高中生物选修三知识点填空形式(整理带答案)(DOC 11页).doc

1、选修3易考知识点背诵专题1 基因工程基因工程的概念P9基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果特点（优点）本质（原理）（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”-_（1）来源：主要是从_中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的_断开，因此具有_。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：_和_。2.“分子缝合针”_ (1)两种DNA连接酶（EcoliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：相同点：都缝合_。区别：EcoliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之

2、间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”_（1）载体具备的条件：_。_（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它常见载体_(二)基因工程的基本操作程序第一步:_1.目的基因是指：_。2.获取目的基因的方法_ _ _3.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法

3、有反转录法_和化学合成法_。4.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至9095DNA解链；第二步：冷却到5560，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至7075，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：_1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2.组成：_（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞

4、中_，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是_。第三步_1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是_，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是_。此方法的受体细胞多为_2.目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 _ ，其转化方法是：先用 Ca2+ 处理细胞，使其成为 感受态细胞 ，再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA

5、分子，完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用 用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行抗原抗体杂交。4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。（三）基因工程的应用1.植物基因工程：_2.动物基因工程：_3.基因治疗：概念_基因检测原理_

6、作用_（四）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）转录 翻译蛋白质的改造_：设计并制造自然界中不存在的全新蛋白质，使之具有特定的氨基酸序列、空间结构和预期功能_：在蛋白质分子中替代某一个肽段或一个特定的结构域_：通过基因工程中的定点诱变技术，有目的改造蛋白质分子中某活性部位的1个或几个氨基酸残基，以改善蛋白质的性质和功能_是改变蛋白质结构的核心之一_是基因定点诱变的常用方法蛋白质工程与基因工程的关系蛋白质工程

7、基因工程实质结果联系专题2 细胞工程一、植物细胞工程 （一）植物组织培养技术1、理论基础（原理）：_细胞具有全能性的原因：_ 全能性表达的难易程度：受精卵、生殖细胞、干细胞、体细胞；植物细胞、动物细胞,请排序_；_2、过程：离体的植物器官、组织或细胞（又称_） 愈伤组织 胚状体试管苗 植物体 愈伤组织的特点：_脱分化：_再分化_3、用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。A植物繁殖微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖作物脱毒：采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有）人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，

8、经人工薄膜包装得到的种子。优点：完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输人工种子的结构包括：_、_和_。B作物新品种培育单倍体育种：a过程：植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；对花粉进行_（技术是植物组织培养）；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行_处理；得到了正常的_植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。b 优点：_（二）植物细胞培养：通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养，从而让它们能够产生大量的_产物。注意：1、原理：_ 2、大规模获得细胞产品应用组织培养技术培养到_阶段（三）植物体细胞杂交技术1、过程：2、植物

9、诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用_作为诱导剂。（3）注意：a生理基础：_，_ b植物细胞融合前需用_和_除去细胞壁（3）意义：_ _二、动物细胞工程一般包括_等技术（一）动物细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。（2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎用_处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行_培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续_培养。（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称

10、为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为_ 。（4）动物细胞培养需要满足以下条件无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。温度：适宜温度：哺乳动物多是36.50.5；pH：7.27.4。气体环境：95%空气5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制

11、备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。(6)动物细胞培养与组织培养的主要区_（二）动物体细胞核移植技术和克隆动物1、哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。2、选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。3、体细胞核移植的大致过程是：（右图）注意：(1)_ (2)原理：_全能性克隆羊性别：_3、体细胞核移植技术的应用：加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； 保护濒危物种，增大存活数量；生产珍贵的医用蛋白； 作为异种移植的供体；用于组织器官的移植等。4、体细胞核移植技术存在的问题：克隆动物存在着健康问题

12、、表现出遗传和生理缺陷等。（三）动物细胞融合1、动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素_ _等。2、动物细胞融合的意义：克服了_，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。3、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：（重点记忆）细胞工程植物体细胞杂交动物细胞融合理论基础细胞的全能性、细胞膜的流动性细胞增殖、细胞膜的流动性融合前处理酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶）注射特定抗原，免疫处理正常小鼠诱导手段物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG）物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇生物法：灭活的病

13、毒（灭活的仙台病毒）诱导过程第一步：原生质体的制备（酶解法）第二步：原生质体融合 （物、化法）第三步：杂种细胞的筛选和培养第四步：杂种植株的诱导与鉴定正常小鼠免疫处理动物细胞的融合（物、化、生法）杂交瘤细胞的筛选与培养专一抗体检验阳性细胞培养单克隆抗体的提纯用途和意义克服远缘杂交的不亲和障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围应用：白菜-甘蓝等杂种植株（1） 制备单克隆抗体（2） 诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症4.单克隆抗体（1）a.抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种_。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。b.B淋巴细胞特点：可以产生_，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞特点：能_，但不

14、能产生抗体。（2）单克隆抗体的制备过程：注入小鼠细胞融合分离抗原注入小鼠体内B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养养选择培养细胞培养基体内培养体外培养从腹水提取从培养液提取单克隆抗体（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量_，又能产生_。（4）单克隆抗体的优点：_。（5）单克隆抗体的作用： 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”（_），也有少量用于治疗其它疾病。补充： 淋巴因子中的干扰素是治疗病毒的特效药，通常只能从体内获得，且数量非常的少，为了在体外获得大量的干扰素

15、，我们可以用鼠的效应T淋巴细胞与其骨髓瘤细胞进行融合，进而从小鼠的腹水中或从培养液中提取。干扰素是由效应T淋巴细胞产生的，所以在进行细胞融合时，选用的是效应T淋巴细胞和骨髓瘤细胞。专题3 胚胎工程（一）生殖细胞的发生和受精作用1.精子与卵细胞的发生过程（1）精子的发生：精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂；变形过程中，细胞核为精子头的主要部分，高尔基体发育为顶体，中心体演变为精子的尾，线粒体在尾基部形成线粒体鞘膜，其他物质浓缩为原生质滴直至脱落。线粒体为精子运动提供能量（2）卵子的发生：卵原细胞演变成初级卵母细胞被卵泡细胞包围，减一分裂在_，形成次级卵母细胞和第一极体进入输卵管准备受精；减二分

16、裂是在_过程中完成的。（3）精子与卵细胞发生过程比较项目精子的发生过程卵子的发生过程发生场所发生时间发生过程是否连续核物质含量是否变形结果细胞质分裂2.受精作用：（1）受精场所：是母体的_（2）受精前的准备a.精子获能（在雌性动物生殖道内）；b.卵子的准备（排出的卵子要在输卵管中进一步成熟到_才具备受精能力）；（3）受精过程卵子周围的结构由外到内：放射冠、透明带、卵黄膜，a顶体反应：精子释放顶体酶溶解卵丘细胞之间的物质，穿越放射冠。B_：顶体酶可将透明带溶出孔道，精子穿入，在精子触及卵黄膜的瞬间阻止后来精子进入透明带的生理反应它是防止多精子入卵受精的第一道屏障；C_：精子外膜和卵黄膜融合，精子

17、入卵后，卵黄膜会拒绝其他精子再进入卵内的过程它是防止多精子入卵受精的第二道屏障；精子尾部脱落，原有核膜破裂形成雄原核，同时卵子完成减二分裂，形成雌原核注意：受精标志是_的形成；受精完成标志_（二）动物胚胎发育的基本过程1.胚胎发育是指受精卵发育成_的过程2.胚胎发育的各个阶段的特点：（1）卵裂期：特点：细胞进行_分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加。 （2）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹，是_细胞。（3）囊胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。聚集在胚胎一端个体较大的细胞群称为_，将来发育成胎儿的各种组织。而滋养层细胞

18、将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现_注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化（4）原肠胚：特点：有了_的分化，具有原肠腔。(三) 胚胎工程的应用胚胎工程指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，由_、_、_、胚胎冷冻保存技术和_技术等组成的现代生物技术。1.体外受精和胚胎的早期培养(1)卵母细胞的采集和培养：主要方法：用_处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。第二种方法：从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞；第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成

19、熟后，才能与获能的精子受精。(2) 精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行_处理。(3) 受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。(4)胚胎的早期培养：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般要培育到_或_阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在816个细胞阶段

20、移植。)2.胚胎移植(1)胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到_其它_动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“_”，接受胚胎的个体称为“_”。（供体为优良品种，作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。）地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎，都必须经过胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”。(2) 胚胎移植的意义：大大缩短了供体本身的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。(3) 生理学基础：动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提

21、供了相同的生理环境。早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。受体对移入子宫的外来胚胎不发生_。这为胚胎在受体的存活提供了可能。供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。(4) 基本程序主要包括：对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行_，用促性腺激素对供体母牛做_处理。配种或人工授精。对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到_阶段。

22、直接向受体移植或放入196的液氮中保存。对胚胎进行移植。移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。3.胚胎分割(1)概念：是指采用机械方法将_切割2等份、4等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。(2)意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于_繁殖。(3)材料：发育良好，形态正常的_。（桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。）(4)操作过程：对囊胚阶段的胚胎分割时，要将_均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。（四）胚胎干细胞及其应用1.干细胞分类(1).按照分化潜能的大小分_(例 _ _)、_（例_）、_（例_）。(2).按来源分_、

23、_。2.胚胎干细胞(1)、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于_或_中分离出来。(2)、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。(3)、胚胎干细胞的主要用途是：（了解） 可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；是在体外条件下研究细胞分化的理想材料，在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化，这为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段；可以用于治疗人类的某些顽疾，如

24、帕金森综合症、少年糖尿病等；利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能；随着组织工程技术的发展，通过ES细胞体外诱导分化，定向培育出人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。专题四 生态工程一、 生态工程的概念 生态工程是指应用生态系统中物种共生与物质循环再生原理、结构与功能相协调原则，结合系统分析的最优化方法而设计的促_的生产工艺系统。二、生态工程的基本原理生态工程的设计所依据的是_和_原理1、生态学原理（1）物种共生原理：自然界任何一种生物都不能离开其他生物而单独生存和繁衍，存在着 、 等关系，这构成了生态

25、系统的 和 机制。（2）生态位原理：生态系统中各种生物都占有一定的生态位，依据此原理，可构建一个具有 、 的稳定而高效的生态系统。（3）食物链原理：食物链/食物网是实现生态系统中 、 和 的基础，物种间的 关系是生态工程设计的重要因素。（4）物种多样性原理：生态系统中生物多样性越高，抵抗力稳定性越陷越 ，生态系统就越 。丰富物种多样性，使营养结构更为 ，可实现 并增加 的目的。（如“三北防护林”虫害、珊瑚礁区的生机）2、工程学原理（1）_原理：物质能在生态系统中循环往复，分层分级利用。我国古代的“无废弃物农业”利用收集到的一切可能的有机物质转变为有机肥料，改善了土壤结构，培育了土壤微生物，实现

26、了N、P、K等元素的循环利用。（2）_原理：要处理好生物与环境的协调与平衡，生态系统中的生物数量不能超过环境承载力（环境容纳量）的限度。太湖等水体富营养化，导致水葫芦和藻类疯长现象；西北衰败的杨树和繁茂的当地树种间的大反差。（3）_原理：生态工程建设，不但要考虑自然生态系统的规律，还要考虑到社会和经济等系统的影响力。只有应用整体性原理，才能统一协调当前与长远、局部与整体、开发与环境建设之间的关系，保障生态系统的平衡与稳定。三、生态工程建设的基本过程2.生态工程建设的核心环节是_.3.生态工程设计的方法及实例（1）食物链（网）的“相接”，如_农业生态工程。（2）食物链（网）的“加环”，如_的充分

27、利用。4.生态工程在设计时要考虑到有利于_和_两方面，突出_、_、_的特征。二、我国生态工程建设的实例1.治污生态工程（1）内容：主要涉及_处理，_的研制与试用，_的生态治理，塑料的再生利用。（2）实例“人工湿地”生态工程： （1）湿地的重要特点之一是 ，湿地生态系统具有较强的 功能，被誉为“地球之肾”。 （2）“人工湿地”的净化作用是通过湿地环境中所发生的 、 和 _作用的综合效应实现的，由不同类型的_和_的共同作用来完成。（3）水生植物可吸收、转化污水中的 等物质，还能促进 等微生物对污水的处理和净化。2.生态恢复工程（1）生态恢复工程的第一步是_.（2）实例a.矿山废弃地生态恢复工程：在

28、矿区废弃地的生态修复中，植被要注意选择生长 和抗逆性 的树种，优先选择 树种，尽量选择 的乡土树种和 树种，注意树种的多功能效益。b.西部的生态治理_是西部生态问题中最本质、最突出的矛盾。3.生态农业工程生态农业的目的是：以保持_为主导思想，促进_,以最少的投入获取最大的_。选修3易考知识点答案专题1 基因工程基因工程的概念基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切 拼接导入 表达结果产生人类需要的基因产物特点打破种的界限，定向改造生物本质基因重组（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是

29、从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有特异性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（EcoliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：相同点：都缝合磷酸二酯键。区别：EcoliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸

30、加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”载体（1）载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳定保存。具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体： 噬菌体、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.目的基因是指：是人们所需要转移或改造的基因2.获取目的基因的方法基因文库 、人工合成、 PCR技术3.原核基因采取直接分离获得，真核基

31、因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。4.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至9095DNA解链；第二步：冷却到5560，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至7075，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：重组DNA分子1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2.组成：目的基因启动子终止子标记基因+复制原点（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也

32、是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。第三步：转化受体细胞1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ，其转

33、化方法是：先用 Ca2+ 处理细胞，使其成为 感受态细胞 ，再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用 用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行抗原抗体杂交。4.有时还需

34、进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。（三）基因工程的应用1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。（四）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）转录 翻译蛋白质的改造大改：设计并制造自然界中不存在的全新蛋白质，使

35、之具有特定的氨基酸序列、空间结构和预期功能中改：在蛋白质分子中替代某一个肽段或一个特定的结构域小改：通过基因工程中的定点诱变技术，有目的改造蛋白质分子中某活性部位的1个或几个氨基酸残基，以改善蛋白质的性质和功能定点诱变技术是改变蛋白质结构的核心之一PCR技术是基因定点诱变的常用方法蛋白质工程与基因工程的关系蛋白质工程基因工程实质通过改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的蛋白质将目的基因从供体转移到受体细胞，并在受体细胞中表达结果合成自然界不存在的蛋白质只能生产自然界已存在的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程基础上，延伸出的第二代基因工程专题2 细胞工程一、植物细胞工程 （一）植物组织培养技术1、理论基础（原理）：细胞全能性细胞具有全能性的原因：每个细胞都含有该物种的全套遗传物质 全能性表达的难易程度：受精卵、生殖细胞、干细胞、体细胞；植物细胞、动物细胞,请排序受精卵生殖细胞干细胞体细胞；植物细胞动物细胞2、过程：离体的植物器官、组织或细胞（又称外植体） 愈伤组织 胚状体试管苗 植物体