非小细胞肺癌EGFR基因突变检测课件.ppt

1、精品非小细胞肺癌EGFR基因突变检测精品主要内容主要内容EGFR检测的背景及意义检测的背景及意义EGFR检测的标本类型检测的标本类型EGFR检测的临床开展及成功关键检测的临床开展及成功关键精品肺癌精准医学是精确诊断与靶向治疗的结合肺癌精准医学是精确诊断与靶向治疗的结合精确诊断精确诊断 靶向治疗靶向治疗 分子靶点药物EGFR吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、CO-1686,AZD9291ALK克唑替尼、AlectinibMetTivantinib(ARQ197),Onartuzumab(MetMab)Cabozantinib(XL184)FGFR1Nintedanib,XL999HER-2

2、阿法替尼RET/ROS融合基因克唑替尼,AP 26113,ASP 3026RAS/MAPK通路Trametinib(GSK1120212)，Pimastertib，Refametinib,TAK733PI3K/PTEN/AKTBEZ235,XL-765PD-1/PDL-1Nivolumab,MPDL3280AHSP 90.GanetespibLi TH,et al.J Clin Oncol 2013;31:1039-1049.Vari S,et al.Expert Opin Drug Discov 2013;8(11):1381-1397.精品多部权威指南强调治疗前的多部权威指南强调治疗前的E

3、GFR突变检测突变检测ASCO2015指南指南：考虑用EGFR TKI进行一线治疗的非小细胞肺癌患者应该进行肿瘤EGFR突变检测来确定适合一线使用EGFR TKI还是一线使用化疗药物治疗。ESMO2015指南指南：进行个体化治疗决定前应有足够的组织材料进行组织学诊断和分子检测在疾病进展时应考虑重新检测应当系统分析EGFR突变状态在晚期非小细胞肺癌患者组织中进行标准检测A.NCCN2016指南：指南：对晚期非鳞NSCLC及不吸烟/小标本鳞癌的治疗强调了治疗前必须检测EGFR/ALK，并指出“多重/下一代测序项目应该包含这2个靶点的检测”中国原发性肺癌诊疗规范（中国原发性肺癌诊疗规范（2016版）

4、版）在推荐所有NSCLC患者的肿瘤组织都应进行EGFR基因突变检测基础上，补充了如果肿瘤标本不可评估可使用从血液（血浆）标本中获得的ctDNA进行评估.精品EGFR基因突变基因突变和和EGFR靶向治疗靶向治疗中国肺腺癌驱动基因突变图谱中国肺腺癌驱动基因突变图谱NSCLC中药物疗效相关的中药物疗效相关的EGFR突变突变研究 RR 中位PFS IPASS 71.2%vs 47.3%9.8 vs 6.4 月 First-SIGNAL 84.6%vs 37.5%8.4 vs 6.7 月 WJTOG 3405 62.1%vs 32.2%9.6 vs 6.6月 NEJGSG002 73.7%vs 30.7

5、%10.8 vs 5.4 月 OPTIMAL 83%vs 36%13.1 vs 4.6 月 EURTAC 58%vs 15%9.7 vs 5.2 月 LUX-LUNG 3 61%vs 22%11.1 vs 6.9 月 LUX-LUNG 6 67%vs 23%11.0 vs5.6 月八项随机研究奠定了八项随机研究奠定了TKI在在EGFR基因突基因突变阳性患者中一线治疗的地位变阳性患者中一线治疗的地位NCCN Guidelines Version 3.2016 Non-Small Cell Lung CancerMok et al.,2008;Kim et al.,2008;Hirsch et a

6、l.,2006突变类型所占比例对EGFR-TKI敏感性19 del;L858R90%敏感G719X;L861Q;S768I7%亚敏感T790M alone;20 ins3%不敏感EGFR检测样本来源检测样本来源组织活检组织活检（肿瘤蜡片）（肿瘤蜡片）目前检测金标准目前检测金标准 细胞学标本细胞学标本（恶性胸水）（恶性胸水）样本品质和样本品质和 肿瘤细胞含量可能比肿瘤细胞含量可能比 组织样本较低组织样本较低血液标本血液标本（ctDNA）-当无法获取组织或细当无法获取组织或细胞学样本的晚期转移胞学样本的晚期转移患者，作为有效补充患者，作为有效补充DNA 片段化片段化/假阴性较多，假阴性较多，需要高

7、敏感度技术需要高敏感度技术+-+-侵入性侵入性每个病人每个病人都适用都适用动态检测动态检测对于组织和胸水都取不到的患者，血液样本是一个很好的补充对于组织和胸水都取不到的患者，血液样本是一个很好的补充Pirker R et al.J Thorac Oncol 2010;5:17061713;Savic S et al.Br J Cancer 2008;98:154160;Rekhtman N et al.J Thorac Oncol 2011;6:451458;Tanaka T et al.Cancer Sci 2007;98:246252;-+质量控制质量控制组织组织/细胞学检测是目前的金标准

8、细胞学检测是目前的金标准目前国内送检以组织和细胞学标本为主，组织/细胞学检测仍是目前的金标准目前的低送检率源于：医生观念经济因素1.约20%患者无组织标本From AZ 2015 internal data肉眼判断是否10%肿瘤组织H&E 染色&确定肿瘤组织Step 1标本病理质控标本病理质控DNA样本制备DNA 纯化DNA 定量Step 2DNA的抽提的抽提建立PCR反应体系Step 3PCR反应反应 数据的分析Step 4报告的解读报告的解读报告组织检测基本流程组织检测基本流程组织及细胞学标本的处理组织及细胞学标本的处理-需要临床科室的协助与配合需要临床科室的协助与配合组织学标本固定要及时

9、，离体后即时处理（15-30分钟内)固定液：10%10%中性缓冲福尔马林中性缓冲福尔马林（终浓度 4%）；固定液的量一般为组织体积的10-15倍.固定时间：活检标本直接放入固定液，支气管镜活检标本的固定时间为624 h，手术切除标本的固定时间为12 h-48 h.细胞学标本采用95%乙醇固定液，时间不宜少于15 min，或采用非妇科液基细胞学固定液，固定时间和方法可按说明书进行操作所有细胞学标本应尽量制作福尔马林固定石蜡包埋（formalin-fixed and parrffin-enbedded,FFPE）细胞学蜡块。将细胞学标本离心沉淀置于包埋盒中，后续操作同组织学标本制作蜡块流程中国原发

10、性肺癌诊疗规范2016版病理评估和质控对于基因检测至关重要病理评估和质控对于基因检测至关重要-蜡块 未染色切片 H&E 染色切片 标记肿瘤细胞比例高的区域肿瘤细胞比例高的区域刮取标记以内的区域组织处理、蜡块和组织处理、蜡块和H&E染色切片制作染色切片制作病理质量控制病理质量控制EGFR 基因突变基因突变检测检测无无EGFR 基因基因突变检测突变检测标本接收标本接收质量达标质量不达标为什么为什么EGFR检测要在检测要在病理科开展？病理科开展？肿瘤细胞含量评估对于肿瘤细胞含量评估对于EGFR结果判读影响结果判读影响病理肿瘤细胞含量评估对于EGFR突变结果影响较大，检测流程如果没有该步骤，会造成较多

11、的假阴性假阴性。血液检测的价值与优势血液检测的价值与优势作为无法获取组织标本的补充，无创取样后的检测结果指导临床用药实现实时动态监测，提高全程管理水平循环而匀质的血液标本，在一定程度有效克服异质性*已可以指导EGFR敏感性突变治疗用药1.Molina-Vila M et al.J Thorac Oncol 2008;3:12241235;2.Smouse J et al.Cancer Cytopathol 2009;117:6772;3.Van Ejik R et al.PLoS One 2011;6:e177791;4.Rekhtman N et al.J Thorac Oncol 2011

12、;6:451458精品吉非替尼获得血液吉非替尼获得血液ctDNA伴随诊断适应症伴随诊断适应症欧盟和中国相继批准阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴随诊断非小细胞肺癌患者用药前检测EGFR突变精品循环血肿瘤细胞循环血肿瘤细胞(circulating tumour cell，CTC)即释放到外周血中的肿瘤细胞，目前CTC的捕获比较困难循环肿瘤循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)即循环肿瘤DNA，指由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA血液标本的检测对象精品总量少总量少 未转移未转移 4期期3期期2期期1期期 晚期、无法获得组织标本的晚期、无法获得组织标本的NSCLC患

13、患者者100806040200结直肠胃食管胰腺乳腺局限期转移性可检测ctDNA的发生率(%)100806040200可检测ctDNA的发生率(%)I期III期II期IV期1.0*10061.0*10051.0*10041.0*10031.0*10021.0*10011.0*1001.0*10-01每5ml的突变片断I期III期II期IV期Bettegowda et.al.,Sci Transl Med(2014)精品非小细胞肺癌血液非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测基因突变检测中国专家共识中国专家共识(2015年年12月月)中国国家食品药品监督管理总局（CFDA）在2015年2月已批准吉非替

14、尼说明书更新，在推荐所有NSCLC患者的肿瘤组织都应进行EGFR基因突变检测基础上，如果肿瘤标本不可评估，则可使用从血液（血浆）标本中获得的ctDNA进行评估。EGFR基因突变检测流程基因突变检测流程精品血液检测实验流程血浆血浆cfDNAEGFR突变检测cfDNA提取加样分离全血采集时间 采集方式采血管（EDTA抗凝）抗凝）及时高效避免污染使用可信赖的血浆cfDNA提取试剂盒使用可信赖的检测试剂盒筛选合适人群cfDNA（肿瘤标本不可评估）（2h内）内）采用EDTA抗凝管，采集10mL全血2小时内将全血充分低温离心两次，分离出不含细胞成分的血浆，放置于-70冻存精品慎重对待ARMS法的血液检测结

15、果EMQN External Quality Assessment Scheme for Lung Cancer(2014).检测到突变检测到突变未检测到突变未检测到突变根据突变类型指导根据突变类型指导用药用药参考临床优势特征参考临床优势特征用药用药血液检测报告血液检测报告精品非小细胞肺癌非小细胞肺癌EGFR检测检测各标本处理方式各标本处理方式患者患者手术手术标本标本小活检小活检标本标本细胞学细胞学标本标本新鲜组织于新鲜组织于10%中性福尔马林固定中性福尔马林固定12h纤支镜标本纤支镜标本取材后固定于取材后固定于10%中性福尔马林中性福尔马林穿刺标本穿刺标本取材后固定于取材后固定于10%中性福

16、尔马林中性福尔马林血液标本血液标本针对晚期转移、且取不到组织（或胸水）标本的患者针对晚期转移、且取不到组织（或胸水）标本的患者，以以EDTA抗凝管取抗凝管取10mL全血，务必于全血，务必于2h内送至分子检测平台内送至分子检测平台将胸水引入将胸水引入500ml玻璃瓶中，并按照玻璃瓶中，并按照1支肝素钠支肝素钠/100ml添加添加抗凝，及时送到病理科处理抗凝，及时送到病理科处理胸水抽取原则：抽多少送多少，送多少包埋多少，最少50ml，但有无肿瘤细胞与胸水量没有直接关系精品总结总结重要讯息回顾重要讯息回顾EGFR突变突变样本样本检测检测方法方法在中国NSCLC患者中，约50%存在EGFR突变准确的驱动基因检测是实现精准治疗的基础与关键严格的质量控制是保障报告准确的关键组织活检是目前金标准，胸水是另一选择。血液检测适用于晚期、转组织活检是目前金标准，胸水是另一选择。血液检测适用于晚期、转移且取不到组织标本的移且取不到组织标本的NSCLC患者，可作为补充患者，可作为补充血液检测的优势在于便捷，无创，并可实现动态、定量监测对EGFR敏感突变，ARMs有较高灵敏度和特异性ARMS检测血液EGFR突变的阴性结果需慎重解读精品谢谢 谢！谢！