1、中药制剂分析概论一、定义一、定义 1 1、中药：以中医药学理论体系的、中药：以中医药学理论体系的术语表述其性能、功效和使用规律，并术语表述其性能、功效和使用规律，并且只有按中医药学理论指导其临床应用且只有按中医药学理论指导其临床应用的传统药物。的传统药物。一一 概述概述 2 2、中药制剂：、中药制剂： 以中药为原料，按中医药学理论基以中药为原料，按中医药学理论基础配伍、组方，以一定制备工艺和方法础配伍、组方，以一定制备工艺和方法制成一定剂型的药物制剂。制成一定剂型的药物制剂。 注意：中药制剂必须是以中医药基注意：中药制剂必须是以中医药基础理论和用药原则为指导制成的单方或础理论和用药原则为指导制
2、成的单方或复方制剂。复方制剂。3 3、中药及其制剂分析：、中药及其制剂分析： 以中医药理论为指导，运用现代分以中医药理论为指导，运用现代分析理论和方法研究中药及其制剂质量的析理论和方法研究中药及其制剂质量的一门应用学科。一门应用学科。二、中药及其制剂分析的意义和任务二、中药及其制剂分析的意义和任务 1、意义：中药发展的、意义：中药发展的“瓶颈瓶颈”问问题之一，中国药学事业发展的希望和突题之一，中国药学事业发展的希望和突破口。破口。2 2、任务：、任务： 运用现代分析手段和方法（包括物理运用现代分析手段和方法（包括物理学、化学、生物学、和微生物学等），对学、化学、生物学、和微生物学等），对中药制
3、剂的各个环节进行质量分析。中药制剂的各个环节进行质量分析。 保证中药及其制剂的临床使用中的安保证中药及其制剂的临床使用中的安全性和有效性。全性和有效性。三、发展历史三、发展历史 战国时期，中医学第一部经典著作战国时期，中医学第一部经典著作“黄黄帝内经帝内经”，为中医药学奠定了理论基础；，为中医药学奠定了理论基础； 汉代张仲景所著汉代张仲景所著“伤寒论伤寒论”“”“金匮要略金匮要略”，丰富和发展了中医辨证论治的治疗体系，丰富和发展了中医辨证论治的治疗体系，收载了许多有名的方剂，收载了许多有名的方剂， 晋代葛洪所著晋代葛洪所著“肘后备急方肘后备急方”最早提出最早提出成药剂概念。成药剂概念。 明代李
4、时珍，著成明代李时珍，著成“本草纲目本草纲目”，全书，全书收载药物收载药物18921892种，方剂种，方剂1300013000余首，剂型近余首，剂型近4040种种。1.中药市场混乱中药市场混乱同物异名同物异名 同名异物同名异物（30多种，鳞毛蕨科、蹄盖蕨科、多种，鳞毛蕨科、蹄盖蕨科、 紫萁科、乌毛蕨科）紫萁科、乌毛蕨科）贯众贯众四、四、中药及其制剂分析的中药及其制剂分析的特点特点2. 中药材质量的不稳定性中药材质量的不稳定性生长环境、采收季节及部位差异生长环境、采收季节及部位差异麻黄麻黄 东北东北西北（西北（-）麻黄碱含量）麻黄碱含量 （+）麻黄碱含量）麻黄碱含量GAP 中药材生产质量管理规范
5、中药材生产质量管理规范不同部位人参皂苷的含量不同部位人参皂苷的含量 重量比重量比(%) 总皂苷含量总皂苷含量(%) 周皮周皮 6.9 2.60韧皮韧皮 46.6 3.04木质部木质部 46.5 0.313.五倍子五倍子 鞣质（鞣质（70%）槐米槐米 芦丁（芦丁（20%）长春花长春花 长春新碱（百万分之一）长春新碱（百万分之一）美登木美登木 美登木碱（千万分之一）美登木碱（千万分之一）各种有效成分在中药中含量各种有效成分在中药中含量相差悬殊相差悬殊4. 中药药效的发挥是多种成分中药药效的发挥是多种成分协同作用的结果，因此应从整体协同作用的结果，因此应从整体上来控制中药的质量。上来控制中药的质量。
6、成分复杂，而且大多数中药的成分复杂，而且大多数中药的有效成分尚不十分清楚。有效成分尚不十分清楚。鞣质鞣质 地榆（止血）地榆（止血） 其他（无药效）其他（无药效）有效有效 无效无效5. 同一成分在不同药材中的药理同一成分在不同药材中的药理作用不同作用不同6. 制剂工艺不同，有效成分的量制剂工艺不同，有效成分的量也不同也不同例例 三黄泻心汤干浸膏三黄泻心汤干浸膏有效成分与浓缩干燥方法的关系有效成分与浓缩干燥方法的关系(%) 常压常压 减压减压 逆浸透逆浸透 成分成分 浓缩浓缩 浓缩浓缩 喷雾喷雾大黄酸葡萄糖苷大黄酸葡萄糖苷 41.1 51.6 96.8小檗碱小檗碱 34.5 37.5 94.5黄连
7、碱黄连碱 6.3 12.0 93.7黄岑苷黄岑苷 77.4 77.6 98.5丸、散、片、锭、合、酒、酊、丸、散、片、锭、合、酒、酊、膏、露、茶、栓、颗粒、糖浆等膏、露、茶、栓、颗粒、糖浆等7. 剂型繁多，辅料干扰大剂型繁多，辅料干扰大 针对不同的剂型，采用相应的针对不同的剂型，采用相应的方法进行分离纯化后测定方法进行分离纯化后测定蜡丸蜡丸 蜂蜡蜂蜡蜜丸蜜丸 蜂蜜蜂蜜糊剂糊剂 糯米粉、黄米粉糯米粉、黄米粉曲剂曲剂 发酵发酵胶剂胶剂 豆油、黄酒、冰糖豆油、黄酒、冰糖1 1、新的科学技术得到广泛的应用：、新的科学技术得到广泛的应用：DNADNA遗传标记技术遗传标记技术 、 人工神经网络人工神经网络
8、 、 模模糊数学法等等。糊数学法等等。2 2、分离能力强、灵敏度高、稳定性好的、分离能力强、灵敏度高、稳定性好的现代化仪器的应用：高效液相色谱、气现代化仪器的应用：高效液相色谱、气相色谱、高效毛细管电泳等。相色谱、高效毛细管电泳等。3 3、新的质量评价方法的出现：中药指纹、新的质量评价方法的出现：中药指纹图谱等。图谱等。五、中药及其制剂分析的发展趋势五、中药及其制剂分析的发展趋势六六 中药制剂分析的一般程序中药制剂分析的一般程序取样取样鉴别鉴别含量测定含量测定检查检查提取提取纯化纯化报告报告一、取样：一、取样： 分析样品首先是取样，取样必须具分析样品首先是取样，取样必须具有科学性、真实性和代表
9、性。有科学性、真实性和代表性。 基本原则：均匀合理，所取样品基本原则：均匀合理，所取样品具有代表性。具有代表性。供试品溶液的制备供试品溶液的制备二、二、 中药及其制剂成分复杂，大多需经提取中药及其制剂成分复杂，大多需经提取分离后制成较纯净的供试品溶液，才可进行分离后制成较纯净的供试品溶液，才可进行分析测定。分析测定。 目的：目的：1、排除杂质的干扰、排除杂质的干扰 2、保护仪器、保护仪器 原则：最大限度的保留被测成分，除去原则：最大限度的保留被测成分，除去干扰物质，将被测成分浓缩至分析方法最小干扰物质，将被测成分浓缩至分析方法最小检测所需浓度。检测所需浓度。 （一）提取（一）提取 （二）纯化（
10、二）纯化（一）（一）提取方法提取方法1、萃取法萃取法 利用溶质在两种互不相利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同，使溶的溶剂中溶解度的不同，使物质从一种溶剂转移到另一种物质从一种溶剂转移到另一种溶剂中，将测定组分提取出来溶剂中，将测定组分提取出来的方法的方法正丁醇正丁醇 用于皂苷类用于皂苷类醋酸乙酯醋酸乙酯 用于黄酮类用于黄酮类氯仿氯仿 用于生物碱类用于生物碱类乙醚、石油醚乙醚、石油醚 用于挥发油用于挥发油（1）萃取溶剂的选择）萃取溶剂的选择（2）水相）水相pH的选择的选择酸性成分酸性成分 比其比其pKa低低12个个pH单位单位碱性成分碱性成分 比其比其pKa高高12个个pH单位单位（3）
11、仪器和提取次数）仪器和提取次数（4）酒剂和酊剂）酒剂和酊剂先挥去乙醇先挥去乙醇（5）防止和消除乳化）防止和消除乳化分液漏斗分液漏斗鉴别鉴别1次次含量测定含量测定 3 4次次2、冷浸法冷浸法 样品置溶剂里，室温下浸泡一样品置溶剂里，室温下浸泡一段时间的提取方法段时间的提取方法适宜易溶出的组分适宜易溶出的组分适宜遇热不稳定的药物适宜遇热不稳定的药物 费时（费时（8 24小时）小时）特点特点适用范围适用范围适宜植物性粉末适宜植物性粉末不宜动物性粉末不宜动物性粉末亲脂性亲脂性 亲水性亲水性石油醚石油醚 苯苯 氯仿氯仿 乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水3、 回流提取法回流提
12、取法 样品置有机溶剂中加热回流的样品置有机溶剂中加热回流的提取方法提取方法加快溶出速度，省时加快溶出速度，省时适宜受热稳定的药物适宜受热稳定的药物适宜较难溶出的组分适宜较难溶出的组分特点特点仪器仪器普通回流装置普通回流装置通过更换溶剂，使提取更完全通过更换溶剂，使提取更完全4、 连续回流提取法连续回流提取法 样品置有机溶剂中加热，蒸发样品置有机溶剂中加热，蒸发的溶剂经冷凝流回样品管的提取方的溶剂经冷凝流回样品管的提取方法法节省溶剂，提高提取效率节省溶剂，提高提取效率适宜受热稳定的药物适宜受热稳定的药物费时费时特点特点仪器仪器索氏提取器索氏提取器5、 水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法 适用于具挥发性的可
13、随水蒸气适用于具挥发性的可随水蒸气蒸出的组分的测定蒸出的组分的测定麻黄碱、槟榔碱、丹皮酚、挥发油麻黄碱、槟榔碱、丹皮酚、挥发油6、 超声提取法超声提取法 超声波振荡器（超声波清洗器）超声波振荡器（超声波清洗器） 简便简便 省时省时 提取率高提取率高 利用超声波的助溶作用进行提取利用超声波的助溶作用进行提取原理原理 超声波在液体中以疏密相间的形式超声波在液体中以疏密相间的形式向物体辐射，出现向物体辐射，出现“空化空化”现象（气泡现象（气泡的形成、产生及破裂现象），形成超过的形成、产生及破裂现象），形成超过1000个大气压的冲击力个大气压的冲击力 （二）（二）纯化方法纯化方法1、萃取法萃取法 利用
14、药物与杂质溶解性能利用药物与杂质溶解性能的不同进行分离的不同进行分离例例弃弃去去水水层层含含生生物物碱碱样样品品 H生物碱盐生物碱盐 游离生物碱游离生物碱氯仿氯仿氨水氨水H2O2 2、色谱法：、色谱法： 常用的样品纯净方法，包括：柱色常用的样品纯净方法，包括：柱色谱、薄层色谱法、纸色谱法。谱、薄层色谱法、纸色谱法。柱色谱法柱色谱法（1）保留测定组分在柱上，洗去杂）保留测定组分在柱上，洗去杂 质，再用适当溶剂洗下组分质，再用适当溶剂洗下组分（2）保留杂质于柱上）保留杂质于柱上常用固定相常用固定相硅胶硅胶氧化铝氧化铝大孔吸附树脂大孔吸附树脂例如：人参皂苷类成分用大孔树脂净化，例如：人参皂苷类成分用
15、大孔树脂净化，先用水洗去糖类等水溶性杂质，再用先用水洗去糖类等水溶性杂质，再用70%的乙醇洗脱皂苷类成分的乙醇洗脱皂苷类成分人参皂苷提取物人参皂苷提取物大孔树脂大孔树脂3 3、沉淀法：基于某些试剂与被测成分、沉淀法：基于某些试剂与被测成分或成分生成沉淀，保留溶液或分离沉淀或成分生成沉淀，保留溶液或分离沉淀得到净化的方法。得到净化的方法。沉淀剂沉淀剂提取溶液提取溶液三、鉴别：三、鉴别： 中药及其制剂的定性鉴别是利用各中药及其制剂的定性鉴别是利用各单味药材的形态、组织学特征及所含化单味药材的形态、组织学特征及所含化学成分的结构特性、化学反应、光谱特学成分的结构特性、化学反应、光谱特性、色谱特性及某
16、些物理化学常数来鉴性、色谱特性及某些物理化学常数来鉴别中药及其制剂的真伪及存在与否的分别中药及其制剂的真伪及存在与否的分析方法。析方法。四、检查：四、检查： （一）制剂通则检查（不同剂型）（一）制剂通则检查（不同剂型） （二）一般杂质检查（水分、灰分等）（二）一般杂质检查（水分、灰分等） （三）特殊杂质检查（三）特殊杂质检查 （四）微生物限度检查（四）微生物限度检查五、含量测定：五、含量测定： 是控制中药及其制剂内在质量的重是控制中药及其制剂内在质量的重要方法，测定对象应该是起主要作用的要方法，测定对象应该是起主要作用的有效成分或毒性成分，以保证临床用药有效成分或毒性成分，以保证临床用药的有效
17、性和安全性。的有效性和安全性。六、原始记录和检验报告六、原始记录和检验报告（一）原始记录：真实、完整、清晰、具体（一）原始记录：真实、完整、清晰、具体（二）检验报告：固定格式（二）检验报告：固定格式二、中药及其制剂的鉴别二、中药及其制剂的鉴别常用的方法：常用的方法： 1、来源（原植物、原动物和矿物）、来源（原植物、原动物和矿物）鉴定鉴定 2、性状鉴定、性状鉴定 3、显微鉴定、显微鉴定 4、理化鉴定、理化鉴定（一）来源鉴定（一）来源鉴定 来源鉴定就是应用植（动）物的分来源鉴定就是应用植（动）物的分类学知识，对中药的来源进行鉴定，确类学知识，对中药的来源进行鉴定，确定其正确的学名；应用矿物学的基本
18、知定其正确的学名；应用矿物学的基本知识，确定矿物中药的来源，以保证在应识，确定矿物中药的来源，以保证在应用中品种准确无误。用中品种准确无误。特点：特点：1、中药鉴定工作的基础，也是中药生产、中药鉴定工作的基础，也是中药生产和利用的依据。和利用的依据。2、主要适用于带花、果实、枝叶（或皮、主要适用于带花、果实、枝叶（或皮毛、骨骼）、昆虫和多数全草类等中药毛、骨骼）、昆虫和多数全草类等中药材的鉴定。材的鉴定。3、本方法需要有牢固的植物形态学和分、本方法需要有牢固的植物形态学和分类学知识。（经验性）类学知识。（经验性）（二）性状鉴别（二）性状鉴别 1、内容：、内容： 颜色、形态、形状、气、味等（制颜
19、色、形态、形状、气、味等（制剂）。剂）。 2、各种剂型的性状描述、各种剂型的性状描述 丸剂、散剂、滴丸剂等丸剂、散剂、滴丸剂等 例如：牛黄解毒片例如：牛黄解毒片“本品为素片或本品为素片或包衣片，素片或除去包衣的片心显棕黄包衣片，素片或除去包衣的片心显棕黄色；有冰片香气，味微苦、辛。色；有冰片香气，味微苦、辛。中国药典（中国药典（20102010年版）年版） 生晒山参：主根与根茎等长或较短，生晒山参：主根与根茎等长或较短，呈人字形、菱形、或圆柱形，长呈人字形、菱形、或圆柱形，长2 210cm.10cm.表面灰黄色表面灰黄色, ,具纵纹具纵纹, ,上端有紧密而深陷上端有紧密而深陷的环状横纹的环状横
20、纹, ,支根多为支根多为2 2条条, ,清晰不乱清晰不乱, ,有有明显的疣状突起明显的疣状突起, ,习称习称“珍珠疙瘩珍珠疙瘩”. .（三）显微鉴别（三）显微鉴别 中药的显微鉴别是利用显微镜来观中药的显微鉴别是利用显微镜来观察中药中的组织碎片、细胞或内含物等察中药中的组织碎片、细胞或内含物等特征，对中药及其制剂进行鉴别。特征，对中药及其制剂进行鉴别。 1、鉴别对象：（药材、含生药粉制剂、鉴别对象：（药材、含生药粉制剂）例如：丸剂、片剂、胶囊剂、散剂例如：丸剂、片剂、胶囊剂、散剂2、鉴别原则、鉴别原则（1 1）应选有专属性的特征进行鉴别）应选有专属性的特征进行鉴别（2 2）根据制剂工艺选择相应药
21、物特征进行）根据制剂工艺选择相应药物特征进行 鉴别鉴别 例如：牛黄解毒片例如：牛黄解毒片 大黄特征大黄特征3 3、特点：、特点： 快速，简便，覆盖面大，需要经验。快速，简便，覆盖面大，需要经验。4 4、制片方法：、制片方法：水合氯醛、甘油醋酸、水等水合氯醛、甘油醋酸、水等载玻片载玻片盖玻片盖玻片药物粉末药物粉末1、水牛角浓缩粉、水牛角浓缩粉2、麝香、麝香3、珍珠、珍珠4、朱砂、朱砂5、雄黄、雄黄6、黄连、黄连7、栀子、栀子8、郁金、郁金9、黄芩、黄芩安宫牛黄丸安宫牛黄丸理化鉴别理化鉴别（四）（四） 理化鉴别就是利用药材及其制剂中理化鉴别就是利用药材及其制剂中存在的某种成分的化学性质和物理性质，
22、存在的某种成分的化学性质和物理性质，通过物理的、化学的、或物理化学的方通过物理的、化学的、或物理化学的方法来鉴定药物的真伪和纯度以及内在质法来鉴定药物的真伪和纯度以及内在质量的方法。量的方法。 它经常配合来源鉴定，性状鉴定或它经常配合来源鉴定，性状鉴定或显微鉴定综合解决中药鉴定问题。显微鉴定综合解决中药鉴定问题。 采用方法：采用方法： 1、一般化学反应、一般化学反应 2、升华法、升华法 3、光谱法、光谱法 4、色谱法、色谱法（薄层色谱法最为常用）（薄层色谱法最为常用）（一）（一） 化学反应法化学反应法抗干扰能力差抗干扰能力差显色、显色、荧光、荧光 试试剂剂组组分分例例 二妙丸中苍术的鉴别二妙丸
23、中苍术的鉴别褪褪色色醚醚层层样样品品乙乙醚醚 4KMnO苍术酮苍术酮苍术炔苍术炔原理：原理：（二）升华法：（二）升华法：升华法升华法 鉴别中药及其制剂中某些具有升华鉴别中药及其制剂中某些具有升华性质的化学成分性质的化学成分 （游离香豆素、蒽醌类（游离香豆素、蒽醌类及其它）。例：大黄游离蒽醌、冰片、及其它）。例：大黄游离蒽醌、冰片、牡丹酚、咖啡碱等牡丹酚、咖啡碱等中国药典（中国药典（2010年版）：年版）： 牛黄解毒片：取本品牛黄解毒片：取本品1片，研细，进片，研细，进行微量升华，所得白色升华物（冰片），行微量升华，所得白色升华物（冰片），加新制加新制1%香草醛的浓硫酸液香草醛的浓硫酸液1-2滴
24、，液滴，液滴边缘显玫瑰红色滴边缘显玫瑰红色（三）（三）光谱法光谱法1 1、荧光法、荧光法（紫外光、日光下产生荧光的性质）（紫外光、日光下产生荧光的性质） 黄连：金黄色黄连：金黄色 大黄：深棕色大黄：深棕色 秦皮：天蓝色秦皮：天蓝色2 2、紫外、紫外- -可见分光光度法可见分光光度法（成分复杂、专属（成分复杂、专属性差、应用较少）性差、应用较少）3 3、红外分光光度法、红外分光光度法（此方面的应用只是处于（此方面的应用只是处于研究阶段）研究阶段）（四）（四）色谱法色谱法TLCTLC法法应用最多应用最多 （R Rf f、颜色、荧光）、颜色、荧光）GCGC法法适用于含挥发性成分适用于含挥发性成分 的
25、药物的药物 HPLCHPLC法法常与含量测定同时进行常与含量测定同时进行薄层色谱法：薄层色谱法： 将适宜的将适宜的吸附剂或载体吸附剂或载体涂布于玻璃涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。 在鉴定时，可取样品及对照品（化在鉴定时，可取样品及对照品（化学成分单体、粗提物或标准药材）按同学成分单体、粗提物或标准药材）按同样的方法，在相同条件下进行薄层展开样的方法，在相同条件下进行薄层展开和显色，比较二者所得层析图谱是否相和显色，比较二者所得层析图谱是否相同。同。（1）、吸附剂）、吸附剂薄层板的选择薄层板的选择 硅胶硅胶G G板（可加板（可加0.3% -0.5%
26、 CMC-Na0.3% -0.5% CMC-Na） 多用多用 氧化铝板氧化铝板 常用于生物碱类药物常用于生物碱类药物 聚酰胺板聚酰胺板 常用于黄酮类及酚类药物常用于黄酮类及酚类药物纤维素板纤维素板 常用于氨基酸类药物常用于氨基酸类药物 （2）、操作方法：）、操作方法：1、薄层板的制备：、薄层板的制备：1份吸附剂（硅胶份吸附剂（硅胶G）+3份水份水 糊状物糊状物 涂布器涂布器 涂布（均匀）涂布（均匀） 晾干，晾干，110C活化活化30分钟分钟2、样品液与对照品（对照药材）液的制备、样品液与对照品（对照药材）液的制备3、点样、展开、点样、展开4、检测：斑点显色方法、检测：斑点显色方法A本身有色本身
27、有色B紫外灯紫外灯观察荧光观察荧光C喷显色剂喷显色剂 点样点样毛毛 细管细管样品样品对照品或对照药材对照品或对照药材1-1.5cm点样方法：点样方法：1.5-2cm展开方法：展开方法：7-9 cm（3 3）对照物的选择：）对照物的选择： 对照品对照法：用已知中药及其制剂的对照品对照法：用已知中药及其制剂的某一有效成分或特征性成分对照品制成对某一有效成分或特征性成分对照品制成对照液，与样品在同一条件下层析，比较在照液，与样品在同一条件下层析，比较在相同位置上有无同一颜色（或荧光）的斑相同位置上有无同一颜色（或荧光）的斑点。点。对照品对照品例如：例如：延胡索延胡索 延胡索乙素延胡索乙素（镇痛）（镇
28、痛）黄连黄连 小檗碱（抗小檗碱（抗菌消炎）菌消炎）定义：定义： 中药材或中药制剂经适当处中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得理后，采用一定的分析手段，得到的能够标定该中药材或中药制到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的图谱剂特性的共有峰的图谱（四）中药鉴别新技术中药指（四）中药鉴别新技术中药指 纹图谱纹图谱2. 色谱指纹图谱的基本属性色谱指纹图谱的基本属性3. 指纹图谱的应用指纹图谱的应用IIIIII诃诃 子子小诃子小诃子大诃子大诃子绒毛诃子绒毛诃子雅莲云莲味莲味莲雅莲雅莲云莲云莲不同产地高良姜的气相指纹图谱不同产地高良姜的气相指纹图谱三、中药及其制剂的杂质检查三、中药及
29、其制剂的杂质检查 1 1、制剂通则检查、制剂通则检查 2 2、一般杂质检查、一般杂质检查 3 3、特殊杂质检查、特殊杂质检查 4 4、微生物检查、微生物检查杂质检查杂质检查水分水分总灰分和酸不溶性灰分总灰分和酸不溶性灰分重金属重金属砷盐砷盐残留农药残留农药 主要项目主要项目杂质来源及检查意义杂质来源及检查意义水分水分 结块、霉变或有效成分水解结块、霉变或有效成分水解灰分灰分 控制药物本身及泥土、沙石控制药物本身及泥土、沙石 等无机杂质等无机杂质砷盐砷盐 剧毒，常由除草剂、杀虫剂剧毒，常由除草剂、杀虫剂 或化肥引入或化肥引入重金属重金属 环境污染和使用农药引入环境污染和使用农药引入 残留农药残留
30、农药 有毒有毒1 1、烘干法（不含或少含挥发性成分）、烘干法（不含或少含挥发性成分）2 2、甲苯法、甲苯法 （含挥发性成分）（含挥发性成分）3 3、减压干燥法（含挥发性成分贵重药）、减压干燥法（含挥发性成分贵重药）4 4、GCGC法（中国药典法（中国药典 20002000年版）年版）（一）（一）水分测定法水分测定法注意事项：注意事项： 1、测定、测定用的样品，一般用的样品，一般先破碎成直径不先破碎成直径不超过超过3mm颗粒或颗粒或碎片。碎片。 2、甲苯、甲苯法中，甲苯事先法中，甲苯事先需用水饱和以后需用水饱和以后再用。再用。样品、样品、甲苯甲苯水分测定管水分测定管（二）（二）总灰分和酸不溶性灰
31、分的测定总灰分和酸不溶性灰分的测定 中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为由此所得灰分为“生理灰分生理灰分”- -总灰分总灰分 中药经高温炽灼后得到的总灰分加盐酸中药经高温炽灼后得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分处理，得到不溶于盐酸的灰分酸不溶性酸不溶性灰分（更能反映泥土砂石的杂质的量）灰分（更能反映泥土砂石的杂质的量）总灰分的测定总灰分的测定 灰灰化化恒恒重重炭炭化化供供试试品品已已恒恒重重坩坩埚埚600500酸不溶性灰分的测定酸不溶性灰分的测定 炭炭化化灰灰化化
32、过过滤滤总总灰灰分分已已恒恒重重坩坩埚埚HCldWHO规定植物药规定植物药铅铅10ppm镉镉0.3ppm干法破坏干法破坏湿法破坏湿法破坏硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法（三）（三）重金属的测定重金属的测定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质色的金属杂质（四）（四） 残留农药的测定（残留农药的测定（GC法）法）1、 有机磷农药有机磷农药2、 有机氯农药有机氯农药3、拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类四、中药及其制剂的含量测定四、中药及其制剂的含量测定 中国药典中药制剂含量测定所占比例中国药典中药制剂含量测定所占比例 版本版本 % 1977 1.48 1985 5
33、.31 1990 8.73 1995 12.81 2000 62.09 （HPLC 36% TLCS 24% GC 3%)测定项目的选定原则测定项目的选定原则1 首选君药及贵重药、剧毒药建立首选君药及贵重药、剧毒药建立 含量测定方法含量测定方法2 其次考虑臣药及其他味药其次考虑臣药及其他味药3 有效成分明确的，可选有效成分有效成分明确的，可选有效成分4 成分类别清楚的，可测某一类总成分类别清楚的，可测某一类总 成分的含量成分的含量5 检测成分应归属某单一药味检测成分应归属某单一药味6 检测成分应与中医用药的功能主检测成分应与中医用药的功能主 治相近治相近7 确无法含量测定的，可测定浸出确无法含
34、量测定的，可测定浸出 物含量物含量化学分析法化学分析法色谱法色谱法常用定量方法常用定量方法 分光光度法分光光度法（一）（一）化学分析法化学分析法重量分析法（挥发法、萃取法、沉淀法）重量分析法（挥发法、萃取法、沉淀法） 容量分析法（生物碱、有机酸类成分）容量分析法（生物碱、有机酸类成分）特点特点 A A、准确度、精密度高、准确度、精密度高 B B、抗干扰能力差、抗干扰能力差昆昆明明山山海海棠棠片片 HCl残渣残渣滤液滤液样品样品乙醇乙醇 OHNH23乙乙醚醚恒恒重重称称重重 例例总生物碱的测定总生物碱的测定（二）（二）分光光度法分光光度法UV法法 比色法比色法特点特点 A、灵敏度高、灵敏度高 B
35、、简便、快速、简便、快速 C、精密度稍低、精密度稍低 D、干扰多、干扰多 比色法含量测定方法的计算（利用比尔比色法含量测定方法的计算（利用比尔-朗伯原理）朗伯原理） 取水杨酸钠对照品用适量溶剂配成取水杨酸钠对照品用适量溶剂配成10g/ml的对照液。另的对照液。另取水杨酸钠取水杨酸钠60mg，用适当溶剂配成，用适当溶剂配成100ml供试品溶液。在供试品溶液。在320nm波长处测定吸收度，对照液为波长处测定吸收度，对照液为0.510，供试液为，供试液为0.483，计算该药百分含量？计算该药百分含量？芦丁芦丁nm,max359299266259 黄芩苷黄芩苷nm,max314271240 小檗碱小檗
36、碱 nm,max360350345 丹皮酚丹皮酚nmmax274 （三）（三）TLCS法法 测定薄层板上斑点对单色光的吸测定薄层板上斑点对单色光的吸收或反射的强度而进行定量的方法收或反射的强度而进行定量的方法特点特点 A、分离效果好、分离效果好 B、适用于无法用、适用于无法用UV、HPLC 法测定的组分法测定的组分 C、准确度、精密度低于、准确度、精密度低于HPLC1、 选择测定条件选择测定条件（1）薄层色谱条件）薄层色谱条件 分离好分离好 不拖尾不拖尾（2）检测方法）检测方法吸收测定法吸收测定法荧光测定法荧光测定法反射法反射法透射法透射法（3）扫描方式）扫描方式 单波长单波长双波长双波长线性
37、扫描法线性扫描法锯齿扫描法锯齿扫描法外标法外标法内标法内标法（1）薄层板）薄层板 均匀、平整均匀、平整2、 注意事项注意事项（2）点样量）点样量 准确准确（4）显色剂）显色剂 均匀、适当均匀、适当（5）保护斑点）保护斑点 用相同大小洁净玻璃用相同大小洁净玻璃盖住薄层板，并用透明胶纸封住边缘，盖住薄层板，并用透明胶纸封住边缘，以起固定和隔绝空气作用以起固定和隔绝空气作用（3）斑点）斑点 应完全分离，不拖尾应完全分离，不拖尾（四）（四）HPLC法法 在中药及其制剂分析中，在中药及其制剂分析中，HPLCHPLC法已经法已经广泛应用于药物中有效成分或生理活性物广泛应用于药物中有效成分或生理活性物质的含
38、量测定，是最常用的定量分析方法质的含量测定，是最常用的定量分析方法色色谱谱泵泵及及控控制制器器数数据据处处理理及及控控制制进进样样器器色色谱谱柱柱检检测测器器W a te rs 4 8 6一、实验条件的选择：一、实验条件的选择：1、色谱柱的选择：、色谱柱的选择： C18反相柱（反相柱（ ODS柱）、柱）、C8反相柱、正相分配色谱柱反相柱、正相分配色谱柱(氨基柱等）。氨基柱等）。2、流动相的选择：反相键合相为例、流动相的选择：反相键合相为例（1）部分含水溶剂：以水为基础溶剂，再加入一定量可）部分含水溶剂：以水为基础溶剂，再加入一定量可与水互溶的有机极性调节剂（如甲醇、乙腈等）。甲醇与水互溶的有机
39、极性调节剂（如甲醇、乙腈等）。甲醇-水、乙腈水、乙腈-水系统。适用于中等极性、弱极性的药物。水系统。适用于中等极性、弱极性的药物。（2）缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的药物）缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的药物（弱酸、弱碱、蛋白质、肽类等）。常用缓冲液：磷酸（弱酸、弱碱、蛋白质、肽类等）。常用缓冲液：磷酸盐、醋酸盐等。盐、醋酸盐等。（3）非水溶剂：用于非极性物质）非水溶剂：用于非极性物质。3、洗脱方式：、洗脱方式：（1）等度洗脱：在同一分析周期内流动相的）等度洗脱：在同一分析周期内流动相的组成保持恒定。适用于组分数较少、性质差别组成保持恒定。适用于组分数较少、性质差别不大的样品
40、。不大的样品。（2）梯度洗脱：在同一分析周期内程序控制）梯度洗脱：在同一分析周期内程序控制流动相的组成（溶剂极性、流动相的组成（溶剂极性、pH值等）值等） 适用于组分数多、性质差别大的复杂混合适用于组分数多、性质差别大的复杂混合物样品。物样品。4、检测器：、检测器：（1）紫外检测器（）紫外检测器（UV）：应用最普遍）：应用最普遍。 灵敏度高、噪音低、线性范围宽等优点。只能用于灵敏度高、噪音低、线性范围宽等优点。只能用于检测有紫外吸收的药物。检测有紫外吸收的药物。 可变波长型可变波长型 、二极管阵列检测器（色谱、紫外光、二极管阵列检测器（色谱、紫外光谱图）谱图）（2）蒸发光散射检测器（）蒸发光散
41、射检测器（ELSD）：通用型检测器。）：通用型检测器。 主要用于糖类、生物碱类、三萜类、甾提类等挥主要用于糖类、生物碱类、三萜类、甾提类等挥发性低的物质。灵敏度稍低，流动相中不能含缓冲盐。发性低的物质。灵敏度稍低，流动相中不能含缓冲盐。（3）示差折光检测器（）示差折光检测器（RID）：通用型，利用组分与）：通用型，利用组分与流动相折射率之差进行检测。（用于糖类物质）流动相折射率之差进行检测。（用于糖类物质）二、二、HPLC常用色谱法：常用色谱法： 键合相色谱法：化学键合相为固定相的色谱法，由键合相色谱法：化学键合相为固定相的色谱法，由液液-液分配色谱发展而来，分离机制以分配作用为主。液分配色谱
42、发展而来，分离机制以分配作用为主。（1）反相键合相色谱：非极性键合相，根据键合基团的）反相键合相色谱：非极性键合相，根据键合基团的不同：不同：18烷基键合相（烷基键合相（ODS或或C18）应用最广）应用最广 常用流动相：甲醇常用流动相：甲醇-水系统水系统（2）正相键合相色谱：极性键合相。）正相键合相色谱：极性键合相。 氰基（氰基（-CN）：双键异构体或双键不等的环状化合）：双键异构体或双键不等的环状化合物物 氨基（氨基（-NH2）：糖类专用色谱柱）：糖类专用色谱柱常用流动相：正己烷加适量极性调整剂。常用流动相：正己烷加适量极性调整剂。五、中药制剂中各类化学成分分析五、中药制剂中各类化学成分分析
43、生物碱类药物的分析生物碱类药物的分析 一、生物碱（一、生物碱（Alkaloids） 生物碱是生物体内含氮有机化合生物碱是生物体内含氮有机化合物的总称（氨基酸、蛋白质和物的总称（氨基酸、蛋白质和B族维族维生素除外）生素除外）典型药物的结构 小檗碱 OH-+NOOCH3OCH3OpKb=2.5麻黄碱 CCCH3OH NHCH3HHpKb=4.42阿托品 NCH3OCOCHCH2OHpKb=4.35NNNNCH3CH3OO 茶碱H二、生物碱类的理化性质二、生物碱类的理化性质（一）物理性质（一）物理性质：1.形态形态为结晶固体，少为粉末；有熔点。为结晶固体，少为粉末；有熔点。 少数常温下少数常温下液体
44、（多不含氧，若含多成多酯键液体（多不含氧，若含多成多酯键）2.颜色颜色多为无色或白色，少数有色（共轭结构、助多为无色或白色，少数有色（共轭结构、助色团存在）。色团存在）。3.挥发性、升华性挥发性、升华性多无，少数具有。多无，少数具有。例：麻黄碱：挥发性；例：麻黄碱：挥发性； 咖啡因：升华性咖啡因：升华性4.旋光性旋光性多为左旋光性。多为左旋光性。 多数左旋体呈显著生理活性多数左旋体呈显著生理活性6.溶解度溶解度 (1)游离碱游离碱*酸、碱均为1%。 类别 极性 溶解性 H2O CHCl3 H+ OH-非酚性 较弱 脂溶性 + + 季铵碱 强 水溶性 + + + 氮氧化物 半极性 中等水溶 +
45、+ +氯仿、乙醚、乙醇、丙酮、苯等氯仿、乙醚、乙醇、丙酮、苯等(2)成盐成盐Alk 多易溶于水，不溶或难溶有机溶剂。多易溶于水，不溶或难溶有机溶剂。 含氧酸盐的水溶性往往较大。含氧酸盐的水溶性往往较大。 与大分子有机酸所形成的盐水溶性差与大分子有机酸所形成的盐水溶性差 与小分子有机酸或无机酸成盐水溶性较好。与小分子有机酸或无机酸成盐水溶性较好。（二）化学性质：（二）化学性质：1、碱性、碱性N:N:H+ H+生物碱生物碱盐H+生物碱 + 生物碱沉淀试剂2 2、沉淀反应：、沉淀反应：常用的生物碱沉淀试剂为：常用的生物碱沉淀试剂为： 1. 重金属盐类，如重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、I2K
46、I、二氯化汞等；二氯化汞等； 2. 大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。用途： 鉴别试管、TLC或PPC显色剂； 提取分离检查是否提取完全。3、显色反应、显色反应（一）双缩脲反应（一）双缩脲反应 侧链具有氨基醇结构侧链具有氨基醇结构 水层 兰色醚层 紫红色乙醚紫堇色OH-CuSO4+盐酸麻黄碱盐酸伪麻黄碱麻黄碱 CCCH3OH NHCH3HH（二）Vitali反应 托烷生物碱托烷生物碱 硫酸阿托品+发烟HNO3黄色醇制KOH深紫色氢溴酸山莨菪碱阿托品 NCH3OCOCHCH2OH三、生物碱类的定性鉴别三、生物碱类的定性鉴别（一）一般理化鉴别：主要应用沉淀反应的化（一
47、）一般理化鉴别：主要应用沉淀反应的化学性质。学性质。 沉淀试剂：沉淀试剂：K2HgI4、KBiI4、I2KI 条条 件：酸性条水溶液件：酸性条水溶液 注注 意：蛋白质、多肽和鞣质干扰。意：蛋白质、多肽和鞣质干扰。例：马钱子散中生物碱成分的鉴别例：马钱子散中生物碱成分的鉴别 主要组成：马钱子、地龙主要组成：马钱子、地龙鉴别：取马钱子散鉴别：取马钱子散1 1克，加浓氨试液数滴及氯克，加浓氨试液数滴及氯仿仿1010毫升，浸泡数小时，滤过，蒸干，残渣加毫升，浸泡数小时，滤过，蒸干，残渣加1 1毫升稀盐酸溶解，加碘化铋钾毫升稀盐酸溶解，加碘化铋钾1-21-2滴，生成黄滴，生成黄棕色沉淀。棕色沉淀。（二）
48、、色谱鉴别：（二）、色谱鉴别： 1、薄层色谱法、薄层色谱法 2、纸色谱法、纸色谱法 3、高效液相色谱法、高效液相色谱法 常用吸附剂常用吸附剂： （1 1）氧化铝）氧化铝 （2）硅胶 硅胶为吸附剂：弱游离生物碱能顺利迁移，强生硅胶为吸附剂：弱游离生物碱能顺利迁移，强生物碱形成盐类吸附太牢，造成严重拖尾或物碱形成盐类吸附太牢，造成严重拖尾或Rf 值小。值小。 解决方法：在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、解决方法：在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、二乙胺、有机脂烃胺类二乙胺、有机脂烃胺类 显色方法：常用显色剂显色方法：常用显色剂-改良碘化铋钾试剂相改良碘化铋钾试剂相应斑点显橘红色。应斑点显橘红色。四
49、、含量测定四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（一）总生物碱的含量测定1、化学分析法、化学分析法2、分光光度法、分光光度法（二）单体生物碱的含量测定（二）单体生物碱的含量测定高效液相色谱法高效液相色谱法生物碱的提取与纯化：生物碱的提取与纯化：（一）原理与方法 生物碱盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂游离生物碱不溶于水，易溶于有机溶剂依据性质中和法测定有机层（B）水层有机溶剂OH-sol过滤sol(BH+)稀酸或H2O游离生物碱或生物碱盐类1. 碱化2. 有机溶剂提取容量分析测定容量分析测定 ： 终点酸滴定液滴定）（中性乙醇）残渣（，蒸干）有机层（BsolBB（1）直接滴定法直接滴定法 用于碱性较强
50、的生物碱用于碱性较强的生物碱 （2 2）剩余滴定法）剩余滴定法 用于碱性较弱的生物碱用于碱性较弱的生物碱 终点碱滴定液滴定）（定量过量的酸标准溶液）残渣（，蒸干）有机层（HBHsolBB1. 碱化试剂 最常用氨水最常用氨水 2. 提取溶剂 （1）提取溶剂选择的原则）提取溶剂选择的原则（2）常用的提取溶剂）常用的提取溶剂 最常用氯仿最常用氯仿（二）测定条件的选择（二）测定条件的选择（3）提取溶剂的用量及提取次数）提取溶剂的用量及提取次数 通常应提取通常应提取4次，第一次用量至次，第一次用量至少应为水液体积的一半，以后几次应少应为水液体积的一半，以后几次应各为第一次的一半各为第一次的一半 3. 提
