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1、 生物化学习题生物化学习题解析解析一一 名词解释名词解释1、蛋白质变性（蛋白质变性（denaturation）2、Tm (熔点，熔解温度熔点，熔解温度)蛋白质受到某些理化因素的影响，其蛋白质受到某些理化因素的影响，其一一级结构不变级结构不变，但其空间结构发生改变，随之，但其空间结构发生改变，随之蛋白质的蛋白质的理化性质理化性质和和生物学功能生物学功能发生改变或发生改变或丧失的现象叫丧失的现象叫变性作用变性作用。1、蛋白质变性（denaturation）DNA DNA 热变性热变性中其中其双双螺旋链螺旋链50%被解开被解开及及紫外紫外（260nm260nm处）光处）光吸收值达到最大值吸收值达到最

2、大值（完全变性）一半（完全变性）一半时时的的温度温度。2、Tm（DNADNA熔解温度，熔点熔解温度，熔点）2 选择题选择题1、有关著名科学家及重要的历史事件有关著名科学家及重要的历史事件如：如：2008，2010年全国硕士研究生统一考试年全国硕士研究生统一考试生物化学生物化学试题试题 选择题选择题：22.阐明阐明TCA循环的循环的科学家是科学家是 A.J.D.Watson B.H.A.Krebs C.L.C.Pauling D.J.B.Sumner22.1961年，年，F.Jacob和和J.Monod提出了提出了 A.中心法则中心法则 B.中间产物学说中间产物学说 C.操纵子学说操纵子学说 D

3、.诱导诱导契契合学说合学说2009年全国硕士研究生统一考试年全国硕士研究生统一考试生物化学试题生物化学试题22 世界上首次人工合成具有生物活性酵世界上首次人工合成具有生物活性酵母母tRNAAla 的国家是：的国家是：A 美国美国 B 中国中国 C 英国英国 D 法国法国二二 选择题选择题2、体现一定的知识扩展体现一定的知识扩展2008年全国硕士研究生统一考试年全国硕士研究生统一考试生物化学试题生物化学试题26.由磷脂类化合物降解产生的信号转导由磷脂类化合物降解产生的信号转导 分子是分子是 A.cAMP B.cGMP C.IMP D.IP32009年全国硕士研究生统一考试年全国硕士研究生统一考试

4、生物化学试题生物化学试题 34、劳氏肉瘤病毒逆转录的产物是：、劳氏肉瘤病毒逆转录的产物是：A.DNA B.cDNA C.ccDNA D.Ts-DNA 还有还有cccDNA,ocDNA,Z-DNA,H-DNA等等 (covalently closed circular DNA)2010年全国硕士研究生统一考试年全国硕士研究生统一考试生物化学试题生物化学试题23.生物体内氨基酸有生物体内氨基酸有D-型和型和L-型两种，其型两种，其 中中D-型氨基酸通常存在于型氨基酸通常存在于 A.胰岛素中胰岛素中 B.抗菌肽中抗菌肽中 C.细胞色素细胞色素C中中 D.血红蛋白中血红蛋白中3 选择题的答案可能不是一

5、个选择题的答案可能不是一个！1 下面关于一个五肽（下面关于一个五肽（Glu-Phe-Lys-Val-Asp）的叙述中，正确的叙述是）的叙述中，正确的叙述是 （）A：它含有一种非极性氨基酸：它含有一种非极性氨基酸 B：必需它含有三种氨基酸：必需它含有三种氨基酸 C：它含有一种酸性氨基酸：它含有一种酸性氨基酸 D：它在：它在pH 8的溶液中电泳能向正极移动的溶液中电泳能向正极移动 2 在蛋白质生物合成的下列步骤完成中，在蛋白质生物合成的下列步骤完成中，需要需要GTP参与的是参与的是 （）A：氨基酸的活化：氨基酸的活化 B：氨酰：氨酰-tRNA结合到核糖体的结合到核糖体的A位点上位点上 C：起始复合

6、物的形成：起始复合物的形成 D：已合成的肽链从核糖体和：已合成的肽链从核糖体和tRNA上释放上释放出来出来 不一定只有一种答案的选择不一定只有一种答案的选择 谷氨酸合酶属于第几大类酶？谷氨酸合酶属于第几大类酶？在氨同化成氨基酸的途径中在氨同化成氨基酸的途径中在氨同化成氨基酸的途径中在氨同化成氨基酸的途径中 一种由一种由Gln合成酶和合成酶和Glu合酶协同催化途径合酶协同催化途径 Gln合成酶（合成酶（glutamine synthetase）Glu合酶（合酶（glutamate synthase）后者又写成：后者又写成：GOGAT（glutamine-oxoglutarate amino tr

7、ansferase）ATP ADP+Pi Glu+NH3 Gln Gln 合成酶合成酶(GS)-（NADPH+H+）（NADP+）2 Fdred 2 Fdox Gln+-Ketog 2 Glu +）Glu 合酶合酶(GOGAT)-Ketog+NH3+ATP+2 Fdred Glu+ADP+Pi+2Fdox+NADP+问：问：Glu 合酶合酶(GOGAT)属于第几大类酶属于第几大类酶？同样不一定只有一种答案选择的同样不一定只有一种答案选择的柠檬酸合酶属于第几大类酶？柠檬酸合酶属于第几大类酶？三三 问问 答答 题题（一）（一）简答题简答题：(-需要归纳总结需要归纳总结)37.简述简述ATP在生物体

8、内的主要作用。在生物体内的主要作用。37.答案要点：答案要点：(1)是生物系统的是生物系统的能量交换中心能量交换中心(2)参与代谢调节（蛋白的磷酸化反应）参与代谢调节（蛋白的磷酸化反应）(3)是合成是合成RNA等物质等物质的原料的原料 (4)是细胞内磷酸基团转移的中间载体是细胞内磷酸基团转移的中间载体（一）（一）简答题简答题：(-需要归纳总结需要归纳总结)39.以丙二酸抑制琥珀酸脱氢酶为例，说以丙二酸抑制琥珀酸脱氢酶为例，说明酶竞争性抑制作用的特点。明酶竞争性抑制作用的特点。39.(1)竞争性抑制剂丙二酸的结构与底物琥珀竞争性抑制剂丙二酸的结构与底物琥珀酸结构相似。酸结构相似。(2)丙二酸与底

9、物琥珀酸竞争结合琥珀酸脱丙二酸与底物琥珀酸竞争结合琥珀酸脱氢酶的活性中心。氢酶的活性中心。(3)丙二酸的抑制作用可以通过增加底物琥丙二酸的抑制作用可以通过增加底物琥珀酸的浓度解除。珀酸的浓度解除。(4)加入丙二酸后琥珀酸脱氢酶加入丙二酸后琥珀酸脱氢酶Km值增大，值增大，而而Vmax不变。不变。2010年全国硕士研究生入学统一考试年全国硕士研究生入学统一考试 农学门类联考（生物化学）试题农学门类联考（生物化学）试题简答题：简答题：40.分别写出在己酰分别写出在己酰CoA -氧化与三羧酸循氧化与三羧酸循 环中，以环中，以 FAD 和和 NAD+为辅酶的脱氢酶为辅酶的脱氢酶 名称名称（一）（一）简答

10、题简答题：（需要一定的知识拓展需要一定的知识拓展）38.简述蛋白质的一级结构及其与生物进化的简述蛋白质的一级结构及其与生物进化的 关系。关系。38(1)蛋白质一级结构是指蛋白质蛋白质一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序及多肽链中氨基酸残基的排列顺序及二硫键的位置二硫键的位置。(2)不同物种同源蛋白质一级结构存在不同物种同源蛋白质一级结构存在差异，亲缘关系越远，其一级结构中氨差异，亲缘关系越远，其一级结构中氨基酸序列的差异越大基酸序列的差异越大;亲缘关系越近，其亲缘关系越近，其一级结构中氨基酸序列的差异越小。一级结构中氨基酸序列的差异越小。(3)与功能密切相关的氨基酸残基是不与功能密切

11、相关的氨基酸残基是不变的，与生物进化相关的氨基酸残基是变的，与生物进化相关的氨基酸残基是可变的。可变的。需要对比分析题：需要对比分析题：请说明请说明RNA剪接剪接与与RNA编辑编辑的异同。的异同。剪接剪接：指转录后精确切除内含子序列，使外显子连：指转录后精确切除内含子序列，使外显子连接成为成熟的接成为成熟的mRNA过程。过程。编辑编辑：指转录后：指转录后RNA编码区发生的碱基加入、缺失编码区发生的碱基加入、缺失和转换等情况。和转换等情况。相同点：相同点：均是转录后的加工，基因调控的方式。均是转录后的加工，基因调控的方式。不同点不同点：前者是切除前者是切除RNA中内含子一段序列；中内含子一段序列

12、；后者是发生在后者是发生在RNA的编码区，编辑后或者的编码区，编辑后或者 对正常生物造成伤害，甚至死亡，但也增加对正常生物造成伤害，甚至死亡，但也增加 基因产物多样性，造成生物的进化。基因产物多样性，造成生物的进化。（二）综合论述（二）综合论述题：题：（一章内容中的综合）（一章内容中的综合）42.试从遗传密码、试从遗传密码、tRNA结构和氨酰结构和氨酰tRNA合成酶功能三个方面，阐述在蛋白质生物合成酶功能三个方面，阐述在蛋白质生物合成中，合成中，mRNA的遗传密码是如何准确翻的遗传密码是如何准确翻译成多肽链中氨基酸排列顺序的。译成多肽链中氨基酸排列顺序的。(1)mRNA上三个相邻的核苷酸组成密

13、码子上三个相邻的核苷酸组成密码子编码一种氨基酸。遗传密码具有简并性。编码一种氨基酸。遗传密码具有简并性。(2)tRNA反密码子环上具有的反密码子，反密码子环上具有的反密码子，可以按照碱基配对原则反向识别可以按照碱基配对原则反向识别mRNA上的密码子。但这种识别具有上的密码子。但这种识别具有“摆动摆动性性”。tRNA的结构影响其结合氨基酸的的结构影响其结合氨基酸的特异性。特异性。(3)氨酰氨酰tRNA合成酶具有专一性识别氨基合成酶具有专一性识别氨基酸和能携带该氨基酸酸和能携带该氨基酸tRNA的功能。氨酰的功能。氨酰tRNA合成酶还具有二次校对功能。合成酶还具有二次校对功能。（二）（二）综合论述综

14、合论述题：题：41、论述生物氧化的特点。论述生物氧化的特点。生物氧化的定义生物氧化的定义 有机物（糖、脂、蛋白质等）在生物细胞有机物（糖、脂、蛋白质等）在生物细胞里氧化分解为里氧化分解为COCO2 2和和HH2 2OO，并释放出能量的过，并释放出能量的过程叫生物氧化程叫生物氧化。与非生物氧化相比的共同点：与非生物氧化相比的共同点：1 化学反应本质相同，都是失电子反应；化学反应本质相同，都是失电子反应；2 同种同种物质不论以何种方式氧化，所释放的能物质不论以何种方式氧化，所释放的能量相同。量相同。与非生物氧化相比的与非生物氧化相比的不同点不同点：生物氧化是酶促反应，反应条件温和生物氧化是酶促反应

15、，反应条件温和（如常温、（如常温、中性中性pH）；而体外氧化（燃烧）通常是剧烈的反而体外氧化（燃烧）通常是剧烈的反应，要求在高温、高压等条件下进行。应，要求在高温、高压等条件下进行。生物氧化分阶段逐步缓慢地氧化，能量也逐步释生物氧化分阶段逐步缓慢地氧化，能量也逐步释放放；而体外燃烧能量是爆发式释放出来的而体外燃烧能量是爆发式释放出来的。生物氧化生物氧化释放的能量有相当多的转换成释放的能量有相当多的转换成ATPATP中活中活跃的化学能，跃的化学能，用于各种生命活动用于各种生命活动。生物氧化反应的表现形式生物氧化反应的表现形式：1 加氧加氧 被氧化物质分子中加入氧被氧化物质分子中加入氧 生物体内，

16、生物体内，以上有些反应实质是通过加水后再脱氢以上有些反应实质是通过加水后再脱氢实现的。实现的。2 脱氢脱氢 RCHO+O2 RCOOH HRCHO+H2 O R-C-OH RCOOH OH NAD+NADH+H+RCH2OH RCHO3 失电子失电子 -e Fe2+Fe3+生物氧化中生物氧化中 COCO2 2 和和 H H2 2O O 的生成的生成1 1、COCO2 2的生成的生成 直接脱羧：直接脱羧：如丙酮酸脱羧酶催化如丙酮酸脱羧酶催化丙酮酸脱羧丙酮酸脱羧 变成乙醛的反应变成乙醛的反应 氧化脱羧：氧化脱羧：如丙酮酸脱氢酶复合物如丙酮酸脱氢酶复合物催化丙酮催化丙酮 酸脱氢脱羧变成乙酰酸脱氢脱羧

17、变成乙酰CoA的反应的反应直接脱羧：直接脱羧：CH3CCOOHOCH3CHO+CO2丙酮酸脱羧酶丙酮酸脱羧酶（-脱羧）脱羧）（-脱羧）脱羧）PEP羧激酶羧激酶氧化脱羧：氧化脱羧：在氧化过程（脱氢）过程中伴随着脱羧在氧化过程（脱氢）过程中伴随着脱羧 H2O的生成的生成在糖酵解在糖酵解第九步第九步PEP的生成过程中：的生成过程中：(Phosphoenol pyruvic acid)Mg2+水水三羧酸循环中三羧酸循环中-柠檬酸异构化成异柠檬酸柠檬酸异构化成异柠檬酸三羧酸循环中：琥珀酰三羧酸循环中：琥珀酰CoACoA生成琥珀酸生成琥珀酸GDP+Pi GTP2 H2O的生成的生成 在生物体内，主要是通过

18、以在生物体内，主要是通过以脱氢酶脱氢酶、电子传递、电子传递体及氧化酶组成生物氧化体系来生成水的。体及氧化酶组成生物氧化体系来生成水的。MH2M递氢体递氢体递氢体H2 NAD+、NADP+、FMN、FAD、COQ还原型氧化型Cyt递电子体递电子体 b,c1,c,aa32H+2e O2O2-H2O脱氢酶脱氢酶氧化酶氧化酶答案：答案：（1）生物氧化包括线粒体氧化体系和非线粒）生物氧化包括线粒体氧化体系和非线粒 体氧化体系。真核细胞生物氧化主要是体氧化体系。真核细胞生物氧化主要是 线粒体氧化体系，原核细胞生物氧化主线粒体氧化体系，原核细胞生物氧化主 要是在细胞膜上进行。要是在细胞膜上进行。（2）生物氧

19、化是在活细胞的温和条件下进行）生物氧化是在活细胞的温和条件下进行（3）是一系列酶、辅酶和中间传递体参与的）是一系列酶、辅酶和中间传递体参与的 多步骤反应。多步骤反应。（4）能量逐步释放，）能量逐步释放，ATP是能量转换的是能量转换的 载体。载体。（5）真核细胞在有氧条件下条件下，）真核细胞在有氧条件下条件下，CO2 由由TCA循环中酶催化脱羧产生，循环中酶催化脱羧产生，H2O 主要是主要是由代谢物脱下的氢经呼吸由代谢物脱下的氢经呼吸链链传给传给氧形成的。氧形成的。2009年考研生物化学试题年考研生物化学试题 37请用中文或者符号写出糖原（或淀粉）、请用中文或者符号写出糖原（或淀粉）、脂肪酸和蛋

20、白质多肽链生物合成中的单体脂肪酸和蛋白质多肽链生物合成中的单体活化活化反应式。反应式。-（几章内容的综合）（几章内容的综合）37 UDPG焦磷酸化酶焦磷酸化酶（1）G1P+UTP+H2O UDPG+PPi ADPG焦磷酸化酶焦磷酸化酶 或或 G1P+ATP+H2O ADPG+PPi 37 （2）乙酰）乙酰CoA+HCO3-+H+ATP 丙二酸丙二酸单酰单酰CoA+ADP+Pi 乙酰乙酰CoA羧化酶羧化酶 37 (3)氨基酸氨基酸+tRNA+ATP 氨氨酰酰-tRNA+AMP+PPi 氨酰氨酰-tRNA合成酶合成酶 三三 一定难度题一定难度题1 一个八肽的氨基酸序列为：一个八肽的氨基酸序列为：G

21、ln-Trp-His-Ser-Ile-Arg-Pro-Gly,请回答：请回答：在在pH7时该肽所带净电荷性质和数量及等时该肽所带净电荷性质和数量及等电点（电点（pI）大小。）大小。已知：已知：-COOH R(His)-咪唑咪唑 -NH3+R(Arg)-NH3+pK 2.34 6.0 9.67 12.48 1 一个八肽的氨基酸序列为：一个八肽的氨基酸序列为：Gln-Trp-His-Ser-Arg-Ile-Pro-Gly,请回答：请回答：在在pH7时该肽所带净电荷性质和数量及等时该肽所带净电荷性质和数量及等电点（电点（pI）大小。）大小。已知：已知：-COOH R-咪唑咪唑 -NH3+R(Arg)

22、-NH3+pK 2.34 6.0 9.67 12.48 pH7时时 Gly His Glu Arg -1 0 +1 +1答案：答案：所带的净电荷为：所带的净电荷为：+1 等电点（等电点（pI）=11.1 9.67+12.48 pI=11.075=11.1 2但请注意但请注意：蛋白质蛋白质分子中分子中氨基酸残基氨基酸残基侧链基团侧链基团的解离情况往往的解离情况往往与游离与游离氨基酸中氨基酸中的解离的解离情况还是不一样情况还是不一样！请看请看一个例子：一个例子：甘氨酸与丙酸羧基的甘氨酸与丙酸羧基的pK 值相差很大值相差很大，前者羧基的解离强度约是后者的前者羧基的解离强度约是后者的300倍倍！（pK

23、=2.35）(pK=4.87)原因：原因：Gly中的氨基对附近羧基中质子存中的氨基对附近羧基中质子存 在的斥力而形起的。在的斥力而形起的。CCOO-NH3+HHCCOO-HHCO-O2 2008年硕士统考农学联考年硕士统考农学联考(生物化学生物化学)分析论述题分析论述题41.磷磷a酸酸二羟丙酮二羟丙酮是是如何联系糖代谢与脂肪代如何联系糖代谢与脂肪代谢途径的谢途径的?-(1)磷酸二羟丙酮是糖代谢的中间产物，磷酸二羟丙酮是糖代谢的中间产物，-磷酸甘油是脂肪代谢的中间产物磷酸甘油是脂肪代谢的中间产物;因此，磷酸二羟丙酮与因此，磷酸二羟丙酮与-磷酸甘油之间的磷酸甘油之间的转化是联系糖代谢与脂代谢的关键

24、反应。转化是联系糖代谢与脂代谢的关键反应。(2)磷酸二羟丙酮有氧氧化产生的乙酰磷酸二羟丙酮有氧氧化产生的乙酰CoA可作为脂肪酸从头合成的原料，同时磷酸二可作为脂肪酸从头合成的原料，同时磷酸二羟丙酮可转化形成羟丙酮可转化形成-磷酸甘油，脂肪酸和磷酸甘油，脂肪酸和-磷酸甘油是合成脂肪的原料。磷酸甘油是合成脂肪的原料。(3)磷酸二羟丙酮经糖异生途径转化为磷酸二羟丙酮经糖异生途径转化为 6-磷磷酸葡萄糖，再经磷酸戊糖途径产生酸葡萄糖，再经磷酸戊糖途径产生NADPH，该物质是从头合成脂肪酸的还原剂。该物质是从头合成脂肪酸的还原剂。(4)脂肪分解产生的甘油可转化为磷酸二脂肪分解产生的甘油可转化为磷酸二羟丙

25、酮。可进入糖异生途径产生葡萄糖，也羟丙酮。可进入糖异生途径产生葡萄糖，也可以进入三羧酸循环彻底氧化分解。可以进入三羧酸循环彻底氧化分解。选择题：选择题：某抑制剂在其浓度等于某抑制剂在其浓度等于Ki时，对酶的抑制程时，对酶的抑制程度为度为50%，则这种抑制作用的类型是，则这种抑制作用的类型是 。某抑制剂对酶的抑制程度为某抑制剂对酶的抑制程度为(E0-I0)/E0，则这种抑制作用的类型是，则这种抑制作用的类型是 。(一）可逆抑制作用一）可逆抑制作用2.非竞争性抑制作用非竞争性抑制作用Linerweaver-Burk plot of noncompetitive inhibitioniiKI11I1

26、m(1)(1)VVKSVKmaxmaxV =Vmax S(1+I/Ki)(Km+S)几种抑制类型的抑制分数：几种抑制类型的抑制分数：Vi i=1-V0 如非竞争性抑制：如非竞争性抑制：Vmax S Vi (Km+S)(1+I/Ki)Ki V0 Vmax S Ki+I Km+S i=I/(Ki+I)四四 计计 算算 题题1 NADH+H+在线粒体内进行氧化反应，请：在线粒体内进行氧化反应，请：（1）写出写出NADH+H+氧化磷酸化中的化学方氧化磷酸化中的化学方程式。程式。（2）计算生物化学标准条件下）计算生物化学标准条件下1分子分子NADH+H+氧化成水所释放的自由能。氧化成水所释放的自由能。（

27、3）如果温度为）如果温度为25oC，测得呼吸活跃时的，测得呼吸活跃时的线粒体膜内外电势差线粒体膜内外电势差=0.18V，线粒体内膜，线粒体内膜内的内的pH为为7.41，膜外，膜外pH为为6.66，计算此时线，计算此时线粒体的质子动力。粒体的质子动力。解答解答：(1)NADH+11H+内内+0.5O2(+2.5ADP+2.5Pi)NAD+H2O+10H+外外(+2.5ATP+2.5H2O)(2)因为因为 ENAD+/NADH+H+=-0.320V,EO2/H2O=0.816 所以，所以，G=-nFE =-2 x 96.5 x 0.816-(-0.320)=-220(kJ/mol)(3)因为质子动

28、力势（自由能）变化因为质子动力势（自由能）变化 G=2.3 RT pH+F =2.3x0.00831x298x(7.41-6.66)+96.5x0.18 =4.27+17.37 =21.64(kJ/mol)2 商品商品NADH+H+二钠试剂的相对分子量为二钠试剂的相对分子量为709.41，现测得，现测得 1/ml 该样液的光吸收值该样液的光吸收值A340为为0.875；还已知：；还已知：NADH+H+的摩尔消的摩尔消光系数光系数340=6220，比色杯径为，比色杯径为1cm，请问请问该试剂的纯度如何？该试剂的纯度如何？（说明：（说明：NAD+在在340nm处无光吸收处无光吸收）解：解：设该试剂

29、的纯度为设该试剂的纯度为 X(g/g)而而1/ml 样液的摩尔浓度为：样液的摩尔浓度为：(1x10-3)x(X)/709.41=1.409x10-7 X 根据根据Lambert-beer 定律：定律：A=C L 得得：0.870=6220 x(1x10-6)x(x%)/709.41 x1 =6220 x1.409x10-7 X 所以，所以，X=0.9923 2009年全国硕士研究生入学统一考试年全国硕士研究生入学统一考试 农学门类联考（生物化学）试题农学门类联考（生物化学）试题 七、实验题：七、实验题：40 分离纯化某蛋白酶的主要步骤和结果如下表：分离纯化某蛋白酶的主要步骤和结果如下表：分离步

30、骤分离步骤 分离液体积分离液体积 总蛋白含量总蛋白含量 总活力总活力 （ml）(mg)(IU)1 离心离心 1,400 10,000 100,0002 硫酸铵沉淀硫酸铵沉淀 280 3,000 96,0003 离子交换离子交换 90 400 80,0004 亲和层析亲和层析 6 3 45,000 请计算请计算 2、3 和和4 步的回收率和纯化倍数。步的回收率和纯化倍数。（四）（四）实验题实验题 2008年硕士统考农学联考年硕士统考农学联考(生物化学生物化学)题题 40.从动植物细胞匀浆中提取基因组从动植物细胞匀浆中提取基因组DNA时，常用时，常用EDTA、氯仿、氯仿-异戊醇混合液和异戊醇混合液

31、和95%乙醇试剂。请根据蛋白质和核酸的理乙醇试剂。请根据蛋白质和核酸的理化性质回答：化性质回答：(1)该实验中这些试剂各起什么作用该实验中这些试剂各起什么作用?(2)举出一种可以鉴定所提取基因组的举出一种可以鉴定所提取基因组的DNA中是否残留有中是否残留有RNA的方法。的方法。(1)试剂的作用试剂的作用 EDTA可螯合金属离子，抑制可螯合金属离子，抑制DNA酶的活性。酶的活性。氯仿氯仿-异戊醇混合液使蛋白质变性异戊醇混合液使蛋白质变性沉淀，并能去除脂类物质。沉淀，并能去除脂类物质。95%乙醇可使乙醇可使DNA沉淀。沉淀。(2)鉴别方法鉴别方法 采用地衣酚试剂检测采用地衣酚试剂检测RNA分子中的

32、核分子中的核糖。如果反应液呈绿色，说明残留有糖。如果反应液呈绿色，说明残留有RNA。采用紫外吸收法检测采用紫外吸收法检测A260/A280的比的比值。如果比值大于值。如果比值大于1.8，说明残留有，说明残留有RNA。采用琼脂糖凝胶电泳法检测是否有小采用琼脂糖凝胶电泳法检测是否有小分子量的分子量的RNA条带存在。条带存在。2009年硕士统考农学联考年硕士统考农学联考(生物化学生物化学)题题 40、酶纯化实验中，通常先用（酶纯化实验中，通常先用（NH4）2SO4作作为分级沉淀剂，再用为分级沉淀剂，再用Sephadex G-25凝胶柱层凝胶柱层析法从沉淀酶液中除去（析法从沉淀酶液中除去（NH4）2S

33、O4。请问：。请问：（1）与其他中性盐沉淀剂相比，用（）与其他中性盐沉淀剂相比，用（NH4）2SO4做沉淀剂有何优点做沉淀剂有何优点 （2）如发现柱层析后酶的总活性较纯化前）如发现柱层析后酶的总活性较纯化前明显升高，可能的原因是什么？明显升高，可能的原因是什么？（3）柱层析时，湿法装柱的注意事项主要）柱层析时，湿法装柱的注意事项主要有哪些？有哪些？选用（选用（NH4）2SO4的理由的理由（1）溶解度大，且对温度不敏感；）溶解度大，且对温度不敏感；（2）有稳定蛋白质结构的作用；）有稳定蛋白质结构的作用；（3）可用离心法得到蛋白质沉淀，因为：）可用离心法得到蛋白质沉淀，因为：饱和硫酸铵溶液密度为：

34、饱和硫酸铵溶液密度为：1.235g/cm3 结合蛋白质密度为：结合蛋白质密度为：1.29 g/cm3 3mol/L磷酸钾密度为：磷酸钾密度为：1.33 g/cm3（4）有抑菌和抑制蛋白酶的作用；）有抑菌和抑制蛋白酶的作用；（5）分离、纯化蛋白质效果比较好）分离、纯化蛋白质效果比较好（6）价格低，废液能够作肥料）价格低，废液能够作肥料优点优点:硫酸铵溶解度大，硫酸铵溶解度大，温度系数小，温度系数小，对酶活力影响小对酶活力影响小 有利于分离等优点。有利于分离等优点。可能的原因可能的原因:纯化前酶液中可能含有酶的抑制剂纯化前酶液中可能含有酶的抑制剂操作操作凝胶溶涨凝胶溶涨凝胶脱气凝胶脱气3 凝胶装柱

35、凝胶装柱 柱子下部出口处先要赶去气泡，柱子下部出口处先要赶去气泡，柱子要安装垂直，柱子要安装垂直，凝胶倒入柱内最好一次完成凝胶倒入柱内最好一次完成 （不能够一次完成，怎么办？）（不能够一次完成，怎么办？）标准凝胶柱应该是：无气泡、无节痕、床面平整等标准凝胶柱应该是：无气泡、无节痕、床面平整等 可用兰色葡聚糖进行检查。可用兰色葡聚糖进行检查。注意事项：注意事项：1 层析柱应于水平面垂直层析柱应于水平面垂直2 柱床体积至少是上样体积的柱床体积至少是上样体积的3倍以上倍以上3 层析介质中不能出现气泡和断层层析介质中不能出现气泡和断层4 柱床表面要平整，并保持有一定的水位柱床表面要平整，并保持有一定的

36、水位 最后预祝大家：最后预祝大家：考试顺利！考试顺利！读研成功！读研成功！6 简答题简答题：38、在体外蛋白质合成体系中，一条有在体外蛋白质合成体系中，一条有CAU重复序列的多聚核甘酸链，经翻译后发现重复序列的多聚核甘酸链，经翻译后发现其产物有三种，即多聚组氨酸，多聚异亮其产物有三种，即多聚组氨酸，多聚异亮氨酸和多聚丝氨酸。如果组氨酸的密码子氨酸和多聚丝氨酸。如果组氨酸的密码子是是CAU，异亮氨酸的密码子是，异亮氨酸的密码子是AUC，那么，那么丝氨酸的密码子是什么？为什么？丝氨酸的密码子是什么？为什么？CAUCAUCAUCAUCAUCAUCAUCAU (1)丝氨酸的密码子是丝氨酸的密码子是UC

37、A (2)CAU 重复序列的多聚核苷酸链重复序列的多聚核苷酸链的阅读起点可以有的阅读起点可以有3个，从而阅读密个，从而阅读密码子可能有码子可能有3种，即种，即CAU、AUC和和UCA。糖酵解的过程糖酵解的过程 第一阶段第四步：第四步：1,6-二磷酸果糖的裂解二磷酸果糖的裂解 1个己糖分裂成个己糖分裂成2个丙糖个丙糖 丙酮糖和丙醛糖，丙酮糖和丙醛糖，它们为同分异构体。它们为同分异构体。DHAPGAPGlyceraldehyde-3-phosphate Dihydroxy acetone phosphate 糖酵解的过程糖酵解的过程 第二阶段第八步：第八步：3-磷酸甘油酸异构磷酸甘油酸异构Mg2+

38、3PGA2PGA 糖酵解的过程糖酵解的过程 第二阶段第九步：第九步：PEP的生成的生成 这一步其实是分子内的氧化还原，使分子中的能这一步其实是分子内的氧化还原，使分子中的能量重新分布，使能量集中，第二次产生了高能磷酸键。量重新分布，使能量集中，第二次产生了高能磷酸键。2PGAPEP(Phosphoenol pyruvic acid)Mg2+糖酵解的过程糖酵解的过程 第二阶段第十步：丙酮酸的生成第十步：丙酮酸的生成糖酵解途径过程中糖酵解途径过程中第二次第二次产生了产生了 ATP。Mg2+，K+PEPPyr (Pyruvic acid)(一）可逆抑制作用一）可逆抑制作用2.非竞争性抑制作用非竞争性

39、抑制作用Linerweaver-Burk plot of noncompetitive inhibitioniiKI11I1m(1)(1)VVKSVKmaxmaxV =Vmax S(1+I/Ki)(Km+S)几种抑制类型的抑制分数：几种抑制类型的抑制分数：Vi i=1-V0 如非竞争性抑制：如非竞争性抑制：Vmax S Vi (Km+S)(1+I/Ki)Ki V0 Vmax S Ki+I Km+S i=I/(Ki+I)(CH2)3CCOO-NHC NHNH2HNH2(CH2)3CCOO-NHC NNH2HNH2CHCH2COO-COO-(CH2)3CCOO-NHCNH2HNH2O(CH2)3C

40、COO-NH2HNH2OH2CNH2NH2OCOO-CHCHCOO-COO-HCNH2CH2COO-CNH2OOP精氨琥珀酸精氨琥珀酸 合成酶合成酶精氨琥珀酸精氨琥珀酸 裂解酶裂解酶胞液鸟氨酸氨甲酰鸟氨酸氨甲酰 转移酶转移酶精氨酸酶精氨酸酶(2ADP+Pi)NH3+CO2+2ATPGluATPAspAMP+PPiP线粒体线粒体鸟氨酸鸟氨酸精氨酸精氨酸瓜氨酸瓜氨酸Gln尿素循环尿素循环1.丙酮酸羧化丙酮酸羧化 回补反应的途径：回补反应的途径：丙酮酸羧化酶需要丙酮酸羧化酶需要生物素生物素作为其辅酶作为其辅酶。这是动物中最重要的回补反应，在这是动物中最重要的回补反应，在线粒体中线粒体中进行。进行。T

41、CA的回补反应的回补反应 脂肪酸从头合成的过程的过程 丙二酸单酰丙二酸单酰CoACoA的形成的形成1)1)底物水平磷酸化底物水平磷酸化：代谢物通过氧化（脱氢）代谢物通过氧化（脱氢）形成的形成的高能（磷酸）化合高能（磷酸）化合物物在在高势能基团转移过程中释放出来的能量高势能基团转移过程中释放出来的能量将将PiPi与与ADPADP化合（化合（ADPADP磷酸化）磷酸化）形成形成ATPATP的作用的作用。奇数碳链脂肪酸的氧化奇数碳链脂肪酸的氧化丙酰丙酰CoACoA 的代谢的代谢（一）简答题（一）简答题：39、简述三羧酸循环的特点。简述三羧酸循环的特点。每经历一次每经历一次TCATCA循环循环 有有2

42、 2个碳原子（物）通过乙酰个碳原子（物）通过乙酰CoACoA进入循环，进入循环，以后有以后有2 2个碳原子通过脱羧反应离开循环。个碳原子通过脱羧反应离开循环。有有4 4对氢原子通过脱氢反应离开循环，其中对氢原子通过脱氢反应离开循环，其中3 3对由对由NADHNADH携带，携带，1 1对由对由FADHFADH2 2携带。携带。产生产生1 1分子高能磷酸化合物分子高能磷酸化合物GTPGTP，通过它可生通过它可生成成1 1分子分子ATPATP。消耗消耗2 2分子水，分别用于合成柠檬酸（水解分子水，分别用于合成柠檬酸（水解柠檬酰柠檬酰CoACoA）和延胡索酸的加水。和延胡索酸的加水。TCA循环的总反应

43、循环的总反应答案要点：答案要点：（1）三羧酸循环是在线粒体中进行的；循）三羧酸循环是在线粒体中进行的；循环反应从乙酰环反应从乙酰CoA与草酰乙酸缩合形成柠与草酰乙酸缩合形成柠檬酸开始。檬酸开始。（2）三羧酸循环为单向循环，草酰乙酸可）三羧酸循环为单向循环，草酰乙酸可以看成为是乙酰以看成为是乙酰CoA的载体，在循环中不的载体，在循环中不发生变化。发生变化。（3）循环一周消耗）循环一周消耗 2分子分子H2O，释放，释放2分子分子CO2，并且使，并且使3分子分子NAD+和和1分子分子FAD还原为还原为3分子分子NADH+H+和和1分子分子FADH2。(4)循环中有一步底物水平磷酸化反应，循环中有一步

44、底物水平磷酸化反应，过程中催化过程中催化3步不可逆反应的酶是调控步不可逆反应的酶是调控酶。酶。（二）综合论述（二）综合论述题：题：42、论述酶活性别构调节特点及生物、论述酶活性别构调节特点及生物学的意义。学的意义。别构调节的特点：别构调节的特点：1 别构酶结构特点：别构酶结构特点：一般为寡聚酶。一般为寡聚酶。酶蛋白上有二类功能部位，即活性中心酶蛋白上有二类功能部位，即活性中心和别构中心。和别构中心。别构中心与效应物通过可逆非共价结合，别构中心与效应物通过可逆非共价结合，导致酶活性中心的构象发生变化。导致酶活性中心的构象发生变化。别构调节的特点：别构调节的特点：2 别构酶的动力学特点：不符合典型

45、米别构酶的动力学特点：不符合典型米氏酶的双曲线，正协同效应的别构酶呈氏酶的双曲线，正协同效应的别构酶呈现现“S”型曲线。型曲线。3 别构剂（效应物）分为正效应物和负别构剂（效应物）分为正效应物和负效应物，其中，前者起激活效应，后者效应物，其中，前者起激活效应，后者起抑制效应；同促效应物为底物，异促起抑制效应；同促效应物为底物，异促效应物为非底物化合物。效应物为非底物化合物。生物学意义：生物学意义：底物浓度发生较小变化时，别构酶底物浓度发生较小变化时，别构酶可以灵敏、有效地调节酶促反应速度，可以灵敏、有效地调节酶促反应速度，保证重要代谢途径正常运行。保证重要代谢途径正常运行。正协同效应别构酶与米氏酶动力学比较正协同效应别构酶与米氏酶动力学比较