微生物弧菌科培训课件.ppt

1、微生物弧菌科微生物弧菌科微生物弧菌科2教学要求教学要求 掌握霍乱弧菌、副溶血弧菌的生物学特性掌握霍乱弧菌、副溶血弧菌的生物学特性和微生物学检验。和微生物学检验。熟悉霍乱弧菌、副溶血弧菌的临床意义熟悉霍乱弧菌、副溶血弧菌的临床意义 气单胞菌、邻单胞菌（自学）气单胞菌、邻单胞菌（自学）微生物弧菌科3 一类氧化酶阳性、菌体短小、弯曲成弧形一类氧化酶阳性、菌体短小、弯曲成弧形或直杆状、具有单端鞭毛、运动活泼的革或直杆状、具有单端鞭毛、运动活泼的革兰阴性细菌。兰阴性细菌。弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见，其中有一些种对人类致病为多见，其中有一些种对人类致病微

2、生物弧菌科4一、霍乱弧菌（一）临床意义（一）临床意义（二）微生物学检验（二）微生物学检验微生物弧菌科5（一）临床意义（一）临床意义1 1、经肠道传染、经肠道传染，引起烈性肠道传染病霍乱，为，引起烈性肠道传染病霍乱，为甲类传染病甲类传染病2 2、在自然情况下，人类是霍乱弧菌的易感者、在自然情况下，人类是霍乱弧菌的易感者3 3、正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱、正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱弧菌，但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌弧菌，但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时，霍乱弧菌可以从胃进入肠道时，霍乱弧菌可以从胃进入肠道微生物弧菌科64 4、进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛

3、运动穿过肠粘膜表、进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁殖产生对热不稳定的霍乱毒素（面繁殖产生对热不稳定的霍乱毒素（cholera cholera toxin,CTtoxin,CT）而致病）而致病5 5、CT CT 导致小肠上皮细胞分泌功能亢进，向细胞外导致小肠上皮细胞分泌功能亢进，向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留，导致呕分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留，导致呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱平衡紊吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱平衡紊乱状态乱状态6 6、典型病人粪便呈、典型病人粪便

4、呈“米泔水米泔水”样样微生物弧菌科7 “米泔水米泔水”样便及霍乱患儿样便及霍乱患儿微生物弧菌科87 7、病程分期：典型病例病程可分、病程分期：典型病例病程可分3 3期期 （1 1）吐泻期：以剧烈的腹泻开始，继而出现呕吐，）吐泻期：以剧烈的腹泻开始，继而出现呕吐，一般不发热，仅少数有低热。一般不发热，仅少数有低热。腹泻：腹泻是发病的第一个症状，其特点为无里腹泻：腹泻是发病的第一个症状，其特点为无里急后重感，多数不伴腹痛，排便后自觉轻快感，急后重感，多数不伴腹痛，排便后自觉轻快感，少数患者有腹部隐痛，个别病例可有阵发性腹部少数患者有腹部隐痛，个别病例可有阵发性腹部绞痛，排出的粪便初为黄色稀便，后为

5、水样便，绞痛，排出的粪便初为黄色稀便，后为水样便，以黄色水样便多见，腹泻严重者排出白色混浊的以黄色水样便多见，腹泻严重者排出白色混浊的“米泔水米泔水”样大便，有肠道出血者排出洗肉水样样大便，有肠道出血者排出洗肉水样大便，出血多者则呈柏油样便，以埃尔托生物型大便，出血多者则呈柏油样便，以埃尔托生物型霍乱弧菌引起者多见，腹泻次数由每天数次至数霍乱弧菌引起者多见，腹泻次数由每天数次至数十次不等，重者则大便失禁十次不等，重者则大便失禁 微生物弧菌科9呕吐：一般发生在腹泻之后，不伴恶心，呕吐：一般发生在腹泻之后，不伴恶心，多为喷射性呕吐，呕吐物初为胃内食物，多为喷射性呕吐，呕吐物初为胃内食物，继而为水样

6、，严重者亦可呕吐继而为水样，严重者亦可呕吐“米泔水米泔水”样物，与粪便性质相似，轻者可无呕吐。样物，与粪便性质相似，轻者可无呕吐。（2 2）脱水期：由于剧烈的呕吐与腹泻，使体）脱水期：由于剧烈的呕吐与腹泻，使体内大量水分和电解质丧失，因而出现脱水，内大量水分和电解质丧失，因而出现脱水，电解质紊乱和代谢性酸中毒，严重者出现电解质紊乱和代谢性酸中毒，严重者出现循环衰竭循环衰竭 （3 3）恢复期或反应期：腹泻停止，脱水纠正）恢复期或反应期：腹泻停止，脱水纠正后多数患者症状消失，尿量增加，体力逐后多数患者症状消失，尿量增加，体力逐步恢复步恢复 微生物弧菌科108 8、临床类型：根据失水程度，血压和尿量

7、情况，可、临床类型：根据失水程度，血压和尿量情况，可分为轻，中，重三型分为轻，中，重三型 （1）轻型：起病缓慢，腹泻不超过轻型：起病缓慢，腹泻不超过1010次次/d/d，为稀，为稀便或稀水样便，一般不伴呕吐，持续腹泻便或稀水样便，一般不伴呕吐，持续腹泻3 35 5天天后恢复，无明显脱水表现。后恢复，无明显脱水表现。（2）中型中型(典型典型)：有典型的腹泻和呕吐症状，腹：有典型的腹泻和呕吐症状，腹泻达泻达10102020次次/d/d，为水样或，为水样或“米泔水米泔水”样便，量样便，量多，因而有明显失水体征，血压下降多，因而有明显失水体征，血压下降 （3）重型：患者除有典型腹泻和呕吐症状外，存重型

8、：患者除有典型腹泻和呕吐症状外，存在严重失水，因而出现循环衰竭，表现为脉搏细在严重失水，因而出现循环衰竭，表现为脉搏细速或不能触及速或不能触及 除上述三种临床类型外，尚有一种罕见的暴除上述三种临床类型外，尚有一种罕见的暴发型或称中毒型，又称发型或称中毒型，又称“干性霍乱干性霍乱”(cholera(cholera sicca)sicca)，本型起病急骤，尚未出现腹泻和呕吐症，本型起病急骤，尚未出现腹泻和呕吐症状，即迅速进入中毒性休克而死亡状，即迅速进入中毒性休克而死亡 微生物弧菌科11微生物弧菌科129 9、抵抗力、抵抗力 在水中存活时间长（在水中存活时间长（2020天左右），对热、干天左右），

9、对热、干燥和光敏感，燥和光敏感，1001001212分钟即死亡，怕酸不怕碱，分钟即死亡，怕酸不怕碱，对常用消毒剂敏感，对庆大耐药对常用消毒剂敏感，对庆大耐药1010、抗原结构、抗原结构 有有O O抗原与抗原与H H抗原，根据抗原，根据O O抗原的不同，抗原的不同，现有现有155155个血清群个血清群O1O1群与群与O139O139群：霍乱群：霍乱非非O1O1群：胃肠炎群：胃肠炎微生物弧菌科131111、自、自18171817年以来，已发生七次世界性的霍乱大流年以来，已发生七次世界性的霍乱大流行，均由霍乱弧菌的行，均由霍乱弧菌的O1O1群引起群引起前六次为霍乱弧菌的古典生物型前六次为霍乱弧菌的古

10、典生物型第七次为埃尔托生物型第七次为埃尔托生物型1212、自、自19921992年年1010月起分离到新的血清群月起分离到新的血清群O139O139，现在，现在世界各地均有流行或散发病例报告世界各地均有流行或散发病例报告微生物弧菌科14 第一次大流行：第一次大流行：1817年，当时霍乱起于印度，传年，当时霍乱起于印度，传到阿拉伯地区，然后到了非洲和地中海沿岸。到阿拉伯地区，然后到了非洲和地中海沿岸。第二次大流行：第二次大流行：1826年，它抵达阿富汗和俄罗斯，年，它抵达阿富汗和俄罗斯，然后扩散到整个欧洲。然后扩散到整个欧洲。第三次大流行：第三次大流行：1832年，它漂洋过海，抵达北美。年，它漂

11、洋过海，抵达北美。20年不到，霍乱就成了年不到，霍乱就成了“最令人害怕、最引人注最令人害怕、最引人注目的目的19世纪世界病世纪世界病”。1865-1875年，年，第四次世界性大流行第四次世界性大流行是通过一艘是通过一艘从埃及到英国的航船流传开来的。从埃及到英国的航船流传开来的。1883-1896年，年，第五次世界霍乱大流行。第五次世界霍乱大流行。历史上历史上8次霍乱大流行次霍乱大流行微生物弧菌科15 1910-19261910-1926年，年，第六次全球性霍乱第六次全球性霍乱。百余年间霍乱。百余年间霍乱6 6次大流行，造成损失难以计算，仅印度死者就超次大流行，造成损失难以计算，仅印度死者就超过

12、过38003800万。万。19611961年，年，霍乱又开始第霍乱又开始第7 7次大流行次大流行。这次起于印度。这次起于印度尼西亚，然后传到亚洲其他国家和欧洲，迄今已尼西亚，然后传到亚洲其他国家和欧洲，迄今已波及五大洲波及五大洲140140个以上的国家和地区，报告患者个以上的国家和地区，报告患者350350万以上。万以上。19921992年年1010月，由非月，由非0101群的一个血清型群的一个血清型01390139霍霍乱弧菌引起的新型霍乱席卷印度和孟加拉国的某乱弧菌引起的新型霍乱席卷印度和孟加拉国的某些地区，至些地区，至19931993年年4 4月已报告十万余病人，现已波月已报告十万余病人，

13、现已波及许多国家和地区，包括我国，有取代埃尔托生及许多国家和地区，包括我国，有取代埃尔托生物型的可能，有人将其称为霍乱的物型的可能，有人将其称为霍乱的第第8 8次世界性大次世界性大流行流行微生物弧菌科16（二）微生物学检验（二）微生物学检验1 1、标本采集、标本采集（1 1）粪便、肛门拭子和可疑食物）粪便、肛门拭子和可疑食物（2 2）及时送检）及时送检（3 3）如不能及时送检，应将标本置于）如不能及时送检，应将标本置于3.5%3.5%NaClNaCl蛋白胨水或卡蛋白胨水或卡-布运送培养基中送检布运送培养基中送检微生物弧菌科172、检验、检验（1）形态与染色：）形态与染色：弧形或逗点状，无芽孢，

14、弧形或逗点状，无芽孢，无荚膜，单鞭毛，运动活泼；取标本直接无荚膜，单鞭毛，运动活泼；取标本直接革兰染色，油镜下观察到革兰染色，油镜下观察到“鱼群样鱼群样”排列排列的革兰阴性弧菌（可初步报告）的革兰阴性弧菌（可初步报告）（2）动力观察及制动试验：取患者粪便制成）动力观察及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细菌动力，见悬滴（或压滴）标本，观察细菌动力，见穿梭或流星样运动，穿梭或流星样运动，O1群霍乱弧菌多价血群霍乱弧菌多价血清制动试验阳性（可早期报告）清制动试验阳性（可早期报告）微生物弧菌科18革兰染色革兰染色鞭毛染色鞭毛染色微生物弧菌科19微生物弧菌科21 快速诊断：通过直接荧光抗

15、体染色和抗O1群抗原的单抗凝集试验 霍乱毒素的测定：ELISA法微生物弧菌科22（3）培养培养特性：营养要求不高，兼性厌氧，在普通培养中生长良好，耐碱不耐酸，NaCl6%可生长，在液体培养基中形成菌膜碱性琼脂平板：碱性琼脂平板：硫代硫酸钠硫代硫酸钠-枸櫞酸盐枸櫞酸盐-胆盐胆盐-蔗糖琼脂平板蔗糖琼脂平板（TCBS）：黄色菌落）：黄色菌落4号琼脂或号琼脂或庆大霉素琼脂平板：中心灰褐色庆大霉素琼脂平板：中心灰褐色的菌落的菌落微生物弧菌科23微生物弧菌科24（4）生化反应）生化反应试验名称试验名称结果结果试验名称试验名称结果结果氧化酶氧化酶+吲哚吲哚+硝酸盐还原硝酸盐还原+葡萄糖葡萄糖+赖氨酸赖氨酸+

16、蔗糖蔗糖+鸟氨酸鸟氨酸+甘露醇甘露醇+精氨酸双水解精氨酸双水解-0 0、1 1NaClNaCl+V-PV-Pd d7 7、1010 NaClNaCl-明胶液化明胶液化+微生物弧菌科25（5 5）血清学鉴定）血清学鉴定确定血清群：确定血清群：O1O1、O139O139、非、非O1O1群群确定血清型：确定血清型：O1O1群的群的O O抗原由抗原由A A、B B、C C三种抗原三种抗原生物分型：古典生物型与生物分型：古典生物型与EltorEltor生物型生物型血清型血清型A A抗原抗原B B抗原抗原C C抗原抗原小川型（小川型（ABAB）+-稻叶型（稻叶型（ACAC）+-+彦岛型（彦岛型（ABCAB

17、C）+微生物弧菌科263、检验程序、检验程序确诊报告确诊报告标本标本碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水 分离培养（分离培养（TCBS、碱性平板）、碱性平板）生化鉴定分型生化鉴定分型血清学鉴定血清学鉴定初步报告初步报告快速诊断快速诊断 直接涂片直接涂片 动力、制动试验动力、制动试验微生物弧菌科27二、副溶血性弧菌二、副溶血性弧菌（一）临床意义（一）临床意义（二）微生物学检验（二）微生物学检验微生物弧菌科28（一）临床意义（一）临床意义1 1、具有嗜盐性、具有嗜盐性2 2、存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝、存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝壳及盐渍加工的海产品中壳及盐渍加工的海产品中3 3

18、、主要引起胃肠炎、主要引起胃肠炎是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程水样便，偶尔血性，恢复较快，病程2323天，通常为自限性天，通常为自限性微生物弧菌科294 4、通过菌毛的粘附，产生两种致病因子：耐热直接、通过菌毛的粘附，产生两种致病因子：耐热直接溶血素、耐热直接溶血素相关溶血素溶血素、耐热直接溶血素相关溶血素5 5、抵抗力：、抵抗力：抵抗力弱，不耐热，抵抗力弱，不耐热，90 1min90 1min即被

19、杀即被杀死，耐碱怕酸，死，耐碱怕酸，1%1%醋酸或醋酸或50%50%食醋中食醋中1min1min死亡，淡死亡，淡水中不超过水中不超过2 2日，但海水中能存活日，但海水中能存活4747天以上天以上微生物弧菌科30（二）微生物学检验1、标本采集、标本采集 可采集患者的粪便，肛门拭子或可疑食物。可采集患者的粪便，肛门拭子或可疑食物。应及时接种，或置碱性蛋白胨水或卡应及时接种，或置碱性蛋白胨水或卡-布运送培养布运送培养基中送检基中送检2、检验、检验（1）形态与染色）形态与染色革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，无荚膜无荚膜微生物弧菌科31（3 3）培养）培养

20、培养特性：要求不高，需氧或兼性厌氧，具有嗜培养特性：要求不高，需氧或兼性厌氧，具有嗜盐特性，无盐不生长，盐特性，无盐不生长，超过超过8%8%不能生长，不能生长，最适最适NaClNaCl浓度为浓度为3.5%3.5%增菌培养：标本接种增菌培养：标本接种1%NaCl1%NaCl碱性胨水或碱性胨水或4%NaCl4%NaCl蛋蛋白胨水中进行选择性增菌白胨水中进行选择性增菌TCBSTCBS平板：绿色或蓝绿色菌落（平板：绿色或蓝绿色菌落（不发酵蔗糖）不发酵蔗糖）微生物弧菌科32微生物弧菌科33神奈川现象（神奈川现象（Kanagawa phenomenon,KPKanagawa phenomenon,KP）从

21、腹泻患者中分离到的菌株从腹泻患者中分离到的菌株95%95%以上在我妻以上在我妻（wagatsumawagatsuma）琼脂）琼脂上产生上产生溶血现象溶血现象NaClNaCl生长试验生长试验在不含在不含NaClNaCl和含和含10%10%的蛋白胨水中不生长，在的蛋白胨水中不生长，在3%3%和和7%NaCl 7%NaCl 蛋白胨水中生长蛋白胨水中生长微生物弧菌科34（4 4）生化反应）生化反应生化反应生化反应结果结果生化反应生化反应结果结果氧化酶氧化酶+O129O12910ug10ug吲哚吲哚+O129 150ugO129 150ug+V VP P葡萄糖葡萄糖+枸枸乳糖乳糖ONPGONPG麦芽糖麦芽糖+动力动力+蔗糖蔗糖精氨酸水解精氨酸水解0%NaCI0%NaCI鸟氨酸鸟氨酸+3%NaCI3%NaCI赖氨酸赖氨酸+10%NaCI10%NaCI