1、产 筛 实 验 室 检教学技能培训小讲座六盘水市人民医院检验科查10105040203产筛背景介绍产筛血清学检测指标产筛实验室检测产筛报告分析影响因素2LOGOTEXT HERE第一部分产筛背景介绍出生缺陷唐氏综合症18-三体综合征开放性神经管缺陷3LOGOTEXT HERE产前筛查产前筛查是指通过简便、经济和较少创伤的检测方法，从孕妇群体中发现某些怀疑有先天性缺陷或遗传性疾病胎儿的高危孕妇，以便进一步明确诊断。4LOGOTEXT HERE出生缺陷出生缺陷又称先天缺陷，是指由于先天性、遗传性和不良环境等原因引起的出生时存在的各种结构性畸形和功能性异常的总称。我国是人口大国，也是缺陷和残疾高发国
2、家,每年约有2030万肉眼可见先天畸形儿出生，加上出生后数月或数年才显现出来的缺陷，先天残疾儿总数竟高达80120万，约占我国每年出生人口总数的4%6%。 5LOGOTEXT HERE常见出生缺陷神经系统畸形：无脑畸形、脑膨出、脊柱裂、先天性脑积水等遗传代谢病及多发畸形：21-三体综合征、苯丙酮尿症等头部器官畸形：先天性白内障、小眼畸形等腹壁缺损及疝：腹裂畸形、脐膨出、脐疝等消化系统畸形：腭裂、唇裂、食道闭锁、狭窄和食道气管瘘等先天性心脏病：房、室间隔缺损、法洛四联症等泌尿生殖系统畸形：尿道下裂、先天性肾囊肿、隐睾、外生殖器两性畸形。四肢畸形：足变形、多指（趾）畸形等皮肤畸形：血管瘤、色素痣；
3、6LOGOTEXT HERE唐氏综合症唐氏综合征，又名唐氏综合征，又名2121三体综合征，是一三体综合征，是一种人类最常见的染色体异常引起的疾病。种人类最常见的染色体异常引起的疾病。发病率约为发病率约为1 1：6006001 1：8008002121三体综合征的临床特征：三体综合征的临床特征： 先天性智力障碍先天性智力障碍特殊面容、精神、体格发育迟滞特殊面容、精神、体格发育迟滞器官组织的多发性畸形器官组织的多发性畸形 ( (心脏心脏, , 消化消化道等道等) )7LOGOTEXT HERE临床表现痴呆面容痴呆面容两眼间距增宽、塌鼻梁，婴幼儿时常张口伸舌。智力低下智力低下 患者智商通常在2550
4、之间，常有语言发育障碍，抽象思维能力差。大多数患儿1 周岁后方能坐起、3岁时才开始走路。生育能力几乎丧失生育能力几乎丧失男性患者无生育能力，女性少数能妊娠和生育。先天多发畸形先天多发畸形 枕部扁平，小头、裂唇、裂腭。四肢软而无力，通贯手，小指内弯、第二节缺如。约50患者有先天性心脏病，常见室间隔缺损、房室通道、房间隔缺损和动脉导管未闭。8LOGOTEXT HERE18-三体综合征也称为也称为Edward综合征综合征 9LOGOTEXT HERE18-三体综合征生长发育迟缓，严重智力低下。多数在出生后一岁内死亡，极少数活到儿童期唇裂或腭裂，全身骨骼发育异常。特殊握拳姿势，手指弓形纹增多，1/3为
5、贯通掌“摇椅样畸形足”特殊特殊面容面容特殊特殊面容面容 多发多发 畸形畸形 临床表现眼间距宽、眼裂小、内 眦 赘 皮 ， 耳 廓 畸形低位。10LOGOTEXT HERE开放性神经管缺陷神经管缺陷是一类中枢神经系统的出生缺陷，是一种多基因遗传病，是从胚胎时期发育时神经管不能闭合所致的畸形。临床上的主要表现有无脑儿、开放性脊柱裂、闭合性脊柱裂、脑膨出等。胎儿常在围产期死亡，即使存活下来也有严重的功能障碍，不能正常生活。11LOGOTEXT HERE产筛必要性我国目前每年新生儿2000万，其中有13-20的先天性缺陷患儿21-三体综合征、18-三体综合征，神经管畸形，危害非常严重，而且发病率较高，
6、据统计三种疾病的发病率如下表疾病疾病发病率发病率21-三体（唐氏综合症）1/800开放性神经管1/1800无脑畸形1/180018-三体（爱德华氏）1/3500我国约为1/600-1/800；我国新生儿年出生约为2000万，则每年新增唐氏儿27000余名12LOGOTEXT HERE产筛必要性据统计我国每出生一例唐氏患儿将给社会造成25万元左右的经济负担。每年政府将支付67.5亿元左右的经费用于患儿的医疗、生活、和社会救济。同时对患儿的家庭造成长期沉重的精神负担和经济压力，对我们国家的人口素质、国民经济发展以及社会稳定都会产生重大的影响，由此可见唐氏综合征已成为影响我国国民经济发展和出生人口素
7、质的重要因素之一。如何在产前发现唐氏综合征胎儿，防止和减少唐氏综合征胎儿的出生，是当前优生和产前诊断的重要任务。由于这些缺陷缺乏有效的治疗手段，患儿的出生给家庭和社会带来了众多的不良影响。综上所述，进行产前筛查对提高出生人口质量来讲具有特殊重要综上所述，进行产前筛查对提高出生人口质量来讲具有特殊重要性。性。13LOGOTEXT HERE第二部分产前筛查血清学指标PAPP-AAFPF- HCGE3抑制素A14LOGOTEXT HERE产前筛查血清学检查产前筛查血清学检查是通过孕期母体血清甲胎蛋白（AFP）、血清人绒毛膜促性腺激素（HCG）、血清人绒毛膜促性腺激素游离亚基（F- HCG）、抑制素A
8、、妊娠相关蛋白A（PAPP-A）和非结合雌三醇（E3）指标结合孕妇的年龄、体重、孕周、病史等进行综合风险评估，得出胎儿罹患唐氏综合症、18-三体综合征和开放性神经管缺陷的风险。15LOGOTEXT HERE产前筛查血清学指标1PAPP-A PAPP-A是一个大分子蛋白复合物，产生于胎盘，孕3-4周即可在母体中检出，其后随着孕周的增多而增高。在早孕期为异常胎儿表现为降低异常16LOGOTEXT HERE产前筛查血清学指标2AFP AFP是来源于胎儿肝脏和卵黄囊的一种糖蛋白，从妊娠7周起浓度逐渐升高，至28-32周达到高峰，少量AFP经肾脏排泄进入羊水，并通过胎盘屏障进入母亲血液循环中。唐氏儿和1
9、8三体患儿.由于肝脏发育不全，AFP合成减少，所以母血中相应减少，怀有21-三体综合征胎儿的孕妇其血清AFP水平为正常孕妇的70%。 开放性神经管缺陷患儿由于无脑畸形和脊柱裂的发生，AFP可大量进入羊水中，使母体血液循环中的AFP浓度增加。17LOGOTEXT HERE产前筛查血清学指标3F-HCG HCG 是由胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，孕妇血清中HCG主要以完整形式存在，游离-HCG约占18%。唐氏的胎盘较正常成熟晚，所以HCG水平升高，患儿的母亲血清游离-HCG较正常孕妇增加。18LOGOTEXT HERE产前筛查血清学指标4E3 E3是由胎儿肾上腺和肝脏合成的甾体类激素，它以游
10、离形式直接由胎盘分泌入母血。随孕周的增长而不断升高。唐氏儿的肾上腺皮质发育不良，导致UE3的前体-硫酸脱氢表雄酮的合成减少，从而使UE3减少。19LOGOTEXT HERE产前筛查血清学指标5抑制素A抑制素A是一个异二聚体的糖蛋白的激素，由女性卵巢的颗粒细胞分泌。抑制素A在孕10-12周时增加并达到高峰，在妊娠中期下降成一个平台，但到妊娠晚期时再一次升高，足月时达最高水平。和HCG一样在唐氏综合症胎儿的母体血清抑制素A水平高于正常妊娠孕妇水平。抑制素在母体的血清浓度不依赖于HCG浓度的变化20LOGOTEXT HERE产前筛查血清学指标危险增加危险增加PAPP-AAFPF-HCG E3唐氏综合
11、症18-三体ONTD 孕妇筛查指标与胎儿畸形的关系21LOGOTEXT HERE产前筛查方案孕早期： PAPP-A + Free -hCG孕中期： AFP + hCG AFP + Free -hCG孕早期： PAPP-A + Free -hCG + NT 孕中期： AFP + hCG + uE3 AFP + Free -hCG + uE3 AFP + hCG + uE3 + Inhibin A AFP + Free -hCG + uE3 + Inhibin A二联法四联法三联法22LOGOTEXT HERE产筛检出率要求1二联筛查23三联筛查四联筛查唐氏综合征：检出率60%,假阳性率8%;18
12、-三体综合征：检出率80%,假阳性率5%:开放性神经管缺陷(ONTD)：检出率85%6,假阳性率5%唐氏综合征：检出率70%,假阳性率5%; 18一三体综合征：检出率85%,假阳性率5%; 开放性神经管缺陷(ONTD)：检出率85%,假阳性率5%唐氏综合征：检出率80%,假阳性率5%; 18一三体综合征：检出率85%,假阳性率1%; 开放性神经管缺陷(ONTD)：检出率85%,假阳性率5%23LOGOTEXT HERE第三部分产筛实验室检测仪器试剂方法原理标本采集与接收样本检测报告发放资料保存24LOGOTEXT HERE仪器25LOGOTEXT HERE试剂组成灰色盖子生物素化的单克隆抗体黑
13、色盖子钌标记单克隆抗体透明盖子包被链酶亲和素的磁珠微粒罗氏提供原装配套试剂：26LOGOTEXT HERE免疫技术的发展放射免疫测定法放射免疫测定法 酶免疫测定法酶免疫测定法化学发光免疫测化学发光免疫测定法定法）电化学发光免疫测电化学发光免疫测定法定法27LOGOTEXT HERE电化学发光反应原理电化学发光反应原理28LOGOTEXT HERE以甲胎蛋白（以甲胎蛋白（AFP）检测检测方法原理方法原理第一步第二步第三步第四步第二步：加入链酶亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链酶亲和素间的反应结合到微粒上。第一步：10L标本、生物素化的抗AFP单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗AFP单
14、克隆抗体混匀，形成夹心复合物。第三步：反应混合液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果有机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校 正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。1324操作步骤：29LOGOTEXT HERE 采集孕妇外周血2-3ml，不抗凝，无需空腹。采集标本后应在采血管标签上写明患者的姓名、采血时间及唯一标识号（此步骤主要由妇产科门诊完成）样本采集样本采集30LOGOTEXT HERE标本接收123 样本接收时，认真核对送检单各项目填写是否完整、准确；是否已签署知情同意书和填
15、报产前筛查申请单。对送检的使用抗凝剂的标本，溶血、高脂血等标本拒收对申请单项目填写不完整者，应询问孕妇后补填相关信息，若孕妇不能提供准确信息者拒收31LOGOTEXT HERE标本接收32LOGOTEXT HERE样本检测标本处理样本上机仪器准备校准质控样本检测 1.样本编号：在采血管及申请单上编号2.样本离心：2000rpm10分钟分离血清备用（离心后观察标本是否有溶血、脂血情况）试验记录：应包括实验室温度、湿度、仪器运行情况、试剂充足与否等校准方法：全点，校准品为罗氏提供的两个水平质控检测：质控品为罗氏提供的两个水平PCU1和PCU2按e601操作规程编程上机注意：质控应和样本同批上机检测
16、，质控品测定值在参考范围内，方可确定标本的测定值123433LOGOTEXT HERE报告发放a.将仪器所测结果与申请单上相关信息录入产筛分析软件，软件自动得出所筛查疾病风险率34LOGOTEXT HERE报告发放b.所得筛查结果以书面形式发放，结果必须经副高以上 职称的具有从事产前诊断技术人员复核后方可发放。c.筛查报告应包括 所有生化标记物的绝对值 MOM值 风险度 阳性结果与高风险切值 有关说明:低风险或阴性的报告(1/270),只表 明你的胎儿发生该种先 天异常的机会很低,并 不能排除这种异常或其他异常的可能性。高风 险也并不是确诊,须进一步羊水穿刺细胞遗传学 检查以确定诊断。 有相关
17、的提议和建议:包括21三体、18三体、NTD及高龄孕妇的提议与建议。35LOGOTEXT HERE资料保存资料保存血清保存申请单保存产筛数据保存血清收集到离心管注明姓名及标号后保存至-40 冰箱（一个月集中一次），以备复查。剩余样本管保存至2-8 冰箱1周后高压消毒有专门人员运送离开申请单保存至专门存放处（一个月集中装订一次）血清与申请单编唯一标识号：年月日+编号。例如：2018年5月7日所检标本第一个编号为201805070001所得实验数据记录与申请单按要求均应保存5年以上36LOGOTEXT HERE资料保存37LOGOTEXT HERE第四部分报告单分析检测结果的换算风险率的表达高危孕
18、妇的处理38LOGOTEXT HERE报告单分析将检测到的标本标记物浓度转化为相应孕周的中位数倍数( mui tiple of medium,MOM), 结合孕妇的年龄、孕周、体重等资料,使用专门的风险计算软件分别计算胎儿罹患唐氏综合症、18-三体综合征和开放性神经管缺陷( open neural tube defects,ONTD)的风险。唐氏综合症、18-三体综合征的风险率以1/n的方式来表示， 意味着出生的某一患儿存在1/n的可能性。开放性神经管缺陷筛查结果可以风险率(1/n)的方式来表示,也可以高风 险或低风险表示。对高危孕妇提出相应意见与建议年龄 35岁唐氏 1/27018-三体1/
19、350AFP 2.5MOM39LOGOTEXT HERE报告单分析统计学名词，是指将数据按大小顺序排列起来，形成一个数列，居于数列中间位置的那个数据。小知识中位数中位数值的倍数，指产前筛查中，孕妇个体的血清标志物的检测结果是正常孕妇群在该孕周时血清标志物浓度中位数的倍数。MOM值用1/n表示，意味着出生某一患儿存在1/n的可能性，n值越大患病风险越低，n值越小患病风险越高。风险率40LOGOTEXT HERE产前诊断产前诊断超声排查超声排查及时通知及时通知跟踪观察跟踪观察 终止妊娠年龄 35岁唐氏 1/27018-三体1/350AFP 2.5MOM高危孕妇的处理41LOGOTEXT HERE第
20、五部分注意事项42LOGOTEXT HERE注意事项1、孕周的确定: 当被检测孕妇的血清标记物（AFP、-HCG、PAPP-A）数值异常时（过高或过低），应特别注意孕周的确定是否准确。建议应采用B超确定孕周，排除由此引起的误差。 （1）末次月经(LMP)： 以末次月经第一天来计算是最常用的方法之一；43LOGOTEXT HERE注意事项（2）B超(B超下的双顶径BPD)： 当孕周14周，末次月经日期不肯定或末次月经所记妊娠周数与临床医生检查结果不符时，推荐用B超下的BPD来确定孕周.在妊娠的这个时期，B超下BPD决定孕周准确性在10天以内，与LMP决定的孕周相比，提高了母血清筛查的敏感性，降低
21、了假阳性的数目。 一般来讲，脊柱裂病例的BPD较正常胎儿小2周，用BPD调整后的孕周，改进了用母血清AFP筛查脊柱裂的敏感性。不推荐用B超测量的股骨或弘骨长度来估计胎龄，因为唐氏综合征时，这些长骨可能变短。 当孕周14周，采用CRL确定孕周。44LOGOTEXT HERE注意事项2、所有异常实验结果的病人都应该推荐进行遗传咨询。 咨询内容为是否应复查一次，异常胎儿风险大小、病人可以有的选择如B超，产前诊断等。 尽管产前筛查所用检测方法与临床检验类似，但其结果的解释与一般临检不同，筛查结果和胎儿异常的风险预测有关，要求咨询医生给病人解释风险及提出可能的选择。 45LOGOTEXT HERE注意事
22、项3、 孕周的计算采用三舍四入的方法（如17周+3天=17周，17周+4天=18周）。4、 各个实验室正常的中位值应计算修正。（1）正常值应是取每个孕周300-500个样本的中位数。正常值应每年计算一次，或当实验中对照的样本值偏差10%。（2）尽管商业的试剂盒通常提供正常值，但只应短期内使用。有经验表明，同一试剂盒在不同实验室可以有不同的正常值。46LOGOTEXT HERE注意事项5、 校正：（1） 种族差异的校正；（2）孕妇的体重校正，因为重的妇女较轻的妇女母血清AFP值低；（3） 孕妇为胰岛素依赖性糖尿病时须进行校正，因为胰岛素依赖性糖尿病孕妇的AFP值较正常人低。 而且此类孕妇生育神经管缺陷（NTD）胎儿的风险比正常人高出10倍以上。 但是，妊娠性糖尿病孕妇不需要进行矫正。47感 谢 聆 听48
