL）值值时时F5=1 for a NOEL；F5=1-5 for a NOAEL；F5=5-10 for a LOEL；F5=10 for a Lowest-observed-adverse-effect level(LOAEL)因为NOEL已经确定，所以这里F5=1。当研究没有区分NOAEL和NOEL，且依据确定的PDE值选择剂量时毒性不被认为是“副作用”，则使用F5等于1，NOAEL用于多数

16、元素的口服PDE值设定。三乙胺在ICH Q 3C中属于三类溶剂，限度：0.515由由LD50推推算算PDE值建议值建议 原料药工厂中清洁验证指南一文中的NOEL 的单位是mg/天，而不是上文公式中的mg/kg/天 LD50计算NOEL的公式：NOEL=LD5070/2000，公式中的70是欧洲人的评价体重 如果需要用LD50计算NOEL用于计算PDE，推荐公式应该是NOEL=LD50/2000（见参考文献）不推荐在基因毒物质研究中使用 推荐在包材研究的剂量计算中使用参考文献：D.W.Layton;B.J.Mallon;D.H.Rosenblatt;M.J.Small Deriving allo

17、wable daily intakes for systemic toxicants lacking chronic toxicity data.Regulatory Toxicology&Pharmacology,1987,7(1):96-112药品杂质引入风险评估药品杂质引入风险评估常见已知杂质引入途径 起始物料及已知杂质 中间体 试剂&溶剂&催化剂 反应副产物、降解杂质常见未知杂质引入途径 起始物料引入未知杂质、起始物料杂质产生的杂质、生产设备引入的杂质 包材浸出物杂质 环境引入杂质（生产用水等）需要重点做风险评估工作关于PDE法与TTC法管不住外包项目 6氯代丙醇响应低，耐用性差当使用

18、多孔填充材料作为固定相时，分子排阻色谱（Size exclusionchromatography，SEC）和相互作用色谱潜在及未知杂质研究策略讨论5种测定甲磺酸酯分析方法比较LD50计算NOEL的公式：NOEL=LD5070/2000，公式中的70是欧洲人的评价体重具有合适的样品制备方式：直接溶解、溶解后沉淀、液液萃取、固体液萃取似是老生常谈的杂质研 究对于无阈值效应的遗传毒性杂质，如果每日摄入量低于1.“请补充提供或说明杂质检查方法与限度修改(制订)的依 据”杂质研究有关物质检查！ICH Q3D:元素杂质的指导原则(2014.通则0531超临界流体色谱法原料药工厂中清洁验证指南一文中的NOE

19、L 的单位是mg/天，而不是上文公式中的“请结合本产品及起始原料工艺对杂质进行补充研究”PDE控制（存在报道）欧洲化学品管理局（ECHA）符合资质的对照品：适合包装、有COA安全性重点关注高毒性杂质：致癌、致突变类杂杂质17已知杂质研究策略讨论已知杂质研究策略讨论结构已知的杂质研究：起始物料及其已知杂质、中间体、试剂、反应副产物、降解产物 根据工艺路线梳理出产品待研究的杂质清单 进行毒性杂质评估分类：文献报道、软件预测 根据各国药典及ICH Q ABC规则分别建立有关物质和溶剂残留方法 建立满足专属性和灵敏度的方法（LOQ30%限度浓度），收集多批次API中目标杂质含量 基于已有的有关物质方法

20、和溶剂残留方法，增加供试品浓度或改变检测器 基于杂质检出情况制定杂质添加实验，考察工艺的杂质的去除能力 基于杂质分类、毒性评估、产品检出情况制定方法学验证策略及产品控制策略18潜在及未知杂质研究策略讨潜在及未知杂质研究策略讨论论潜在及未知杂质来源：起始物料引入未知杂质、溶剂中杂质、包材浸出物杂质、辅料引入杂质、生产设备引入 根据供应商提供的工艺路线梳理杂质清单及潜在杂质，分别对元素杂质和有机杂质进行分类研究 针对元素杂质采取ICPMS全质量数扫描（69种）和 35种元素半定量扫描 针对挥发及半挥发杂质采用GCMS进行全质量数扫描（谱库匹配）及半定量分析（SIM模式）针对不挥发杂质采用LCMS

21、或 LC-MSMS进行全质量数扫描及半定量分析（SIM模式）购买疑似或近似杂质进行分析比对，确定研究目标 根据杂质结构评估杂质的毒性，确定杂质的研究限度 对比多批次中起始物料及其关联的原料药中杂质的检出情况 根据杂质的来源风险及检出情况，制定杂质的控制策略二、痕量杂质分析方法的建立二、痕量杂质分析方法的建立1.痕量杂质分析的挑战与目标2.基于结构特性的分析方法决策思路3.痕量分析方法建立步骤4.痕量物质定量方法的要素1.痕量杂质分析的挑战与目标痕量杂质分析的挑战与目标痕量杂质分析的挑战痕量杂质分析的挑战 含量低，选择性要求高，高灵敏度的仪器（GC-MS，LC-MSMS、ICPMS 等）杂质结构

22、多样性和差异大，需要多种分析手段和方法 样品基质复杂，需要合适的前处理方法进行分离，纯化，富集 有些杂质具有“亚稳定性”的化学结构，在样品准备，制 备和分析过程中容易发生转化 需要有经验的分析科学家好的分析方法好的分析方法 简单 容易操作，成本低 通用性 稳定性 容易技术转移2.基于结构特性的分析方法决策思路基于结构特性的分析方法决策思路易挥发易挥发分子分子?是是GC条件稳定条件稳定?否否是是HPLC条件稳定条件稳定吗吗?是是HPLC/UV HPLC/MS否否化学衍生化学衍生后引入质谱或紫外检测仪敏感基团后引入质谱或紫外检测仪敏感基团:GC/MS,LC/UV,LC/MS等方法等方法否否HPLC

23、条件条件 下稳定吗下稳定吗?否否是是碱性碱性酸性酸性富含杂原中性分子富含杂原中性分子,羟基羟基,羰基羰基,醚醚,酯等等酯等等富含共轭富含共轭 键分子键分子(+)电喷离电喷离 子化子化/质谱质谱(-)(-)电喷离电喷离 子化子化/质谱质谱化学电离化学电离/质谱质谱UV/UV/质谱质谱如不能如不能达达到检到检测灵测灵敏度敏度HS/GC/FID/MS如不能达到如不能达到 检测灵敏度检测灵敏度如不能达到如不能达到 检测灵敏度检测灵敏度3.3.痕量分析方法建立步痕量分析方法建立步骤骤色谱分离技术色谱分离技术1)1)气相色谱气相色谱2)2)液相色谱液相色谱3)3)离子色谱离子色谱4)4)毛细管电泳毛细管电

24、泳检测手段检测手段 氢火氢火焰焰(FID)紫外紫外(UV)电子电子捕捕获获(ECD)EI质谱质谱(MS)ESI/APCI质谱质谱(MS/MS)荧光荧光检检测测(FLD)氮化学检测器氮化学检测器（CND）样品制备技术样品制备技术1)1)直接溶解直接溶解2)2)溶解后析出溶解后析出3)3)化学衍生法化学衍生法4)4)液液-液萃取液萃取5)5)固相萃取固相萃取选择何种组合的分析方选择何种组合的分析方法法取决取决于于：APIAPI性质（溶解性、化学活性）性质（溶解性、化学活性）目标物性质（极性与挥目标物性质（极性与挥发发性、性、结结构特构特征征）检测器极限检测器极限杂质溶液稳定性杂质溶液稳定性4.4.

25、痕量物质定量方法的要素痕量物质定量方法的要素待测物限度待测物限度=对照品浓度/样品浓度 符合资质的符合资质的对照品对照品：适：适合合包装包装、有有COACOA 有代表性的有代表性的样品样品：中试：中试样样品、品、验验证批证批次次样品样品 适合的适合的色谱系色谱系统统：各目：各目标标杂质杂质及及样品样品可可以有以有效效分离分离 适合的适合的检测检测器器：具有高：具有高专专属性属性、高灵高灵敏敏度度 适合的适合的溶溶媒媒：色谱系统：色谱系统兼兼容、容、溶溶液稳液稳定定性、性、溶溶解能力解能力 具有合适的具有合适的样品制备方样品制备方式式：直：直接接溶解溶解、溶解溶解后后沉淀沉淀、液液液液萃萃取、取

26、、固固体液体液萃萃取取 分析方法核心：准确度分析方法核心：准确度、耐用性耐用性三、案例分析与讨论三、案例分析与讨论5种测定甲磺酸酯分析方法比较种测定甲磺酸酯分析方法比较5种测定水合肼分析方法比较种测定水合肼分析方法比较3种测定氯代丙醇分析方法比较种测定氯代丙醇分析方法比较基因毒杂质开发实例基因毒杂质开发实例甲磺酸甲酯甲磺酸甲酯等等仪器设备样品处理及进样发生LOQ方法缺点LCMS三甲胺衍生后直接进样1 ng/ml存在基质不适用及潜在假阳性风险LC/MS/MS直接溶解进样10 ng/ml设备昂贵，不易获取GC-MS衍生后顶空进样10 ng/ml存在基质不适用及潜在假阳性风险溶解后直接进样20 ng

27、/ml灵敏度低、基质效应强、耐用性差液液萃取后直接进样20 ng/ml操作较为繁琐，局限于水溶性样品ORSOR O I+OR RSOI基因毒杂质开发实例基因毒杂质开发实例肼肼常用分析方法样品处理LOQ方法缺点IC直接进样50 ng/ml设备不通用、灵敏度低 专属性差HILIC/LC/MS直接进样1 ng/ml质量数过小，方法稳定性不好LC/MS苯甲醛衍生后直接进样5 ng/ml衍生萃取操作比较繁琐LLE+GCMS苯甲醛衍生后，液液萃取后直接进样10 ng/ml衍生萃取操作比较繁琐LLE+HPLC/UV苯甲醛衍生后，液液萃取后 直接进样5 ng/ml衍生萃取操作比较繁琐HO+H2NH2NONN+

28、H2N N H2H-1B（Ir、Rh、Ru、Os）建立满足专属性和灵敏度的方法（LOQ30%限度浓度），收集多批次API中目标杂质含量10)ICH Q3B(R2):新型药品中的杂质问题(2006.管不住外包项目 6赋值-QNMR（400M核磁）对于原料药而言，dose均定为10g/dayF5=5-10 for a LOEL；F3：为短期接触急性毒性研究的可变系数：杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、疗效，甚至对人体的健康有害的物质Rosenblatt;M.LiquidChromatographyatCriticalCondition，LCCC“请补充提供或说明杂质检查方法与限度

29、修改(制订)的依 据”取对照溶液20l注入液相色谱仪，调节检 测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满 量程的20%；需要重点做风险评估工作PDE=TD50*体重/500005ug，那么患者因服药导致癌症发生的额外风险可以忽略不记。化学衍生后引入质谱或紫外检测仪敏感基团:根据杂质的来源风险及检出情况，制定杂质的控制策略电感耦合等离子体质谱法uv 检测限 工艺杂质基因毒杂质开发实例基因毒杂质开发实例氯代丙醇测氯代丙醇测定定常用分析方法样品处理LOQ方法缺点GCMS氯代丙醇直接进样30 ng/ml氯代丙醇响应低，耐用性差衍生GC/MS七氟丁酰基咪唑衍生后直接进样5 ng/ml衍生操作繁琐衍生LC/MS

30、二甲胺衍生后直接进样1 ng/ml衍生操作繁琐制剂中两个未知杂质的分离及鉴制剂中两个未知杂质的分离及鉴定定四、未知杂质分离鉴定案例分四、未知杂质分离鉴定案例分析析项目介绍项目介绍 项目背景:某制剂样品在稳定性研究过程中出现的两个降解杂质 色谱条件:C18,40mM磷酸盐水溶液/甲醇=23：77 研究步骤:1.分析方法转换，置换成质谱兼容流动相2.液质联用分析,获取杂质分子量及获取制备中控方法3.制剂样品提取有效成分，利用制备液相分离杂质4.结构鉴定（TOF-MS、超低温探头600M 核磁）5.杂质定向合成6.赋值-QNMR（400M核磁）7.相对校正因子测定定位MS（ESI-）分析方法转换分析

31、方法转换甲醇萃取、过滤常温旋干甲 醇 复 溶、制 备样品处理与制备分离样品处理与制备分离冷冻干燥色谱定位、质谱确认分子量结合API结构推论杂质 结构通过TOFMS和核磁得到验证 杂质A：次甲基氧化生成醇杂质B：2号位甲甲基氧化成醛QNMR定量 杂质A：89.5%；杂质B：85.6%未知杂质结构鉴定未知杂质结构鉴定找找不准研不准研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不细质不细质量量标标准准看不懂发看不懂发补补意意见见2 23 34 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 6 1 1高比例发补高比例发补的的几几条意条意见见你有木有接到过这类令人心塞的发补通知？

32、“请结合本产品及起始原料工艺对杂质进行补充研究”“请补充提供或说明杂质检查方法与限度修改(制订)的依 据”“请使用专属性更强灵敏度更高的方法对本品与原研的 杂质谱进行重新研究”1 1找找不见研不见研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不细质不细质量量标标准准看不懂发看不懂发补补意意见见2 24 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 6 3 31 1杂质研究有关物质检查！1有关有关物物质质起始原料起始原料中间体、副产物中间体、副产物 异构体异构体和聚合物和聚合物 多晶型多晶型降解产物降解产物异构体和聚合物异构体和聚合物 多晶型多晶型3外源污外源污染染物物微

33、生物微生物微粒物质微粒物质-农药残留农药残留非法添加物非法添加物2无关杂质无关杂质试剂试剂配配位位体体、无无机盐机盐、溶、溶剂剂重金属催化剂重金属催化剂过滤介质、活性炭过滤介质、活性炭-酶残留酶残留通则0531超临界流体色谱法2000 是一个安全系数。1,3-二氯-2-丙醇根据杂质结构评估杂质的毒性，确定杂质的研究限度在检索剂量数据前需要全面检索该物质是否有致癌致畸性，例如氯乙酸CPDB数据TD50显示阴性制剂中两个未知杂质的分离及鉴定质控标准/方法与质量的关系当研究没有区分NOAEL和NOEL，且依据确定的PDE值选择剂量时毒性不被认为是“副作用”，则使用F5等氯代丙醇响应低，耐用性差201

34、5年版药典注射剂通则整合后补充的这 个项目给你什么提示？2小时改换溶剂或明确给出Rosenblatt;M.已有证据表明，该物质只有在超过一定限度时才会产生遗传毒性。F5=5-10 for a LOEL；R=试剂/催化剂 DS=药用辅料分析方法转换，置换成质谱兼容流动相杂质与主成分结构性质差异很大 国外使用TLC补充检测三唑仑/七氟烷/十一烯酸欧洲化学品管理局（ECHA）有否漏检杂质 有否需校正杂质重组人生长激素重组人生长激素红霉素红霉素/麦迪霉素麦迪霉素硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白/肝素钠肝素钠阿奇霉素阿奇霉素/右旋糖酐铁右旋糖酐铁三唑三唑仑仑/七氟烷七氟烷/十一烯酸十一烯酸重组重组发酵发酵提取提

35、取半合成半合成合成合成更有新型生物技更有新型生物技术术/细胞产品细胞产品多多、全全大大、杂杂农药残留农药残留菌体菌体蛋白蛋白残留酶残留酶培养液培养液杂质杂质元元素素（重（重金金属）属）杂杂质质1类类金属金属杂质（原料药）杂质（原料药）-1A（Pt、Pd）-1B（Ir、Rh、Ru、Os）-1C（Mo、Ni、Cr、V）修订通则新增方法2341农药残留量测定法农药残留量测定法本方法为质谱法（通则0431）测定中药材中的农药残留量。气相色谱串联质谱法 液相色谱串联质谱法提供了多品种通用的色谱及质谱条件仅仅中药材有仅仅中药材有 农药农药残留问题？残留问题？各国药典列出的杂质与你产品的关系？各国药典列出的

36、杂质与你产品的关系？曾见到有企业CTD格式申报资料中杂质分析章节 让人不知所云的神段子：国内标准目前未收载指定相关杂质，USP中收载有3个杂质，EP中收载有5个特定杂质，其中2个与USP不同，国内可以购买到EP的5种杂质对照品。呃.我弱弱的问您一句您想说什么？“请结合本产品及起始原料工艺对杂 质进行补补充充研究”杂杂质研质研究究怎样怎样突突出自出自己己特色特色？-中间体中间体-副产物副产物A+BC;C+DEA+BCA+BC以合成路线为线索，顺藤摸瓜列表以合成路线为线索，顺藤摸瓜列表 自家工艺杂质！自家工艺杂质！理论分析与实验数据相结合！理论分析与实验数据相结合！以终为始确定重以终为始确定重点！

37、点！-物物料料残留残留（反应物，试剂，溶剂，催化剂）A（1mol）+B（2mol）C（1mol）+B（1mol）列表自家产品中所有潜在杂质并分析来龙去脉杂质名称杂质名称 引入点引入点 去除方式去除方式 监控方法监控方法 预估量预估量 属性属性A 合成第一步 反应完全TLC 检测限 工艺杂质过程中检测以下 起始原料B合成第一步水洗3次 uv 检测限 工艺杂质过程中检测以下起始原料合成第二步完C合成第一步 HPLC 工艺杂质全过程中检测中间体B合成第一步反应结束或水洗工艺杂质 原料引入CChp.和USP中的杂质1合成第一步合成第二步HPLC过程中检测+终产品标准中检查工艺杂质 副产物/热降解物“请

38、结合本产品及起始原料工艺对杂质进行补补充充研究”1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不细质不细质量量标标准准看不懂发看不懂发补补意意见见2 24 4说说不清依不清依据据缘缘由由 5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 63 31 1检检测测的的方方法法因因杂杂而异而异质量数过小，方法稳定性不好过程中检测以下 起始原料针对元素杂质采取ICPMS全质量数扫描（69种）和 35种元素半定量扫描-1B（Ir、Rh、Ru、Os）似是老生常谈的杂质研 究“请使用专属性更强灵敏度更高的方法对本品与原研的杂质谱进行重新研究”F5=1-5 for a NOAEL；关于PDE法与TT

39、C法三唑仑/七氟烷/十一烯酸急毒数据，根据欧盟数据经验，这个研究时间在3-6个月之间，因此，F3=5。液质联用分析,获取杂质分子量及获取制备中控方法全过程中检测中间体杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、疗效，甚至对人体的健康有害的物质5种测定甲磺酸酯分析方法比较TTC是在接受患者终生用药的癌症发生概率不超过10万分之一的基础上，从高浓度下进行的致癌性实验数据线性外推倒极低浓度得到的一个理论值。以超临界流体作为流动相。以超临界流体作为流动相。各国药典列出的杂质与你产品的关系？210nm 254nmR=试剂/催化剂 DS=药用辅料原研标准原研标准EP7.0USP34JP15杂质谱杂

40、质谱研究研究梯度洗脱梯度洗脱色谱条件色谱条件 210nm 254nm双波长检测双波长检测梯度洗脱梯度洗脱色谱条件色谱条件 210nm 254nm双波长检测双波长检测梯度洗脱梯度洗脱色谱条件色谱条件 210nm 254nm双波长检测双波长检测等度洗脱等度洗脱色谱条件色谱条件 210nm 检测检测等度洗脱等度洗脱色谱条件色谱条件210nm单波长检测单波长检测“请使用专属性更强灵敏度更高的方法对本品与原研的杂质谱进行重新研究”杂质杂质与主成与主成分分结结构性构性质质差异很大差异很大 国外使国外使用用TLCTLC补补充充检测检测怎么判定你所用的方法不够好？-根据文献怎么判定你所用的方法不够好？-根据试

41、验物质平衡考察/灵敏度试验/专属性试验有否漏检杂质 有否需校正杂质 需否补充方法根据组成根据结构根据性质/需求/法规怎么判定你所用的方法不够好？-综合分析举一反举一反三触类旁三触类旁通通20152015年版年版药药典注典注射射剂剂通通则则整合后整合后补补充充的的这这 个个项项目目给给你你什么提什么提示？示？通则中新增的仪器与技术通通则则0412电电感感耦合耦合等等离子离子体体质谱质谱法法重重金属金属及及有害元有害元素素山楂山楂照铅、镉、砷、汞、铜测定法（通则2321原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质 谱法）测定，铅不得过5mg/kg;镉不得过0.3mg/kg;砷 不得过2mg/kg；汞不得

42、过 0.2mg/kg；铜不得过 20mg/kg。中药注射剂已经在精密测定按日服药量限定 金属杂质，连化妆品都开始用ICP-MS检测 铅汞砷镉喽！而化药的静脉注射剂重金属就 一直用目视判断总量粗测？！重金属杂质监控是不是该升升级啦？重金属杂质监控是不是该升升级啦？新增通则中涉及的仪器与技术通则通则0531超临界超临界流流体色谱法体色谱法supercritical fluid chromatography,SFC超超临临界流界流体体色谱色谱仪仪很多部件类似髙效液相色谱仪以超临界超临界流流体体作为流动相。分析速度比比H PLC提提高高3-10倍倍，溶剂成本是是HPLC的的1/3-1/40，除可连接U

43、V,DAD以及MS检测器外还可可以连接以连接气气相相的的FID检检测测器器对手性化合手性化合物物具有更好的分离能力新增通则中涉及的仪器与技术新增通则中涉及的仪器与技术0532临临界界点色点色谱谱法法Liquid Chromatography at Critical Condition，LCCC仪器同仪器同HPLC当使用多孔填充材料作为固定相时，分子排阻色分子排阻色谱谱（Size exclusionchromatography，SEC）和相互作用色谱相互作用色谱（Interaction chromatography，IC）的分离机制在分离聚合物 时同时发生作用。在某个特殊色谱条件（固定相、流动相

44、的组成、温度）下，存在两种分离机制的临界点存在两种分离机制的临界点，被称为焓熵互补点或色 谱临界条件（critical conditions）或临界吸附或临界吸附点点（critical adsorptionpoint，CAP）。是对聚聚合合物物进行分离的一种色谱技术。与时俱进实事求是与时俱进实事求是接轨国际体现特色接轨国际体现特色 整体整体着眼细节入手着眼细节入手The Carcinogenic Potency Database(CPDB)全过程中检测中间体痕量物质定量方法的要素异构体和聚合物 多晶型药物杂质致癌致畸信息获取来源NOEL值与致癌致畸没有必然联系限度=PDE/日最大剂量F5=1

45、for a NOEL；基于杂质分类、毒性评估、产品检出情况制定方法学验证策略及产品控制策略新药与仿制药研究策略有显著差异10)ICH Q3B(R2):新型药品中的杂质问题(2006.四、未知杂质分离鉴定案例分析当研究没有区分NOAEL和NOEL，且依据确定的PDE值选择剂量时毒性不被认为是“副作用”，则使用F5等现在提倡配定量限或限度1/10溶液公式解释：NOEL（NOAEL）数据如果能直接查到就不需要计算了，直接进入到第2个公式；含量低，选择性要求高，高灵敏度的仪器（GC-MS，取对照溶液20l注入液相色谱仪，调节检 测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满 量程的20%；ICH M7(R1):

46、评估和控制药物中DNA 反应性（致突变）杂质以限制潜在的致癌风险(2017.现在改为配定量限或限度1/10溶液基于已有的有关物质方法和溶剂残留方法，增加供试品浓度或改变检测器1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不对研不对研究究方方法法写写不好质不好质量量标标准准看不懂发看不懂发补补意意见见2 23 3 4 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 6质质控控标标准准/方法方法与与质质量的关系量的关系美女与旗袍美女与旗袍肥肥与束身衣肥肥与束身衣需要严控的毒性杂质可以宽管的有效杂质校正因子差异大的杂质以以及你想及你想重重点精密点精密管管控的杂控的杂质质！结合结合试试验

47、结果验结果写写好标准好标准溶剂选择的依据溶剂选择的依据8小时小时标标准中准中一一般不般不需需提示提示4小小时时需提需提示示“临临用用现现配配”或或“立立即进样即进样”2小时改小时改换换溶剂溶剂或或明确明确给出给出“该溶该溶液液配配制制后后应应在在1小小时内时内使使用用”采用采用外外标标法法时时，通，通常常取各取各品品种种项项下下的的对对照照品溶品溶液，液，连续连续进进样样5 5次，次，除除另另有有规规定外定外，RSDRSD2.02.0在在质质量量标标准中如果准中如果没没有明有明确确规规定定，就就是是2.02.0 注意注意：不不要自己要自己难为难为自自己己哦哦！应应给给予微予微量量物物质检质检测

48、测较较宽宽松的指松的指标标！特特别别是是在定在定量量限附限附近近时时！要要连续进样连续进样不能拼不能拼凑凑哦哦！重复性（重复性（RSD）的要求）的要求 原来大多药典标准原来大多药典标准取对取对照照溶溶液液20l注注入入液相液相色色谱仪谱仪，调节调节检检 测灵测灵敏敏度度，使使主主成成分分色色谱谱峰峰的的峰峰高高约约为为满满 量程量程的的20%；现在改为配定量限现在改为配定量限或或限度限度1/10溶液溶液取灵取灵敏敏度度溶溶液液20l注入液注入液相相色谱色谱仪仪，调，调节节 检测检测灵灵敏度敏度，使主使主成成分色分色谱谱峰的峰的信信噪比噪比约约 为为10（或大或大于于10）；）；关于灵敏度测试关

49、于灵敏度测试 原来大多标准原来大多标准取对取对照照溶溶液液20l注注入入液相液相色色谱仪谱仪，调节调节检检 测灵测灵敏敏度度，使使主主成成分分色色谱谱峰峰的的峰峰高高约约为为满满 量程量程的的20%；现在提倡配定量限或限现在提倡配定量限或限度度1/10溶液溶液取灵取灵敏敏度度溶溶液液20l注入液注入液相相色谱色谱仪仪，调，调节节 检测检测灵灵敏度敏度，使主使主成成分色分色谱谱峰的峰的信信噪比噪比约约为为10（或大或大于于10）；）；关于灵敏度测试关于灵敏度测试1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不细质不细质量量标标准准似是老生常谈似是老生常谈的的杂质研杂质研 究究

50、-还有哪些困惑与问题？看不懂发看不懂发补补意意见见2 23 34 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 6优优秀秀的申的申报资报资料料-是能成功传递大量信息的研发研发思路思路研发研发实验实验水平水平方法方法实验实验结论结论实验实验结果结果研发研发 理念理念缺依据少过程 无数据缺缺主观臆断主观臆断别问我根据什么别问我根据什么常常见问见问题题-错错缺浅乱缺浅乱乱乱杂散无章杂散无章没链接没逻辑没链接没逻辑 慢慢品来细细找慢慢品来细细找东一句西一行 考验你浅浅蜻蜓点水蜻蜓点水想说信你很困难想说信你很困难 谁说我没跟你讲谁说我没跟你讲只能发补问明白只能发补问明白点两句藏八