1、瘦肉精残留及其检测技术重庆瘦肉精残留及其检测技术重庆瘦肉精残留及其检测技术重庆研究方向研究方向细菌耐药性产生与扩散及风险评估细菌耐药性产生与扩散及风险评估兽药残留检测技术(包括快速检测产品研发)兽药残留检测技术(包括快速检测产品研发)兽医毒理学(包括环境生态毒理学)兽医毒理学(包括环境生态毒理学)药物动力学及新兽药创制药物动力学及新兽药创制 研究队伍研究队伍现有工作人员现有工作人员32名,其中具有高级技术职称的名,其中具有高级技术职称的15人,具有博士学位的人,具有博士学位的11人。国家人。国家973项目首席科学项目首席科学家家1名,教育部长江学者名,教育部长江学者1名,新世纪人才名,新世纪人
2、才2名。在名。在读硕士、博士近读硕士、博士近70名。专业涉及兽医学、兽医药名。专业涉及兽医学、兽医药理学与毒理学、兽医微生物学、药物学、分析化理学与毒理学、兽医微生物学、药物学、分析化学、免疫化学、标准化等多个领域,组成了一支学、免疫化学、标准化等多个领域,组成了一支多学科的科研教学队伍。多学科的科研教学队伍。主要研究成果主要研究成果近五年先后承担国家科技支撑计划项目、近五年先后承担国家科技支撑计划项目、973项目、行业公益项项目、行业公益项目、国家杰出青年基金项目、国家自然科学基金重点项目等目、国家杰出青年基金项目、国家自然科学基金重点项目等40余项,总经费超过余项,总经费超过1亿元。在国内
3、外重要学术刊物上发表论文亿元。在国内外重要学术刊物上发表论文300余篇,其中余篇,其中SCI收录收录172篇;制定国家和行业兽药残留检测篇;制定国家和行业兽药残留检测方法标准方法标准70项研发出具有自主知识产权药物残留检测试剂盒和项研发出具有自主知识产权药物残留检测试剂盒和试纸条产品试纸条产品60余种,其中余种,其中20种获得农业部批准备案文号;获得种获得农业部批准备案文号;获得国家发明专利国家发明专利33项。研究成果获得国家科学技术进步二等奖项。研究成果获得国家科学技术进步二等奖1项,项,北京市科学技术一等奖北京市科学技术一等奖1项和北京市科学技术二等奖项和北京市科学技术二等奖2项。已培项。
4、已培养博士研究生养博士研究生65名,硕士研究生近名,硕士研究生近200名。名。主要内容主要内容一、畜牧水产养殖业及动物性产品简况一、畜牧水产养殖业及动物性产品简况二、动物源食品安全现状二、动物源食品安全现状三、瘦肉精主要种类三、瘦肉精主要种类四、国内外瘦肉精残留限量标准四、国内外瘦肉精残留限量标准五、残留检测技术五、残留检测技术六、瘦肉精检测方法标准六、瘦肉精检测方法标准中国是养殖业大国,其中中国是养殖业大国,其中猪,猪,66686.4 万头万头奶牛,奶牛,1420.1 万头万头禽,禽,110 亿羽亿羽羊,羊,28087.9 万只万只一、畜牧水产养殖业及动物源性产品简况一、畜牧水产养殖业及动物
5、源性产品简况数据来源:中国统计年鉴(数据来源:中国统计年鉴(2011)中国又是动物源性产品生产和消费大国,其中中国又是动物源性产品生产和消费大国,其中肉类,肉类,7925.8 万吨,人均达万吨,人均达59 kg;蛋类,;蛋类,2762.7 万万吨,人均达吨,人均达21 kg;奶类,;奶类,3748 万吨,人均达万吨,人均达28 kg;水产品,水产品,5373 万吨,人均达万吨,人均达40 kg。数据来源:中国统计年鉴(数据来源:中国统计年鉴(2011)二、动物源食品安全现状二、动物源食品安全现状l 全球经济一体化和食品贸易国际化使食品安全成为一个世全球经济一体化和食品贸易国际化使食品安全成为一
6、个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题。界性的挑战和全球重要的公共卫生问题。l 其中外源化合物(兽药、药物添加剂、违禁药物等)残留其中外源化合物(兽药、药物添加剂、违禁药物等)残留超过最高残留限量标准以及临床使用不遵守休药期是影响超过最高残留限量标准以及临床使用不遵守休药期是影响动物源食品安全的最主要因素之一。动物源食品安全的最主要因素之一。l 尽管世界各国采取了一系列政策和监控措施,但世界范围尽管世界各国采取了一系列政策和监控措施,但世界范围内涉及食品安全的恶性、突发事件时有发生,食品安全现内涉及食品安全的恶性、突发事件时有发生,食品安全现状仍然令人担扰。状仍然令人担扰。l 我国目前动物性食
7、品抽检比例低,且大多数为出口食品。我国目前动物性食品抽检比例低,且大多数为出口食品。部分部分“瘦肉精瘦肉精”事件事件2012年年2月月9月,辽宁曝光月,辽宁曝光8起瘦肉精事件,肉牛、猪检测出瘦肉精起瘦肉精事件,肉牛、猪检测出瘦肉精2012年年2月,国家体育总局发文,称猪牛羊肉可能含兴奋剂,规定国家队成员月,国家体育总局发文,称猪牛羊肉可能含兴奋剂,规定国家队成员不能在外用餐;不能在外用餐;2012年年7月女排比赛失利归咎于瘦肉精。月女排比赛失利归咎于瘦肉精。2011年年10月,山东利津月,山东利津“瘦肉精瘦肉精”羊事件羊事件2011年年3月,双汇月,双汇“瘦肉精瘦肉精”猪被央视曝光猪被央视曝光
8、2010年年9月,深圳市民吃蛇肉中毒月,深圳市民吃蛇肉中毒2010年年4月,广州月,广州70余人余人“瘦肉精瘦肉精”中毒中毒2009年年4月,阜阳产雨润牌午餐肉检出瘦肉精,食用可能中毒月,阜阳产雨润牌午餐肉检出瘦肉精,食用可能中毒2009年年2月月19日,广州出现了日,广州出现了“瘦肉精瘦肉精”中毒事件,累计有中毒事件,累计有70人出现中毒情况。人出现中毒情况。2008年年11月,浙江嘉兴月,浙江嘉兴70余人吃红烧肉中毒余人吃红烧肉中毒2007年年3月,广东江门市一家月,广东江门市一家6口喝猪肺汤中毒口喝猪肺汤中毒若不含药物,则金标抗体与抗原反应,T线显色;农业部1025号公告162008 动
9、物尿液中盐酸克伦特罗残留检测 气相色谱质谱法DB33/T 4542003 动物血清中盐酸克伦特罗残留的检测方法兽药残留实验技术规范,农牧发20031号四、国内外瘦肉精残留限量标准先用快速检测产品(试剂盒或试纸条)进行筛查,可疑阳性样品再用仪器分析方法尤其是色质联用检测方法加以确证。农业部1063号公告72008 饲料中8种受体激动剂的检测 气相色谱质谱法NY/T 14602007 饲料中盐酸克仑特罗的测定 酶联免疫吸附法莱克多巴胺在美国、加拿大、墨西哥等20余个美洲和亚太国家批准用于猪和反刍动物,组织残留限量要求在30150 ppb之间。2006年,江西12人因制售使用瘦肉精被刑拘。2012年
10、2月9月,辽宁曝光8起瘦肉精事件,肉牛、猪检测出瘦肉精气相色谱(ECD/NPD)催眠、镇静类:氯丙嗪、地西泮、及其盐、酯及制剂对猪肉等组织样品,通过提取或加热处理后,进行稀释;国家973项目首席科学家1名,教育部长江学者1名,新世纪人才2名。欧盟则禁止使用莱克多巴胺。2006年年9月,上海月,上海300余人中毒余人中毒2006年年3月,广东东莞月,广东东莞6人中毒,人中毒,1人死亡人死亡2005年年9月,上海月,上海6人人2004年年8月,上海月,上海22人人2003年年10月,杭州月,杭州22人人2003年年10月,辽宁辽阳发生月,辽宁辽阳发生39人人2003年年3月,广东佛山近百人中毒月,
11、广东佛山近百人中毒 2002年年4月,广东湛江月,广东湛江35人中毒人中毒2001年年11月,广东河源近月,广东河源近500人中毒人中毒2001年年11月,北京出现首例月,北京出现首例14人中毒人中毒2001年年8月,广东信宜月,广东信宜530人人提示:目前发生的中毒事件都是由克伦特罗引起的。提示:目前发生的中毒事件都是由克伦特罗引起的。瘦肉精相关案件瘦肉精相关案件 2011年年4月至今,全国公安机关共破获食品非法添加案件月至今,全国公安机关共破获食品非法添加案件1200余起,抓获犯罪嫌余起,抓获犯罪嫌疑人疑人2000余名。其中,在余名。其中,在“瘦肉精瘦肉精”破案会战中,各地共侦破案件破案会
12、战中,各地共侦破案件120起,抓获涉起,抓获涉案人员案人员980多名。多名。2011年年8月,河北昌黎,瘦肉精喂羊,养羊户被判刑月,河北昌黎,瘦肉精喂羊,养羊户被判刑5年。年。2011年年8月,河南获嘉,韩文斌等人非法经营瘦肉精,判处月,河南获嘉,韩文斌等人非法经营瘦肉精,判处1到到10年。年。2011年年7月,月,河南沁阳,王二团等人违规出具检疫证明,判处河南沁阳,王二团等人违规出具检疫证明,判处56年有期徒刑。年有期徒刑。2011年年7月,河南焦作,刘襄等人非法生产瘦肉精,判处月,河南焦作,刘襄等人非法生产瘦肉精,判处9年到死缓不等。年到死缓不等。2011年年6月,吉林伊通,刘春成等人非法
13、销售瘦肉精,判处月,吉林伊通,刘春成等人非法销售瘦肉精,判处46年。年。2010年年3月,广州市刑拘月,广州市刑拘15人。人。2009年年5月,浙江嘉兴王云水投毒瘦肉精,判处月,浙江嘉兴王云水投毒瘦肉精,判处8年。年。2006年,江西年,江西12人因制售使用瘦肉精被刑拘。人因制售使用瘦肉精被刑拘。2004年年9月,浙江衢州姜土寿生产、销售瘦肉精判处月,浙江衢州姜土寿生产、销售瘦肉精判处1年半。年半。三、瘦肉精主要种类三、瘦肉精主要种类 主要包括克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等,主要包括克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等,因其具有肾上腺素样作用,可缓解、消除或预防因其具有肾上腺素样作用,可缓解、消
14、除或预防支气管哮喘。除莱克多巴胺外,克伦特罗、沙丁支气管哮喘。除莱克多巴胺外,克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林等胺醇、特布他林等受体激动剂在人医临床上作为受体激动剂在人医临床上作为平喘的处方药广泛使用。平喘的处方药广泛使用。11种受体激动剂的结构式种受体激动剂的结构式 在生猪和反刍动物饲养过程中如果给予一定量的在生猪和反刍动物饲养过程中如果给予一定量的受体激动剂,能够改变营养的代谢途径,促进动受体激动剂,能够改变营养的代谢途径,促进动物肌肉、特别是骨胳肌蛋白质的合成,加速脂肪物肌肉、特别是骨胳肌蛋白质的合成,加速脂肪的分解与转化,可使饲料转化率,生长速率,胴的分解与转化,可使饲料转化率,生长速率,
15、胴体瘦肉率明显增加,所以在畜牧养殖业上该类化体瘦肉率明显增加,所以在畜牧养殖业上该类化合物被统称为合物被统称为“瘦肉精瘦肉精”。肉色鲜红,脂肪层极薄,往往是皮贴着瘦肉,瘦肉色鲜红,脂肪层极薄,往往是皮贴着瘦肉,瘦肉丰满,后臀肌肉饱满突出,但肥肉和瘦肉明显肉丰满,后臀肌肉饱满突出,但肥肉和瘦肉明显分离,组织疏松。分离,组织疏松。健康正常猪肉肉色淡红,肉质弹性好,组织紧健康正常猪肉肉色淡红,肉质弹性好,组织紧密,肥瘦交替,肉皮与瘦肉之间脂肪(膘)厚约密,肥瘦交替,肉皮与瘦肉之间脂肪(膘)厚约1.5cm。盐酸赛庚啶(Cyproheptadine Hydrochloride)药典2010版二部P803
16、。2011年8月,河北昌黎,瘦肉精喂羊,养羊户被判刑5年。硝基化合物:硝基酚钠、硝呋烯腙及制剂四、国内外瘦肉精残留限量标准2012年7月5日,CAC第35届年会上69票赞成,67票反对,通过了莱克多巴胺在组织中的最大残留限量。瘦肉精残留及其检测技术重庆农业部1063号公告32008 动物尿液中11种受体激动剂的检测 液相色谱串联质谱法碘化酪蛋白、苯丙酸诺龙及苯丙酸诺龙注射液2011年7月,河南焦作,刘襄等人非法生产瘦肉精,判处9年到死缓不等。气谱-串联质谱法(GC-MS/MS)盐酸克仑特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林2011年4月至今,全国公安机关共
17、破获食品非法添加案件1200余起,抓获犯罪嫌疑人2000余名。硝基咪唑类:甲硝唑、地美硝唑及其盐、酯及制剂样品有组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪等)、牛奶、蜂蜜等。采用竞争法,样品滴入后,在层析作用下经胶体金标记抗体的结合垫,再流经包被抗原和二抗的T线和C线,若样品中含有药物,药物与金标抗体结合后不再与抗原反应,T线不显色;2001年8月,广东信宜530人性激素类:甲基睾丸酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、苯甲酸雌二醇及其盐、酯及制剂DB33/T 6232006 动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定 气相色谱质谱法盐酸氯丙那林(Clorprenaline Hydrochlorid
18、e)药典2010版二部P783。该类药物毒副作用较大,人使用后可能出现肌肉该类药物毒副作用较大,人使用后可能出现肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等不良反振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等不良反应症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列应症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。这类药物如果用于食品动物,易在动物组织,尤这类药物如果用于食品动物,易在动物组织,尤其是内脏中残留。其是内脏中残留。该类药物主要在肝脏、肺脏等组织蓄积,据报道,该类药物主要在肝脏、肺脏等组织蓄积,据报道,犊牛肝脏中克伦特罗残留量
19、可达到犊牛肝脏中克伦特罗残留量可达到5000 ppb。我。我国百姓自古以来就有喜爱食用内脏的习惯,所以国百姓自古以来就有喜爱食用内脏的习惯,所以我国禁止包括莱克多巴胺在内的所有我国禁止包括莱克多巴胺在内的所有受体激动剂受体激动剂用于食品动物。用于食品动物。猪以猪以20ppm莱克多巴胺添加浓度饲喂后残留消除情况莱克多巴胺添加浓度饲喂后残留消除情况强志懿,中国农业大学硕士论文强志懿,中国农业大学硕士论文注:给药饲喂注:给药饲喂7天,数据来源于美国礼来公司天,数据来源于美国礼来公司注:给药注:给药30天,数据来源于天,数据来源于Food Chemistry,127(2011)327332 1987年
20、欧盟、美国就宣布禁止使用克伦特罗作为年欧盟、美国就宣布禁止使用克伦特罗作为兽用饲料添加剂。兽用饲料添加剂。莱克多巴胺在美国、加拿大、墨西哥等莱克多巴胺在美国、加拿大、墨西哥等20余个美余个美洲和亚太国家批准用于猪和反刍动物,组织残留洲和亚太国家批准用于猪和反刍动物,组织残留限量要求在限量要求在30150 ppb之间。欧盟则禁止使用莱克之间。欧盟则禁止使用莱克多巴胺。多巴胺。四、国内外瘦肉精残留限量标准四、国内外瘦肉精残留限量标准(一)国外残留限量标准(一)国外残留限量标准国家国家药物药物靶动物靶动物残留限量(残留限量(g/kg)欧盟克伦特罗牛肌肉:0.1;肝脏:0.5;肾脏:0.5;牛奶:0.
21、05马肌肉:0.1;肝脏:0.5;肾脏:0.5美国莱克多巴胺牛肝脏:90;肌肉:30猪肝脏:150;肌肉:50(一)国外残留限量标准(一)国外残留限量标准国家国家药物药物靶动物靶动物残留限量(残留限量(g/kg)日本克伦特罗牛肝脏:0.6;肌肉:0.2猪肝脏:不得检出;肌肉:不得检出日本莱克多巴胺牛肝脏:40;肌肉:10猪肝脏:40;肌肉:10注:其他受体激动剂未见限量标准注:其他受体激动剂未见限量标准 On July 5th,the 35th annual meeting of the Codex Alimentarius Commission(CAC)approved by a vote
22、of 69 to 67,maximum quantities of ractopamine residue in meat products.The CAC adopted the maximum allowable level of ractopamine residue in beef and pork muscle and fat at 10 ppb(parts per billion),40 ppb in beef and pork liver,and 90 ppb in beef and pork kidneys,while no standard was set for turke
23、y.2012年年7月月5日,日,CAC第第35届年会上届年会上69票赞成,票赞成,67票反对,通过票反对,通过了莱克多巴胺在组织中的最大残留限量。了莱克多巴胺在组织中的最大残留限量。牛肉和猪肉,牛肉和猪肉,10ppb,牛肝和猪肝,牛肝和猪肝,40ppb,牛肾和猪肾,牛肾和猪肾,90ppb。尿液、组织、血清、饲料性激素类:甲基睾丸酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、苯甲酸雌二醇及其盐、酯及制剂2001年11月,北京出现首例14人中毒农业部、卫生部和国家药品监督管理局联合出台了禁止在饲料和动物饮用水中使用的药品目录(农业部公告176号)溴布特罗(Brombuterol)肾上腺素受体激动剂。农业部176号公告
24、颁布5类40种禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种。一、肾上腺素受体激动剂SN/T 11162002 进出口饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量的检验方法 液相色谱法班布特罗(Bambuterol)肾上腺素受体激动剂。农业部1063号公告32008 动物尿液中11种受体激动剂的检测 液相色谱串联质谱法2001年8月,广东信宜530人高效液相色谱法(HPLC)尿液、血清、肌肉、饲料The CAC adopted the maximum allowable level of ractopamine residue in beef and pork muscle and fat at 10 ppb(pa
25、rts per billion),40 ppb in beef and pork liver,and 90 ppb in beef and pork kidneys,while no standard was set for turkey.NY/T 10302006 饲料中沙丁胺醇的测定 气相色谱质谱法灵敏度高,特异性强,可进行定性和定量测定四、国内外瘦肉精残留限量标准尿液、血清、肌肉、饲料获得国家发明专利33项。2011年8月,河北昌黎,瘦肉精喂羊,养羊户被判刑5年。(一)国外残留限量标准欧盟、中国、俄罗斯、印度等仍然坚持反对。欧盟、中国、俄罗斯、印度等仍然坚持反对。农业部农业部176号公告
26、颁布号公告颁布5类类40种禁止在饲料和动物饮用水中种禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种。使用的药物品种。农业部农业部193号公告颁布了号公告颁布了21种种食品动物禁用的兽药及其它食品动物禁用的兽药及其它化合物清单化合物清单。农业部农业部1519号公告颁布了号公告颁布了11种禁止在饲料和动物饮水中使种禁止在饲料和动物饮水中使用的物质。用的物质。农业部农业部235号公告中颁布了号公告中颁布了109种兽药的限量标准,涉及马、种兽药的限量标准,涉及马、牛、羊、猪、禽、蜜蜂、鱼、虾等动物。样品有组织(肌牛、羊、猪、禽、蜜蜂、鱼、虾等动物。样品有组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪等)、牛奶、蜂蜜等。肉、肝脏
27、、肾脏、脂肪等)、牛奶、蜂蜜等。(二)我国残留限量标准(二)我国残留限量标准农业部、卫生部和国家药品监督管理局联合出台了农业部、卫生部和国家药品监督管理局联合出台了禁止在饲料和动物饮用水中使用的药品目录禁止在饲料和动物饮用水中使用的药品目录(农业部公告(农业部公告176号)号)一、肾上腺素受体激动剂一、肾上腺素受体激动剂 盐酸克仑特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林二、性激素二、性激素 乙烯雌醇、雌二醇、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、氯烯雌醚快诺醇、炔诺醚、醋酸氯地孕酮、左快诺孕酮、快诺酮、绒毛膜促性腺激素(绒促性素)、促卵泡生长激素三、蛋白同化激素三、蛋白
28、同化激素 碘化酪蛋白、苯丙酸诺龙及苯丙酸诺龙注射液四、精神药品四、精神药品盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、安定(地西泮)、苯巴比妥、苯巴比妥钠、巴比妥、异戊巴比妥、异戊巴比妥钠、利血平、艾司唑仑、甲丙氨脂、咪达唑仑、硝西洋、奥沙西洋、匹莫林、三唑仑、唑吡旦、其他国家管制的精神药品。五、各种抗生素滤渣五、各种抗生素滤渣 农业部农业部193号公告号公告食品动物禁用的兽药及其它化合物清单食品动物禁用的兽药及其它化合物清单序号序号兽药及其它化合物名称兽药及其它化合物名称禁止用途禁止用途禁用动物禁用动物1-兴奋剂类:克仑特罗、沙丁胺醇、西马特罗及其盐、酯及制剂所有用途所有食品动物2性激素类:己烯雌酚及其盐、酯及
29、制剂所有用途所有食品动物3具有雌激素样作用的物质:玉米赤霉醇、去甲雄三烯醇酮、醋酸甲孕酮及制剂所有用途所有食品动物4氯霉素、及其盐、酯(包括:琥珀氯霉素)及其制剂所有用途所有食品动物5氨苯砜及制剂所有用途所有食品动物6硝基呋喃类:呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃苯烯酸钠及制剂所有用途所有食品动物7硝基化合物:硝基酚钠、硝呋烯腙及制剂所有用途所有食品动物8催眠、镇静类:安眠酮及制剂所有用途所有食品动物9林丹(丙体六六六)杀虫剂所有食品动物10毒杀芬(氯化烯)杀虫剂、清塘剂所有食品动物序号序号兽药及其它化合物名称兽药及其它化合物名称禁止用途禁止用途禁用动物禁用动物11呋喃丹(克百威)杀虫剂所有食品动物12
30、杀虫脒(克死螨)杀虫剂所有食品动物13双甲脒杀虫剂水生食品动物14酒石酸锑钾杀虫剂所有食品动物15锥虫胂胺杀虫剂所有食品动物16孔雀石绿抗菌剂、杀虫剂所有食品动物17五氯酚酸钠杀螺剂所有食品动物18各种汞制剂包括:氯化亚汞(甘汞)、硝酸亚汞、醋酸汞、吡啶基醋酸汞杀虫剂所有食品动物19性激素类:甲基睾丸酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、苯甲酸雌二醇及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物20催眠、镇静类:氯丙嗪、地西泮、及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物21硝基咪唑类:甲硝唑、地美硝唑及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物农业部农业部1519号公告号公告禁止在饲料和动物饮水中使用的物质禁止在饲料和动物饮水中使用的
31、物质 苯乙醇胺A(Phenylethanolamine A)肾上腺素受体激动剂。班布特罗(Bambuterol)肾上腺素受体激动剂。盐酸齐帕特罗(Zilpaterol Hydrochloride)肾上腺素受体激动剂。盐酸氯丙那林(Clorprenaline Hydrochloride)药典2010版二部P783。肾上腺素受体激动剂。马布特罗(Mabuterol)肾上腺素受体激动剂。西布特罗(Cimbuterol)肾上腺素受体激动剂。溴布特罗(Brombuterol)肾上腺素受体激动剂。酒石酸阿福特罗(Arformoterol Tartrate)长效型肾上腺素受体激动剂。富马酸福莫特罗(Form
32、oterol Fumatrate)长效型肾上腺素受体激动剂。盐酸可乐定(Clonidine Hydrochloride)药典2010版二部P645。抗高血压药。盐酸赛庚啶(Cyproheptadine Hydrochloride)药典2010版二部P803。抗组胺药。瘦肉精发展新情况1、老药新对象、老药新对象克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇用于牛羊兔禽等。克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇用于牛羊兔禽等。2、新药老对象、新药老对象苯乙醇胺苯乙醇胺A用于猪;在国家残留监控中,检测猪肉、猪肝用于猪;在国家残留监控中,检测猪肉、猪肝9种种激动剂,猪尿检测激动剂,猪尿检测3种。种。3、非饲料添加使用、非饲料
33、添加使用(1)添于垫料,经皮肤吸收;)添于垫料,经皮肤吸收;(2)屠宰前使用,注水增重。)屠宰前使用,注水增重。五、残留检测技术五、残留检测技术残留分析一般程序残留分析一般程序 先用快速检测产品(试剂盒或试纸条)进行筛查,可疑先用快速检测产品(试剂盒或试纸条)进行筛查,可疑阳性样品再用仪器分析方法尤其是色质联用检测方法加以确阳性样品再用仪器分析方法尤其是色质联用检测方法加以确证。美国、欧盟和日本等发达国家均按此程序进行。证。美国、欧盟和日本等发达国家均按此程序进行。10-1210-910-610-3紫外紫外/可见分光光度法可见分光光度法放射免疫测定法放射免疫测定法/酶免疫测定法酶免疫测定法色质
34、联用分析色质联用分析放射受体分析放射受体分析气相色谱气相色谱(ECD/NPD)气相色谱气相色谱(FID)高效液相色谱高效液相色谱(FLD/UVD)时间分辨免疫时间分辨免疫/化学发光免疫化学发光免疫荧光分光光度法荧光分光光度法微生物测定法微生物测定法比色法比色法10-15(一)色谱分析技术(一)色谱分析技术气相色谱法(气相色谱法(GC)高效液相色谱法(高效液相色谱法(HPLC)超高效液相色谱法(超高效液相色谱法(UPLC)气谱气谱-质谱法(质谱法(GC-MS)气谱气谱-串联质谱法(串联质谱法(GC-MS/MS)液谱液谱-质谱法(质谱法(LC-MS)液谱液谱-串联质谱法(串联质谱法(LC-MS/M
35、S)其他新技术,如飞行时间质谱等其他新技术,如飞行时间质谱等兽药残留实验技术规范,农牧发兽药残留实验技术规范,农牧发20031号号瘦肉精仪器检测方法(瘦肉精仪器检测方法(HPLC、LC-MS/MS等)检测限为等)检测限为0.5-2ppb。精确度高精确度高假阳性率低假阳性率低较高的灵敏度较高的灵敏度重现性好重现性好效率较高效率较高准确度高准确度高优点优点需要专业操作人员需要专业操作人员仪器难以普及仪器难以普及成本高成本高操作繁琐操作繁琐缺点缺点酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法化学发光免疫测定法化学发光免疫测定法荧光偏振免疫测定法荧光偏振免疫测定法量子点标记荧光测定法量子点标记荧光测定法时间分
36、辨荧光免疫测定法时间分辨荧光免疫测定法胶体金免疫测定法胶体金免疫测定法放射免疫测定法放射免疫测定法微生物抑制测定法微生物抑制测定法生物传感器生物传感器生物芯片生物芯片(二)快速检测技术(二)快速检测技术1、酶联免疫吸附测定法、酶联免疫吸附测定法基本原理基本原理在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体与在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应,结合在固相载体上的酶量与标本中固相载体表面的抗原或抗体起反应,结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例,加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为受检物质的量有一定的比例,加入
37、酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,根据颜色反应的有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。深浅进行定性或定量分析。1、加入待测物;、加入待测物;2、加入抗体;、加入抗体;3、加入酶标二体;、加入酶标二体;4、加入底物;、加入底物;5、加入终止液、加入终止液目前最常用目前最常用方法为间接方法为间接竞争竞争ELISA法,其他还法,其他还用直接法、用直接法、夹心法等。夹心法等。优点优点 灵敏度高,特异性强,可进行定性和定量测定灵敏度高,特异性强,可进行定性和定量测定检测方便、快捷,一般检测方便、快捷,一般12个
38、小时就能出结果个小时就能出结果对操作者和实验室条件要求不高对操作者和实验室条件要求不高可以用于大量样本的快速筛选可以用于大量样本的快速筛选目前市场上兽药等残留检测目前市场上兽药等残留检测ELISA试剂盒品种有数十个,试剂盒品种有数十个,克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等试剂盒产品非常成熟。克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等试剂盒产品非常成熟。96孔酶标版孔酶标版样品稀释液样品稀释液标准溶液标准溶液底物溶液底物溶液终止液终止液酶标二抗工作液酶标二抗工作液浓缩洗涤液浓缩洗涤液抗体工作液抗体工作液酒石酸阿福特罗(Arformoterol Tartrate)长效型肾上腺素受体激动剂。食品安全问题仍然是全球
39、关注的热点,加强监控势在必行,对食品中有害物进行检测是把好食品安全的最后一道关口;农业部1063号公告72008 饲料中8种受体激动剂的检测 气相色谱质谱法强志懿,中国农业大学硕士论文获得国家发明专利33项。莱克多巴胺在美国、加拿大、墨西哥等20余个美洲和亚太国家批准用于猪和反刍动物,组织残留限量要求在30150 ppb之间。研究成果获得国家科学技术进步二等奖1项,北京市科学技术一等奖1项和北京市科学技术二等奖2项。气谱-质谱法(GC-MS)1、酶联免疫吸附测定法获得国家发明专利33项。现有工作人员32名,其中具有高级技术职称的15人,具有博士学位的11人。全球经济一体化和食品贸易国际化使食品
40、安全成为一个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题。仪器本身成本高,操作繁琐,需要专业人员,缺少检测方法标准,检测样本和数量难于满足食品安全监控的需求;农业部、卫生部和国家药品监督管理局联合出台了禁止在饲料和动物饮用水中使用的药品目录(农业部公告176号)细菌耐药性产生与扩散及风险评估近五年先后承担国家科技支撑计划项目、973项目、行业公益项目、国家杰出青年基金项目、国家自然科学基金重点项目等40余项,总经费超过1亿元。农业部1519号公告颁布了11种禁止在饲料和动物饮水中使用的物质。GB/T 213132007 动物源性食品中受体激动剂残留检测方法 液相色谱质谱/质谱法班布特罗(Bambute
41、rol)肾上腺素受体激动剂。DB33/T 4542003 动物血清中盐酸克伦特罗残留的检测方法瘦肉精检测瘦肉精检测ELISA试剂盒试剂盒药物药物样品样品检测限(检测限(ppb)检测时间检测时间克伦特罗尿液、组织、血清、饲料0.1、0.1、0.2、501-2h莱克多巴胺尿液、组织、血清、饲料0.1、0.5、0.3、501-2h沙丁胺醇尿液、组织、血清、饲料0.2、0.5、0.2、21-2h方法名称方法名称灵敏度级别灵敏度级别本底干扰本底干扰单个样品检测时间单个样品检测时间酶联免疫吸附10-8-10-10一般1h左右化学发光免疫10-12-10-15小1h左右荧光偏振免疫10-8-10-10小5-
42、10min量子点标记免疫10-9-10-10一般0.5h左右时间分辨免疫10-15-10-19几乎为零1h左右试剂盒方法比较试剂盒方法比较2、胶体金免疫测定法、胶体金免疫测定法试纸条结构试纸条结构采用竞争法,样品滴入后,在层析作用下经胶体金标记抗体的结合垫,再采用竞争法,样品滴入后,在层析作用下经胶体金标记抗体的结合垫,再流经包被抗原和二抗的流经包被抗原和二抗的T线和线和C线,若样品中含有药物,药物与金标抗体线,若样品中含有药物,药物与金标抗体结合后不再与抗原反应,结合后不再与抗原反应,T线不显色;若不含药物,则金标抗体与抗原反线不显色;若不含药物,则金标抗体与抗原反应,应,T线显色;无论有无
43、药物,二抗与金标抗体均反应,即线显色;无论有无药物,二抗与金标抗体均反应,即C线显色。线显色。优点优点灵敏度高,特异性强灵敏度高,特异性强检测方便、快捷,一般检测方便、快捷,一般3-5分钟就能出结果分钟就能出结果几乎不需要任何仪器设备几乎不需要任何仪器设备可用于大量样本的快速筛选,适用于现场检测可用于大量样本的快速筛选,适用于现场检测检测卡组成检测卡组成试纸条的一般检测步骤试纸条的一般检测步骤1、样品前处理、样品前处理 对尿液、血清等样品,只需进行简单稀释即可;对尿液、血清等样品,只需进行简单稀释即可;对猪肉等组织样品,通过提取或加热处理后,进行稀释;对猪肉等组织样品,通过提取或加热处理后,进
44、行稀释;2、取出检测卡,平放到桌面上,用一次性吸管吸取、取出检测卡,平放到桌面上,用一次性吸管吸取样品处理液,在加样孔中加入样品处理液,在加样孔中加入3-4滴;滴;3、5 min后观察结果;后观察结果;4、结果判定。、结果判定。阴性:阴性:C线显色,线显色,T线有线有颜色,无论颜色深浅均判颜色,无论颜色深浅均判为阴性。为阴性。阳性:阳性:C线显色,线显色,T线无线无颜色,判为阳性。颜色,判为阳性。无效:无效:C线不显色,无论线不显色,无论T线是否有无,该试纸条线是否有无,该试纸条均判为无效。均判为无效。结果判定结果判定瘦肉精检测卡瘦肉精检测卡药物药物样品样品检测限(检测限(ppb)检测时间检测
45、时间克伦特罗尿液、血清、肌肉、饲料2、3、5、1005min莱克多巴胺尿液、血清、肌肉、饲料3、3、8、1005min沙丁胺醇尿液、血清、肌肉、饲料5、5、10、1005min3、多残留检测胶体金层析技术、多残留检测胶体金层析技术在传统胶体金层析技术的基础上,在硝酸纤维素膜上包被多在传统胶体金层析技术的基础上,在硝酸纤维素膜上包被多条检测线,实现条检测线,实现“一条多检一条多检”。检测更加快捷、方便。检测更加快捷、方便。克伦特罗-莱克多巴胺、喹诺酮类-庆大霉素、磺胺类-喹诺酮类、三聚氰胺-庆大霉素-四环素类T1T2T3C快速筛查原则“在快速筛查技术研究中,国内外的一个基本在快速筛查技术研究中,
46、国内外的一个基本原则是原则是绝不能有假阴性,但允许有假阳绝不能有假阴性,但允许有假阳性性,也就是说,快速筛查为阴性的样品,也就是说,快速筛查为阴性的样品,肯定不含瘦肉精,而筛查为阳性的样品,可肯定不含瘦肉精,而筛查为阳性的样品,可以有误判。以有误判。”河南农科院张改平院士接受中央电视台采访时谈到河南农科院张改平院士接受中央电视台采访时谈到 2001年至今,先后颁布了年至今,先后颁布了39项瘦肉精残留检测方项瘦肉精残留检测方法国家标准、行业标准以及地方标准。法国家标准、行业标准以及地方标准。主要为液相色谱质谱法、气相色谱质谱法、气相主要为液相色谱质谱法、气相色谱质谱法、气相色谱法、高效液相色谱法
47、、酶联免疫吸附法、胶色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法等。体金免疫层析法等。六、残留检测方法标准六、残留检测方法标准 GB/T 5009.1922003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定动物性食品中克伦特罗残留量的测定 GB/T 213132007 动物源性食品中动物源性食品中受体激动剂残留检测方法受体激动剂残留检测方法 液相色谱质谱液相色谱质谱/质质谱法谱法 GB/T 221472008 饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定 液相色液相色谱质谱联用法谱质谱联用法 GB/T 222862008 动物源性食品中多种动物
48、源性食品中多种受体激动剂残留量的测定受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联液相色谱串联质谱法质谱法 农业部农业部1025号公告号公告182008 动物源性食品中动物源性食品中受体激动剂残留检测受体激动剂残留检测 液相色谱串联液相色谱串联质谱法质谱法 农业部农业部1025号公告号公告162008 动物尿液中盐酸克伦特罗残留检测动物尿液中盐酸克伦特罗残留检测 气相色谱质谱法气相色谱质谱法 农业部农业部1025号公告号公告112008 猪尿中猪尿中受体激动剂多残留检测受体激动剂多残留检测 液相色谱串联质谱法液相色谱串联质谱法 NY 4382001 饲料中盐酸克仑特罗的测定饲料中盐酸克仑特罗的测定 农业
49、部农业部958号公告号公告82007 牛可食性组织中克仑特罗残留检测方法牛可食性组织中克仑特罗残留检测方法 气相色谱质谱气相色谱质谱法法 农业部农业部1063号公告号公告72008 饲料中饲料中8种种受体激动剂的检测受体激动剂的检测 气相色谱质谱法气相色谱质谱法 农业部农业部1063号公告号公告62008 饲料中饲料中13种种受体激动剂的检测受体激动剂的检测 液相色谱串联质谱法液相色谱串联质谱法 农业部农业部1063号公告号公告32008 动物尿液中动物尿液中11种种受体激动剂的检测受体激动剂的检测 液相色谱串联质液相色谱串联质谱法谱法 农业部农业部1031号公告号公告32008 猪肝和猪尿中
50、猪肝和猪尿中受体激动剂残留检测受体激动剂残留检测 气相色谱质谱法气相色谱质谱法 NY/T 4682006 动物组织中盐酸克伦特罗的测定动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱质谱法气相色谱质谱法 NY/QY 4212003 动物尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留的检测气相色谱动物尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留的检测气相色谱/质谱(质谱(GC/MS)方法)方法 NY/T 9332005 尿液中盐酸克仑特罗的测定尿液中盐酸克仑特罗的测定 胶体金免疫层析法胶体金免疫层析法 NY/T 14602007 饲料中盐酸克仑特罗的测定饲料中盐酸克仑特罗的测定 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法 3、5 min后观察结
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