检测系统的评价与验证课件.ppt

1、1临床生化实验方法的临床生化实验方法的 选择和评价选择和评价2n教学目的和要求：教学目的和要求：掌握掌握:实验方法的分级、标准品分级及相互之间的联系实验方法的分级、标准品分级及相互之间的联系熟悉熟悉:实验方法选择的的原则；实验误差的定义、分类和表实验方法选择的的原则；实验误差的定义、分类和表 示方法；方法评价的指标；示方法；方法评价的指标；了解了解:实验方法选择评价的步骤；方法评价实验实验方法选择评价的步骤；方法评价实验:回收实验和回收实验和 干扰实验的定义、原理和应用。干扰实验的定义、原理和应用。3 第一节第一节 实验方法的选择实验方法的选择 选择选择准确可靠准确可靠的实验方法的实验方法为为

2、临床临床提供提供准确可靠准确可靠的信息的信息临床生化检验分析临床生化检验分析保保证证4一、实验方法选择的目的一、实验方法选择的目的根本目的：根本目的：各实验室按照方法选择的原则结合自身条件，确各实验室按照方法选择的原则结合自身条件，确定定合适合适的某项目的检测方法。的某项目的检测方法。保证拟使用的检测方法在正式应用于临床分析病保证拟使用的检测方法在正式应用于临床分析病人标本之前，对方法性能及可能引入的误差进行人标本之前，对方法性能及可能引入的误差进行了了解解，作出初步评估。，作出初步评估。5二、实验方法的分级二、实验方法的分级分级依据分级依据国际临床化学联合会国际临床化学联合会（IFCCIFC

3、C）根据分析方法的根据分析方法的准确性准确性与精密度与精密度的不同。的不同。v决定性方法决定性方法 v参考方法参考方法 v常规方法常规方法 分为三级：分为三级：6（一）决定性方法（一）决定性方法p定义定义：是指是指准确度最高，系统误差最小准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，经过详细的研究，没有没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，其测定结，其测定结果与真值最为接近。果与真值最为接近。p主要方法：主要方法：重量分析法重量分析法、中子活化法、同位素稀释、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（质谱分析法（ID-MSID-MS）7p应用：应用

4、：由于由于技术要求太高，费用昂贵技术要求太高，费用昂贵，这类方法不直接用于鉴定，这类方法不直接用于鉴定常规方法的准确性，只用于常规方法的准确性，只用于评价参考方法与一级标准品评价参考方法与一级标准品。储氢重量分析仪储氢重量分析仪 (北京英格海德分析技术有限公司北京英格海德分析技术有限公司)8（二）参考方法（二）参考方法p定义：定义：是指是指准确度与精密度已经被充分证实准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。这类方法的方法。这类方法干扰因素少干扰因素少，系统误差很小

5、，有适当的灵系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中，重复测定中的的随机误差可以忽略不计随机误差可以忽略不计。p主要方法：主要方法：原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等9p应用：应用：能在能在条件优越条件优越的实验室作的实验室作常规分析常规分析，主要用于鉴定主要用于鉴定常规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以常规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以被接受；用于鉴定二级标准品和为质控血清定值；用于被接受；用于鉴定二级标准品

6、和为质控血清定值；用于商品试剂盒的质量评价。商品试剂盒的质量评价。10（三）常规方法（三）常规方法p定义：定义：应具有应具有足够足够的精密度、准确度和特异度，有的精密度、准确度和特异度，有适当适当的分析范围，的分析范围，经济实经济实用用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。，其性能指标符合临床或其它目的的需要。p主要方法：主要方法：溴甲酚绿法、双缩脲法、溴甲酚绿法、双缩脲法、J-GJ-G法等。法等。p应用：应用：临床临床常规检验常规检验使用，常规方法在作使用，常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为以作为推荐方法推荐方法。11项目项目决定性方法决定

7、性方法参考方法参考方法钙钙ID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法氯氯电量滴定法、中子活化法电量滴定法、中子活化法电流滴定法电流滴定法镁镁ID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法磷磷ID-MS钾钾ID-MS、中子活化法中子活化法火焰光度法火焰光度法钠钠重量分析法、中子活化法重量分析法、中子活化法火焰光度法火焰光度法白蛋白白蛋白免疫化学法免疫化学法总蛋白总蛋白双缩脲法双缩脲法肌酐肌酐ID-MS、离子交换层析法离子交换层析法离子交换层析法离子交换层析法尿素尿素ID-MS尿素酶法尿素酶法尿酸尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外法尿酸酶法（紫外法）胆红素胆红素重氮反应法重氮反应法葡萄糖葡萄糖ID-

8、MS己糖激酶法己糖激酶法胆固醇胆固醇ID-MSAbell-Kendall法，胆固醇氧化酶法，胆固醇氧化酶法法甘油三酯甘油三酯ID-MS酶法酶法AST（GOT）MDH-NADH法法ALT（GPT）LDH-NADH法法转肽酶（转肽酶（r-GT）连续监测产物生成法连续监测产物生成法肌酸激酶肌酸激酶 NAD+偶联法偶联法12三、标准试剂的分级三、标准试剂的分级标准试剂（标准品）的定义：标准试剂（标准品）的定义：国际标准化委员会将标准品的定义暂定为：它的国际标准化委员会将标准品的定义暂定为：它的一种或几种物理或一种或几种物理或化学性质已经充分确定化学性质已经充分确定；被用于；被用于校正仪器或用于评价一种

9、测定方法校正仪器或用于评价一种测定方法的物的物质，并将其分成三级。质，并将其分成三级。标准品的应用：标准品的应用：方法评价、仪器校正、常规分析的质量控制方法评价、仪器校正、常规分析的质量控制13标准品的分级：标准品的分级：v一级标准品一级标准品 v二级标准品二级标准品 v控制物控制物 14（一）一级标准品（原级参考物）（一）一级标准品（原级参考物）p定义：定义：是是已经确定的稳定而均一已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量所含杂质已经定量。p应用：应用：用于用于校正决定性方法，

10、评价和校正参考方法以及为校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品二级标准品”定值。定值。15（二）二级标准品（次级参考物）（二）二级标准品（次级参考物）p定义：定义：这类标准品可以是这类标准品可以是纯溶液纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相存在于相似基质中似基质中。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。定值或用一级标准品比较而确定。p应用：应用：主要主要用于常规方法的标化和控制物的定值。用于常规方法的标化和控制物的定值。16（三）控制物（质控物

11、）（三）控制物（质控物）用二级标准品和常规方法测定，用二级标准品和常规方法测定，用于常规质量控制，以控制病人标本用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差的测定误差。控制物不能用于标定仪器或方法。控制物不能用于标定仪器或方法。定值血清：定值血清：在发生问题时查找原因在发生问题时查找原因 未定值血清：一般情况下使用未定值血清：一般情况下使用17v决定性方法 一级标准品v参考方法 二级标准品v常规方法 控制物18四、实验方法选择的原则四、实验方法选择的原则总原则：总原则：从实际出发，根据实验室的条件和检测要求确定从实际出发，根据实验室的条件和检测要求确定适当的方法适当的方法。条件优越的实验室：参考

12、方法条件优越的实验室：参考方法一般临床化学实验室实验室：常规方法或使一般临床化学实验室实验室：常规方法或使用方便的参考方法用方便的参考方法19 尽量选用尽量选用国内外通用方法或推荐方法国内外通用方法或推荐方法，便于方法，便于方法的规范化和质量控制，重点考虑的规范化和质量控制，重点考虑实用性和可靠性实用性和可靠性。常规方法选择时的原则：常规方法选择时的原则：20（一）实用性（一）实用性微量快速、方微量快速、方法简便、安全法简便、安全可靠、成本低可靠、成本低廉廉（二）可靠性（二）可靠性 所选方法具有较高的精密度、准确度和较大的检所选方法具有较高的精密度、准确度和较大的检测能力，保证测定结果的准确性

13、能满足方法允许误差测能力，保证测定结果的准确性能满足方法允许误差限度的要求。限度的要求。标本标本l、试、试剂剂ml21五、实验方法选择的步骤五、实验方法选择的步骤（一）广泛查阅文献：（一）广泛查阅文献：根据方法选择的要求，比较各种方法根据方法选择的要求，比较各种方法（二）选定侯选方法：全面认识该法。（二）选定侯选方法：全面认识该法。（三）侯选方法的初步试验：（三）侯选方法的初步试验：1.根据方法性能选择根据方法性能选择2.根据所需条件设备选择根据所需条件设备选择详见教材详见教材P822第二节第二节 实验方法的评价实验方法的评价 初步试验初步试验判断符合实验要求判断符合实验要求系统评价系统评价决

14、定该方法是否可接受决定该方法是否可接受分析评价试验测得结果和分析评价试验测得结果和比较方法性能判断的标准比较方法性能判断的标准u实验方法系统评价的过程实验方法系统评价的过程:对实验误差的测定对实验误差的测定23一、实验误差一、实验误差定义定义:指量值的指量值的给出值给出值与其客观与其客观真值真值之差之差.(一一)实验误差的分类实验误差的分类:依据来源性质依据来源性质实验误差实验误差系统误差系统误差随机误差随机误差恒定系统误差恒定系统误差比例系统误差比例系统误差广泛性广泛性不可求不可求24p系统误差系统误差定义定义:指一系列测定值对真值存在指一系列测定值对真值存在同一倾向同一倾向的偏差的偏差。特

15、点特点:具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现；出现；当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。统误差能提高测定的准确度。25分类分类:恒定系统误差：指恒定系统误差：指由干扰物引起由干扰物引起的使测定值与真值存在的使测定值与真值存在恒定大小的误差，恒定大小的误差，误差大小与被测物浓度无关，而与干扰物误差大小与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关。浓度相关。

16、比例系统误差：指相对于被测物浓度有比例系统误差：指相对于被测物浓度有相同的百分比误相同的百分比误差差，误差的绝对量与被测物浓度成正比。误差的绝对量与被测物浓度成正比。引起误差的原因：引起误差的原因：方法误差：方法误差：最严重，最难避免最严重，最难避免；仪器和试剂误差：仪器和试剂误差：可以采取措施避免。可以采取措施避免。26p随机误差随机误差特点特点:误差没有一定的大小和方向，可正可负，数据呈正态分布误差没有一定的大小和方向，可正可负，数据呈正态分布；具有不可预测性，不可避免，但可控制在一定范围内；具有不可预测性，不可避免，但可控制在一定范围内；当分析步骤越多，造成种误差的机会越多；当分析步骤越

17、多，造成种误差的机会越多；随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。定义定义:指在实际工作中，指在实际工作中，多次重复测定多次重复测定某一物质时引起的误某一物质时引起的误差。差。27 由测定仪器、试剂、环境等实验条件的改变以及由测定仪器、试剂、环境等实验条件的改变以及分析人分析人员操作习惯员操作习惯等因素的变化而引起。等因素的变化而引起。引起误差的原因：引起误差的原因：28二、方法评价的基本内容和步骤二、方法评价的基本内容和步骤(一)方法评价的基本内容方法评价的基本内容p基本内容基本内容:通过实验途径，测定并评价方法的通过实验途径，测定并评价方法的精密

18、度和准确度精密度和准确度。p评价试验的过程评价试验的过程:就是对就是对误差误差的测定。的测定。精密度和准确度精密度和准确度误差误差方法评价指标方法评价指标不可直接测定不可直接测定 实际测定实际测定可直接测定可直接测定方法评价试验方法评价试验29(二二)方法评价步骤方法评价步骤p评价前实验评价前实验:研究候选方法的最适条件。研究候选方法的最适条件。p初步评价初步评价:批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验 p最后评价最后评价:依顺序作依顺序作日间重复性试验日间重复性试验，方法比较试验方法比较试验和总体判断方法和总体判断方法是否可接受是否可接受 。p评价后

19、实验评价后实验:如方法可接受，则进行临床相关研究如方法可接受，则进行临床相关研究.p方法应用方法应用:建立质控系统，培训操作者，引人常规工作等建立质控系统，培训操作者，引人常规工作等。随机误差随机误差系统误差系统误差方法性能方法性能判断判断诊断学评价诊断学评价30三、方法评价指标三、方法评价指标 精密度、准确度、特异度和干扰以及线性范围等精密度、准确度、特异度和干扰以及线性范围等（一）精密度（一）精密度表示测定结果中表示测定结果中随机误差大小随机误差大小程度的指标。它表示程度的指标。它表示同一标本同一标本在一定条件下在一定条件下多次重复测定多次重复测定所得到的所得到的一系列单次测定值的符合程度

20、一系列单次测定值的符合程度。常用常用标准差（标准差（S S）或或变异系数（变异系数（CVCV）表示。表示。（二）准确度：（二）准确度：指指测定结果与真值接近测定结果与真值接近的程度的程度31（四）特异度和干扰（四）特异度和干扰 即专一性，是指在特定实验条件下即专一性，是指在特定实验条件下分析试剂只对待测物质起反应分析试剂只对待测物质起反应，而，而不与其它结构相似的非被测物质发生反应不与其它结构相似的非被测物质发生反应。分析方法特异度越高，则测定。分析方法特异度越高，则测定结果越准确。结果越准确。化学反应中能检出的化学反应中能检出的最小量最小量即检测限度或检出限，是指能与适当的即检测限度或检出限

21、，是指能与适当的“空白空白”读数读数相区别的待测物的最小值相区别的待测物的最小值。（三）灵敏度（三）灵敏度（五）线性范围（五）线性范围实验方法所能检测标本中某物质的实验方法所能检测标本中某物质的浓度范围浓度范围32四、评价试验四、评价试验 评价试验包括评价试验包括v重复性试验重复性试验v回收试验回收试验v干扰试验干扰试验v方法比较试验方法比较试验 33（一）重复性试验（一）重复性试验p试验的目的试验的目的:p试验的方法试验的方法:对对同一材料（标准液、质控液、标本等）同一材料（标准液、质控液、标本等）分成数份试验标本进行分成数份试验标本进行多次分多次分析测定析测定，并计算其，并计算其均数、标准

22、差与变异系数。均数、标准差与变异系数。检测候选方法的随机误差检测候选方法的随机误差（1 1）批内）批内:标准液标准液 （2 2）日内）日内:（3 3）日间）日间:质控液质控液 （4 4）平行双份）平行双份:p试验的形式试验的形式:p应注意的问题应注意的问题:（1 1）分析标本选择）分析标本选择（2 2）被测物浓度）被测物浓度34(二二)回收试验回收试验p试验的目的试验的目的:p试验的方法试验的方法:将被测物标准液加人病人标本中，成为将被测物标准液加人病人标本中，成为分析标本分析标本；原病人；原病人标本中加人等量的无被测物的溶剂作标本中加人等量的无被测物的溶剂作基础标本基础标本；然后用候选方；然

23、后用候选方法测定并得到各自浓度。法测定并得到各自浓度。检测候选方法的比例系统误差。检测候选方法的比例系统误差。p回收回收:指候选方法准确测定指候选方法准确测定加入常规分析标本的纯分析加入常规分析标本的纯分析物物的能力。的能力。35回收浓度回收浓度=分析标本测得浓度分析标本测得浓度 -基础标本测得浓度基础标本测得浓度（实际测得值）（实际测得值）p计算计算:加入浓度加入浓度=标准液量标准液量病人样品量（病人样品量（mlml）标准液量（）标准液量（mlml）标准液浓度（理论真实值）标准液浓度（理论真实值）回收率（回收率（%）=回收浓度回收浓度加入浓度加入浓度 100100（理想值为）（理想值为）36

24、(三三)干扰试验干扰试验p试验的目的试验的目的:用来检测候选方法的用来检测候选方法的恒定系统误差恒定系统误差。干扰物。干扰物浓度浓度不同，不同，误差大小也不同误差大小也不同p干扰干扰:指标本中某些指标本中某些非被测物质本身不与分析试剂反应非被测物质本身不与分析试剂反应但以但以其它形式其它形式使待测物测定值偏高或偏低使待测物测定值偏高或偏低。37p试验的方法试验的方法:基本与回收试验一样，但在病人标本中加人的是疑有干基本与回收试验一样，但在病人标本中加人的是疑有干扰或非特异性反应的物质。将可能引起干扰的物质配成一定扰或非特异性反应的物质。将可能引起干扰的物质配成一定浓度的溶液，加到病人标本中成为

25、干扰分析样本；原病人标浓度的溶液，加到病人标本中成为干扰分析样本；原病人标本加人相同量的无干扰物质的溶剂作为基础样本；然后用候本加人相同量的无干扰物质的溶剂作为基础样本；然后用候选方法对此两种样本同时测定，两者之差即表示该干扰物质选方法对此两种样本同时测定，两者之差即表示该干扰物质产生的干扰所引起的误差，即干扰值产生的干扰所引起的误差，即干扰值干扰值干扰值=分析标本测得浓度分析标本测得浓度 -基础标本测得浓度基础标本测得浓度p计算计算:38(四四)方法比较试验（对比试验）方法比较试验（对比试验）用于检测候选方法的系统误差。用于检测候选方法的系统误差。对所得数据进行分对所得数据进行分析，可提供系

26、统误差的性质（恒定或和比例误差）析，可提供系统误差的性质（恒定或和比例误差）对一组病人的标本用候选方法和比较方法同时进行分对一组病人的标本用候选方法和比较方法同时进行分析测定，观察二者之间的差异。这是考验候选方法析测定，观察二者之间的差异。这是考验候选方法是否可采用的重要措施。是否可采用的重要措施。39v在进行临床化学常规方法的评价时，最好在进行临床化学常规方法的评价时，最好选择参考方法作为比较方法选择参考方法作为比较方法v若采用已知偏差法，则有部分误差来自比若采用已知偏差法，则有部分误差来自比较方法（与已知偏差较方法（与已知偏差 一致的那部分误差），一致的那部分误差），剩余的则属于侯选方法。剩余的则属于侯选方法。v若采用未知偏差法，分析误差可能来源于若采用未知偏差法，分析误差可能来源于二者之一或两者都有，难以分析。二者之一或两者都有，难以分析。40方法学评价实验小结 重复性试验：重复性试验：测定候选方法的偶然误差，衡量精密度。测定候选方法的偶然误差，衡量精密度。回收试验：回收试验：测定比例系统误差，衡量准确度测定比例系统误差，衡量准确度。干扰试验：干扰试验：测定恒定系统误差，衡量准确度测定恒定系统误差，衡量准确度。方法比较试验方法比较试验 测定系统误差测定系统误差41