感染性疾病试验诊断-课件.ppt

1、PPT模板下载： YOU讲授内容讲授内容第一节第一节 概述概述第二节第二节 感染性疾病的常用病原学检测感染性疾病的常用病原学检测第三节第三节 常见感染性疾病的实验诊断常见感染性疾病的实验诊断 相关知识回顾相关知识回顾1、与医学相关微生物有哪些？2、病原体的致病性3、学习过的病原体的检测方法THANK YOU第一节第一节 概述概述一、当今感染病特点二、感染类型三、医院感染四、感染性疾病的实验诊断感染性疾病实验诊断的目的感染性疾病实验诊断的目的确定感染的发生和性质提供恰当的治疗方案采取有效的预防措施防止感染传播一、当今感染病特点一、当今感染病特点 感染性病原体的种类不断发生变迁 宿主的免疫防御能力

2、下降 内源性感染与条件致病菌的感染增加THANK YOU二二、感染类型、感染类型1、按病原体分类按病原体分类 传统病原体：细菌、病毒、真菌 新发病原体：SARS病毒、H1N12、按疾病特征分类按疾病特征分类 隐性感染（或亚临床感染）、潜伏感染 显性感染、带菌状态（或携带者）3、按病原体来源分类按病原体来源分类 外源性感染、内源性感染三、医院感染三、医院感染院内感染（nosocomial infection;hospital infection)医院获得性感染(hospital acquired infection)是指感染来自医院或医疗机构，包括在医院获得是指感染来自医院或医疗机构，包括在医院

3、获得出院后才发生的感染，但不包括入院前已存在的感染出院后才发生的感染，但不包括入院前已存在的感染或入院时已处于潜伏期的感染。或入院时已处于潜伏期的感染。范围可包括病人、医院工作人员、探视者。1、医院感染常见的病原体与类型、医院感染常见的病原体与类型 病原学：细菌最常见，以革兰阴性杆菌为主（肠杆菌科和非发酵菌）、病毒、真菌。病原体特点：1、条件致病菌 2、耐药菌及多重耐药菌：MRSA、VRE ESBL、MDR来源：来源：内源性感染：定植、菌群迁徙、组织受损、滥用抗菌药物 外源性感染：住院病人、医务人员、探视者、陪护人员、医院环境及未彻底消毒灭 菌的医疗器械、血液制品等常见医院感染：常见医院感染：

4、泌尿系统感染、手术部位感染、医院感染肺炎、血流感染2、医院感染的微生物学检测、医院感染的微生物学检测标本的收集感染菌的鉴定药物敏感试验耐药表型检测报告和资料保存菌株的保存3、暴发流行的识别和处理、暴发流行的识别和处理识别：当医院感染发生率增加而超过该时期的预计值时，就属于暴发。处理：提出诊断标准、尽快进行实验室确诊、告知感染细菌耐药模式、准确描述菌株特征并保存菌株、进行分子分型、必要时进行深入研究。4、医院环境和医务人员标本的培养、医院环境和医务人员标本的培养血液制品环境表面消毒剂和防腐剂空气水医务人员手鼻前庭 四、感染性疾病的实验诊断四、感染性疾病的实验诊断一般检测一般检测 1、白细胞常规

5、2、C-反应蛋白 3、前降钙素原 4、器官功能改变的检测病原学实验诊断病原学实验诊断THANK YOU讲授内容讲授内容第一节 概述第二节第二节 感染性疾病的常用病原学检测感染性疾病的常用病原学检测第三节 常见感染性疾病的实验诊断 第二节第二节 感染性疾病的常用病原学检测感染性疾病的常用病原学检测一、标本采集和运送二、直接显微镜检查三、病原体分离、培养和鉴定四、病原体抗原检测五、病原体核酸检测六、病原体抗体检测七、细菌毒素检测一、标本采集和运送一、标本采集和运送采集：1、严格执行无菌操作；2、尽量在抗菌药物使用前采集标本；3、送检标本应注明姓名、年龄、采集日期时间、采集部位种类、临床诊断和检测项

6、目；4、盛标本的容器须灭菌处理。运送：立即送检，含1类病原体标本的运送需按要求专人护送。1、涂片染色显微镜检查：、涂片染色显微镜检查：方法：方法：革兰染色、抗酸染色、芽孢染色、荚膜染色等，观察病原体的形态、染色性等特征。临床意义：临床意义：（1）无菌体液检到病原体具有诊断价值，如：脑脊液中查见革兰阴性双球菌，结合临床表现可作出流行性脑膜脊髓炎的诊断；（2）有正常菌群的部位不能确定诊断，但对进一步检查有重要的提示作用；（3）血液涂片染色检查是诊断疟疾、丝虫病和巴虫病的常用方法。二、直接显微镜检查二、直接显微镜检查粒细胞内粒细胞内G-双球菌双球菌有芽孢的有芽孢的G+粗大杆菌粗大杆菌2、涂片不染色显

7、微镜检查：、涂片不染色显微镜检查：方法：方法：悬滴法、压滴法或湿式涂片，观察细菌的运动方式、螺旋体形态、真菌菌丝结构、寄生虫虫卵、原虫的包囊和滋养体等。临床意义：临床意义：（1）血液、尿液标本发现形似发亮串珠，两端呈钩状、运动活泼的密螺旋体时，可报告“暗视野查找到钩端螺旋体”；（2）下疳渗出液、二期梅毒的皮疹渗出物、淋巴结或组织穿刺液暗视野查见有运动活泼的密螺旋体即可诊断梅毒；（3）检出真菌菌丝和孢子，可确定真菌的存在；（4）湿式涂片可检查寄生虫卵；（5）米泔水样便发现运动活泼的鱼群样弧菌，结合制动试验阳性有助于霍乱的诊断。3、宿主细胞内包涵体检查：、宿主细胞内包涵体检查：方法：方法：Wrig

8、ht-Giemsa染色，观察多核巨细胞内或胞质内的包涵体。临床意义：临床意义：（1）在眼结膜、尿道及子宫颈上皮细胞内检出典型包涵体，对包涵体性结膜炎和生殖道衣原体感染的诊断有价值；（2）海马神经细胞内出现胞质内嗜酸性包涵体，即内基小体（Negri body），对狂犬病有诊断价值；（3）细胞病变效应（cytopathic effect，CPE)：对病毒感染有诊断价值。4 4、负染电镜观察和免疫电镜技术：、负染电镜观察和免疫电镜技术：方法：方法：电子显微镜观察病原体形态。临床意义：临床意义：对某些病毒感染有确诊价值：如电镜下查见婴幼儿急性胃肠炎腹泻的粪便中车轮状的双层衣壳病毒颗粒即可诊断为轮状病毒

9、感染轮状病毒感染。三、病原体分离、培养和鉴定三、病原体分离、培养和鉴定1、细菌分离培养鉴定、细菌分离培养鉴定方法：方法：体外人工培养基培养临床意义：临床意义：（1）分离培养和鉴定是细菌感染性疾病诊断的“金标准”；（2）提供细菌纯培养进行体外药物敏感试验；（3）指导抗菌治疗和预测治疗效果。2、病毒分离培养和鉴定、病毒分离培养和鉴定方法：方法：易感动物、鸡胚或细胞培养临床意义：临床意义：病毒分离培养和鉴定是病毒感染性疾病诊断的“金标准”。3、真菌分离培养和鉴定、真菌分离培养和鉴定方法：方法：沙氏培养基或血平板进行培养。临床意义：临床意义：（1）真菌分离培养和鉴定是真菌感染性疾病诊断的“金标准”；（

10、2）无菌体液分离培养出真菌具有诊断价值；（3）具有正常菌群部位培养出真菌，需结合患者临床表现做出诊断。四、病原体抗原检测四、病原体抗原检测l种类：种类：细菌的菌体抗原、鞭毛抗原、毒素、侵袭性酶、病毒的衣壳蛋白、包膜抗原、真菌细胞壁抗原如曲霉菌半乳甘露聚糖及(1,3)-D葡聚糖等。l方法：方法：免疫荧光技术、酶免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验等。l临床意义：临床意义：（1）病原体的抗原成分检测有助于早期诊断感染性疾病，阳性结果提示某种感染性病原体的存在；（2）无菌体液、血液等标本中检测出特异性病原体抗原，有诊断价值，如：脑脊液中检出脑膜炎奈瑟菌抗原；脑脊液中检出脑膜炎奈瑟菌抗原；泌尿生殖道标

11、本检出沙眼衣原体抗原泌尿生殖道标本检出沙眼衣原体抗原;（3）存在正常菌群的标本，需考虑交叉反应。五、病原体核酸检测五、病原体核酸检测方法：方法：PCR、DNA探针杂交临床意义：临床意义：（1）用于不易分离培养的病原体的检测，如：结核菌、各种病毒、支原体、衣原体等；（2）对于判断病毒的活动性感染、病毒与宿主之间的关系研究、对抗病毒治疗的监控具有重要作用；（3）评估移植后病毒感染的几率及移植成功率；（4）直接检测病毒核酸及细菌鉴定。评价：评价：标本处理不当，蛋白酶、核酸酶、DNA抑制剂等可造成假阴性；反应体系中DNA极微量的污染可产生假阳性。六、病原体抗体检测六、病原体抗体检测方法：方法：凝集试验

12、、沉淀试验、补体结合试验、间接免疫荧光技术、放射免疫测定、酶联免疫吸附试验等。临床意义：临床意义：适用于流行病学调查和回顾性分析或经抗菌治疗后慢性细菌性感染的诊断；是诊断病毒感染的主要手段。评价：评价：（1）排除疾病时：选择高敏感度、高阴性预测值高敏感度、高阴性预测值的试验；（2）确诊疾病时：选择高特异度、高阳性预测值高特异度、高阳性预测值的试验。七、细菌毒素检测七、细菌毒素检测外毒素检测：生物学方法、免疫血清方法、核酸和基因诊断技术、自动化检测。内毒素检测：家兔热原试验、鲎试验（定性、定量）THANK YOU讲授内容讲授内容第一节 概述第二节 感染性疾病的常用病原学检测第三节第三节 常见感染

13、性疾病的实验诊断常见感染性疾病的实验诊断 THANK YOU第三节第三节 常见感染性疾病的实验诊断常见感染性疾病的实验诊断一、血流感染二、中枢神经系统感染三、呼吸系统感染四、胃肠道感染五、肝脏感染六、泌尿系统感染七、皮肤及软组织感染八、先天及新生儿感染一、血流感染一、血流感染血流感染（bloodstream infection)：当病原微生物通过各种途径进入血液，并通过血液造成全身播散，引起各种临床症状称为血流感染。（一）引起血流感染的常见微生物与常见疾病（一）引起血流感染的常见微生物与常见疾病菌血症（菌血症（bacteremia）：由细菌引起的血流感染。真菌血症（真菌血症（fungemia）

14、：由真菌引起的血流感染。病毒血症（病毒血症（viremia）：由病毒引起的血流感染。脓毒血症（脓毒血症（pyemia）：由各种病原微生物和毒素侵入血流所引起骤发寒战、高热、心动过速、呼吸急促、皮疹，肝脾肿大和精神神志改变等一系列严重临床症状，严重者可引起休克、DIC和多脏器功能衰竭。1、菌血症的分类、菌血症的分类一过性菌血症（一过性菌血症（transient）：）：对感染组织的处理、污染粘膜表面的创伤性操作、污染的外科手术等。持续性菌血症（持续性菌血症（Continuoys）：）：感染性心内膜炎、感染性动脉瘤、血栓性静脉炎、血管内膜感染、伤寒热，波浪热最初几周 等。间断性菌血症（间断性菌血症（

15、intermittent）：）：脓肿未及时引流等。2、血流感染常见的病原菌、血流感染常见的病原菌细菌：细菌：葡萄菌属、肠球菌属、链球菌属、肠杆菌科及非发酵菌。真菌：真菌：继发于大剂量抗菌药物的使用、静脉留置导管、肿瘤、肾上腺皮质激素使用、静脉高营养等。病毒：病毒：HBV、HCV等。（二）血流感染的病原学检查（二）血流感染的病原学检查1、标本采集和运送、标本采集和运送 采血部位：采血部位：通常为肘静脉；对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人，在病灶或髂前（后）上棘处消毒后抽取骨髓培养；疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。采血时间：采血时间：对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.51h

16、 采血；最好在未应用抗菌药物之前采血，若已应用抗抗菌药物，应在下次应用抗抗菌药物前采血。03060Time(min)Temp体温体温Chills寒战寒战Blood Cultures血培养血培养BACTEREMIALEVEL菌血症的水平菌血症的水平 静脉采血皮肤消毒方法：静脉采血皮肤消毒方法：70%酒精擦拭静脉穿刺部位；再以碘酊（再以碘酊（11.5分钟）或碘氟（分钟）或碘氟（1.5 2分钟）分钟）擦拭擦拭；最后再以70%酒精脱碘。采血量：采血量：自动化仪器通常要求成人810 ml/瓶、儿童15 ml/瓶；手工配制培养基要求血液和肉汤之比为1:51:10；一份血培养为2瓶（即1个需氧瓶和1个厌氧瓶

17、）。采血次数：采血次数：一般24小时内23次（即2 3 份）。采血量对血培养的影响采血量对血培养的影响0 01 10 02 20 03 30 04 40 05 50 06 60 07 70 08 80 09 90 01 10 00 05 5 1 10 0 1 15 5 2 20 0 2 25 5 3 30 0 3 35 5 4 40 0 4 45 5 5 50 0 5 55 5 6 60 0ml%RelativeYieldOverall/MayoCockerill,CID 2019采血份数对血培养的影响采血份数对血培养的影响中心静脉导管标本：中心静脉导管标本：剪下5cm导管尖端，进行半定量滚动

18、培养。标本运送：标本运送：采血后应该立即送检；立即送检；如不能立即送检可室温室温保存切勿冷藏切勿冷藏。2、细菌学检验、细菌学检验临床意义：临床意义：1、阳性血培养（鉴定到种的微生物名称及药物敏感试验）报告可确诊血流感染；2、阴性血培养报告“培养XX天，未见细菌生长”。3、真菌学检验、真菌学检验临床意义：临床意义：阳性血培养瓶进行涂片、革兰染色检查、发现真菌孢子或菌丝立即报告临床，同时接种沙氏琼脂培养，观察菌落形态并鉴定到种。二、中枢神经系统感染二、中枢神经系统感染（一）引起中枢神经系统感染的常见微生物与常见（一）引起中枢神经系统感染的常见微生物与常见疾病疾病常见病原体：常见病原体：引起脑膜炎的

19、常见病原菌有细菌、真菌及病毒常见疾病：常见疾病：脑膜炎、病毒性脑炎、脑脓肿等（二）中枢神经系统感染的病原学检查（二）中枢神经系统感染的病原学检查1、标本采集和运送、标本采集和运送无菌术腰椎穿刺采集脑脊液；立即送检，同时保温保温，不可置冰箱保存不可置冰箱保存，因脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌等病原菌会因此而死亡；有条件可床旁接种。2、细菌真菌学检验、细菌真菌学检验临床意义：临床意义：正常的脑脊液是无菌的；细菌性脑膜炎：革兰染色镜检见到细菌；结核性脑膜炎：抗酸或金胺“O”染色可见抗酸菌。l 真菌性脑膜炎：镜检可见真菌孢子，隐球菌脑炎时墨汁染色可见黑色背景中的透亮菌体和宽厚荚膜，即隐球菌隐球

20、菌；3、病毒学检验、病毒学检验检验方法：检验方法：分离培养及鉴定、血清学检查、分子生 物学方法等。临床意义：临床意义：抗体检测用于流行病学调查；特异性IgM抗体检测可用于流行性乙型脑炎的早期诊断；检测狂犬病病毒抗糖蛋白抗体可证实狂犬病的诊断。三、呼吸系统感染三、呼吸系统感染（一）引起呼吸系统感染的常见微生物与常见疾病（一）引起呼吸系统感染的常见微生物与常见疾病急性上呼吸道感染急性上呼吸道感染：有70%80%由病毒引起，细菌感染可直接或继病毒感染之后发生，依次为溶血葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和葡萄球菌；肺炎肺炎：细菌、病毒、真菌、寄生虫等。1 1、标本采集和运送：、标本采集和运送：（1）

21、痰、鼻咽拭子和通过气管收集的标本；（2）鼻咽拭子可做病毒检查；（3）合格痰：白细胞25个/LP 上皮细胞10个/LP（二）呼吸系统感染的病原学检查（二）呼吸系统感染的病原学检查2、细菌真菌学检验、细菌真菌学检验临床意义：临床意义：（1）异常恶臭的脓性痰：可能厌氧菌；（2）颗粒状、菌块、干酪样物质：可能放线菌病或曲霉病；（3）结核菌检测阳性有诊断价值；（4）培养出肺炎支原体、军团菌、双相型真菌、结核分枝杆菌有诊断价值。3、病毒学检验、病毒学检验临床意义：临床意义：（1）免疫缺陷患者：细胞培养和分子生物学检测；（2）10岁以下的儿童：易由流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒引起严重呼吸道感

22、染，需进行相关病毒检测；（3）2岁以下的婴幼儿：易感染呼吸道合胞病毒，需进行呼吸道合胞病毒的快速检测。四、胃肠道感染四、胃肠道感染（一）引起胃肠道感染的常见微生物与常见疾病（一）引起胃肠道感染的常见微生物与常见疾病常见病原体常见病原体：沙门菌、志贺菌、空肠弯曲菌、产毒性大肠埃希菌、小肠结肠耶尔森菌、霍乱弧菌等；真菌；病毒。疾病疾病：细菌性痢疾、伤寒、霍乱、结肠炎、胃炎、食物中毒及抗菌药物相关性腹泻。（二）病原学检查（二）病原学检查1 1、标本采集和运送、标本采集和运送取含脓、血或黏液粪便直接装于无菌塑料容器内；排便困难或婴儿可用直肠拭子采集；许多重要病原微生物如志贺菌在PH变化、温度时不能存活

23、，因此标本应立即送检立即送检；为提高阳性率可使用运送培养基。2、病原学检验、病原学检验临床意义：临床意义：培养阳性具有细菌学诊断价值；涂片镜检：球菌杆菌比例诊断抗生素相关腹泻；细胞毒素：难辨梭状芽孢杆菌；非培养方法：病毒感染诊断；粪便虫体或虫卵检查。五、肝脏感染五、肝脏感染（一）引起肝脏感染的常见微生物与常见疾病（一）引起肝脏感染的常见微生物与常见疾病肝炎：肝炎病毒肝脓肿：细菌性肝脓肿：G-杆菌为主 阿米巴肝脓肿：阿米巴（二）感染病原体的检查（二）感染病原体的检查标本采集和运送标本采集和运送：病毒检查主要为血清标本；肝脓肿可采集血培养及脓汁，注意兼性厌氧及厌氧菌。细菌真菌学检查细菌真菌学检查：

24、涂片镜检、分离培养。病毒学检查病毒学检查：分子生物学检测、免疫学检查等。六、泌尿系统感染六、泌尿系统感染（一）引起泌尿系统感染的常见微生物与常见疾病（一）引起泌尿系统感染的常见微生物与常见疾病常见疾病：常见疾病：尿路感染常见病原体：常见病原体：G-杆菌为主（大肠埃希菌）其次G+球菌（肠球菌）（二）病原学检查（二）病原学检查标本采集：标本采集：主要为清洁中段尿、其次导尿；厌氧菌培养采膀胱穿刺尿。临床意义：临床意义：（1）正常人膀胱中的尿液是无菌。尿液经外尿道排出时，受外尿道中正常菌群污染而混有细菌，3种或以上细菌、真菌为污染；（2）G+G+、酵母菌、酵母菌10104 4CFU/mlCFU/ml，

25、G-G-菌菌10105 5CFU/mlCFU/ml有意义。七、皮肤软组织感染七、皮肤软组织感染（一）引起皮肤及软组织感染的常见微生物与常见疾病（一）引起皮肤及软组织感染的常见微生物与常见疾病化脓性感染、创伤、外科切口化脓性感染、创伤、外科切口：金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌单纯疱疹：单纯疱疹：单纯疱疹病毒其他感染：其他感染：麻风分枝杆菌、炭疽杆菌、红班丹毒丝菌引起的感染（二）病原学检查（二）病原学检查1、标本采集、标本采集先用酒精擦拭病灶部位，干燥以后再用一无菌刀片将其切开；若创伤范围极广时，应尽可能将伤口的表面部位割开，只取深层部位的检体，从不同部位采集多份标本封闭性脓肿，穿刺抽取；疑为厌氧菌

26、感染要立即排出空气，插上橡皮塞或使用运送培养基。2、细菌、真菌学检查、细菌、真菌学检查临床意义临床意义：合格标本分离出细菌提示为感染病原菌，但浅表伤口易受体表细菌污染。八、先天及新生儿感染八、先天及新生儿感染（一）引起先天及新生儿感染的常见微生物与常见疾病（一）引起先天及新生儿感染的常见微生物与常见疾病宫内感染新生儿：败血症、脑膜炎、心肌炎淋菌、衣原体、支原体、梅毒、艾滋病等（二）病原学检查（二）病原学检查常用标本常用标本：静脉血、羊水细胞、绒毛标本、胎儿脐带等方法：方法：涂片镜检、培养、PCR、免疫学方法临床意义：临床意义：（1）孕妇血清抗体检测是最佳选择；（2）从新生儿感染的标本中检测出病

27、原菌即可确诊。患者，男，74岁。2周前背部皮肤多处出现红、肿、痛小硬结，病人自觉局部发痒、烧灼感及跳痛，不慎于3天前将硬结抓破，形成迅速扩大的紫红色炎性浸润块并伴剧烈的疼痛。今日突然出现寒战、继之高热，关节疼痛。既往有糖尿病20余年，时好时坏，血糖一直控制不佳。T：39.2，P：102次/分，R：30次/分，Bp：85/60mmHg。神志清楚，急性热病容；呼吸急促，全身出现荨麻疹，眼结膜上出现瘀点。病例分析病例分析思考思考：考虑本例为哪方面的疾病？应选择哪些实验诊断检查项目？分析：分析：1、结合病史、体检及临床表现首先考虑为感染性疾病。2、应检测的实验项目：一般检测一般检测 （1）白细胞常规

28、（2）C-反应蛋白（CRP）（3）前降钙素原（PCT）（4）器官功能检测病原学实验诊断病原学实验诊断实验室检查结果实验室检查结果血液一般检查：RBC4.81012/L，Hb 98g/L，HCT 0.37；WBC 18.3109/L，Sg 0.83，St 0.07，L 0.10。CRP：287mg/L；PCT：1.5ng/ml临床化学检查：GLU 25.3mmol/L；TP 78g/L，ALB42g/L，ALT 32U/L，AST 25U/L。病原学检查：1、皮肤脓肿部位取材直接涂片镜检见到革兰阳性球菌；2、对皮肤脓肿部位标本进行细菌培养；3、半小时内采集两套静脉血培养。4、3天后上述标本细菌培

29、养结果均为耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌生长。思考：思考：实验检查结果如何分析？结合临床该患应考虑为何种诊断？分析分析实验室检查分析：1）血液一般检查表现为贫血（RBC 4.81012/L，Hb 98g/L，HCT 0.37；均减低）和感染的血象（WBC 18.3109/L，Sg 0.83，St 0.07，均增高，有核左移）；2）CRP和PCT均增高；3）血生化检查：GLU（25.3g/L）增高；肝功能检查正常；4）病原学检查：直接标本涂片镜检见到革兰阳性球菌，进一步的皮肤脓肿和血培养结果均为金黄色葡萄球菌生长。既往有糖尿病史20余年，血糖一直控制不佳；本次血糖检查结果为25.3g/L，（是随机血糖11.1g/L的2倍以上）。糖尿病病人极易合并感染。在糖尿病基础上，由于皮肤硬结抓破而引起的局部感染（皮肤脓肿）进一步导致了全身感染（败血症）。最后诊断最后诊断 结合临床及上述实验室检查结果分析 本例的最后诊断是：1.1.金黄色葡萄球菌败血症金黄色葡萄球菌败血症 2.2.皮肤脓肿皮肤脓肿 3.3.糖尿病糖尿病PPT模板下载： You!