微生物标本的采集课件.ppt

1、抗生素时代感染仍是抗生素时代感染仍是人类健康的主要人类健康的主要“杀手杀手”高死亡率原因高死亡率原因 新现传染病：新现传染病：近近2020年，已有近年，已有近3030种新的病种新的病原生物，其中包括原生物，其中包括Ebola-type virusEbola-type virus、HIVHIV和各种新型肝炎病毒等引起的各种疾病。和各种新型肝炎病毒等引起的各种疾病。SARSSARS、禽流感、禽流感 再现传染病：再现传染病：以往已被认为得到很好控制以往已被认为得到很好控制的传染病，如结核、登革热等的流行和传的传染病，如结核、登革热等的流行和传播又重新抬头。播又重新抬头。低免疫人群急剧上升：艾滋病、移

2、植医学国际间低免疫人群急剧上升：艾滋病、移植医学国际间交通的快速便捷使得当今疾病传播无国界的概念。交通的快速便捷使得当今疾病传播无国界的概念。气候变暖，人口快速增长，都市化进程加快，伴气候变暖，人口快速增长，都市化进程加快，伴随人口密度和人口流动增加，清洁水源不足和卫随人口密度和人口流动增加，清洁水源不足和卫生设施的不完善，以及生态破坏造成人与媒介生生设施的不完善，以及生态破坏造成人与媒介生物接触机会增多（动物微生物向人类的袭击）等。物接触机会增多（动物微生物向人类的袭击）等。人类还没有足够的能力战胜病原。人类还没有足够的能力战胜病原。病原生物的抗药性产生的速度已超过新型抗生素病原生物的抗药性

3、产生的速度已超过新型抗生素发明的速度（细菌耐药性的快速发展发明的速度（细菌耐药性的快速发展)。耐药菌株出现和扩散的主要因素耐药菌株出现和扩散的主要因素 1.1.耐药基因发生突变使耐药谱增大；耐药基因发生突变使耐药谱增大；2.2.细菌间遗传物质交换，将耐药基因转移到新宿主；细菌间遗传物质交换，将耐药基因转移到新宿主；（质粒介导的耐药性远比染色体介导的耐药性普遍）（质粒介导的耐药性远比染色体介导的耐药性普遍）3.3.医院及社区抗生素的广泛应用，为耐药菌产生和长医院及社区抗生素的广泛应用，为耐药菌产生和长期存在于体内、或更为广泛地扩散，以及引起疾病提供期存在于体内、或更为广泛地扩散，以及引起疾病提供

4、了重要的选择压力；了重要的选择压力；前两个为细菌本身生物学特性的因素，是耐药性产前两个为细菌本身生物学特性的因素，是耐药性产生的客观依据，后一个是人为因素，是抗生素耐药性迅生的客观依据，后一个是人为因素，是抗生素耐药性迅速播散的主要推动力。速播散的主要推动力。4.4.其他：与感染控制措施不当，各种先进的侵袭性诊其他：与感染控制措施不当，各种先进的侵袭性诊治手段的广泛应用，以及免疫容忍性宿主增多等因素有治手段的广泛应用，以及免疫容忍性宿主增多等因素有关。关。如果说抗菌药物的出现是人类第一次征服病菌，如果说抗菌药物的出现是人类第一次征服病菌，细菌耐药性则是对人类智慧的又一次严峻挑战。细菌耐药性则是

5、对人类智慧的又一次严峻挑战。细菌耐药性的产生是微生物的一种天然抗生细菌耐药性的产生是微生物的一种天然抗生现象。解决细菌耐药问题，不能单纯依靠开发抗现象。解决细菌耐药问题，不能单纯依靠开发抗生素，因为许多细菌耐药性是在和抗生素接触过生素，因为许多细菌耐药性是在和抗生素接触过程中产生的。程中产生的。合理使用抗菌药物对细菌耐药性的产生和发合理使用抗菌药物对细菌耐药性的产生和发展具有重要影响。合理使用抗菌药物可以降低耐展具有重要影响。合理使用抗菌药物可以降低耐药菌增长率，有效控制耐药菌感染、减少耐药菌药菌增长率，有效控制耐药菌感染、减少耐药菌交叉感染、降低院内感染发病率和病死率以及延交叉感染、降低院内

6、感染发病率和病死率以及延长抗生素的使用寿命长抗生素的使用寿命.卫生部关于进一步加强抗菌药物临床应用管理卫生部关于进一步加强抗菌药物临床应用管理的通知的通知 200820084848号通知号通知(一）对细菌耐药率超过一）对细菌耐药率超过30%30%的抗菌药物，应将预的抗菌药物，应将预警信息及时通报有关医疗机构和医务人员。警信息及时通报有关医疗机构和医务人员。（二）对细菌耐药率超过（二）对细菌耐药率超过40%40%的抗菌药物，应该的抗菌药物，应该慎重经验用药。慎重经验用药。（三）对细菌耐药率超过（三）对细菌耐药率超过50%50%的抗菌药物，应该的抗菌药物，应该参照药敏试验结果用药。参照药敏试验结果

7、用药。（四）对细菌耐药率超过（四）对细菌耐药率超过75%75%的抗菌药物，应该的抗菌药物，应该暂停该类抗菌药物的临床应用，根据细菌耐药监暂停该类抗菌药物的临床应用，根据细菌耐药监测结果再决定是否恢复临床应用。测结果再决定是否恢复临床应用。提高感染样本送检率提高感染样本送检率 加强细菌耐药监测加强细菌耐药监测 关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为临床工作者，临床微生物与微生态工作者，临床工作者，临床微生物与微生态工作者，药学家和从事感染控制的工作者共同关注的药学家和从事感染控制的工作者共同关注的热门焦点。热门焦点。临床医生要合理用好两种数据临床医生要合理用好两种数

8、据 1.1.本地区、本单位病原流行病学资料，指本地区、本单位病原流行病学资料，指导经验用药。导经验用药。（微生物室、感染管理科、（微生物室、感染管理科、临床科室）临床科室）2.2.药敏试验报告，纠正经验用药。药敏试验报告，纠正经验用药。重视病原学检查重视病原学检查,尽可能在应用抗菌药尽可能在应用抗菌药物之前留取标本送检物之前留取标本送检.以提高病原学诊断率以提高病原学诊断率,为选药和调整药物提供依据为选药和调整药物提供依据.成功治疗感染症因素成功治疗感染症因素 成功分离病源菌成功分离病源菌 标本收集、运送、保存标本收集、运送、保存 标本处理方法标本处理方法 检验医师专业知识检验医师专业知识 医

9、师判读病源菌培养结果医师判读病源菌培养结果 选择适当治疗方法选择适当治疗方法 ISO 15189ISO 15189的技术要素部分将实验室检验的技术要素部分将实验室检验全过程质量保证分为三部分全过程质量保证分为三部分,即即分析前质量分析前质量保证保证;分析中质量保证分析中质量保证;分析后质量保证分析后质量保证。卫生部颁发的卫生部颁发的 卫医发（卫医发（20062006）7373号号 医医疗机构临床实验室管理办法疗机构临床实验室管理办法第十五条：医第十五条：医疗机构临床实验室应当有分析前质量保证措疗机构临床实验室应当有分析前质量保证措施、制定患者准备、标本采集、标本储存、施、制定患者准备、标本采集

10、、标本储存、标本运送、标本接收等标本运送、标本接收等标准操作规程标准操作规程，并由，并由医疗机构组织实施。医疗机构组织实施。研究表明，分析前和分析后是当代检验误研究表明，分析前和分析后是当代检验误差的主要来源。差的主要来源。有报道，有有报道，有93%93%的实验室误差来自分析前，的实验室误差来自分析前，分析前阶段的质量控制是整个检验质量控分析前阶段的质量控制是整个检验质量控制中一个容易被忽视却非常重要的环节。制中一个容易被忽视却非常重要的环节。它是获得准确实验结果的重要保证。它是获得准确实验结果的重要保证。标本采集的规范化是微生物检验分标本采集的规范化是微生物检验分析前质量控制的重要内容之一。

11、析前质量控制的重要内容之一。标本规范化采集的重要性标本规范化采集的重要性 正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌检验成功的关键。细菌检验成功的关键。标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础。提供重要的临床感染信息的基础。好的微

12、生物检验标本可提升实验室工作效率及病好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量，降低医疗成本。患照顾质量，降低医疗成本。国内微生物标本的采集目前存在的问题国内微生物标本的采集目前存在的问题 ：标本送检率低标本送检率低 从全国来看，抗感染治疗从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本的一半前，送检相关标本可能只占应送标本的一半左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养的机会。此时已失去阳性培养的机会。标本有缺陷标本有缺陷 正确收集各种临床标本，

13、正确收集各种临床标本，关注特检标本采样与送检的方法和条件，是关注特检标本采样与送检的方法和条件，是完成病原学诊断的先决条件。完成病原学诊断的先决条件。微生物实验室与临床的交流沟通不够微生物实验室与临床的交流沟通不够 医护人员对于微生物标本的采集要求和注意事项医护人员对于微生物标本的采集要求和注意事项 不甚了解不甚了解 制定制定SOPSOP：采集时机采集时机 采集部位采集部位 采集频率（采几次）采集频率（采几次）样本量样本量 采样部位的消毒处理采样部位的消毒处理 标本保存与运送标本保存与运送 等等一、标本采集和处理的原则一、标本采集和处理的原则 标本收集部位 非无菌部位 无菌部位 眼 血液 耳

14、脊髓液 呼吸道 胸膜液 肠胃道 腹膜液 泌尿道 关节液 皮肤 毛发标本收集原则 可能致病源 收集到越多越好 保持其活性 可能污染菌 非无菌部位 避免污染:消毒 减少增生:低温保存及使用输送培养基 无菌部位 避免污染:确实消毒发现感染应发现感染应及时及时采集微生物标本作病原学检查采集微生物标本作病原学检查 最好是病程最好是病程早期、急性期或症状典型早期、急性期或症状典型时，而且必时，而且必须在须在使用抗生素或其他抗菌药物之前使用抗生素或其他抗菌药物之前采集采集标本采集时应标本采集时应严格无菌操作严格无菌操作，采集的标本应无外，采集的标本应无外源性污染，减少或避免机体正常菌群及其它杂菌源性污染，减

15、少或避免机体正常菌群及其它杂菌污染污染 采集的标本均应盛于采集的标本均应盛于无菌容器无菌容器内内要收集要收集足够量足够量的标本的标本 标本采集后应标本采集后应立即立即送至细菌室送至细菌室标本采集与处理原则标本采集与处理原则 一些一些对环境敏感的细菌对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应和流感嗜血杆菌等应保温保温并立即送检并立即送检 厌氧性标本厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，也可应放在专门的运送瓶或试管内运送，也可直接用抽取标本的注射器运送，针头应插一橡皮塞以直接用抽取标本的注射器运送，针头应插一橡皮塞以隔绝空气隔绝空气 病人标本中可能含

16、有大量致病菌，不管标本运送距离病人标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意远近，都必须注意安全防护安全防护 标本标本切勿污染切勿污染容器口和外壁，容器必须包装好，防止容器口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中翻倒或碰破流出送检过程中翻倒或碰破流出 实验室有责任实验室有责任拒绝接受拒绝接受未按正确方法采集和转运的标未按正确方法采集和转运的标本本标本的处理标本的处理二、血液培养标本的采集二、血液培养标本的采集血液培养血液培养 提升分离率及判别是否污染提升分离率及判别是否污染 准备无菌的采血部位及培养瓶口准备无菌的采血部位及培养瓶口 静脉或动脉穿刺静脉或动脉穿刺 不换针头不换针头

17、 不可由血管导管注射帽抽取不可由血管导管注射帽抽取 采集足量的血液采集足量的血液 55至至1010毫升毫升/瓶，先打入黄色瓶盖厌氧瓶瓶，先打入黄色瓶盖厌氧瓶 如果血量不足，则以需氧瓶为优先如果血量不足，则以需氧瓶为优先 至少收集至少收集2 2套血液培养瓶套血液培养瓶(需氧及厌氧需氧及厌氧)采集时机采集时机:用药前，间隔用药前，间隔3030分钟或发烧、发冷后采集血分钟或发烧、发冷后采集血液液影响血液培养菌采样因素影响血液培养菌采样因素 血液采样人员训练血液采样人员训练 采集部位采集部位 穿穿刺刺部位的准备工作部位的准备工作 血液采样设备血液采样设备 采样数量与时机采样数量与时机（一）血培养检测采

18、血指征：（一）血培养检测采血指征：临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，的患者，1 1 发热（发热（3838）或低温（）或低温（3636）2 2 寒战寒战3 3 白细胞增多（白细胞增多（1010109/L109/L，特别有，特别有“核左移核左移”未成熟的或带状的白细胞增多未成熟的或带状的白细胞增多4 4 粒细胞减少（成熟的多核白细胞粒细胞减少（成熟的多核白细胞138 38 寒战寒战 血压下降血压下降2008年上海市院内感染质控中心督查方案 项目：年度重点项目：年度重点-加强医院感染病原诊断和耐药性监测加强医院感染病原诊断和耐药性监测 内容：正确

19、掌握血培养指征内容：正确掌握血培养指征-住院病人出现发热住院病人出现发热3838，考虑感染所致，并伴有以下一种情况，应抽血培养：考虑感染所致，并伴有以下一种情况，应抽血培养：(1)(1)对于留置深静脉导管超过对于留置深静脉导管超过4848小时的患者小时的患者(2)(2)医院内肺炎患者医院内肺炎患者 分值：分值：4 4分分 评估方法：到评估方法：到ICUICU或病区，查找发热伴深静脉留置导管或病区，查找发热伴深静脉留置导管 超过超过4848小时和医院内肺炎，各小时和医院内肺炎，各2 2例。如果缺少病例，可例。如果缺少病例，可 以从出院病例中查找以从出院病例中查找 扣分标准：符合条件者，没有做血培

20、养，每例扣扣分标准：符合条件者，没有做血培养，每例扣1 1分分（二）血培养检测消毒程序：（二）血培养检测消毒程序：1.1.皮肤消毒程序皮肤消毒程序：（为防止皮肤寄生菌污染）为防止皮肤寄生菌污染）（1 1）用用75%75%酒精擦拭静脉穿刺部位待酒精擦拭静脉穿刺部位待30s30s以上。以上。（2 2）然后用棉签（然后用棉签（1%1%2%2%碘酊作用碘酊作用3030秒或秒或10%10%碘伏碘伏60 60 秒）消毒皮肤。秒）消毒皮肤。（3 3）最后用最后用75%75%酒精脱碘。对碘过敏的患者，只能用酒精脱碘。对碘过敏的患者，只能用75%75%酒精消毒，消毒酒精消毒，消毒60s60s，待穿刺部位酒精挥发

21、，待穿刺部位酒精挥发干燥干燥后穿刺采后穿刺采血。血。严格执行以上三步消毒后，可行静脉穿刺采血。严格执行以上三步消毒后，可行静脉穿刺采血。2.2.培养瓶消毒程序：培养瓶消毒程序：（1 1）用用75%75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用6060秒。秒。（2 2）用无菌纱布或无菌棉签用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞表面剩余的酒精清除橡皮塞表面剩余的酒精，然后注入血液。然后注入血液。血培养血培养（三）血培养检测采集和运送：（三）血培养检测采集和运送：1.1.采血量采血量 婴幼儿和儿童，一般静脉采血婴幼儿和儿童，一般静脉采血1 15ml5ml，当，当细菌浓度足够高时，血液少于细菌

22、浓度足够高时，血液少于1ml1ml也足以检也足以检测菌血症。测菌血症。成人血培养的采血量是成人血培养的采血量是8 810ml10ml，202030ml30ml最合适，血液和肉汤的比一般为最合适，血液和肉汤的比一般为1 15 5至至1 11010。血培养血培养2.2.血培养的份数和采血时间：血培养的份数和采血时间：一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单次血一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单次血培养。培养。血培养应尽量在使用抗菌药之前进行，在血培养应尽量在使用抗菌药之前进行，在24h24h内内采集采集2 2 3 3份血培养，每次血培养同时采集份血培养，每次血培养同时采集2 2 3 3瓶。瓶。对

23、间歇性菌血症，用于培养的血液应在估计寒对间歇性菌血症，用于培养的血液应在估计寒战或体温高峰到来之前战或体温高峰到来之前0.50.5 1h1h采集，或于寒战或采集，或于寒战或发烧后发烧后1h1h进行。进行。血培养CLSICLSI指南指南 研究结果研究结果 一套血培养的阳性率为一套血培养的阳性率为6565 二套血培养的阳性率为二套血培养的阳性率为8080 三套血培养的阳性率为三套血培养的阳性率为9696 CLSI CLSI建议方针建议方针 对于每位需要血培养的患者需采取对于每位需要血培养的患者需采取2 2至至3 3套血培养。套血培养。对成年患者，不允许只采单套血培养，因结果解释困难对成年患者，不允

24、许只采单套血培养，因结果解释困难 采取血培养后的采取血培养后的2 2至至5 5天内，不需要重复采样，因为治疗天内，不需要重复采样，因为治疗后后2 2至至5 5天内血液中的感染细菌不会马上消失天内血液中的感染细菌不会马上消失 20082008年上海市院内感染质控中心督查方案年上海市院内感染质控中心督查方案 项目：年度重点项目：年度重点-加强医院感染病原诊断和耐药性监测加强医院感染病原诊断和耐药性监测 内容：血培养标本采集方法怀疑有血流感染时，应在内容：血培养标本采集方法怀疑有血流感染时，应在 不同部位采血，至少不同部位采血，至少2 2次。次。分值：分值：4 4分分 评估方法：到微生物室统计连续评

25、估方法：到微生物室统计连续5050例血培养数据例血培养数据 扣分标准：当天扣分标准：当天2 2次采血培养人数占总体血培养人数的次采血培养人数占总体血培养人数的 比例：比例：61 61 8080，扣，扣1 1分；分；41 41 6060，扣，扣2 2分；分；21 21 4040，扣，扣3 3分；分；2010105 5CFU/ml CFU/ml 或革兰阳性球菌数或革兰阳性球菌数10104 4CFU/mlCFU/ml时有临床诊断意义。时有临床诊断意义。（不是绝对的，受多（不是绝对的，受多因素影响，综合判断）因素影响，综合判断）2.2.尿液标本的采集和培养中的问题是污染杂菌，故尿液标本的采集和培养中的

26、问题是污染杂菌，故应严格进行应严格进行无菌操作无菌操作。3.3.尿标本采集后应立即送检，以免污染，尿液中尿标本采集后应立即送检，以免污染，尿液中不不得加防腐剂和消毒剂得加防腐剂和消毒剂。尿液标本的采集尿液标本的采集下列因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果下列因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果时应注意时应注意使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；尿液稀释，尿比重尿液稀释，尿比重1.0031.003，营养成分减少，细菌生长迟缓；，营养成分减少，细菌生长迟缓；尿尿PHPH5.05.0或或8.58.5，细菌生长受阻；，细菌生长受阻；尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数减

27、少；尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数减少；尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数减少；尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数减少；不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同，菌落计数有所不同。不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同，菌落计数有所不同。五、五、粪便标本的采集粪便标本的采集 （一）采集时间（一）采集时间 腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新鲜粪便；伤寒患者在发病新鲜粪便；伤寒患者在发病2 2周以后。周以后。（二）采集方法（二）采集方法 1 1自然排便采集法自然排便采集法 自然排便后，挑取有自然排便后，挑取

28、有脓血或黏液脓血或黏液部部位的粪便位的粪便2-3g 2-3g，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。置于保存液或增菌液中送检。2 2直肠拭子采集法直肠拭子采集法 对不易获得粪便或排便困难的患者对不易获得粪便或排便困难的患者及婴幼儿，可采用直肠拭子法采集标本，其方法是将拭及婴幼儿，可采用直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入肛门约子前端用甘油湿润。然后插入肛门约4 45cm5cm（幼儿约（幼儿约2 23cm3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，盛入无菌试管

29、或保存液中送检。盛入无菌试管或保存液中送检。粪便标本的采集粪便标本的采集（三）采集容器（三）采集容器 粪便标本直接收集于有合适盖子的塑料容粪便标本直接收集于有合适盖子的塑料容器或一干净蜡制纸板中，按要求送到实验器或一干净蜡制纸板中，按要求送到实验室。旋盖玻璃或塑料容器适合于液状粪便。室。旋盖玻璃或塑料容器适合于液状粪便。如果标本需运送或采便后如果标本需运送或采便后2h2h内未培养，标内未培养，标本应放在本应放在Cary-blairCary-blair运送培养基中并于冰运送培养基中并于冰箱保存。标本应选取有黏液、血的部分，箱保存。标本应选取有黏液、血的部分，标本量为标本量为0.50.52g2g粪

30、便标本。粪便标本。粪便标本的采集粪便标本的采集实验室检查实验室检查 肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，因此各种正常菌群，形态上区分困难，因此一般不作直一般不作直接涂片检查接涂片检查。只有当临床怀疑肠道菌群失调或检查霍乱弧菌、结只有当临床怀疑肠道菌群失调或检查霍乱弧菌、结核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩芽孢梭菌引起的核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩芽孢梭菌引起的伪膜性肠炎以及真菌性腹泻时，才作直接涂片检查。伪膜性肠炎以及真菌性腹泻时，才作直接涂片检查。疑似葡萄球菌引起的抗菌素相关性肠炎，可取水样疑似葡萄球菌引起的抗菌

31、素相关性肠炎，可取水样便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴性杆菌明显减少，革兰阳性球菌大量散在或成堆性杆菌明显减少，革兰阳性球菌大量散在或成堆（葡萄状）排列，可提示（葡萄状）排列，可提示肠道菌群失调肠道菌群失调。粪便标本的采集粪便标本的采集特别提醒特别提醒 在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急性期在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急性期（3d3d）内和用药前采集标本，以提高检出率。）内和用药前采集标本，以提高检出率。大便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意防止大便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意防止外界脏物污染。外

32、界脏物污染。为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检。为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检。六、六、生殖道标本的采集生殖道标本的采集（一）标本采集（一）标本采集 生殖器官标本包括子宫颈、阴道、前列腺；男性及女性生殖器官标本包括子宫颈、阴道、前列腺；男性及女性外生殖器的分泌物及经血等。应根据感染的部位和可能的病外生殖器的分泌物及经血等。应根据感染的部位和可能的病原体决定用于病原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法原体决定用于病原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于无菌试管内送检。无菌试

33、管内送检。生殖道标本生殖道标本 制作直接涂片制作直接涂片 病源菌对温度敏感病源菌对温度敏感 直接接种于恢复至室温的适当培养基直接接种于恢复至室温的适当培养基 置于运送培养基中置于运送培养基中 使用特殊采检棒，迅速送至实验室使用特殊采检棒，迅速送至实验室 竹（木）签棉拭子竹（木）签棉拭子因棉花含有的脂肪酸及竹或木签含有因棉花含有的脂肪酸及竹或木签含有树脂和甲醛等对细菌生长有抑制作用而不适于细菌学标本树脂和甲醛等对细菌生长有抑制作用而不适于细菌学标本的采集，建议使用的采集，建议使用塑料杆的藻酸盐或涤纶拭子。塑料杆的藻酸盐或涤纶拭子。生殖道标本的采集生殖道标本的采集（二）送检指征（二）送检指征1.1

34、.全身症状全身症状 发热、乏力、食欲不振发热、乏力、食欲不振 2.2.皮肤黏膜损害皮肤黏膜损害3.3.男性泌尿系统表现男性泌尿系统表现尿急、尿频、尿痛尿急、尿频、尿痛尿道分泌物增多尿道分泌物增多会阴部疼痛及阴囊疼痛会阴部疼痛及阴囊疼痛性功能障碍性功能障碍泌尿生殖器畸形和缺损泌尿生殖器畸形和缺损生殖道标本的采集生殖道标本的采集送检指征送检指征4.4.女性泌尿系统表现女性泌尿系统表现分泌物增多及性状异常分泌物增多及性状异常尿道口搔痒及脓性分泌物流畅尿道口搔痒及脓性分泌物流畅下腹疼痛下腹疼痛月经失调月经失调阴道出血阴道出血外阴搔痒外阴搔痒外阴或阴道疼痛外阴或阴道疼痛性功能障碍性功能障碍生殖道标本的采

35、集生殖道标本的采集（三）特别提醒（三）特别提醒 1.1.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌操作规程以减少杂菌污染。操作规程以减少杂菌污染。2.2.由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定受到干扰，由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量减少或避免减少或避免正常菌群的污染正常菌群的污染。3.3.疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳

36、拭子一同送检。4.4.沙眼衣原体和病毒沙眼衣原体和病毒均在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应均在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几秒钟，并采在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几秒钟，并采集尽可能多的上皮细胞。集尽可能多的上皮细胞。生殖道标本的采集生殖道标本的采集特别提醒特别提醒 5.5.生殖道感染生殖道感染厌氧菌厌氧菌也较多见，疑有厌氧菌感染时，标本也较多见，疑有厌氧菌感染时，标本采集和运送应避免与氧气接触，最佳方法是床边采样，直采集和运送应避免与氧气接触，最佳方法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。接接种至厌氧装置内。6.6.淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌检查时，取材的深度一定要

37、够，因为淋球菌检查时，取材的深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm3cm深转动并深转动并停留停留1030s1030s取样送检。取样送检。7.7.淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境变化颇为敏感，对寒冷淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后要尽快送检，立即接种，标本离体时间越短越好。取材后要尽快送检，立即接种，标本离体时

38、间越短越好。生殖道标本的采集生殖道标本的采集七、七、化脓和创伤标本的采集化脓和创伤标本的采集 组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分为两类：组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分为两类：内源性内源性：感染源是炎症局部周围器官中的正常菌群，由于：感染源是炎症局部周围器官中的正常菌群，由于损伤等因素进入无菌状态的组织内，发生感染。损伤等因素进入无菌状态的组织内，发生感染。外源性外源性：感染源是存在于人体外部自然界的微生物，由于：感染源是存在于人体外部自然界的微生物，由于外伤和直接接触通过人体表面进入人体，造成感染外伤和直接接触通过人体表面进入人体，造成感染。脓液的细菌学检查对于确定感染的种

39、类（结核性或非结核性脓液的细菌学检查对于确定感染的种类（结核性或非结核性等）、提供药物敏感结果和指导临床治疗有重要的意义。等）、提供药物敏感结果和指导临床治疗有重要的意义。（一）标本采集（一）标本采集 1 1开放性感染和已溃破的化脓灶开放性感染和已溃破的化脓灶 标本采集前先标本采集前先用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，从脓肿底部从脓肿底部或脓肿壁取样，效果最好或脓肿壁取样，效果最好。慢性感染，污染严重，。慢性感染，污染严重，很难分离到致病菌，可取感染部位下的组织，研磨很难分

40、离到致病菌，可取感染部位下的组织，研磨成组织匀浆接种于适宜的培养基。成组织匀浆接种于适宜的培养基。2 2封闭性脓肿封闭性脓肿 局部消毒后用局部消毒后用针及注射器抽吸针及注射器抽吸脓脓肿壁，将所有物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧肿壁，将所有物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧菌感染时立即作床边接种或置于厌氧转运装置送检菌感染时立即作床边接种或置于厌氧转运装置送检（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会带入与感染过程无关的定植细菌。带入与感染过程无关的定植细菌。化脓和创伤标本的采集化脓和创伤标本的采集 标本采集标本采集 3 3大面积创伤感染大面积创伤感染

41、：可取感染组织块或沾有脓：可取感染组织块或沾有脓汁的内层敷料送检。汁的内层敷料送检。4 4细菌对干燥敏感细菌对干燥敏感或只能采集少量标本时，用或只能采集少量标本时，用棉拭子采集标本后立即放入液体培养基内，或采棉拭子采集标本后立即放入液体培养基内，或采标本前先将棉拭子沾少许肉汤以标本前先将棉拭子沾少许肉汤以保持标本湿度保持标本湿度。对于不能立即送检的标本，应放对于不能立即送检的标本，应放44保存，培养保存，培养淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌的标本除外。淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌的标本除外。注：注：尽可能在用药前采集标本，如患者在采集标尽可能在用药前采集标本，如患者在采集标本前已用药，请在检验申请单上注明

42、，检验人员本前已用药，请在检验申请单上注明，检验人员可在培养基内加入相应拮抗物，以利于提高阳性可在培养基内加入相应拮抗物，以利于提高阳性检出率。检出率。采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。化脓和创伤标本的采集化脓和创伤标本的采集 有的创伤均可有细菌污染，但不一定发生有的创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染，因此对分离到的细菌要根据创伤的情况、感染，因此对分离到的细菌要根据创伤的情况、菌量和种数，收集标本的处理过程、机体免疫菌量和种数，收集标本的处理过程、机体免疫力及抗生素的使用情况等多种因素来分析判断。力及抗生素的使用情况等多种因素来分析判断。化脓和

43、创伤标本的采集化脓和创伤标本的采集八、八、穿刺液标本的采集穿刺液标本的采集 穿刺液主要包括穿刺液主要包括:脑脊液脑脊液 胆汁胆汁 胸水胸水 腹水腹水 心包液心包液 关节液关节液 鞘膜液鞘膜液 在正常人体中，上述体液均是无菌的。有感染的情况下检出在正常人体中，上述体液均是无菌的。有感染的情况下检出的细菌，在排除污染后应视为病原菌，及时给予正确的治疗，使病的细菌，在排除污染后应视为病原菌，及时给予正确的治疗，使病人早日恢复健康。人早日恢复健康。（一）脑脊液（一）脑脊液 1.1.采集时间采集时间：怀疑为脑膜炎的病人，应立即采怀疑为脑膜炎的病人，应立即采集脑脊液，最好在使用抗菌药物以前采集标本。集脑脊

44、液，最好在使用抗菌药物以前采集标本。2.2.采集方法采集方法：用腰穿方法采集脑脊液用腰穿方法采集脑脊液3 35ml5ml，一般放入一般放入3 3个无菌试管，每个试管内个无菌试管，每个试管内1 12ml2ml。如用。如用于检测细菌或病毒，脑脊液量应不少于于检测细菌或病毒，脑脊液量应不少于1ml1ml；如果；如果用于检测真菌或抗酸杆菌，脑脊液量应大于或等用于检测真菌或抗酸杆菌，脑脊液量应大于或等于于2ml2ml。穿刺液标本的采集穿刺液标本的采集脑脊髓液标本脑脊髓液标本 直接观察直接观察 革兰氏染色革兰氏染色 抗酸菌染色抗酸菌染色-墨汁染色墨汁染色 无菌采集技术无菌采集技术 避免检体污染及病患被感染

45、避免检体污染及病患被感染 病毒培养标本置于病毒培养标本置于44保存保存 分枝杆菌培养标本需要分枝杆菌培养标本需要2mL2mL以上，置于以上，置于44保存保存 细菌培养标本置于细菌培养标本置于3535保存保存（二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、（二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）关节液及鞘膜液等）1.1.检测时间检测时间 怀疑感染存在，应尽早采集标怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后本，一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后1212天采集。天采集。2.2.采集方法采集方法首先用首先用2%2%碘酊消毒皮肤。碘酊消毒皮肤。用针穿刺法抽

46、取标本或外科手术方法采集标本，用针穿刺法抽取标本或外科手术方法采集标本，然后放入无菌试管或小瓶内，立即送到实验室。然后放入无菌试管或小瓶内，立即送到实验室。尽可能采集更多的液体，至少尽可能采集更多的液体，至少1ml1ml。穿刺液标本的采集穿刺液标本的采集(三三)特别提醒特别提醒 1 1如果用于检测如果用于检测细菌细菌，收集脑脊液后，在，收集脑脊液后，在常温常温下下15min15min内内送到实验室。脑脊液标本不可置冰箱保存，送到实验室。脑脊液标本不可置冰箱保存，否则会使病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈瑟菌、肺炎否则会使病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌。链球菌和嗜血杆菌。常温下可保

47、存常温下可保存24h24h。2 2如果用于检测如果用于检测病毒病毒，脑脊液标本应放置冰块，脑脊液标本应放置冰块，在在4 15min4 15min内内送到实验室。用于检测病毒的脑脊送到实验室。用于检测病毒的脑脊液，液，在在44可保存可保存72h72h。3 3作脑脊液细菌培养时，建议同时作血培养。作脑脊液细菌培养时，建议同时作血培养。4 4采集脑脊液的试管不需要加入防腐剂。采集脑脊液的试管不需要加入防腐剂。穿刺液标本的采集穿刺液标本的采集 特别提醒特别提醒 5 5进行腰穿过程中，严格无菌操作，避免污染。进行腰穿过程中，严格无菌操作，避免污染。6 6由于厌氧菌在这些感染中占有重大比例，故由于厌氧菌在

48、这些感染中占有重大比例，故除了有一般细菌培养的无菌试管外，还应有做除了有一般细菌培养的无菌试管外，还应有做厌厌氧菌培养氧菌培养的传输系统。深部脓液穿刺物作普通细的传输系统。深部脓液穿刺物作普通细菌培养时，同时作厌氧菌培养。菌培养时，同时作厌氧菌培养。7 7防止穿刺液的凝固防止穿刺液的凝固，应在无菌试管中预先加，应在无菌试管中预先加入入灭菌肝素，灭菌肝素，再注入穿刺液。再注入穿刺液。8 8有淋病性关节炎患者之关节液，采集后应立有淋病性关节炎患者之关节液，采集后应立即送检。即送检。穿刺液标本的采集穿刺液标本的采集九、九、眼、耳、鼻、咽拭子标本的采集眼、耳、鼻、咽拭子标本的采集 正常眼部、中耳及鼻窦

49、内是无菌的，而正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌的，而咽峡部有口腔的常在菌丛。咽峡部有口腔的常在菌丛。耳、鼻、咽部耳、鼻、咽部的细菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有的细菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官需氧菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官的感染不仅考虑是需氧菌，也须检查厌氧菌。的感染不仅考虑是需氧菌，也须检查厌氧菌。（一）标本采集（一）标本采集 1.1.眼眼 结膜结膜：分别用（无菌盐水预湿）拭子绕每一个结膜取；：分别用（无菌盐水预湿）拭子绕每一个结膜取；采集完即接种培养基；将拭子涂片在两个玻片上染色。采集完即接种培养基；将拭子涂片在两个玻片上染色。角膜刮擦角膜

50、刮擦：滴两滴局部麻醉液；用无菌铲刮擦脓肿或：滴两滴局部麻醉液；用无菌铲刮擦脓肿或溃疡，将刮擦物直接接种于培养基；将剩余材料涂于溃疡，将刮擦物直接接种于培养基；将剩余材料涂于两个干净的玻片上染色。两个干净的玻片上染色。液体或抽吸物液体或抽吸物：备眼，用针头抽吸液体。先用无菌生：备眼，用针头抽吸液体。先用无菌生理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭子采集分泌物。子采集分泌物。眼、耳、鼻、咽拭子标本的采集眼、耳、鼻、咽拭子标本的采集2.2.耳耳 内耳内耳：对复杂的、反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓：对复杂的、反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓膜穿刺术，接触