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总RNA的提取和RT-PCR最新详解课件.ppt

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总RNA的提取和RT-PCR最新详解课件.ppt

收集适量细胞，加1ml Trizol用移液枪反复吹吸，直至裂解液中无明显沉淀向裂解液中加200 l氯仿4,12000g 离心15min吸取上清液400450 l 至另一新离心管中(切忌吸出白色中间层)向上清中加入等体积等体积异丙醇混匀4,12000g 离心10min缓慢沿离心管壁加入1ml 75%乙醇4,12000g 离心5min小心尽量弃去乙醇加入10l DEPC水溶解沉淀,-80保存备用室温静置3min盖紧离心管盖，用手振荡15s室温静置3min上下颠倒离心管充分混匀室温静置5min小心弃去上清室温干燥沉淀室温干燥沉淀2min（1 1）（2 2）（3 3）（4 4）（5 5）（6 6）（7 7）（8 8）（9 9）洗涤离心管壁轻轻上下颠倒 dsDNA(双链DNA)1OD260=50ug/mlssDNA(单链DNA)1OD260=33ug/mlRNA1OD260=40ug/ml 如配好的反应液较多沾到管壁上，可将如配好的反应液较多沾到管壁上，可将PCRPCR反应管置台式离心机中瞬时离心，使反应管置台式离心机中瞬时离心，使反应液集中于管底，反应液集中于管底，将反应管放到基因扩增仪将反应管放到基因扩增仪(PCR(PCR仪仪)上上.