血站核酸检测存在的问题探讨-平凉中心血站课件.ppt

1、血站核酸检测存在的问题血站核酸检测存在的问题探讨探讨天水市中心血站天水市中心血站 杨俊鹏杨俊鹏u 天水市中心血站核酸检测实验室简介天水市中心血站核酸检测实验室简介u 核酸检测实验室的管理核酸检测实验室的管理u 核酸检测样品的采集、运输、保存核酸检测样品的采集、运输、保存u 血液核酸检测模式简介血液核酸检测模式简介 主主 要要 内内 容容 天水市中心血站核酸天水市中心血站核酸 检测实验室简介检测实验室简介总面积：总面积：120平米平米实验分区：分实验分区：分4个室个室(区区)：试剂准备室：试剂准备室(区区)，为，为蓝蓝色色标记；标本制备室标记；标本制备室(区区)，为，为绿色绿色标记；核酸扩标记；

2、核酸扩增检测室增检测室(区区)，为，为黄色黄色标记；产物分析室标记；产物分析室(区区)，为为灰色灰色标记。标记。采用的检测系统：罗氏检测系统采用的检测系统：罗氏检测系统 实验室基本设备实验室基本设备 罗氏罗氏COBASs201核酸检测系统，为核酸检测系统，为1：1：1配配置，即置，即1台混样仪、台混样仪、1台核酸提取仪、台核酸提取仪、1台荧光台荧光PCR仪。仪。相关设备、设施：生物安全柜、相关设备、设施：生物安全柜、UPS电源、移电源、移动紫外车等。动紫外车等。2010年年7月月15开始检测开始检测天水市中心血站核酸检测实验室布局图天水市中心血站核酸检测实验室布局图试剂准备室试剂准备室缓冲间缓

3、冲间空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向标本制备室标本制备室扩增室扩增室产物分析室产物分析室核酸检测实验室核酸检测实验室的管理的管理 12个质量管理体系文件个质量管理体系文件核酸检测实验室的设置和核酸检测实验室的设置和管理管理核酸检测实验室人员岗位职责核酸检测实验室人员岗位职责核酸实验室标本管理程序核酸实验室标本管理程序安全与卫生、职业暴露的预防与控制程序安全与卫生、职业暴露的预防与控制程序核酸实验室的核酸实验室的消毒、清洁及废弃物处理程序消毒、清洁及废弃物处理程序核酸实验室核酸实验室试剂、耗材管理程序试剂、耗材管

4、理程序仪器与设备使用、维护和校准程序仪器与设备使用、维护和校准程序 检测结果分析、报告签发、记录及信息上报检测结果分析、报告签发、记录及信息上报 核酸检测阳性标本的追踪和处理核酸检测阳性标本的追踪和处理 核酸检测实验室室内质量控制程序核酸检测实验室室内质量控制程序核酸实验室室间质量考评程序核酸实验室室间质量考评程序抱怨处理程序抱怨处理程序1个个SOP文件文件COBASs201核酸检测系统操作规程核酸检测系统操作规程质量管理体系文件质量管理体系文件核酸实验室的分区管理核酸实验室的分区管理 试剂准备室试剂准备室 用于合格核酸检测试剂、混样管及吸头等消耗品的用于合格核酸检测试剂、混样管及吸头等消耗品

5、的储存，储存试剂的准备，试剂的分装和主反应混合储存，储存试剂的准备，试剂的分装和主反应混合液的准备。试剂准备应带手套操作。液的准备。试剂准备应带手套操作。样本制备室样本制备室 用于样本的离心、保存、开盖（生物安全柜内），用于样本的离心、保存、开盖（生物安全柜内），样本混合，核酸提取。在本区实验时，应经常更换样本混合，核酸提取。在本区实验时，应经常更换手套，在下列情况之后必须更换手套：清洁工作台手套，在下列情况之后必须更换手套：清洁工作台面、处理样本、执行过维护程序、手套出现破漏、面、处理样本、执行过维护程序、手套出现破漏、疑有污染、处理过废物等。疑有污染、处理过废物等。核酸实验室的分区管理核酸

6、实验室的分区管理 扩增室扩增室 用于核酸扩增检测及结果分析；应带手套操作用于核酸扩增检测及结果分析；应带手套操作,严禁打开严禁打开PCRPCR扩增管，扩增产物及扩增管，扩增产物及PCRPCR管用塑料管用塑料袋密封后处理。袋密封后处理。核酸提取及扩增检测。在本区实验时，应经常核酸提取及扩增检测。在本区实验时，应经常更换手套，在下列情况之后必须更换手套：清更换手套，在下列情况之后必须更换手套：清洁工作台面、处理样本、执行过维护程序、手洁工作台面、处理样本、执行过维护程序、手套出现破漏、疑有污染、处理过废物等。套出现破漏、疑有污染、处理过废物等。核酸实验室的分区管理核酸实验室的分区管理 进入核酸检测

7、实验室的一切人员、物品进入核酸检测实验室的一切人员、物品均须严格遵守从试剂准备室均须严格遵守从试剂准备室(蓝色蓝色)样本样本制备室制备室(绿色绿色)核酸扩增检测室核酸扩增检测室 (黄色黄色)单一方向顺序单一方向顺序,不得逆向进入前一工作区。不得逆向进入前一工作区。各区配备的专用仪器设备、工作服、实验各区配备的专用仪器设备、工作服、实验耗材和清洁用具等，均应贴有相应的标识，耗材和清洁用具等，均应贴有相应的标识，不可混用。不可混用。核酸实验室的分区管理核酸实验室的分区管理各区配备的专用仪器设备、工作服、实验耗各区配备的专用仪器设备、工作服、实验耗材和清洁用具等，均应贴有相应的标识，不材和清洁用具等

8、，均应贴有相应的标识，不可混用。可混用。进入实验室各区时，应先开启给风（内排风）进入实验室各区时，应先开启给风（内排风）设备，再开启外排风设备，最后打开空调。设备，再开启外排风设备，最后打开空调。在缓冲区穿好各区专用工作服，穿一次性鞋在缓冲区穿好各区专用工作服，穿一次性鞋套，戴好一次性口罩后方能进入实验区。实套，戴好一次性口罩后方能进入实验区。实验完毕后，离开本区时，依次关闭空调，外验完毕后，离开本区时，依次关闭空调，外排风设备，并将工作服留在本区缓冲间，最排风设备，并将工作服留在本区缓冲间，最后关闭给风（内排风）设备。后关闭给风（内排风）设备。核酸实验室的分区管理核酸实验室的分区管理非本实验

9、室工作人员，未经许可不得入非本实验室工作人员，未经许可不得入内内,其他科人员需在本室进行相关实验，其他科人员需在本室进行相关实验，须在本实验室人员指导下进行。须在本实验室人员指导下进行。实验前和完毕后应严格对实验室进行清实验前和完毕后应严格对实验室进行清洁、消毒。并做好实验室使用记录。洁、消毒。并做好实验室使用记录。核酸实验室清洁、消毒及废弃物处理核酸实验室清洁、消毒及废弃物处理 各实验区的清洁消毒工具均专用，不可混用，各实验区的清洁消毒工具均专用，不可混用，清洁消毒人员必须按照单一流向的原则进行。清洁消毒人员必须按照单一流向的原则进行。当日工作前用新鲜制备的当日工作前用新鲜制备的0.5%次氯

10、酸钠水溶次氯酸钠水溶液（液（100ml84消毒液原液加水至消毒液原液加水至1000ml，原，原液的有效氯含量应液的有效氯含量应5%）擦拭所有工作表面，）擦拭所有工作表面，保持至少保持至少15分钟分钟,再用清水擦拭一遍。再用清水擦拭一遍。实验过程中如发生样本外溅，应用吸水纸吸实验过程中如发生样本外溅，应用吸水纸吸除后用除后用0.5%次氯酸钠水溶液喷洒被污染的表次氯酸钠水溶液喷洒被污染的表面，保持面，保持30分钟分钟,再用水清洗干净，将任何与再用水清洗干净，将任何与废物接触过的材料丢入生物危害废物容器中。废物接触过的材料丢入生物危害废物容器中。核酸实验室清洁、消毒及废弃物处理核酸实验室清洁、消毒及

11、废弃物处理 每天工作结束后，对生物安全柜内的移液器每天工作结束后，对生物安全柜内的移液器用用0.5%次氯酸钠水溶液对其消毒。打开生物次氯酸钠水溶液对其消毒。打开生物安全柜内的紫外灯照射安全柜内的紫外灯照射60分钟。分钟。每天工作结束后，用每天工作结束后，用0.5%次氯酸钠水溶液泼次氯酸钠水溶液泼洒实验室地面，并用洒实验室地面，并用0.5%次氯酸钠水溶液浸次氯酸钠水溶液浸泡的拖把拖洗地面，最后用紫外消毒车距离泡的拖把拖洗地面，最后用紫外消毒车距离台面台面60-90cm对台面进行消毒对台面进行消毒60分钟，打开分钟，打开紫外灯对实验室空气消毒过夜。紫外灯对实验室空气消毒过夜。核酸实验室清洁、消毒及

12、废弃物处理核酸实验室清洁、消毒及废弃物处理 每天工作结束后，用每天工作结束后，用70%70%的酒精喷洒实验室，的酒精喷洒实验室，进行空气消毒，以使进行空气消毒，以使DNADNA气溶胶沉降。气溶胶沉降。每周将工作服用每周将工作服用2%842%84消毒液浸泡后洗衣机洗消毒液浸泡后洗衣机洗涤，不同实验区的工作服请勿同一天洗涤。涤，不同实验区的工作服请勿同一天洗涤。核酸检测过程中产生的废弃物，包括：废弃核酸检测过程中产生的废弃物，包括：废弃移液枪头、八联管、移液枪头、八联管、PCRPCR管等。试验完成后，管等。试验完成后，由核酸实验室工作人员装入黄色垃圾袋内，由核酸实验室工作人员装入黄色垃圾袋内，用扎

13、带封口紧实、严密后，交办公室人员统用扎带封口紧实、严密后，交办公室人员统一集中送医疗废弃物处理中心处理。一集中送医疗废弃物处理中心处理。核酸检测样品的采核酸检测样品的采集、运输、保存集、运输、保存血站核酸检测试点实验室技术指导意见血站核酸检测试点实验室技术指导意见(卫生部临检中心卫生部临检中心)血站核酸检测试点实验室技术指导意见血站核酸检测试点实验室技术指导意见(卫生部临检中心卫生部临检中心)标本的采集标本的采集原则上建议必须使用无菌、无原则上建议必须使用无菌、无DNA酶、无酶、无RNA酶的耗材。酶的耗材。用于血液核酸扩增检测的标本包括血用于血液核酸扩增检测的标本包括血清和血浆（清和血浆（ED

14、TA或枸橼酸钠抗凝）或枸橼酸钠抗凝）等。血液标本采集后，应尽量在等。血液标本采集后，应尽量在4小小时以内离心，以避免时以内离心，以避免RNA的降解。的降解。血站核酸检测试点实验室技术指导意见血站核酸检测试点实验室技术指导意见(卫生部临检中心卫生部临检中心)标本的运输标本的运输:通常在运送时，应采用通常在运送时，应采用不易破碎的容器装载标本，运送温度不易破碎的容器装载标本，运送温度2-8，应符合生物安全要求。，应符合生物安全要求。标本的保存标本的保存:血液标本离心后，血液标本离心后，4 天天内进行检测的可存放于内进行检测的可存放于2-8；如需；如需长期保存的样本，长期保存的样本，3 个月以内存放

15、于个月以内存放于-20以下。以下。3个月以上置于个月以上置于-70以以下。反复冻融不超过下。反复冻融不超过3次。次。血站核酸检测试点实验室技术指导意见血站核酸检测试点实验室技术指导意见(卫生部临检中心卫生部临检中心)标本的接收标本的接收核对样品与送检单，检查样品管有无破损核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。和溢漏。检查样品的状况检查样品的状况 接收样品时应填写样品接收表。接收样品时应填写样品接收表。样品必须在具有处理感染性材料能力的实样品必须在具有处理感染性材料能力的实验室内、由经过培训的、穿戴防护衣、戴验室内、由经过培训的、穿戴防护衣、戴口罩、防护眼镜的工作人员在生物安全柜口罩、防护

16、眼镜的工作人员在生物安全柜中开盖。中开盖。天水市中心血站检测样品的天水市中心血站检测样品的采集、运输、保存方法采集、运输、保存方法标本的采集标本的采集:采用无采用无DNA酶、无酶、无RNA酶、酶、带分离胶、带分离胶、EDTA-K2抗凝、无菌真空采血抗凝、无菌真空采血管管(上海科华上海科华血浆制备管血浆制备管）。）。制定核酸检测标本采集手册，并对血液采制定核酸检测标本采集手册，并对血液采集人员进行全员培训，以确保标本采集质集人员进行全员培训，以确保标本采集质量。量。天水市中心血站检测样品的天水市中心血站检测样品的采集、运输、保存方法采集、运输、保存方法 采血点采集的标本由用低温运输箱冷链运送，每

17、天采血点采集的标本由用低温运输箱冷链运送，每天运送一次，集中运送到实验室后，由实验室人员运送一次，集中运送到实验室后，由实验室人员立即离心处理。立即离心处理。天水市中心血站天水市中心血站献血者献血者样品处理流程样品处理流程检测标本处理流程记录检测标本处理流程记录血液核酸检测血液核酸检测模式简介模式简介血液核酸检测模式血液核酸检测模式u单样品核酸检测（单样品核酸检测（ID-NAT）：）：诺华公司的诺华公司的Procleix TIGRIS系统系统 u混样汇集核酸检测（混样汇集核酸检测（MP-NAT）：）：罗氏罗氏COBAS s201系统（系统（MP-6-NAT）上海科华核酸检测系统（上海科华核酸检

18、测系统（MP-8-NAT）上海浩源核酸检测系统（上海浩源核酸检测系统（MP-8-NAT）中山达安核酸检测系统（中山达安核酸检测系统（MP-8-NAT）血液核酸检测模式血液核酸检测模式ID-NATID-NAT：与现在的常规血液筛检可同时进：与现在的常规血液筛检可同时进行，也可常规血液筛检完成后，只对常规血行，也可常规血液筛检完成后，只对常规血液筛检合格标本进行液筛检合格标本进行ID-NATID-NAT。MP-NATMP-NAT：一般情况下（血液充足）在常规血：一般情况下（血液充足）在常规血液筛检完成后，再对常规血液筛检合格标本液筛检完成后，再对常规血液筛检合格标本进行进行MP-NATMP-NAT

19、。血液应急时，只要与常规血液。血液应急时，只要与常规血液筛检合理调配进行，同样可取得筛检合理调配进行，同样可取得ID-NATID-NAT的效的效果，如血液的检测时间相当等。下面还作介果，如血液的检测时间相当等。下面还作介绍。绍。检测模式：检测模式：全血标本采集后及时进行常规酶免检测，单酶全血标本采集后及时进行常规酶免检测，单酶免试剂反应性的待复试标本与酶免合格标本同免试剂反应性的待复试标本与酶免合格标本同时进行混样核酸检测，如混样检测有反应性，时进行混样核酸检测，如混样检测有反应性，马上进行拆分检测。与此同时将待复试标本进马上进行拆分检测。与此同时将待复试标本进行酶免复试。这样可大大缩短检测时

20、间，加快行酶免复试。这样可大大缩短检测时间，加快血液放行。血液放行。血液库存量不足下的混样核酸检测血液库存量不足下的混样核酸检测（MP-NAT）检测模式：检测模式：对血液标本进行常规血清学（酶免）和核酸平对血液标本进行常规血清学（酶免）和核酸平行检测。两者均阴性者马上进行血液放行，对行检测。两者均阴性者马上进行血液放行，对待查标本随后再进行相应处理。但这需要核酸待查标本随后再进行相应处理。但这需要核酸检测与血清学检测两个信息系统的有效整合。检测与血清学检测两个信息系统的有效整合。我血站现已着手这方面的工作。我血站现已着手这方面的工作。突发事件的混样核酸检测突发事件的混样核酸检测（）（）人员选择

21、：说话要有亲和力，最好是检验科主任人员选择：说话要有亲和力，最好是检验科主任亲自承担。亲自承担。基本流程：基本流程：首先要做自我介绍，接下来对其无偿首先要做自我介绍，接下来对其无偿献血行为表示感谢，告知其血液的检测结果，特献血行为表示感谢，告知其血液的检测结果，特别要说明国家规定的常规筛查项目，现又补充了别要说明国家规定的常规筛查项目，现又补充了病毒核酸检测，告知其血液的检测结果可能的原病毒核酸检测，告知其血液的检测结果可能的原因，为了您的健康和血液安全负责，我们想因，为了您的健康和血液安全负责，我们想1个月个月后为您再抽血样进行检测。如果您愿意，到时间后为您再抽血样进行检测。如果您愿意，到时

22、间我们再与您联系，在交谈中注意不要引起献血者我们再与您联系，在交谈中注意不要引起献血者的过度恐慌。的过度恐慌。核酸检测阳性献血者的追踪随防及合理解释核酸检测阳性献血者的追踪随防及合理解释7月月15日正式启动核酸检测试点工作日正式启动核酸检测试点工作工作模式：血液检测分工作模式：血液检测分2个班次完成，每个班次完成，每天上午天上午8：30-12：00上午班次，对前上午班次，对前1天天的全血标本进行的全血标本进行2遍酶免检测。下午遍酶免检测。下午2：30点的班次，将上午待复试的全血标本点的班次，将上午待复试的全血标本（单试剂有反应性）、酶免检测合格标本（单试剂有反应性）、酶免检测合格标本同时进行混

23、样核酸检测。第二天早对酶免同时进行混样核酸检测。第二天早对酶免复检标本进行检测。复检标本进行检测。运行运行6个多月来，工作较顺畅。个多月来，工作较顺畅。天水市中心血站核酸检测工作天水市中心血站核酸检测工作 2010年年7月月15日日12月月31日，应用罗氏日，应用罗氏COBASs201核酸检测系统及配套的核酸检测系统及配套的CobasTaqScreen MPX Test和和MPX Control试剂，试剂，采用采用6混样核酸检测（混样核酸检测（MP-6-NAT）模式，共检测）模式，共检测8631份血液标本，其中拆分检测份血液标本，其中拆分检测12次，检出次，检出6份酶份酶免阴性、免阴性、NAT阳性标本，卫生部临检中心已确认为阳性标本，卫生部临检中心已确认为HBV-DNA阳性标本。阳性标本。数据证实，现采用的数据证实，现采用的NAT检测工作模式合理可行。检测工作模式合理可行。天水市中心血站核酸检测工作天水市中心血站核酸检测工作谢谢谢谢