环境毒理学-鱼类毒性试验课件.ppt

1、环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验化研1215 王伟龙指导老师 林爱军日 期 20121010环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验主要内容主要内容 前言前言 目的与要求目的与要求 实验原理实验原理3 3 实验步骤实验步骤 实验报告实验报告 注意事项注意事项7 75 51 12 26 6 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4 4环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验1 前言前言 鱼类是水生食物链的顶级生物，也是水体中最为重鱼类是水生食物链的顶级生物，也是水体中最为重要的经济动物。在污染水体中，当污染物达到一定浓要的经济动物。在污染水体中，当污染物达到一定浓度时，就会引起

2、鱼类各种中毒反应度时，就会引起鱼类各种中毒反应。在人为控制条件在人为控制条件下，进行各种鱼类毒性实验，不仅用于化学品毒性强下，进行各种鱼类毒性实验，不仅用于化学品毒性强度测定、水体污染程度、废水及其处理效果检查，而度测定、水体污染程度、废水及其处理效果检查，而且也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放且也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供科学依据。提供科学依据。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验2 目的与要求目的与要求 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设 计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和计、条件、操作步骤

3、，以及试验结果的计算、分析和 报告报告拟写拟写等全过程。等全过程。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验3 实验原理实验原理环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验4 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4.1 实验鱼的选择与驯养对污染物敏感对污染物敏感在生态类群中具有代表性在生态类群中具有代表性经济价值比较高经济价值比较高来源丰富、取材方便来源丰富、取材方便遗传稳定遗传稳定、生物学背景资料丰富、生物学背景资料丰富体积体积大小适中大小适中原则原则在室内条件下易于饲养和繁殖在室内条件下易于饲养和繁殖 斑马鱼是国际上通用的鱼类急性毒性实验鱼种。本实验以斑马鱼为实验鱼。建议的实验温度21-

4、25，建议实验鱼的全长2.01.0cm。试验前必须驯养（健康选择）：相同水质水温的水体中至少驯养7d（2个月）、每天换水、每天喂食1-2次、试验前一天应停止喂食、驯养期间试验鱼死亡率不得超过5。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验4 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4.2 实验仪器设备（1 1）实验容器）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水族箱或水槽。容器的深度必须超过的水族箱或水槽。容器的深度必须超过16cm16cm，水体表面积越大越，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容好。同一实验应采

5、用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。除去所有毒性残留物。（2 2）其他）其他 溶解氧测定仪、溶解氧控制仪、水硬度计、温度控溶解氧测定仪、溶解氧控制仪、水硬度计、温度控制仪、制仪、pHpH计、分析天平、分光光度计（六价铬：二苯碳酰二肼分计、分析天平、分光光度计（六价铬：二苯碳酰二肼分光光度法）、抄网。光光度法）、抄网。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验4 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4.3 实验溶液的制备 以重铬酸钾为实验毒物，实验溶液的母液由

6、蒸馏水以重铬酸钾为实验毒物，实验溶液的母液由蒸馏水配制而成。母液最好每日配各配制而成。母液最好每日配各1 1次，比较稳定的物质也次，比较稳定的物质也可以两日配制可以两日配制1 1次，配好后，最好低温保存。配制好的次，配好后，最好低温保存。配制好的母液可以稀释为进行毒性实验的溶液，母液可以稀释为进行毒性实验的溶液，以等比或等对以等比或等对数间距设置浓度系列，相临浓度比值不得数间距设置浓度系列，相临浓度比值不得超过超过2.22.2（母母液液3L3L，50g/L50g/L重铬酸钾重铬酸钾）。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验4 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4.4 实验用水（稀释水）

7、高质量的自然水标准稀释水未受污染未受污染的清洁水的清洁水天然湖水、河水或地下水，需要过滤等处理。实验方法配制环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验4 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4.4 实验用水（稀释水）溶液中钙离子和镁离子的总和是2.5mmol/L。Ca:Mg为4:1，Na:K 为10:1。必要时，用氢氧化钠溶液或盐酸调节pH，使其稳定在7.80.2。稀释用水需经曝气直到氧饱和为止，然后储存备用，在使用前不必再曝气。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验4 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4.5 水质条件确保试液温度控制在确保试液温度控制在231水温实验液的实验液的p

8、H在在6.78.5为宜为宜pH至少应保持在至少应保持在4mg/L以上以上，不低于空气饱和值的，不低于空气饱和值的60%DO水的总硬度为水的总硬度为 10250 mg/L硬度以以96h为宜（至少为宜（至少24h）周期系统承载量为系统承载量为1.0g鱼鱼/L溶液溶液负荷12-16h/d光照环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验4 实验材料与实验条件实验材料与实验条件4.6 实验液更换方式 每隔一定时间更换一次试验药液。适用于试验浓度在更换试验药液的时间内保持相对稳定的物质。试验期间不需更换试验液，限于测定那些化学性质比较稳定的物质。试验药液连续更新，可用于大多数物质，包括水中不稳定的物质。静

9、水式换水式流水式环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验5 实验步骤实验步骤第六页设置跨度较大设置跨度较大的浓度范围的浓度范围每个浓度下放入每个浓度下放入5条鱼，静态实验条鱼，静态实验每天记录鱼的死每天记录鱼的死亡率，取出死鱼亡率，取出死鱼24h全死亡浓度全死亡浓度Cm96h无死亡浓度无死亡浓度C036h后观察鱼类后观察鱼类活动异常行为活动异常行为24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况后检查受试鱼的状况实验结束测实验结束测pH、DO温度、受试物浓度温度、受试物浓度无以上结果，另取无以上结果，另取浓度范围重新实验浓度范围重新实验C0Cm间设间设5个浓度组个浓度组每个浓度每个浓度3个

10、平行实验个平行实验每系列一个空白对照每系列一个空白对照实验开始测实验开始测pH、DO温度、受试物浓度，期温度、受试物浓度，期间日测一次间日测一次pH、DO、t第一阶段预处理：为正式实验确定浓度范围。第二阶段正式实验：确定不同溶液浓度和不同培养时间下鱼类的死亡率，找出24h、48h、72h、96h时的LC50值。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验6 实验报告实验报告6.1 数据处理 用直线内插法或常用统计程序计算出 24h、48h、72h、96h的半致死浓度（LC50）值，并计算95的置信限。如果试验数据不适于计算LC50，可用不引起死亡的最高浓度和引起100死亡的最低死亡浓度估算LC

11、50的近似值，即这两个浓度的几何平均值。环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验6 实验报告实验报告6.2 毒性分级（结果评价）表6-1 1990年国家环保局 环境监测技术规范表6-2 1994年国家环保局 新化学物质危害评估准则环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验6 实验报告实验报告6.3 实验报告拟写 在实验报告中应包括：试验名称、目的、试验原理、试验的准确起止日期，还有如下几项：试验鱼试验鱼：种名、来源、体重、体长、健康和驯化状况种名、来源、体重、体长、健康和驯化状况受试物质受试物质：名称、来源物化性质和保存方法名称、来源物化性质和保存方法试验方法及标准稀释水、储备液、试验液的配制方法及性质试验方法及标准稀释水、储备液、试验液的配制方法及性质条件条件：水温、光照、水温、光照、DO、pH、水质、容器形式、负荷率等、水质、容器形式、负荷率等实验开始后实验开始后24h、48h、72h、96h时的时的LC50值和值和95%置信限置信限中毒症状中毒症状、所采用的计算方法及毒性分级试验报告所采用的计算方法及毒性分级试验报告环境毒理学环境毒理学鱼类毒性试验鱼类毒性试验7 实验注意事项实验注意事项1 试验期间，对照组鱼死亡率不得超过10。2 试验期间，受试物实测浓度与设置浓度相差不能超过20，否则应该以实测受试物浓度来表达试验结果。3 试验期间，尽可能维持恒定条件。