1、高效毛细管电泳分离检测高效毛细管电泳分离检测苯磺酸氨氯地平对映体苯磺酸氨氯地平对映体1 1、学习高效毛细管电泳仪的原理、学习高效毛细管电泳仪的原理2 2、学习外标一点法测定主成分含量的方法、学习外标一点法测定主成分含量的方法3 3、了解高效毛细管电泳仪的结构与正确使用方法、了解高效毛细管电泳仪的结构与正确使用方法4 4、了解手性分离的方法、了解手性分离的方法一、实验目的要求一、实验目的要求二、实验原理二、实验原理毛细管电泳毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)(Capillary Electrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳又称高效毛细管电泳(hig
2、h performance capillary electrophoresis,HPCE)(high performance capillary electrophoresis,HPCE)，是一类，是一类以以高压电场高压电场为驱动力，被分离组分在毛细管中按其为驱动力，被分离组分在毛细管中按其淌度淌度或或分配系数分配系数不同进行高效、快速分离，在极细的毛细管内实现的一种新型液相不同进行高效、快速分离，在极细的毛细管内实现的一种新型液相微分离技术。微分离技术。p 带电粒子的迁移速度带电粒子的迁移速度=电泳电泳和和电渗流电渗流两种速度的矢量和两种速度的矢量和p 电泳：电泳：在电解质溶液中，位于电场中
3、的带电离子在电场力的作用下，在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下， 以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象p 电渗流：电渗流：是指管内溶液在外力电场作用下整体朝一个方向运动的现象是指管内溶液在外力电场作用下整体朝一个方向运动的现象HP-CD苯磺酸氨氯地平包合络合物电泳迁移速度差异电泳迁移速度差异1 1、配制配制4444 mmol/L Citric acid + mmol/L Citric acid + 3030 mmol/L mmol/L Tris(Tris(三羟甲基氨三羟甲基氨基甲烷基甲烷) )+ 35mmol/L H
4、P-+ 35mmol/L HP-CDCD为电泳运行液。为电泳运行液。2 2、毛细管柱在使用前依次用、毛细管柱在使用前依次用 0.1 mol/L NaOH0.1 mol/L NaOH、超纯水和、超纯水和电泳运行液各冲洗毛细管柱电泳运行液各冲洗毛细管柱 5 min5 min；3 3、分离电压、分离电压1616 KVKV，进样，进样1010 S S ，检测波长，检测波长 239 nm 239 nm。三、实验方法三、实验方法（1 1）标准溶液配制：标准溶液配制：取苯磺酸氨氯地平对照品适量，用超纯水取苯磺酸氨氯地平对照品适量，用超纯水 配成标准溶液。（已配好）配成标准溶液。（已配好）（2 2）待测样品准
5、备：待测样品准备：取外消旋氨氯地平取外消旋氨氯地平1 1片（标示含量片（标示含量5 5 mg/ mg/片）片） 于于50 mL50 mL容量瓶中容量瓶中, , 在适量水中用超声波辅助浸溶在适量水中用超声波辅助浸溶10 min10 min，定容至，定容至5050 mLmL，滤纸，滤纸 过滤过滤, ,续滤液经过续滤液经过0.45 m0.45 m微孔滤膜过滤至微孔滤膜过滤至EPEP管中。管中。（3 3）上机测试上机测试: :每每4 4个同学为一个组，标样每台仪器进样一次，个同学为一个组，标样每台仪器进样一次， 样品每组测一次，仪器房间样品每组测一次，仪器房间310310。（4 4） 结果处理：结果处
6、理：使用峰面积计算。使用峰面积计算。四、含量测定四、含量测定苯磺酸氨氯地平高效毛细管分离对映体图苯磺酸氨氯地平高效毛细管分离对映体图0.2826.12910.55711.92412.28413.028-279-276-273-270-267-264-261-258-255-252mV12345678910111213minR S苯磺酸氨氯地平高效毛细管分离对映体图苯磺酸氨氯地平高效毛细管分离对映体图1 1、 运行缓冲液须先超声脱气；运行缓冲液须先超声脱气；2 2、 缓冲液及样品须经过缓冲液及样品须经过0.45 0.45 m m微孔滤膜过滤；微孔滤膜过滤；3 3、仪器操作时一定要弹起电压启、仪器
7、操作时一定要弹起电压启/ /停控制按钮，停控制按钮，停止高压停止高压 输出后（此时电压电流都显示输出后（此时电压电流都显示0 0），才可以取出毛细管的），才可以取出毛细管的进样端进样；进样端进样；4 4、进样时间和进样高度控制准确。、进样时间和进样高度控制准确。五、注意事项五、注意事项1、实验步骤2、标准溶液的浓度以及对应的峰面积3、样品测定的保留时间和峰面积（对照品和供试品的色谱图）4、计算过程及结果（包括分离度等）5、实验思考题、心得等2022-2-8六、数据六、数据1 1、 高效毛细管电泳的特点？高效毛细管电泳的特点？2 2、 采用高效毛细管电泳拆分手性药物与采用高效液相色谱采用高效毛细管电泳拆分手性药物与采用高效液相色谱和气相色谱拆分手性药物有何优势？和气相色谱拆分手性药物有何优势？3 3、外标一点法和标准曲线法相比，优势和不足？可否用同、外标一点法和标准曲线法相比，优势和不足？可否用同一浓度不同体积进样获得标准曲线？一浓度不同体积进样获得标准曲线？4 4、采用、采用HP-CDHP-CD作为手性选择剂拆分的化合物有哪些？作为手性选择剂拆分的化合物有哪些？ 利利用用HP-CDHP-CD作为手性拆分的优势？作为手性拆分的优势？七、思考题七、思考题
