第十二章水产品与.ppt

1、 一、弧菌属（一、弧菌属（Vibrio）细菌是一大群菌体短小，弯曲成弧形的革兰阴性菌1、形态与染色、形态与染色涂片中呈穿梭样运动非常活泼液体中排列整齐呈鱼群状革兰染色阴性 弧型或逗点状，单鞭毛（一）霍乱弧菌（一）霍乱弧菌（V.cholerae）2、培养特性、培养特性 耐碱不耐酸碱性琼脂平板上生长良好在pH8.89.0的碱性蛋白胨水根据O抗原不同3、抗原构造与分型、抗原构造与分型现已有155个血清群其中O1群、O139群引起霍乱 根据表型差异O1群霍乱弧菌的每一个血清型还可分为2 生物型古典生物型El Tor生物型4、抵抗力、抵抗力不耐酸不耐酸，在正常胃酸中仅能存活4分钟水中存活长水中存活长，河

2、水、井水、海水中1-3周怕热怕热，1001-2分钟死亡鞭毛运动5、鞭毛、菌毛、鞭毛、菌毛普通菌毛有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层 而接近肠壁上皮细胞是细菌定居于小肠所必须的因子 剧烈腹泻和呕吐（米泔水样腹泻物），大量水分和电解质丧失，低容量性休 克及心力不齐和肾衰竭（死亡率高达60%）烈性肠道传染病，为我国的甲类法定传染病传播途径传播途径主要是通过污染的水源或食物经口摄入6、所致疾病、所致疾病传染源传染源临床表现临床表现霍霍 乱乱病人、无症状感染者上吐下泻霍乱病人7、免疫性、免疫性感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力（流行病学调查）8、微生物学检查法、微生物学检查法标本标本直接镜检直接镜检分离培

3、养分离培养悬滴法观察细菌呈穿梭样运动涂片见G-性弧菌，鱼群状排列碱性蛋白胨水增菌选择培养基为TCBS玻片凝集反应病人粪便，肛拭水样9、防治原则、防治原则改善社区环境，加强水源管理，疫苗预防接种及时补充液体和电解质预防大量失水导致的低血容量性休克和酸中毒治疗霍乱的关键控制传染源切断传播途径提高易感者免疫力隔离病人，治疗无症状携带者 二、大肠杆菌（一）形态及染色特征 G中等大小杆菌，八根鞭毛，能运动，无芽胞，无荚膜但常有微荚膜。（二）培养特性1普通培养基上：生长良好，37 24h 形成圆形，光滑，隆起，湿润，半透明灰白色菌落。2普通肉汤：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，管壁有菌环。3麦康凯琼脂：红色菌落

4、（沙门氏菌无色）原理，麦康凯平板含有乳糖有胆盐，分解乳糖的细菌产酸使指示剂变红，胆盐有利于肠杆菌科细菌生长，对其它菌有抑制作用。大肠杆菌微菌落照片大肠杆菌微菌落照片 大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌平板菌落照片大肠杆菌平板菌落照片4伊红美蓝琼脂：黑色带金属闪光的菌落（沙门氏菌无色）。原理：伊红，美兰均为指示剂，又能抑G+生长，含有乳糖。大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷，染上红色，再与美兰结合形成紫黑色菌落，不分解乳糖不着色，伊红美蓝不结合，故沙门氏菌无色。5远藤氏琼脂：带金属光泽的红色菌落。6SS琼脂（沙门氏菌志贺氏菌分离培养基）：红色小菌落。7三糖铁（TSI）：斜面黄色

5、，底部黄色，不产生H2S。原理：三糖铁含葡萄糖、乳糖，蔗糖。其中乳糖、蔗糖含量为G的10倍，大肠杆菌三种糖均发酵产酸，足以使底部和斜面变黄。沙门氏菌不发酵乳糖和蔗糖，只发酵G产酸，斜面部分先变黄，但产酸量少且接触空气又受到氧化，另外分解含氮物质产碱，所以斜面又变为红色，而下端的酸不被氧化，一直呈黄色。（三）生化特征 G 乳 麦 蔗 靛基质实验：+（I）；MR（甲基红试验）+（M）VP（乙酰甲基醇）（Vi）；柠檬酸基利用试验（C）I M Vi C +硝酸盐还原试验+、H2S、尿素分解三糖铁：斜面黄色/底部黄色，不产生H2S。（四）抗原构造及血清型：大肠杆菌抗原主要有O抗原（菌体抗原，有173种）

6、，K抗原（被膜或荚膜抗原，有80种），H抗原（鞭毛抗原，有56种）。1O抗原：存在于细胞壁中，由脂多糖（LPS）中的特异性多糖侧链组成，O抗原是S型菌的一种耐热菌体抗原，121 2h不破坏其抗原性，当S型菌丢失特异性多糖侧链时，即变为R型菌，O抗原也随之丢失。2K抗原：位于菌体表面的荚膜或被膜中，在80种K抗原中，除K88，K99是两种蛋白质抗原外，其余均为多糖。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。因为K抗原可抑制活细菌在相应抗O血清中的凝集反应，这样可作为判定大肠杆菌是否具有K抗原的一个标准。据耐热性不同，K抗原又分为：L、A、B 三型。L型K抗原：对热敏感100

7、1h破坏其抗原性，并失去与相应 抗体的结合力和凝集性，位于被膜中，偶见于荚膜中。A型K抗原：耐100 1h，但121 2.5h破坏其抗原性和O不凝 集性，但保留与相应抗体结合能力。位于荚膜中，抗 A血 清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。B型K抗原：100 1h 破坏其抗原性与相应抗体的凝集性，但 保留其与相应抗体结合力。3H抗原：不耐热，是一种蛋白质，抗原性好，80破坏其抗原性，每一个有动力的细菌仅含一种H抗原，且无两相变异，无鞭毛细菌无H抗原。根据大肠杆菌抗原的鉴定，可用O K H排列表示其血清型即大肠杆菌抗原结构式：O8 K23（L）H19表示该菌具有O抗原8，L型K抗原23，H

8、抗原为19。（五）致病性 大多数是在正常条件下不致病的共栖菌，但特定条件下，如移位侵入肠外组织或器官可致肠杆菌病；但也有极少数是病原性大肠杆菌。据毒力因子与发病机制不同可分五类：（1）产肠毒素大肠杆菌（ETEC）：引起人和幼畜腹泻（黄痢）。（2）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）：引起猪水肿病，犊牛出血性肠炎。（3）肠致病性大肠杆菌（EPEC）：兔腹泻，猪腹泻。（4）败血性大肠杆菌（SEPEC）：猪，犊牛败血症，鸡的大肠杆菌败血症，气肠炎，脑膜炎，肠炎，肉芽肿。（5）尿道致病性大肠杆菌（UPEC）：犬、猪的尿道感染。（六）微生物诊断1取材：肠系膜淋巴结，心，肝，脾，涂片染色镜检：G中等大小杆菌

9、。2分离培养：接种麦康凯平板和血平板划线分离，挑取麦康凯上的红色菌落或血平板上呈溶血的菌落（仔猪黄痢与水肿病菌株）进行以下生化实验。3三糖铁：斜面黄色/底部黄色，有气体产生。4接种普通肉汤：2436h 均匀混浊，底部有粘稠沉淀，液面有菌环。5生化试验：G 蔗 麦 乳 IMViC +-6动物致病性试验：24h 肉汤培养小白鼠腹腔0.2-0.4ml，2448h小鼠死亡。（七）防治1以抗粘附毒素免疫为基础的含单价或多价菌毛抗原的灭活菌苗或亚单位苗。2以抗肠毒素免疫为主的类毒素苗或LI-B亚单位苗。3表达一种或两种粘附素的基因工程苗 K88 K99双价基因工程苗。三、沙门氏菌属沙门氏菌属是肠杆菌科一个

10、大属，有2500多个血清型，寄生于人及动物肠道，引起各种疾病。（一）形态染色特征G中等大小杆菌，除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌外，都有鞭毛，能运动，无芽胞，无荚膜。（二）培养特性麦康凯平板：无色菌落，伊红美蓝琼脂：无色（大肠杆菌黑色带金属光泽）远腾氏：无色（大肠杆菌为红色带金属闪光菌落）。（三）生化特性：三糖铁斜面：斜面红色/底部黄色（若有H2S产生，底部为黑色）5生化试验：G 蔗 麦 乳 IMViC -+-+（四）抗原及变异具有O，H，K和菌毛4种抗原。O和H抗原是其主要抗原，构成血清型鉴定的物质基础。1O抗原：细胞壁表面的耐热多糖抗原，100 2.5h不被破坏，一个菌体可有几种O抗原，以小写阿拉

11、伯数字表示。将具有共同O抗原的各个血清型菌归入一群，以大写英文字母表示，如A（含有共同O2抗原），B（O4），C1C4，D1D3HZ共计51个O群，包括58种O抗原。2H抗原：蛋白质性质的鞭毛抗原，有63种。H抗原可分为第1相和第2相两种。第1相H抗原用小写英文字母表示，特异性高故称特异相；第2相抗原用阿拉伯数字表示，为许多沙门氏菌所共有故称非特特异相。多数沙门氏菌有第1和第2两相H抗原称为双相菌，常发生位相变异。例如将一个双相菌在平板上划线在所得菌落中，有的有第1相H抗原，有的有第2相H抗原。若任意挑取1个菌落，在培养基上多次传代，其后代又可出现部分是第1相而另一部分是第2相的菌落 这种两个

12、相的H抗原可以交相产生的现象称为位相变异。在鉴别对只能检出1个相，而测不出另一个相。3K抗原：被膜抗原，与毒力有关，又称Vi抗原，60 1h破坏其凝集性和免疫原性。有K抗原的菌株不能相应的抗O血清凝集。在多次传代后K抗原会丢失。用已知的沙门氏菌O和H单因子血清作玻板凝集试验，确定一个沙门氏血清型或抗原，对有K抗原的还须用K抗血清鉴定之。如鼠伤寒沙门氏菌血清型为：1，4，5，12 i 1，2表示该菌有O抗原：1,4,5,12 四种；第1相H抗原为I，若转变为第2相H抗原，则是1，2；括号中抗原表示该抗源可能无。（五）致病性1是一种人畜共患病，最常侵害幼、青年动物使之发生败血症，胃肠炎及其他组织局

13、部炎症。成年动物为散发性或局限性，发生败血症的怀孕母畜可表现流产。主要传播途径为消化道。据其对宿主的嗜好不同分3种类型有广泛嗜性沙门氏菌：能引起人和各种动物的沙门氏菌病，如 鼠伤寒和肠炎沙门氏菌。专嗜性沙门氏菌：只对人或某种动物产生特定的疾病，如鸡白 痢和鸡伤寒沙门氏菌仅使鸡和炎鸡发病。偏嗜性沙门氏菌：如猪霍乱和都柏林沙门氏菌分别是猪和牛羊 的强适应性菌，但也能感染其它动物。（六）免疫性 体液免疫和细胞免疫都起重要作用。动物注射疫苗后，母牛的初乳和奶中含有特异抗体，阻断了细菌对肠道上皮的吸附和穿入，为后代提供抗感染能力。用无毒性的沙门氏菌或热灭活的菌体免疫动物后，尽管其有高滴度特异抗体，但仍可

14、免疫失败，这肯定了细胞免疫在抗沙门氏菌中具有重要作用，致敏T细胞的转移可以提供保护卫（七）微生物诊断1取材：肠系膜淋巴结，粪便，心血，肝，脾，涂片染色镜检可见G中等大小杆菌。2分离培养：麦康凯，伊红美蓝，SS琼脂等培养基上，挑取中等大小的无色菌落，接种三糖铁培养基上。3三糖铁：斜面红色，底部黄色或黑色（H2S产生）4生化试验 G 蔗 麦 乳 IMViC -+-+5血清型鉴定：分群：取一张洁净玻片，取2满杯沙门氏菌多价O血清（A-F群）至玻片上，再挑取沙门氏菌纯培养物与多价O血清混匀，2min内凝集者可初步确定为沙门氏菌。同时设立空白对照。再用代表A群（A群中都含有O2血清）B（O4），C1（O

15、7），C2（O8）D（O9），E（O3）的O因子血清作同样玻板凝集反应，视其被哪一群O因子血清所凝集，则确定被检菌为该群。定型：菌群确定后，用该群所含的各种O因子血清与被检菌作玻板凝集反应，以确定其含有哪些O抗原，同样用该群中H因子血清与被检菌作玻片凝集反应，以确定H抗原。据O和H抗原查沙门氏菌抗原表可检出为哪种沙门氏菌。（八）免疫防治1灭活疫苗或弱毒疫苗有一定作用。2加强卫生检验，防止饲料和环境污染。四、葡萄球菌(一)、形态及染色特征 G+，葡萄串状，无规则排列，无芽胞，无荚膜（有些有荚膜或粘液层），无鞭毛，不运动。(二)、培养及生化特征：1普通平板：湿润，隆起的圆形菌落，直径12mm，有时

16、达4-5mm。菌落颜色依菌株而异，初为灰白色，继而为金黄色，白色柠檬色。2血平板：菌落较大，明显溶血，溶血菌株多为致病菌。3普通肉汤：均匀沉浊，管底有絮状沉淀，培养23天后，产生菌环，管底形成多量粘稠沉淀。(三)、生化特征多数分解：乳糖，葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，产酸不产气致病菌株多分解：甘露醇，硝酸盐还原阳 性，靛基质，接触酶。(四)、抗源性及变异性抗原性比较复杂，含有多糖抗原和蛋白质抗原两大类：1多糖抗原：是一种半抗原，具有型特异性。据多糖抗原将葡 萄球菌分3个型：A型多糖抗原：来自致病菌。（金葡萄球菌）磷壁酸中的核糖 酵残基 B型多糖抗原：来自非致病菌。（表皮葡萄球菌）甘油残基 C型多糖抗原

17、：致病菌非致病菌同有。2蛋白质抗原：是一种完全抗原，有种属特异性。又叫葡萄球菌蛋白A（SPA），所有人源株都含有SPA，而动物株少见。SPA能与许多动物血清中的IgG分子的Fc段非特异性结合，结合后的IgG仍能与相应抗原进行特异反应。这一现象已广泛用于免疫学及诊断技术。(五)、抵抗力 中等，一般消毒剂可以将其杀死。(六)、致病性 金色葡萄球菌产生多种毒素和酶，致病性强，常引起两类疾病：一类为化脓性疾病，另一类为毒素性疾病（呕吐，腹泻）。五、产气荚膜梭菌旧名：魏氏梭菌，自然界分布广，可见于污水，土壤，饲料，食物及人畜肠道中，一定条件下，引起多种严重疾病。（一）形态染色特征G+粗大正直杆菌，单在或

18、成双排列，无鞭毛，一般条件下培养芽孢很少产生，有荚膜。（二）培养特性厌氧要求不高，普通培养基上易生长。1葡萄糖血平板：圆形，光滑，隆起，淡灰白色中等大小菌落，有的可形成圆盘形边缘呈锯齿状，表面有辐射状条纹的“勋章”样大菌落，产生“双重溶血环”内环溶血，外环为溶血。2肝块肉汤：5-6h，均匀浑浊，产生大量气体。（三）生化特性1牛乳暴烈发酵：魏氏梭菌接种牛乳培养基8-10h后，发酵牛乳中的乳糖使牛乳酸凝，同时产生大量气体使凝块变成多孔的海绵状，严重时，被冲成数段，甚至喷出管外。2明胶液化，糖发酵 H2S+吲哚 HNO3（四）型别及病原性据毒素将该菌分为5个型：A，B，C，D，EA型产气荚膜梭菌：引

19、起人畜气性坏疽，食物中毒，牛、羔羊、仔猪、兔、肠毒血症。B：羔羊痢疾，其它动物肠毒血症。C：绵羊猝狙，还有肠毒血症及坏死性肠炎。D：羔羊，绵羊，牛肠毒血症。E：犊牛，羔羊肠毒血症，但很少发生 七、蜡样芽孢杆菌七、蜡样芽孢杆菌 广泛存在在于自然界，如土壤、水、空气、饲料、食品，一定广泛存在在于自然界，如土壤、水、空气、饲料、食品，一定条件下，对人致病：引起人胃肠道感染（食物中毒）、眼球炎、条件下，对人致病：引起人胃肠道感染（食物中毒）、眼球炎、新生儿上呼吸道感染和脐带炎。自然情况下，引起牛的乳腺炎，新生儿上呼吸道感染和脐带炎。自然情况下，引起牛的乳腺炎，驴的皮下水肿，犬，猫腹泻。驴的皮下水肿，犬

20、，猫腹泻。八、产单核细胞李氏杆菌（一）、所致疾病：细胞内寄生菌，牛羊易感，小牛、羔羊表现为败血症或肝脏坏死，成年牛间表现为神经症状的“转圈病”，母畜可致流产。孕妇可致流产，儿童出现神经症状，兽医易患皮肤型李氏杆菌病。(二)、形态及染色特点：G+规则的短杆菌，呈“发渣”状，两端钝圆，有时排列成V型，2025下培养产生4根周身鞭毛，37下一根鞭毛，无芽孢，无荚膜。三、培养及生化特性 普通培养基上可生长，但加入血液或血清生长更佳，4下可缓慢增殖（特点）。1血清琼脂：圆形，光滑透明，淡蓝色小菌落。2血平板：型狭窄溶血环。棒状杆菌和丹毒杆菌为溶血。3肉汤：均匀浑浊，时间久可形成粘稠沉淀，无菌环，无菌膜。4明胶穿刺：沿穿刺线生长，呈倒立树木状，不液化明胶。5生化特点：发酵糖产酸不产气，其他具体看书。四、微生物学诊断1分离培养及鉴定取患畜血液，脑组织研磨液，加入50ml胰蛋白胨肉汤中3724h画线含有5%绵羊血的胰蛋白胨琼脂是否有溶血及淡蓝色小菌落。挑取特征性菌落作纯培养后，用纯培养物作以下试验：染色：G+短杆菌。溶血性检查：溶血，2025运动。生化试验：略动物致病试验：肉汤培养物鸽子胸肌注射1ml，豚鼠皮下1ml,2-5d内鸽子死亡，两豚鼠死亡。五、免疫防治1灭活强毒菌株免疫小鼠产生数月坚强免疫力。2免疫能通过淋巴细胞被动转移，但不能通过血清被动转移。