原生质体融合育种学习教案课件.pptx

1、会计学1原生质体融合育种原生质体融合育种第1页/共62页第2页/共62页杂交杂交甲生长快、产量低生长快、产量低乙生长慢、产量高生长慢、产量高生长快、产量高生长快、产量高第3页/共62页第4页/共62页第5页/共62页第6页/共62页第7页/共62页第8页/共62页第9页/共62页Microbe AMicrobe BADD ENZYME第10页/共62页第11页/共62页ADD FUSION PROMOTER第12页/共62页第13页/共62页融合后再生融合后再生第14页/共62页原生质体融合后基因重组原生质体融合后基因重组第15页/共62页第16页/共62页第17页/共62页一、直接亲本及其遗

2、传标记的选择一、直接亲本及其遗传标记的选择二、原生质体制备与再生二、原生质体制备与再生三、原生质体融合三、原生质体融合四、融合体再生与检出四、融合体再生与检出五、重组体检出鉴别与遗传特性分析五、重组体检出鉴别与遗传特性分析第18页/共62页第19页/共62页第20页/共62页灭活灭活正常活性正常活性正常活性正常活性正常活性正常活性无活性无活性A B第21页/共62页第22页/共62页第23页/共62页Protoplast fusionProtoplast fusion allows genetic improvement(random mutation&recombination)of ase

3、xual micro-organisms protoplasts preparation:cells are grown in isotonic solution while inhibiting growth of cell wall,and partly dissociation it(lysozyme)第24页/共62页第25页/共62页第26页/共62页第27页/共62页第28页/共62页原生质体原生质体细胞碎片细胞碎片、未酶解、未酶解细胞细胞第29页/共62页原生质体原生质体13%甘露醇溶液甘露醇溶液25%蔗糖溶液蔗糖溶液第30页/共62页第31页/共62页第32页/共62页第33页

4、/共62页伊文思蓝染色法伊文思蓝染色法活性原生质体不吸活性原生质体不吸附染料为无色，死附染料为无色，死的无活性细胞吸附的无活性细胞吸附染料呈蓝色。染料呈蓝色。（不吸收不吸收-呈色）呈色）第34页/共62页第35页/共62页第36页/共62页第37页/共62页PEG法法 原原 生生 质质 体体 的的 融融 合合 图图 示示图 一 烟 草 叶 肉 细 胞 和 洋 葱 根 尖细 胞 原 生 质 体 融 合（40）图 二 烟 草 叶 肉 和 洋 葱 根 尖 细胞 原 生 质 体 的 异 源 融 合PEG法法 原原 生生 质质 体体 的的 融融 合合 图图 示示图 一 烟 草 叶 肉 细 胞 和 洋 葱

5、 根 尖细 胞 原 生 质 体 融 合（40）图 二 烟 草 叶 肉 和 洋 葱 根 尖 细胞 原 生 质 体 的 异 源 融 合第38页/共62页第39页/共62页电电融融合合法法原原生生质质体体的的融融合合结结果果 原生质体成串（40）原生质体融合（图1）电电 融融 合合 法法 原原 生生 质质 体体 的的 融融 合合 结结 果果 原 生 质 体 成 串（40）原 生 质 体 融 合（图 1）第40页/共62页第41页/共62页第42页/共62页ABABAABB第43页/共62页融合体融合体AB第44页/共62页AmprKanr融合体融合体AmprKanrAB第45页/共62页第46页/共

6、62页第47页/共62页不利用不利用木糖木糖，抗，抗放线菌酮放线菌酮能利用能利用木糖木糖，对，对放线菌酮放线菌酮敏感敏感含有木糖和放线菌酮的选择培养基上检出融合体含有木糖和放线菌酮的选择培养基上检出融合体第48页/共62页第49页/共62页单倍体单倍体单倍体单倍体繁殖传代繁殖传代异核体异核体杂合体杂合体单倍体化单倍体化第50页/共62页第51页/共62页第52页/共62页E.coli K12第53页/共62页传统诱变育种与基因组改组育种比较传统诱变育种与基因组改组育种比较Y.Zhang,et al.2002.Nature(415):644-646.第54页/共62页Four multiple

7、auxotrophes of Streptomyces(“one-marker”)phenotypeArgCysProUra“marker”(prototrophy)parent-1-+(U)parent-2-+-(P)parent-3-+-(C)parent-4+-(A)Progeny(protoplast hybrids)“two-marker”+-(AC,AP,AU,CP,CU,PU)“three-marker”+-(ACP,ACU,APU,CPU)“four-marker”+(ACPU)第55页/共62页Four multiple auxotrophes of Streptomyces

8、(“one-marker”)phenotypeArgCysProUra“marker”(prototrophy)parent-1-+(U)parent-2-+-(P)parent-3-+-(C)parent-4+-(A)Protoplast fusion-optimizing recombination efficiency Progeny(protoplast hybrids)“two-marker”+-“three-marker”+-“four-marker”+%in F110 0.4 0.00007%in F460(6倍)17(42.5倍)2.5(35700倍)Recursive fusion of multiparent protoplasts is highly efficient第56页/共62页第57页/共62页第58页/共62页第59页/共62页第60页/共62页第61页/共62页