1、技能训练1 实验室常用玻璃器皿洗刷、消毒和仪器使用 实训目标实训目标 q 熟悉各种玻璃器皿的洗刷和灭菌方法;q 了解传染病实验室常用仪器的构造;q 熟悉仪器的使用方法和注意事项。仪器材料仪器材料 试管、刻度吸管、培养皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、量杯、漏斗、乳钵、普通棉花、脱脂棉、纱布、牛皮纸、旧报纸、新洁尔灭、来苏儿、石炭酸、肥皂粉、重铬酸钾、粗硫酸、盐酸、橡胶手套、橡胶围裙等;电热恒温培养箱、电热干燥箱、高压蒸气灭菌器、电冰箱、电动离心机、电热恒温水浴箱等。方法步骤方法步骤(一)玻璃器皿的洗刷、包装和消毒(一)玻璃器皿的洗刷、包装和消毒(二)实验室常用仪器的使用(二)实验室常用仪器的使用(一)
2、玻璃器皿的洗刷、包装和消毒(一)玻璃器皿的洗刷、包装和消毒1玻璃器皿的洗刷玻璃器皿的洗刷 2玻璃器皿的包装玻璃器皿的包装3玻璃器皿的灭菌玻璃器皿的灭菌1玻璃器皿的洗刷玻璃器皿的洗刷(1)新购入的玻璃器皿 用12盐酸溶液浸泡数小时或过夜,再用清水反复冲刷,最后用蒸馏水冲洗23次,倒立使之自然干燥或烘干。(2)一般使用过的器皿 可于用后立即用清水冲净。凡沾有油污的,可用肥皂水煮半小时后趁热刷洗,再用清水冲洗干净,最后用蒸馏水冲洗23次,晾干。(3)载玻片 用毕立即浸泡于消毒液中,经12d取出,用洗衣粉液煮沸5min,再用毛刷刷去油脂及污垢,然后用清水冲洗,晾干或将洗净的玻片用蒸馏水煮沸,趁热把玻片
3、摊放在干毛巾或干纱布上,稍等片刻,玻片即干,保存备用或浸泡于95酒精中备用。(4)细菌培养用过的试管、平皿等 须高压蒸气灭菌后,倒去内容物,用热肥皂水刷去污物,然后用清水冲洗,最后用蒸馏水冲洗23次,晾干或烘干。(5)对污染有病原微生物的吸管 用后投入盛有消毒液(23来苏儿或5石炭酸)的玻璃筒内(筒底必须垫有棉花,消毒液要淹没吸管),经12d后取出,浸入2肥皂粉液中12h(或煮沸)取出,再用一根橡皮管,使一端接于自来水龙头,另一端与吸管口相接,用自来水反复冲洗,最后用蒸馏水冲洗。(6)如遇玻璃器皿用上述方法不能洗净者,可用下列清洗液浸泡后洗刷。重铬酸钾(工业用)80g,粗硫酸100ml,水10
4、00ml。(1)培养皿 将合适的底盖配对,用报纸6个一摞包成一包,装入金属盒内。(2)试管、三角烧瓶等 塞上大小适合的棉塞或纱布塞(也可用各种型号的软木塞),并在棉塞、瓶口之外,包以牛皮纸,用细绳扎紧即可。(3)吸管 用35cm宽的长纸条(旧报纸、牛皮纸等),由尖端缠卷包裹,直至包没吸管将纸条合拢。(4)乳钵、漏斗、烧杯等 可用纸张直接包扎或用厚纸包严开口处,再以牛皮纸包扎。2玻璃器皿的包装 常用干热灭菌法 将包装的玻璃器皿放入干燥箱内,为使空气流通,堆放不宜太挤,也不能紧贴箱壁,以免烧焦。一般160,维持2h。灭菌完毕,关闭电源待箱中温度下降至60以下,开箱取出玻璃器皿。3玻璃器皿的灭菌(二
5、)实验室常用仪器的使用(二)实验室常用仪器的使用 1电热恒温培养箱2电热干燥箱3高压蒸气灭菌器4电冰箱5电动离心机6电热恒温水浴箱1电热恒温培养箱 电热恒温培养箱又称温箱,主要由箱体、电热丝、温度调节器等构成。温箱主要用于细菌的培养、某些血清学试验及有关器皿的干燥等(1)电热恒温培养箱使用方法插上电源插头,开启电源开关,绿色指示灯明亮,表明电源接通。然后把温控仪上的调节旋钮旋至所需温度刻度处,此时红灯亮,箱内开始升温,待红绿指示灯交替发亮时,工作室内温度达到设定状态,进入正常工作。应注意,近几年销售的温箱有的红灯亮表示通电及恒温,绿灯亮表示升温。(2)电热恒温培养箱使用注意事项 温箱必须放置于
6、干燥及平稳处。使用时,随时注意温度计的指示温度是否与所需温度相同。除了取放培养物开启箱门外,尽量减少开启次数,以免影响恒温。工作室内隔板放置试验材料不宜过重、过密,以防影响热空气对流。底板为散热板,其上切勿直接放置物品。培养箱内禁止放入易挥发性物品,以免发生爆炸。2电热干燥箱电热干燥箱又称干热灭菌箱,其构造和使用方法与温箱相似,但所用温度较高。主要用于玻璃器皿和金属制品的干热灭菌。灭菌时箱内放置物品要留空隙,保持热空气流动,以利彻底灭菌。常用灭菌温度160,维持2 h。灭菌时,关门加热应开启箱顶上的活塞通气孔,使冷空气排出,待升至60时,将活塞关闭,为了避免玻璃器皿炸裂,灭菌后箱内温度降至60
7、时,才能开启箱门取物品。若仅需达到干燥目的,可一直开启活塞通气孔,温度只需60左右即可。灭菌过程中如遇温度突然升高,箱内冒烟,应立即切断电源,关闭排气小孔,箱门四周用湿毛巾堵塞,杜绝氧气进入,火则自熄。3高压蒸气灭菌器 高压蒸气灭菌器是应用最广、效率最高的灭菌器,有手提式、立式、横卧式三种,其构造和工作原理基本相同。高压蒸气灭菌器为一锅炉状的双层金属圆筒,外筒盛水,内筒有一活动金属隔板,隔板有许多小孔,使蒸气流通。灭菌器上方或前方有金属厚盖,盖上有压力表、安全阀和放气阀。盖的边缘附有螺旋,借以紧闭灭菌器,使蒸气不能外溢。在标准大气压下,水的沸点是100,这个温度能杀死一般细菌的繁殖体,要杀死芽
8、胞则需要很长时间。如果人为地加大压力,则水的沸点可以升高。因高压蒸气灭菌器是一个密闭的容器,加热时蒸气不能外溢,所以锅内压力不断增大,使水的沸点超过121。(1)高压蒸气灭菌器使用方法 加适量水于灭菌器外筒内,使水面略低于支架,将灭菌物品包扎好放入内筒筛板上。器盖盖上时,必须将器盖腹侧的放气软管插入消毒内筒的管架中,然后对称扭紧六个螺栓;检查安全阀、放气阀,并使安全阀关闭,放气阀打开。通电后,待水蒸气从放气阀均匀冒出时,表示锅内冷空气已排尽,然后关闭放气阀继续加热,待灭菌器内压力升至约1105Pa(121.3),开始计时,维持2030min(通过控制电源维持),即可达到灭菌的目的。灭菌完毕,停
9、止加热,待压力自动降至零时才能开盖取物。手提式高压蒸气灭菌器灭菌之后,可放出器内的水,并擦干净。高压蒸气灭菌器使用方法视频(2)高压蒸气灭菌器使用注意事项 螺栓必须对称均匀旋紧,以免漏气。内筒中的灭菌物品,不可堆压过紧,以免妨碍蒸气流通,影响灭菌效果。凡能耐热和潮湿的物品,如培养基、生理盐水、敷料、病原微生物等都可应用此法灭菌。为了达到彻底灭菌的目的,灭菌时间和压力必须准确可靠,操作人员不能擅自离开。注意安全,在高压灭菌密封液体时,如果压力骤降,可能造成物品内外压力不平衡而炸裂或液体喷出。4电冰箱电冰箱主要由箱体、制冷系统、自动控制系统和附件四大部分构成。实验室中常用以保存培养基、药敏片、病料
10、以及菌种、疫苗、诊断液等生物制品。电冰箱使用方法及注意事项(1)电冰箱应放置在干燥通风处,避免日光照射,远离热源,离墙10cm以上,以保证对流,利于散热。(2)电冰箱电源的电压一般为220V,如不符合,须另装稳压器稳压。(3)通电检查箱内照明灯是否明亮,机器是否运转。(4)使用时将温度调节器调至一定刻度(冷冻室0以下,冷藏室温度410)。调节温度时不可一次调得过低,以免冻坏箱内物品。应作第二次、第三次调整。(5)冷冻室冰霜较厚时,按化霜按钮或切断电路,进行化霜,融化后清洁整理。(6)箱内存放物品不宜过挤,以利冷空气对流,使箱内温度均匀。(7)箱内保持清洁干燥,如有霉菌生长,断电后取出物品,经福
11、尔马林熏蒸消毒后,方可使用。5电动离心机实验室常用电动离心机沉淀细菌、血细胞、虫卵和分离血清等,较多用的低速离心机转速可达4000r/min。常用倾角电动离心机,其中管孔有一定倾斜角度,使沉淀物迅速下沉。上口有盖,确保安全,前下方装有电源开关和速度调节器,可以调节转速。电动离心机使用方法及注意事项(1)先将盛有材料的两个离心管及套管放天平上配平,然后对称放入离心机中,若分离材料为一管,则对侧离心管放入等量的其他液体。(2)将盖盖好,接通电路,慢慢旋转速度调节器到所需刻度,保持一定的速度,达到所需的时间(一般转速2000r/min,维持320min),将调节器慢慢旋回“0”处,停止转动方可揭盖取
12、出离心管。6电热恒温水浴箱为镀镍的铜或不锈钢制成的水浴箱,加热快耗电省,箱前有“电源”和“加热”指示灯(一红一绿),并装有温度调节器,自37100可以调节定温,箱侧有一水笼头,供放水用。水浴箱主要用于蒸馏、干燥、浓缩、温渍化学药品及血清学试验用。使用时必须先加水于箱内,通电后电源指示灯(绿灯)即亮,再顺时针方向旋转温度调节器,绿灯灭,使加热指示灯(红灯)亮,即接通内部电热丝,使之加温。如水温达到所需温度,再逆时针方向微微调节温度调节器,使红绿指示灯忽亮忽灭,经3060min观察,水温恒定不变即达到定温。如下次使用需要同样温度,可不必旋转调节旋钮,或记下所需刻度,以作下次转向之用。使用时,不可加水过多,以浸过加热容器为宜。加水少于最低水位,则箱旁焊锡溶化引起漏水。使用完毕,待水冷却后,必须放水擦干。电热恒温水浴箱使用方法及注意事项 课后作业课后作业1.写出实习报告
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