临床酶学检验技术课件.ppt

1、第第 四四 章章临床酶学检验技术临床酶学检验技术全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术2教学目标与要求教学目标与要求掌握掌握1.酶活性的国际单位定义酶活性的国际单位定义2.酶活性测定的连续监测法和定时法的概念酶活性测定的连续监测法和定时法的概念3.连续监测法的计算和方法设计连续监测法的计算和方法设计4.酶活性测定最适条件的概念和意义酶

2、活性测定最适条件的概念和意义5.ALT、AST、ALP、GGT、LD、CK测定参考方法测定参考方法 原理和评价原理和评价全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术3教学目标与要求教学目标与要求熟悉熟悉1.酶动力学参数的含义酶动力学参数的含义2.电泳法和免疫抑制法测定同工酶的原理电泳法和免疫抑制法测定同工酶的原理3.AMY、CHE的测定原理的测定原理全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）

3、（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术4教学目标与要求教学目标与要求了解了解 1.酶蛋白质量测定的优点酶蛋白质量测定的优点2.定时法测定临床常用诊断酶的原理和评价定时法测定临床常用诊断酶的原理和评价3.同工酶的其他检测方法同工酶的其他检测方法全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术5酶的概念：酶的概念：人卫第六版 酶（酶（enzyme）是由活细胞合成的、对其特异底物）是由活细胞合成的、对其特异底物起高效催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反起

4、高效催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反应最主要的生物催化剂应最主要的生物催化剂(biocatalyst)。人卫第七版 生物体内的酶（生物体内的酶（enzyme）是对其特异底物起高效是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核糖核酸，前者是是机体内催化催化作用的蛋白质和核糖核酸，前者是是机体内催化各种代谢反应最主要的催化剂。各种代谢反应最主要的催化剂。概述概述全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术6酶促反应表示为：酶促反应表示为：底物底物：Subestrate

5、：S 产物：产物：Product：P 酶酶 ：Enzyme：E12PKKKSEESEP 概述概述全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术7酶的化学本质：酶的化学本质：绝大多数的酶是蛋白质，称绝大多数的酶是蛋白质，称这类酶为这类酶为enzyme 具有催化功能的具有催化功能的RNA被称为核酶被称为核酶(ribozyme)具有催化功能的具有催化功能的DNA被称为脱氧核酶被称为脱氧核酶(deoxyribozyme)概述概述全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药

6、院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术8酶的研酶的研究历史：究历史：1926年年J.B.Sumner首次从刀豆制备出脲酶结晶，证首次从刀豆制备出脲酶结晶，证明其为蛋白质，并提出酶的本质就是蛋白质的观点明其为蛋白质，并提出酶的本质就是蛋白质的观点 1982年年T.Cech发现了第发现了第1个有催化活性的天然个有催化活性的天然RNAribozyme（核酶），以后（核酶），以后Altman和和Pace等又等又陆续发现了真正的陆续发现了真正的RNA催化剂催化剂 1995年，年，Jack W.Szostak 研究室首

7、先报道了具有研究室首先报道了具有DNA连接酶活性的连接酶活性的DNA片段，称之为脱氧核酶片段，称之为脱氧核酶(deoxyribozyme)概述概述全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术9临床酶学临床酶学 高诊断灵敏度高诊断灵敏度 高诊断特异性高诊断特异性 临床酶学检验技术临床酶学检验技术 酶活性测定酶活性测定 酶蛋白质量测定酶蛋白质量测定概述概述全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版

8、）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术10临床酶学的历史：临床酶学的历史：1908年年Wohlgemuth用尿淀粉酶（用尿淀粉酶（AMY）诊断急性胰腺炎）诊断急性胰腺炎1930s，LPS、ALP、ACP开始用于临床开始用于临床定时法定时法1950s，Karmen、La Due、Wroblewski等人建立了分光光等人建立了分光光度法，度法，ALT、AST、CK、LD等酶活性测定应用于肝胆等酶活性测定应用于肝胆疾病、心脏疾病的诊断疾病、心脏疾病的诊断连续监测法连续监测法1970s，同工酶和酶蛋白质量测定同工酶和酶蛋白质量测定1980s，同工酶亚型，同工酶亚型概述概述全国高等医

9、药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术11目录目录酶学基本知识酶学基本知识1血清酶变化的生理病理机制血清酶变化的生理病理机制2酶含量的表示方法酶含量的表示方法3酶催化活性浓度测定的理论基础酶催化活性浓度测定的理论基础4酶活性测定的影响因素与最适条件的确定酶活性测定的影响因素与最适条件的确定5同工酶检测技术同工酶检测技术6目前常用诊断酶的酶活性测定目前常用诊断酶的酶活性测定7小结与展望小结与展望8返回总目录返回总目录全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学

10、检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术12酶的结构和分类酶的结构和分类一一酶的特性和应用酶的特性和应用二二酶促反应动力学酶促反应动力学三三第一节第一节 酶学基本知识酶学基本知识全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术13酶的结构和分类酶的结构和分类一一辅因子（一）（一）酶酶的的组组成成单纯酶单纯酶：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等结合酶酶蛋白（a

11、poenzyme）（cofacter)辅酶辅酶（coenzyme)辅辅基基(prosthetic group)全全酶酶(holoenzyme）=酶蛋白酶蛋白+辅因子辅因子全全酶酶全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术14酶的结构和分类酶的结构和分类一一（二）（二）酶酶的的分分子子形形式式单体酶：只有单一的三级结构蛋白质构成寡聚酶：由两个以上具有三级结构的亚基聚合而成多酶复合体：由几个功能相关的酶嵌合而成的复合体(oligomeric enzyme)(multi

12、enzyme system)（monomeric enzyme)全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术15乳酸脱氢酶同工酶乳酸脱氢酶同工酶1全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术16（三）（三）酶酶的的结结构构“非”必需基团必需基团结合基团：催化基团：活性中心：酶分子中直接和底物结合并起催化反活性中心：酶分子中直接和底物结合并

13、起催化反应的空间局限（部位）应的空间局限（部位）酶的结构和分类酶的结构和分类一一(Catalytic site)决定酶的专一性决定酶所催化反应的性质（活性中心）全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术17酶的结构和分类酶的结构和分类结合基团结合基团一一全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术18酶的结构和分类酶的结构和分类活性中心

14、活性中心一一牛牛胰胰蛋蛋白白酶酶 全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术19酶的特性和应用酶的特性和应用二二酶的特性酶的特性（一）化学本质：除核酶、脱氧核酶以外，为蛋白质（一）化学本质：除核酶、脱氧核酶以外，为蛋白质（二）高效催化性（二）高效催化性（三）高度特异性（三）高度特异性（四）可调节性（四）可调节性（五）不稳定性（五）不稳定性全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）

15、第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术20酶的特性酶的特性高效催化性高效催化性二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术21反应总能量改变反应总能量改变 非催化反应活化能非催化反应活化能 酶促反应酶促反应 活化能活化能 一般催化剂催一般催化剂催化反应的活化能化反应的活化能 能能量量 反反 应应 过过 程程 底物底物 产物产物 酶促反应活化能的改变酶促反应活化能的改变 酶的特性酶的特性高效催化性的机理高效催化性的机理二二全国高等医药院校医学检验专业规划教

16、材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术22全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术23酶的特性酶的特性高效催化性的机理高效催化性的机理二二collision：碰撞 全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术24酶的特性酶的特性高效催

17、化性的机理高效催化性的机理二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术25酶的特性酶的特性高效催化性的机理高效催化性的机理二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术26一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化学反应并生成一定的产物。酶的这种特性称为酶的特异性或专一性。酶的特性酶的特性高度特异性高度特异性(sp

18、ecificity)二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术27绝对特异性绝对特异性(absolute specificity)：只能作用于特定结构：只能作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物物。相对特异性相对特异性(relative specificity)：作用于一类化合物或：作用于一类化合物或一种化学键。一种化学键。立体结构特异性立体结构特异性(stereo specificit

19、y)：作用于立体异构体：作用于立体异构体中的一种。中的一种。酶的特性酶的特性高度特异性高度特异性(specificity)二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术28酶的特性酶的特性高度特高度特异性异性(specificity)二二mol/L全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术29对酶生成与降解量的调节对酶生成与降解量的调

20、节酶催化效率的调节酶催化效率的调节通过改变底物浓度的调节通过改变底物浓度的调节广义上讲广义上讲:多酶体系、关键酶（限速酶）多酶体系、关键酶（限速酶）酶的特性酶的特性可调节性可调节性二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术30酶促反应在温和条件下进行加热、过酸、过碱、重金属都可以使酶活性降低（失活）酶的特性酶的特性不稳定性不稳定性二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）

21、第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术31 改变改变 pH 急速急速 加加热热 加入加入 变性剂变性剂 加入加入金属鳌合剂金属鳌合剂 加入加入酶抑制剂酶抑制剂 抑制抑制剂剂 大量大量稀释稀释TCABoilingSDSEDTAPMSF-化学物理化学化学化学物理酶不稳定性酶不稳定性终止酶促反应的方法终止酶促反应的方法补充补充PMSF：Phenylmethanesulfonylfluoride，苯甲基磺酰氟，用于抑制蛋白酶 全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验

22、技术32 添加物添加物 作用作用一般使用一般使用浓度浓度Tween-20,Triton X-100NaN3(sodium azide)EDTAb b-MercaptoethanolDithiothreitol(DTT or DTE)BSA(bovine serum albumin)Glycerol,glucosePMSF,TPCK,TLCK,benzamidine除去除去重金属重金属 抑抑菌剂菌剂防冻剂防冻剂蛋白蛋白酶抑制剂酶抑制剂表面活性剂表面活性剂抗氧化抗氧化剂剂抗氧化抗氧化剂剂稳定剂稳定剂0.11mmol/L0.01%50%微量微量0.50.05%110mmol/L15mmol/L0.1

23、10mg/mL酶不稳定性酶不稳定性缓冲缓冲液常用的添加物液常用的添加物补充补充全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术33添加物添加物TLCK：对甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮TPCK：L-苯甲磺酰苯丙氨酰氯甲酮Benzamidine 苄眯-Mercaptoethanol：-巯基乙醇Dithiothreitol(DTT)：二硫苏糖醇 补充补充全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二

24、版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术34表4-1 酶在医学检验中的应用举例主要特性应用技术举例化学本质是蛋白质化学本质是蛋白质高效催化性、高度特异性、高效催化性、高度特异性、反应条件温和反应条件温和催化剂反应前后没有变化催化剂反应前后没有变化形成中间络合物形成中间络合物酶催化活性与酶量成正比酶催化活性与酶量成正比高效催化性高效催化性酶蛋白定量酶法测定代谢物固相酶技术抗体酶诊断酶学ELISACK-MB质量、前列腺特异抗原质量、前列腺特异抗原己糖激酶法测定血糖己糖激酶法测定血糖葡萄糖氧化酶膜电极测血糖葡萄糖氧化酶膜电极测血糖抗病毒疫苗抗病毒疫苗ALT、CKPOD、ALP 酶的特性和应

25、用酶的特性和应用二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术35临床应用酶临床应用酶ECEC编号编号习惯用名习惯用名英语缩写英语缩写ECEC编号编号习惯用名习惯用名英语缩写英语缩写1.1.1.271.1.1.27乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶LDLD、LDHLDH2.7.3.22.7.3.2肌酸激酶肌酸激酶CKCK、CPKCPK1.1.1.371.1.1.37苹果酸脱氢酶苹果酸脱氢酶MDMD、MDHMDH3.1.1.33.1.1.3脂肪酶脂肪酶LPSLPS1.1.1.41

26、1.1.1.41异柠檬酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶ICDICD、ICDHICDH3.1.1.83.1.1.8胆碱酯酶胆碱酯酶CHECHE1.1.1.491.1.1.496-6-磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶G6PDHG6PDH3.1.3.13.1.3.1碱性磷酸酶碱性磷酸酶ALPALP、AKPAKP1.4.1.31.4.1.3谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶GLDGLD、GLDHGLDH3.1.3.23.1.3.2酸性磷酸酶酸性磷酸酶ACPACP1.4.3.41.4.3.4单氨氧化酶单氨氧化酶MODMOD3.1.3.53.1.3.55-5-核苷酸酶核苷酸酶5-NT5-NT2.1.3.32.1.3.3鸟氨酸

27、氨甲酰基转移酶鸟氨酸氨甲酰基转移酶OCTOCT3.2.1.13.2.1.1-淀粉酶淀粉酶AMYAMY、AMSAMS2.3.2.22.3.2.2-谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶-GT-GT、GGTGGT3.2.1.303.2.1.30-N-N-乙酰乙酰(基基)-)-D D氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶NAGNAG2.4.1.12.4.1.1糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶GPGP3.2.1.513.2.1.51-L-L-岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶-FU-FU、AFUAFU2.5.1.182.5.1.18谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶GSTGST3.4.23.13.4.23.1亮氨酸氨基肽酶亮氨酸氨基肽酶LAPLAP

28、2.6.1.12.6.1.1门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶ASTAST、GOTGOT4.1.2.134.1.2.13果糖二磷酸醛缩酶果糖二磷酸醛缩酶ALDALD2.6.1.22.6.1.2丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶ALTALT、GPTGPT酶的命名、分类及编号酶的命名、分类及编号补充补充全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术36酶促反应动力学酶促反应动力学）三三（一）米氏方程（一）米氏方程（二）酶促反应进程（二）酶促反应进程（三）动力学参数（三）动

29、力学参数（四）酶偶联反应（四）酶偶联反应全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术37（一）米氏方程19131913年，德国化学年，德国化学家家Michaelis和和Menten根根据中间产据中间产物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程。为米氏方程。V=VmaxSKm+S酶促反应动力学酶促反应动力学三三全国高等

30、医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术38全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术39（二）酶促反应进程（二）酶促反应进程1.1.延滞期延滞期 是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要的时间的时间2.2.线性期线性期 是指酶促反应速度保持恒定的时期，不受底物是指酶促反应速度保持恒定的时期，不受底物

31、浓度的影响浓度的影响3.3.非线性期非线性期 随着反应时间的延长，底物消耗越来越明显，随着反应时间的延长，底物消耗越来越明显，酶促反应速度明显下降，偏离线性而进入非线性期酶促反应速度明显下降，偏离线性而进入非线性期 酶促反应进程好似酶促反应进程好似100m径赛径赛酶促反应动力学酶促反应动力学三三全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术40图图4-1 4-1 酶促反应时间进程曲线酶促反应时间进程曲线酶促反应动力学酶促反应动力学三三浓浓度度(C)全国高等医药院校医学

32、检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术41（三）动力学参数（三）动力学参数1.初速度初速度(initial velocity)指在反应最初阶段底物的消耗量很指在反应最初阶段底物的消耗量很小（一般在小（一般在5以内）时的反应速度，用以内）时的反应速度，用v0来表示来表示2.最大反应速度最大反应速度(maximum velocity)指当酶的结合位点与底指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应速度，通常用物结合饱和时的反应速度，通常用V或或Vmax来表示来表示 3.米氏常数米氏常数（M

33、ichaelis constant，Km）指酶促反应速度为）指酶促反应速度为最大反应速度一半时最大反应速度一半时的底物浓度，单位同底物浓度的底物浓度，单位同底物浓度酶促反应动力学酶促反应动力学三三全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术42（四）酶偶联反应（四）酶偶联反应 Ex：待测酶：待测酶 Ea：辅助酶：辅助酶 Ei：指示酶：指示酶 酶促反应动力学酶促反应动力学三三ExEaEiABCD 全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材

34、 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术43酶促反应动力学酶促反应动力学三三图4-2 IFCC推荐法测定ALT的时间进程曲线图图4-2 IFCC推荐法测定推荐法测定ALT的时间进程曲线的时间进程曲线全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术44酶偶联反应进程酶偶联反应进程1.1.预孵育期预孵育期2.2.延滞期延滞期 3.3.线性期线性期 4.4.非线性期非线性期酶促反应动力学酶促反应动力学三三effef

35、fxiVVaV effVaKBeffiVK C返回章目录返回章目录全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术45血清酶的来源与去路血清酶的来源与去路一一血清酶变化的生理机制血清酶变化的生理机制二二血清酶变化的病理机制血清酶变化的病理机制三三第二节第二节 血清酶变化的生理病理机制血清酶变化的生理病理机制全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学

36、检验技术46（一）按血清酶的来源分（一）按血清酶的来源分 1.1.血浆固有酶血浆固有酶 2.2.非血浆固有酶非血浆固有酶 外分泌酶外分泌酶 细胞酶细胞酶 注：除凝血酶和纤溶酶外，血清酶与血浆酶基本一致注：除凝血酶和纤溶酶外，血清酶与血浆酶基本一致（二）按诊断特异性分（二）按诊断特异性分非器官特异酶非器官特异酶器官特异酶器官特异酶血清酶的来源与去路血清酶的来源与去路一一全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术47（三）血清酶的去路（三）血清酶的去路 1.肾小球滤过

37、从尿液中排出肾小球滤过从尿液中排出 2.网状内皮系统清除网状内皮系统清除 3.血管内失活血管内失活或灭活或灭活血清酶的来源与去路血清酶的来源与去路一一全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术481.1.性别性别2.2.年龄年龄 3.3.饮食饮食 4.4.运动运动 5.5.妊娠妊娠 血清酶变化的生理变异血清酶变化的生理变异二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章

38、 临床酶学检验技术临床酶学检验技术491.1.酶合成异常酶合成异常 2.2.细胞内酶的渗漏细胞内酶的渗漏 3.3.酶进入血液的方式酶进入血液的方式 4.4.其他其他血清酶变化的病理机制血清酶变化的病理机制三三返回章目录返回章目录全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术50酶活性浓度表示法酶活性浓度表示法一一酶蛋白质量浓度表示法酶蛋白质量浓度表示法二二第三节第三节 酶含量的表示方法酶含量的表示方法全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划

39、教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术51（一）（一）酶活性单位酶活性单位 1.惯用单位惯用单位 2.国际单位：国际单位：在特定条件下在特定条件下，1分钟能转化分钟能转化1微摩尔底物（微摩尔底物（mol/min）的酶量为一个）的酶量为一个“国际单位国际单位”3.Katal单位：即每秒钟转化单位：即每秒钟转化1个摩尔底物（个摩尔底物（mol/s）的）的酶量酶量酶活性浓度表示法酶活性浓度表示法一一61U1mol/min110/60s16.67nkatal全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床

40、生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术52（二）（二）酶活性浓度酶活性浓度 指单位体积指单位体积样品中的酶活性单位，样品中的酶活性单位，习惯用习惯用U/L来表示来表示体液体液中酶活性即酶活性浓度中酶活性即酶活性浓度（三）正常上限升高倍数（三）正常上限升高倍数（upper limits of normal,ULN)：是：是指用测得的酶活性结果指用测得的酶活性结果除以参考范围上限除以参考范围上限 酶活性浓度表示法酶活性浓度表示法一一全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （

41、第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术53以mg/或g/来表示优点：优点：灵敏度高灵敏度高特异性高特异性高可测定无活性的酶可测定无活性的酶与酶活性测定一起，计算免疫比活性，与酶活性测定一起，计算免疫比活性，可能提供新的资料和信息可能提供新的资料和信息在同工酶测定中更有价值在同工酶测定中更有价值酶蛋白质量浓度表示法酶蛋白质量浓度表示法二二返回章目录返回章目录全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术54定时法定时法（Fixed time a

42、ssay）一一连续监测法连续监测法（Continuous monitoring assay）二二第四节第四节 酶催化活性浓度测定的理论基础酶催化活性浓度测定的理论基础全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术55酶含量测定酶含量测定酶蛋白质量酶蛋白质量酶活性测定酶活性测定定时法定时法连续监测法连续监测法全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶

43、学检验技术56（一）概念（一）概念 将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，经将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，经过一定时间后，用过一定时间后，用终止液终止反应终止液终止反应，通过化学或生物化学的，通过化学或生物化学的方法测出底物或方法测出底物或产物的产物的总变化量总变化量，除以时间即可计算出底物，除以时间即可计算出底物消耗速度（消耗速度（dS/min）或产物生成速度（）或产物生成速度（dP/min），将），将速度换算为速度换算为mol/min便是以国际单位表示的便是以国际单位表示的酶活性。酶活性。定时法定时法一一全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专

44、业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术57（二）计算（二）计算 定时法定时法一一AbcAcbtPcV631010 /min(/min)AVtPbvd Pmoltt3310(/)10(/min)vVsX ULVsXmol66/m i n1 0tsV tAVtbV sbVA1 0X=(U/L)=全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术58定时法定时法无无机机P酚酚氨氨萘胺萘胺NAD(P)HH2

45、O2酮酸酮酸淀粉淀粉ALT、AST、LDALP、ACP、5NTALP、ACPADA、脲酶、脲酶CK、GGTLD、GLD、G6PDALTAMS（三）定时法的方法设计（三）定时法的方法设计显色物显色物项目项目全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术59（一）概念（一）概念 将酶与底物在特将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，定条件（缓冲液、温度等）下孵育，每隔一定时间（每隔一定时间（2s 60s）连）连续测定酶促反应过程中某一续测定酶促反应过程中某一底物或产

46、物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号变化速率变化速率。连续监测法连续监测法二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术60全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术61连续监测法连续监测法二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学

47、检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术62连续监测法连续监测法二二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术63连续监测法连续监测法二二6313310()10/min(/min)10(/)10(/min)A nVs Vrbvd PmoltnvVsx U LVsxmol（二）计算（二）计算全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第

48、四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术64连续监测法连续监测法二二6/min 10AVtbVs活性U/L61 0V tbV sk全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术65连续监测法连续监测法色素原底物色素原底物NAD(P)H系统系统过氧化物酶系统过氧化物酶系统其他其他ALP、ALP、GGT、GPDA、AMS、AFULD、G6PD、HBDH、AD、SD、GLD、ALT、AST、CK、ADALPS、ADA、5-NTCHE、ACP（三）连续监测法的方法设计（三

49、）连续监测法的方法设计全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术66定时法与连续监测法的区别定时法与连续监测法的区别返回章目录返回章目录全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术67方法因素的影响方法因素的影响 一一测定条件的影响与最适条件的确定测定条件的影响与最适条件的确定 二二第五节第五节 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定酶活

50、性测定的影响因素与最适条件的确定 其他因素对测定结果影响其他因素对测定结果影响三三全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术68电位滴定法电位滴定法浊度法浊度法时间滴定法时间滴定法比色法比色法分光光度法分光光度法生物传感器生物传感器荧光荧光按监测手段按监测手段各类终点法各类终点法LPSNAD(P)HAMSCHENAD(P)HALT方法因素的影响方法因素的影响 一一全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学