细菌学检验-与医学有关的其他细菌-yy课件.ppt

1、第十三章第十三章 与医学有关的其他细菌与医学有关的其他细菌军团菌属,假单胞菌属l是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；l多为条件致病菌。第一节 军团菌属（Legionella)一、概述n19761976年在美国费城退伍军人集会时发生了年在美国费城退伍军人集会时发生了爆发性肺炎流行，有爆发性肺炎流行，有221221人发病，人发病，2929人死亡。人死亡。n次年发现为一类新菌，次年发现为一类新菌，19781978年正式命名为年正式命名为军团菌，军团菌，共有39种及3个亚种，63个血清型。u-杆菌，有端鞭毛或侧鞭毛，有菌毛，有微荚膜u 菌体不易染色，u 用

2、用Dieterle镀银法染成镀银法染成黑褐色黑褐色u Giemsa法染色染成法染色染成红色红色 二、生物学特性u对营养要求苛刻，生长缓慢营养要求苛刻，生长缓慢u严格需氧，初次分离严格需氧，初次分离2.55的的CO生长良生长良好，生长温度为好，生长温度为35，最适，最适pH 6.1。u血平板上不生长血平板上不生长uBCYE（活性炭（活性炭-酵母浸液琼脂）酵母浸液琼脂）or GVPC：含：含L-半胱氨酸半胱氨酸和铁离子，和铁离子，3-5天可形成天可形成1-2mm直径直径的光泽菌落，有的光泽菌落，有酸臭味。u FG（Feeley-Garman）琼脂培养基：3 5d培养可见针尖大小菌落，在紫外线照射下

3、 可发出黄色荧光u 在富含L酪氨酸苯丙氨酸琼脂平板：产生棕色水溶性色素，能分解马尿酸盐 u嗜肺军团菌的生存能力较强，在蒸馏水中存活100天以上，在污水中可存活1年、对热和常用化学消毒剂敏感n 常存在于人工管道的水源中（空调冷却管，淋浴头，呼吸机等），故可以气溶胶传播n 高发于夏秋季节，易侵犯患有慢性器质性疾病或免疫功能低下患者，如恶性肿瘤、慢性支气管炎或肺气肿等患者，以及使用激素及免疫抑制剂和器官移植的患者。n 军团菌在机会感染或医院内感染中的位置也越来越被人们所重视。三、临床意义n 临床类型：临床类型：流感样型（旁地亚克热）：轻症、发热、寒战、上感症状、无肺炎肺炎型（军团病）：重症、高热、咳

4、嗽、肺炎、多器官衰竭死亡肺外感染型（继发感染）：多脏器感染症状n 属胞内菌，能在巨噬细胞内繁殖，其免疫主要是细胞免疫。四、微生物鉴定四、微生物鉴定1.核酸检测：核酸检测：针对针对5SrRNA5SrRNA和和16SrRNA16SrRNA基因设计引物，进基因设计引物，进行行PCRPCR扩增，可快速检测。扩增，可快速检测。2.2.分离培养分离培养 活性炭-酵母浸液琼脂培养基(BCYE)or GVPC：形成1-2mm直径的光泽菌落。3.溴甲酚紫(BCP)斑点试验u即BCP 100mg溶于1molL KOH 10ml中，配成10浓度。然用蒸馏水稀释25倍，使之成为0.04浓度。u试验时取此试剂1滴，滴于

5、滤纸上，再刮取新培养菌，涂抹于含有BCP试剂的滤纸上，u若在30s内出现蓝宝石色泽即为阳性。4.色素产生试验 在MH-LH培养基产生的色素：n 在培养基中产生的褐色素：由酶介导形成黑色素n 细胞外荧光:该荧光是由细菌分泌的一种化合物进人琼脂培养基中而形成的，用长波紫外线照射时可出现黄色或黄绿色荧光；n 细胞内荧光，在紫外线照射时，细菌菌落呈蓝白色或暗黄色荧光。5.抗体检测u作为检测军团菌感染临床常用手段，检测病人血清中抗军团菌lgM及lgG抗体做出特异性诊断。ulgM抗体为近期感染，lgG抗体在体内持续数月，供流行病学的调查。直接法荧光抗体染色6.药物敏感试验 临床治疗药物为红霉素，可加用利福

6、平，而氨基糖甙类抗生素、青霉素、头孢菌素类抗生素对本菌无效。药物敏感试验不做临床常规化验项目。第二节第二节 假单胞菌属假单胞菌属l 需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性。l DNA G+C mol为5871，包括200余种菌。l 多数为腐生菌，少数为植物和动物寄生菌，大多为条件致病菌。l分类n按rRNA同源性分为5群及未确定群n第1群可分为12个菌种n铜绿假单胞菌n荧光假单胞菌n斯氏假单胞菌n产碱假单胞菌等。铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌u铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（P.aeruginosaP.aeruginosa）俗称）俗称绿脓杆绿脓杆菌菌，广泛分布于自然界。，广泛分布于自然

7、界。u常见的条件致病菌。当烧伤、肿瘤、使用免常见的条件致病菌。当烧伤、肿瘤、使用免疫抑制剂或导管时易感染。疫抑制剂或导管时易感染。u产生产生绿色水溶性色素绿色水溶性色素，感染后使脓汁或敷料，感染后使脓汁或敷料出现绿色，故得名。出现绿色，故得名。一、生物学性状一、生物学性状1.1.形态和染色形态和染色l革兰阴性，大小为革兰阴性，大小为0.50.51.01.01.51.53.0m3.0m的直或微弯杆菌。的直或微弯杆菌。l有有荚膜荚膜，单端有，单端有1 13 3根根鞭毛鞭毛，运动活泼。，运动活泼。临床分离的菌株常有临床分离的菌株常有菌毛菌毛。2.2.培养培养u需氧，在普通培养基上生长良好。需氧，在普

8、通培养基上生长良好。u最适生长温度为最适生长温度为3535u在在44不生长而在不生长而在4242可生长可生长(特点特点)u菌落大小不一，扁平湿润菌落大小不一，扁平湿润,边缘不齐边缘不齐u产生带荧光的产生带荧光的水溶性色素水溶性色素（青脓素（青脓素 与绿脓素）而使培养基呈亮绿色。与绿脓素）而使培养基呈亮绿色。u血琼脂平板上产生透明的血琼脂平板上产生透明的溶血环溶血环。u在液体培养基中呈混浊生长，常在在液体培养基中呈混浊生长，常在其表面形成菌膜。其表面形成菌膜。3 3、生化反应、生化反应u分解葡萄糖，产酸不产气，多数菌不分解葡萄糖，产酸不产气，多数菌不液化明胶。液化明胶。u铜绿假单胞菌分解尿素，氧

9、化酶阳性，铜绿假单胞菌分解尿素，氧化酶阳性，不形成吲哚。不形成吲哚。二、致病性二、致病性（一）（一）致病因素n 粘附素：黏附上皮细胞粘附素：黏附上皮细胞n多糖荚膜：细菌黏附细胞；抗吞噬多糖荚膜：细菌黏附细胞；抗吞噬n内毒素：发热、休克、内毒素：发热、休克、DICn外毒素：抑制蛋白质合成外毒素：抑制蛋白质合成n绿脓素绿脓素:催化超氧化物产生有毒基团催化超氧化物产生有毒基团n弹性蛋白酶：降解弹性蛋白，损伤肺组织弹性蛋白酶：降解弹性蛋白，损伤肺组织n磷脂酶磷脂酶C：组织损伤：组织损伤（二）临床意义（二）临床意义n 广泛存在自然界与人体，为人体内的广泛存在自然界与人体，为人体内的正常菌群正常菌群n 多

10、见于皮肤粘膜损伤与机体免疫力下多见于皮肤粘膜损伤与机体免疫力下降病人，降病人，几乎可感染人体的任何组织几乎可感染人体的任何组织和部位和部位n 多见于多见于烧伤和创伤后感染烧伤和创伤后感染n 局部化脓性炎症：手术切口、烧伤组局部化脓性炎症：手术切口、烧伤组织感染织感染n 也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内膜炎、脓胸，以及菌血胃肠炎、心内膜炎、脓胸，以及菌血症、败血症症、败血症三、微生物检验 1标本采集 u采取不同的标本：患者的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、尿液、十二指肠引流液、粪便等；u医院病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及

11、生活用品。2标本镜检为革兰阴性，有动力的杆菌 3分离培养 u普通培养基：形成圆形、扁平隆起、光滑湿润菌落，琼脂被染成绿色或黄绿色，约80-90产生绿脓素或荧光菌株素。u血琼脂平板：有特殊气味的蓝绿色菌落，有透明溶血环 4生化鉴定 u氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。四、检验结果分析与报告 u 结合临床感染症状，特别是反复检出即可确 定是感染病原菌。u 如无感染的临床表现，应作为正常菌群。u 铜绿假单胞菌具有多重耐药性，能抵抗 多种抗生素u Kolar报道耐药株约占临床分4.0%26.3%，可在治疗过程中发生突变

12、产生耐 药，应密切监测其耐药性。第三节 李斯特菌属（Listeria）概概 述述n 李斯特氏菌属（Listeria）普遍存在于环境中，最新的分类学研究表明，其分为六个种：单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）伊氏李斯特氏菌（Listeria ivanovii）无害李斯特氏菌（Listeria innocua）斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri）威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri）格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）一、生物学特性（一）形态染色n 革兰氏阳性；小的、类似球形杆菌n 在有些培养基中稍弯，两端钝圆，单个、成短

13、链、细胞彼此连成V形，或成群的细胞沿长轴方向平行排列，在较老的或生长不良的培养物中，可能形成丝状；n 20-25以4根周生鞭毛运动，在37只有较少的鞭毛或1根鞭毛；n 无芽胞、无荚膜。（二）培养特性（二）培养特性n 兼性厌氧；pH范围pH4.4-pH9.6。n 在20-25培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。n 生长温度范围为2-42（也有报道在0能缓慢生长），最适培养温度为35-37。n 在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。n 在5-7%的血平板上，菌落灰白色，可产生窄小-溶血环。n 在0.6%酵

14、母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)琼脂上，用45角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。（三）生化反应（三）生化反应n 触酶触酶阳性，阳性，氧化酶氧化酶阴性。阴性。n 能发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖、乳糖、水能发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、杨素、麦芽糖、鼠李糖鼠李糖、七叶苷七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发酵醇、海藻糖、果糖，不发酵木糖木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。n 不利用枸橼酸盐，不利用枸

15、橼酸盐，40%胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性，素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性，VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。、甲基红试验和精氨酸水解阳性。（四）血清型（四）血清型n 根据菌体（根据菌体（O）抗原和鞭毛）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增抗原，将单增李氏菌分成李氏菌分成13个血清型，分别是个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和和“7”。n 致病菌株的血清型一般为致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和和4b,后

16、两型尤多。后两型尤多。（五）抵抗力（五）抵抗力n 该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和食该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和食品中能长期存活；品中能长期存活；n 对碱和盐抵抗力强，对碱和盐抵抗力强，60-70经经5-20min可杀死，可杀死，70%酒酒精精5min、2.5%石炭酸、石炭酸、2.5%氢氧化钠、氢氧化钠、2.5%福尔马林福尔马林20min 可杀死此菌；可杀死此菌；n 湿热灭菌湿热灭菌（121，至少，至少15min）和干热灭菌（）和干热灭菌（160-170，至少，至少1hr）可杀灭该菌，对紫外线和）可杀灭该菌，对紫外线和射线敏感射线敏感；n 该菌对青霉素、

17、氨苄青霉素、四环素（已产生抗性）、氨基该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素（已产生抗性）、氨基糖苷类、氯霉素均敏感。糖苷类、氯霉素均敏感。二、流行病学二、流行病学n 分布分布：广泛存在于自然界中，土壤、地表水、污：广泛存在于自然界中，土壤、地表水、污水、废水、青储饲料、动植物及其食品中均有该水、废水、青储饲料、动植物及其食品中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播粪便的途径进行传播n 寄主范围寄主范围：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳类和昆：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳类和昆虫虫二、流行病学二、流行病学n 据报道，有据报道，有1-10

18、%的人类肠道中存在单核增生李斯特氏的人类肠道中存在单核增生李斯特氏菌，菌，4-8%的水产品、的水产品、5-10%的奶及其产品、的奶及其产品、30%以上以上的肉制品及的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。以上的家禽均被该菌污染。n 相关食品相关食品：鲜奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤其是软奶酪）、：鲜奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤其是软奶酪）、冰激凌、生的蔬菜、发酵过的生肉制作的香肠、生的和加冰激凌、生的蔬菜、发酵过的生肉制作的香肠、生的和加工过的禽肉、各种生的肉类、生的和烟熏的鱼肉。约有工过的禽肉、各种生的肉类、生的和烟熏的鱼肉。约有85-90%的病例是由被污染的食品引起的。的病例是由被污染的食品引起的。

19、1996年至年至1999年，因单核增生李斯特氏菌回收年，因单核增生李斯特氏菌回收的食品种类（来源：的食品种类（来源：USDA及及FDA报告）报告）三、致病性及其治疗三、致病性及其治疗n 该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产自然流产或死婴或死婴、脑膜炎、败血症直至死亡。、脑膜炎、败血症直至死亡。n 由该菌造成的脑膜炎的致死率可高达由该菌造成的脑

20、膜炎的致死率可高达70%，败血症的死，败血症的死亡率达亡率达50%，围产期或新生儿感染的死亡率超过，围产期或新生儿感染的死亡率超过80%，怀孕期妇女的感染，母亲通常能存活下来。怀孕期妇女的感染，母亲通常能存活下来。n 抗生素治疗，用青霉素或氨苄青霉素注射给药，或与氨基抗生素治疗，用青霉素或氨苄青霉素注射给药，或与氨基糖苷类抗生素一起用药。糖苷类抗生素一起用药。（一）感染人群（一）感染人群n 感染剂量未知，但与该菌的毒力和易感人群的年龄、免疫状感染剂量未知，但与该菌的毒力和易感人群的年龄、免疫状态有关。态有关。n 易感者：易感者：孕妇孕妇/胎儿胎儿围产期和新生儿的感染；围产期和新生儿的感染；接受

21、皮质激素、抗癌剂治疗、器官移植接受皮质激素、抗癌剂治疗、器官移植 治疗、艾滋病患者等免疫缺损者；治疗、艾滋病患者等免疫缺损者；癌症病人癌症病人 尤其是白血病的患者；尤其是白血病的患者；不太常见的报道不太常见的报道糖尿病、肝硬化、哮喘和溃疡性结肠炎的患者；糖尿病、肝硬化、哮喘和溃疡性结肠炎的患者；年纪较大的人；年纪较大的人；没有免疫缺陷的健康的人，食用污染该菌尤其是大量污染该菌的食品后，也没有免疫缺陷的健康的人，食用污染该菌尤其是大量污染该菌的食品后，也有患病的危险。有患病的危险。（二）致病机理（二）致病机理n 单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致病性与毒力单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的

22、致病性与毒力机理如下：机理如下：1、寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进入肠细胞与、寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进入肠细胞与巨噬细胞；巨噬细胞；2、抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧化物歧、抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物（为杀菌的毒化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解；性游离基团）分解；3、溶血素溶血素，即李氏杆菌素，即李氏杆菌素O，可以从培养物上清液中获，可以从培养物上清液中获得，有得，有和和两种，为毒力因子。两种，为毒力因子。四、实验室危害四、实验室危害n 不是一种普遍的与实验室相关的传染病，目前不

23、是一种普遍的与实验室相关的传染病，目前只有少数有报道的案例发生；只有少数有报道的案例发生；n 直接摄取直接摄取是最普遍的一种感染方式，除此之外，是最普遍的一种感染方式，除此之外，暴露在该菌高浓度的气溶胶中，也可通过眼睛暴露在该菌高浓度的气溶胶中，也可通过眼睛和破损的皮肤、粘膜进入体内造成感染。和破损的皮肤、粘膜进入体内造成感染。（一）注意事项（一）注意事项n 生物安全生物安全2级级，操作时应有相应的防污染设施，操作时应有相应的防污染设施，在进行可能产生气溶胶的操作时，应在生物安在进行可能产生气溶胶的操作时，应在生物安全柜内完成；全柜内完成；n 在直接接触有感染性的材料时，必须穿着实验在直接接触

24、有感染性的材料时，必须穿着实验服，戴手套和护目镜；服，戴手套和护目镜；n 怀孕的妇女怀孕的妇女应避免接触传染物。应避免接触传染物。（二）操作要求（二）操作要求n 溅洒溅洒：使气溶胶沉降，穿着防护服装，用纸巾轻：使气溶胶沉降，穿着防护服装，用纸巾轻轻覆盖溅洒处，加入轻覆盖溅洒处，加入1%次氯酸钠溶液，由周边次氯酸钠溶液，由周边向中心加，在清理之前要留充足的接触时间向中心加，在清理之前要留充足的接触时间（30min）；）；n 废弃废弃：在废弃前应先采取净化措施，高压蒸汽灭：在废弃前应先采取净化措施，高压蒸汽灭菌、化学消毒、焚烧等；菌、化学消毒、焚烧等；n 储存储存：在有适当标记的密封容器内储存。：

25、在有适当标记的密封容器内储存。五、检测程序五、检测程序（一）增菌（一）增菌n 目前常用的单核增生李斯特氏菌检测增菌肉目前常用的单核增生李斯特氏菌检测增菌肉汤主要有汤主要有半量半量Fraser肉汤肉汤、Fraser肉汤肉汤（FB）、）、UVM（Modified University of Vermont broth，也叫，也叫UVM1）、）、LEB（Listeria enrichment broth）和）和BLEB（buffered Listeria enrichment broth）半量半量Fraser肉汤和肉汤和Fraser肉汤肉汤n 具有具有选择性选择性和和区别性区别性。n 加入加入柠檬酸

26、铁铵柠檬酸铁铵和和七叶灵七叶灵，起到区别的作用。李斯特氏菌，起到区别的作用。李斯特氏菌可以水解七叶灵，与培养基中的铁离子反应，使培养基变可以水解七叶灵，与培养基中的铁离子反应，使培养基变黑，可直观的从培养液的颜色就可以判断是否有单核李斯黑，可直观的从培养液的颜色就可以判断是否有单核李斯特氏菌的生长。特氏菌的生长。n 氯化锂氯化锂、吖啶黄吖啶黄和和萘啶酮酸萘啶酮酸作为选择性因子。作为选择性因子。n 半量半量Fraser肉汤与肉汤与Fraser肉汤所用的添加剂一样肉汤所用的添加剂一样 半量半量Fraser肉汤：萘啶酮酸肉汤：萘啶酮酸10mg/L，吖啶黄，吖啶黄12.5mg/L Fraser肉汤：萘

27、啶酮酸肉汤：萘啶酮酸20mg/L，吖啶黄的，吖啶黄的25mg/L UVMn UVM只有选择性没有区别性只有选择性没有区别性n 加入加入萘啶酮酸萘啶酮酸和和盐酸吖啶黄盐酸吖啶黄，作为选择性因子。，作为选择性因子。虽然其中含有七叶灵，但是没有添加柠檬酸铁虽然其中含有七叶灵，但是没有添加柠檬酸铁铵，不能发生黑色的颜色反应。铵，不能发生黑色的颜色反应。LEB和和BLEBn 只有选择性没有区别性只有选择性没有区别性n LEB是在是在TSB-YE的基础上加入的基础上加入盐酸吖啶黄盐酸吖啶黄、萘啶萘啶酮酸酮酸和和放线菌酮放线菌酮等选择性因子；加入的等选择性因子；加入的丙酮酸钠丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；

28、不含七叶灵和柠檬酸铁有助于受损细胞的恢复；不含七叶灵和柠檬酸铁铵，无颜色反应铵，无颜色反应n BLEB是在是在LEB基础上加入缓冲体系：磷酸二氢钾基础上加入缓冲体系：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠和磷酸氢二钠（二）分离（二）分离n 分离培养基有：分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX等，但首选仍然是等，但首选仍然是OXA。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有D葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶的活的活性，能水解培养基中的七叶灵，产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应性，能水解培养基中的七叶灵，产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应而，使菌落为棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性李

29、斯特而，使菌落为棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能发生这种反应氏菌病都能发生这种反应n 还有一些选择性显色培养基，如还有一些选择性显色培养基，如BCM、ALOA、CHROMagar listeria、RapidL.mono等，其原理主要是检测由毒力基因编码的等，其原理主要是检测由毒力基因编码的溶血素溶血素，而此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏，而此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特属的其他种分开。菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特属的其他种分开。OXA平板平板 OXA平板平板（三）鉴定（三）鉴定蓝色

30、菌落检验（蓝色菌落检验（Henry illumination）典型运动：相差显微镜，轻微旋转或翻跟头典型运动：相差显微镜，轻微旋转或翻跟头动力试验：动力试验：7天，伞形生长天，伞形生长过氧化氢酶过氧化氢酶试验：阳性试验：阳性革兰氏染色革兰氏染色：阳性短杆菌：阳性短杆菌溶血试验溶血试验：穿刺接种血平板：穿刺接种血平板硝酸盐还原试验：硝酸盐还原试验：5天，阴性天，阴性糖发酵试验糖发酵试验：葡萄糖、麦芽糖和七叶灵，李斯特菌属反应均为阳性，：葡萄糖、麦芽糖和七叶灵，李斯特菌属反应均为阳性，除格氏李斯特甘露醇阴性，李斯特其他种甘露醇阴性，除格氏李斯特甘露醇阴性，李斯特其他种甘露醇阴性，木糖木糖和和鼠鼠李

31、糖李糖最有检测意义最有检测意义动力试验动力试验 血平板血平板 血平板血平板 血平板血平板单核增生李斯特氏菌检测流程单核增生李斯特氏菌检测流程25g样品样品+225ml BLEB基础（加入丙酮酸钠）基础（加入丙酮酸钠）加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮 30 4hr划线接种划线接种OXA平板平板30 24hr和和48hr 科玛嘉李氏菌显色培养基科玛嘉李氏菌显色培养基TSA-YE分纯分纯 35 24hr-48hr 35 24hr过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发酵试验（木糖、鼠李糖）酵试验（木糖、鼠李糖）API L

32、isteria 35 24-48hr报告结果报告结果 35 18-24hr方法名称一次增菌二次增菌分离鉴定快速方法SN 0184-1993加加工工MBP30，18-24hEB30，24/48hMMA/OXA（35，24-48h）蓝色菌落；典型运动；过氧化蓝色菌落；典型运动；过氧化氢酶；革兰氏染色；溶血试验；氢酶；革兰氏染色；溶血试验；尿素酶试验；硝酸盐还原；尿素酶试验；硝酸盐还原；MR-VP；三糖铁；糖发酵；动；三糖铁；糖发酵；动力试验；协同溶血力试验；协同溶血*；血清学检；血清学检验验*；小鼠毒力试验；小鼠毒力试验*无无未未加加工工EB（30，24/48h）GB/T 4789.30-2003

33、EB（301，48h）MMA（301，24-48h）蓝色菌落；三糖铁；动力试验；蓝色菌落；三糖铁；动力试验；染色镜检（革兰氏染色、典型染色镜检（革兰氏染色、典型运动）；生化特性（溶血反应、运动）；生化特性（溶血反应、硝酸盐还原、尿素酶、硝酸盐还原、尿素酶、MR-VP、糖发酵）；小鼠毒力试验；协糖发酵）；小鼠毒力试验；协同溶血同溶血无无LB1（301，24h）LB2（301，24h）FDABLEB+Phy（30，4h）BLEB+Phy+三种抑菌三种抑菌剂剂（30，20/44h）OXA/PALOM/MOX/LPM+七叶七叶灵灵+Fe3+推荐推荐BCM/ALOA/RapidLmono/CHROMag

34、ar Listeria蓝色菌落蓝色菌落*；典型运动或动力试；典型运动或动力试验；过氧化氢酶；革兰氏染色；验；过氧化氢酶；革兰氏染色；溶血试验；硝酸盐还原溶血试验；硝酸盐还原*；糖发；糖发酵；协同溶血；血清学检验；酵；协同溶血；血清学检验；小鼠毒力试验小鼠毒力试验*筛选、鉴定都可筛选、鉴定都可以使用快速方法以使用快速方法USDAUVM（302，222h）FB（352，26-482h）MOX（352，26-482h）初步鉴定：纯菌菌落形态；典初步鉴定：纯菌菌落形态；典型运动；型运动；生化鉴定：生化鉴定：MICRO-ID Listeria或或Api Listeria或或BAM等方法中等方法中的传统生

35、化反应；协同溶血的传统生化反应；协同溶血遗传鉴定：核糖体遗传鉴定：核糖体RNA检测；检测；PFGE*筛选用的快速方筛选用的快速方法必须经过确认法必须经过确认后才可使用后才可使用鉴定中用到鉴定中用到MICRO-ID、Api、GenProbe AccuProbe、GENE-TRAK方法名称一次增菌二次增菌分离鉴定快速方法CFIAMFHPB-30LEB（UVM）（30，24/48h）MFB（35，24-48h）OXA+LPM或或MOX或或PALCOM典型运动或动力试验；典型运动或动力试验；溶血试验；甘露醇；溶血试验；甘露醇；木糖；鼠李糖；快速木糖；鼠李糖；快速鉴定试剂盒鉴定试剂盒*；过氧化；过氧化氢

36、酶氢酶*；革兰氏染色；革兰氏染色*；协同溶血协同溶血*；血清学试；血清学试验验*作为鉴定的可选步作为鉴定的可选步骤，允许使用快速骤，允许使用快速方法，如方法，如Vitek或或API、Micro ID Listeria、Listera AccuprobeISO 11290-1:1996（E）半量半量Fraser肉肉汤汤(30，242h）Fraser肉汤肉汤（35或或37，482h）OXA和和PALCOM（30、35或或37，24-48h)PALCOM平板平板微需氧或好氧微需氧或好氧条件培养条件培养蓝色菌落蓝色菌落*；过氧化氢；过氧化氢酶；革兰氏染色；动酶；革兰氏染色；动力试验或典型运动力试验或典

37、型运动*；溶血试验；糖发酵试溶血试验；糖发酵试验；协同溶血；送参验；协同溶血；送参考实验室（血清或噬考实验室（血清或噬菌体分型）菌体分型）无无NMKL No.136 2nd 1999LB(30.01.0，243h)LB(30.01.0，243h）或或Fraser肉汤肉汤（37.01.0，484h)OXA和和PALCOM(37.01.0，243/484h，好氧或微需，好氧或微需氧）氧）溶血试验；过氧化氢溶血试验；过氧化氢酶；革兰氏染色；典酶；革兰氏染色；典型运动型运动动力试验；糖发酵试动力试验；糖发酵试验；送参考实验室（验；送参考实验室（血清、噬菌体、血清、噬菌体、DNA或酶分型）或酶分型）允许

38、使用经过确认允许使用经过确认的商业化生产的单的商业化生产的单核增生李斯特氏菌核增生李斯特氏菌菌株鉴定试验，但菌株鉴定试验，但没列明具体试剂盒没列明具体试剂盒名称名称单核增生李斯特氏菌检测单核增生李斯特氏菌检测快速方法快速方法VIDASVITEKAPI ListeriaBAXTECTAVITEKAPI ListeriaBAXTECRA UNIQUE PLUS TECRA UNIQUETM第四节 布鲁菌属n 包括羊布鲁菌包括羊布鲁菌(又称马尔他布鲁菌又称马尔他布鲁菌)、牛布鲁菌、牛布鲁菌(又又称流产布鲁菌称流产布鲁菌)、猪布鲁菌、绵羊布鲁菌、狗布、猪布鲁菌、绵羊布鲁菌、狗布鲁菌、森林鼠布鲁菌等鲁菌

39、、森林鼠布鲁菌等6个种，个种，n 在我国流行占绝对优势的是羊布鲁斯菌病，其次在我国流行占绝对优势的是羊布鲁斯菌病，其次为牛布鲁斯菌。为牛布鲁斯菌。（一）临床意义n 可通过皮肤、呼吸道、消化道引起感染。可通过皮肤、呼吸道、消化道引起感染。n 以长期发热多汗、关节痛及全身乏力疼痛为特征。以长期发热多汗、关节痛及全身乏力疼痛为特征。多见于牧区，城市散发，发病季节以夏秋较多。多见于牧区，城市散发，发病季节以夏秋较多。n 传染源为病兽，病菌存在于乳液、阴道分泌物、传染源为病兽，病菌存在于乳液、阴道分泌物、胎儿及羊水内，引起动物死胎及流产。胎儿及羊水内，引起动物死胎及流产。n 在淋巴结、脾、骨髓等处繁殖，

40、并多次进入血液在淋巴结、脾、骨髓等处繁殖，并多次进入血液引起菌血症，有各种类型发热，常见引起菌血症，有各种类型发热，常见波状热波状热。n 胞内寄生菌，以细胞免疫为主，胞内寄生菌，以细胞免疫为主，n 它有较强的内毒素，能产生透明质酸酶和过氧化它有较强的内毒素，能产生透明质酸酶和过氧化氢酶有关。有利于细菌生长繁殖和扩散，氢酶有关。有利于细菌生长繁殖和扩散，致病性致病性还与迟发性超敏反应有关。还与迟发性超敏反应有关。n 特异性特异性IgMIgM和和lgGlgG可发挥免疫调节作用。布鲁菌各可发挥免疫调节作用。布鲁菌各菌种或生物型的抗体有交叉保护作用，其初期的菌种或生物型的抗体有交叉保护作用，其初期的免

41、疫为有菌免疫，但随着免疫力不断增强，可转免疫为有菌免疫，但随着免疫力不断增强，可转变为无菌免疫。变为无菌免疫。（二）（二）微生物特性n-短小球杆菌，无动力无芽胞、光滑型有微荚膜，短小球杆菌，无动力无芽胞、光滑型有微荚膜，n 家畜的胎盘、绒毛膜中都含有赤癣醇，为本菌的生长因家畜的胎盘、绒毛膜中都含有赤癣醇，为本菌的生长因子；所以这些部位对感染敏感。子；所以这些部位对感染敏感。n 为需氧菌，营养要求高，初次分离时需为需氧菌，营养要求高，初次分离时需1010的的C0C02 2及及硫胺、烟酸、生物素等物质，最适生长温度为硫胺、烟酸、生物素等物质，最适生长温度为3535，最，最适适pH 6pH 67 7

42、。生长缓慢，初代分离更为迟缓。生长缓慢，初代分离更为迟缓。n 其抗原结构复杂，主要有其抗原结构复杂，主要有A A和和M M抗原，羊布鲁菌抗原，羊布鲁菌A A：M M约为约为1 1：2020；牛布鲁菌；牛布鲁菌A A：M M约为约为2020：1 1。(三)微生物检验1.1.采集血液、骨髓、尿液或流产胎儿的淋巴、肝采集血液、骨髓、尿液或流产胎儿的淋巴、肝脾肺组织，及流产的子宫分泌物等标本。脾肺组织，及流产的子宫分泌物等标本。2.2.在血琼脂平板培养在血琼脂平板培养5 57 7天可形成微小、灰色不天可形成微小、灰色不溶血菌落。延长培养溶血菌落。延长培养3030天才能天才能 报告阴性报告阴性3 3生化

43、鉴定及染料抑制试验：可利用葡萄糖等生化鉴定及染料抑制试验：可利用葡萄糖等糖类，但产酸量少。糖类，但产酸量少。各种布鲁菌的生化鉴定菌菌 种种氧化酶氧化酶/触酶触酶葡萄糖葡萄糖分分 解解精氨酸精氨酸脱脱 羧羧硫廑硫廑40g 复红复红20g 羊布鲁菌羊布鲁菌+-+牛布鲁菌牛布鲁菌+-+猪布鲁菌猪布鲁菌+-绵羊布鲁菌绵羊布鲁菌+/-+-犬布鲁菌犬布鲁菌+-4 4药物敏感试验药物敏感试验 首选强力霉素，次选磺胺增效剂首选强力霉素，次选磺胺增效剂(TMP(TMPSMZ)SMZ)；由；由 于病程长，用药时间需于病程长，用药时间需4 46 6周。药敏试验可不作为周。药敏试验可不作为临床常规。临床常规。5 5抗

44、体检测抗体检测 感染后感染后2 2周血中开始出现周血中开始出现不完全抗体不完全抗体，需用抗人球，需用抗人球蛋白检测，且在病程进展中不断的升高。发病蛋白检测，且在病程进展中不断的升高。发病3 3周周后出现后出现IgGIgG抗体，其特异性较高。抗体，其特异性较高。6结果解释结果解释n 由于培养的营养苛求而且时间长，应以血清学诊断为主。由于培养的营养苛求而且时间长，应以血清学诊断为主。n 从患者的标本中分离出布鲁菌即为确诊的依据。应尽早从患者的标本中分离出布鲁菌即为确诊的依据。应尽早抽血或骨髓作分离培养。抽血或骨髓作分离培养。n 血清学检查血清学检查是常用的诊断方法，症状出现后，抗体效价是常用的诊断

45、方法，症状出现后，抗体效价上升，持续时间很长；若抗体效价再次升高，可能是重上升，持续时间很长；若抗体效价再次升高，可能是重复感染或复发。补体结合试验特异性强，诊断价值较高。复感染或复发。补体结合试验特异性强，诊断价值较高。第五节第五节 弯曲菌属弯曲菌属u是一类呈逗点状或s 形的G-菌。u广泛分布于动物界，其中有些可引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。u对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病原菌。一、流行病学特征家畜、家禽肠道正常菌群家畜、家禽肠道正常菌群 传染源传染源 病人，带菌者病人，带菌者，带菌动物，带菌动物 传播途径传播途径 动物动物人人

46、 密切接触、粪口传播密切接触、粪口传播 人人 人人 粪口传播粪口传播 人群易感性人群易感性 人群普遍易感人群普遍易感 15岁儿童发病率最高岁儿童发病率最高二、致病性1.1.致病物质n 该菌借助于鞭毛和外膜蛋白与空肠上皮细胞结合，侵入生长繁殖，产生肠毒素、细胞毒素和内毒素等物质，引起肠炎和肠道外感染。2.所致疾病n 婴幼儿急性肠炎 腹痛、水样泻、粘液脓血便。n 食物中毒：腹泻。腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现，转为粘液脓血样便，甚至血便。有发热腹痛、恶心不适等症状。可在1周内消退，20患者症状可持续1-3周。三、微生物特性1.形态结构 n G-菌体弯曲呈逗点。无芽胞。n 有鞭毛。运动活泼，呈

47、投镖样为其特征。2.基因组及抗原成分 基因组大小仅为大肠杆菌的35；DNA的G+C为30-38mol按O抗原不同分为65个血清型。3.培养特征 n 为微需氧菌，最佳气体环境通常为含5氧气、10二氧化碳及85氮气。n 42能生长，营养要求高。四、微生物检验 1.粪便直接镜检，G-呈弧形、呈投镖式运动。2.核酸检测粪便弯曲菌flaA基因，体外扩增 空肠大肠弯曲菌为13kb。3.分离培养 粪便等标本可接种选择平板进行分离，置微氧环境培养。空肠大肠弯曲生长温度为42，培养24h可观察为灰白湿润、扁平边缘不整的蔓延生长的菌落。五、鉴定要点1.为氧化酶阳性，G-菌体弯曲或呈S型。2.萘啶酸、头孢噻吩敏感试

48、验：空肠弯曲菌 对萘啶酸敏感、噻吩耐药；胎儿弯曲菌对 萘啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。3.马尿酸盐试验：有助于鉴定空肠弯曲菌空 肠亚种，凡试验阳性、在42条件下生长，氧化酶阳性且与镜检形态相符者，即可报告为空肠弯曲菌空肠亚种。4.醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性，胎儿弯曲菌为阴性。5.用抗体包被的乳胶颗粒，遇到相应的弯曲菌时便可出现反应。可用于鉴定空肠大肠弯曲菌，具有高度敏感性和特异性。6.DNA探针：DNA-DNA杂交可以用于鉴别大肠弯曲菌与马尿酸水解阴性的空肠弯曲菌、区别空肠弯曲菌和其他的弯曲菌。第六节第六节 气单胞菌属气单胞菌属 一、一、分分 类类n 有四个种：嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、

49、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌。n 分为14个DNA杂交群(HGs),HG8和HG10被证实为同一菌种，即维隆气单胞菌分为两个生物型。（动力生物型，维隆生物型）二、临床意义n 为水中的常居菌，引起肠道内的感染,是夏季慢性腹泻的常见病原菌,其主要的致病物质为溶血和细胞毒素等。n 肠道外感染为皮肤和软组织的感染，菌血症通常发生在免疫低下的人群,由嗜水气单胞菌和维隆气单胞菌引起。n 也可引起眼部感染，脑膜炎，肺炎，胸膜炎，骨髓炎，关节炎，腹膜炎，胆囊炎，静脉炎和尿道感染等。三、微生物特性1.G-直杆菌，有动力，营养要求不高，在普通培养基上可以生长。n分为嗜冷菌群35以下生长，37不生长。n嗜中温菌群10

50、42之间生长。三、微生物特性2.氧化酶和触酶阳性，发酵葡萄糖产酸或产酸产气，还原硝酸盐。22生化反应比37活跃，pH为4590。3.抗原结构复杂，血清学分型有异质性。011、034和016在人类的感染中特别重要。四、微生物检验 1.标本采集 采取粪便或肛门拭子，血液，脓液。2.分离培养 可用碱性胨水,含菌量少的标本增菌培养，粪便和脓液标本直接接种，初次分离用血平板和加有10uml氨苄西林的血平板。生长为灰白色，光滑湿润凸起，2mm大小的菌落，有溶血现象。四、微生物检验 3.生化鉴定：对O129耐药、TCBS平板不生长、在无盐培养基生长。嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌均能发酵阿拉伯糖而其它为阴性，嗜