1、 脂质体制备技术脂质体制备技术 药剂教研室药剂教研室 吴琳华吴琳华内容提要n脂质体的概念脂质体的概念n脂质体的组成、结构、理化性质脂质体的组成、结构、理化性质与分类与分类n脂质体的制备方法脂质体的制备方法 n脂质体的质量研究脂质体的质量研究n特殊性能脂质体特殊性能脂质体n脂质体的作用机理脂质体的作用机理n脂质体的特点脂质体的特点第一第一节节概概述述 将将药物药物包封于包封于类脂质双分子类脂质双分子层层内而形成的内而形成的微型囊泡微型囊泡。脂质体的研究进展脂质体的研究进展n19651965年，英国年，英国BanghanBanghan作为研究作为研究生物膜的模型生物膜的模型提出的。提出的。n202
2、0世纪世纪7070年代初期，年代初期，GregoriadisGregoriadis首先提出用首先提出用脂质体作为脂质体作为-半乳糖苷酶半乳糖苷酶载体治疗糖原积累载体治疗糖原积累疾病。疾病。 脂质体的研究进展脂质体的研究进展n第一个第一个药用脂质体药用脂质体制剂制剂(1988(1988年年, ,瑞士瑞士) ) 益康唑脂质体凝胶益康唑脂质体凝胶n第一个第一个脂质体注射剂脂质体注射剂( (19901990年美国年美国) ) 两性霉素两性霉素B B脂质体脂质体n第一个第一个抗癌药物脂质体抗癌药物脂质体( (19951995年，美国年，美国) ) 阿柔比星脂质体阿柔比星脂质体一、脂质体的组成一、脂质体的
3、组成磷脂磷脂亲水的头部亲水的头部磷酸骨架磷酸骨架水溶性分子水溶性分子（胆碱、丝氨酸胆碱、丝氨酸等等）疏水的尾部疏水的尾部胆固醇胆固醇脂质体脂质体第二节第二节 脂质体的组成、结构、理化性质与分类脂质体的组成、结构、理化性质与分类两条脂肪酸链，两条脂肪酸链，（10-24个个C原子，原子，0-6个双键）个双键） 磷脂示意图磷脂示意图脂质体的组成脂质体的组成OH胆固醇的结构图胆固醇的结构图脂质体材料脂质体材料中性磷脂中性磷脂 负电荷磷脂负电荷磷脂（酸性磷脂）（酸性磷脂）正电荷正电荷脂质脂质 胆固醇（胆固醇（Ch)Ch)大豆甾醇及其葡萄糖苷大豆甾醇及其葡萄糖苷磷脂酰胆碱磷脂酰胆碱（PCPC）磷脂酰乙醇胺
4、（磷脂酰乙醇胺（PEPE）鞘磷脂（鞘磷脂（SM）磷脂酸（磷脂酸（PAPA）磷脂酰甘油（磷脂酰甘油（PGPG）磷脂酰肌醇磷脂酰肌醇 (PI)(PI)磷脂酰丝氨酸磷脂酰丝氨酸(PS(PS) )硬脂酰胺（硬脂酰胺（SASA）胆固醇衍生物胆固醇衍生物大豆甾醇葡萄糖苷大豆甾醇葡萄糖苷(SG(SG）大豆甾醇大豆甾醇SSSS脂质体的组成脂质体的组成1 1、中性磷脂、中性磷脂磷脂酰胆碱磷脂酰胆碱(phosphatidyl choline,PCPC，)天然的天然的PC PC a.a. 脂质体的主要组成部分脂质体的主要组成部分b.b. 从蛋黄、大豆、牛心脏和脊髓提取从蛋黄、大豆、牛心脏和脊髓提取c.c.是一种混合
5、物，每一种是一种混合物，每一种PCPC具有不同长度、不同饱和度的脂肪链。具有不同长度、不同饱和度的脂肪链。 植物性植物性PCPC的脂肪链具有的脂肪链具有高度不饱和性高度不饱和性 动物性动物性PCPC的脂肪链大部分是的脂肪链大部分是饱和的饱和的合成的合成的PCPC 二棕榈酰胆碱（二棕榈酰胆碱（DPPC)DPPC)、二硬脂酰胆碱、二硬脂酰胆碱(DSPC)(DSPC) 二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC) DMPC) 脂质体的组成脂质体的组成（中性磷脂）（中性磷脂）脂质体的组成脂质体的组成（中性磷脂）（中性磷脂）POOOOOOORRONCH3CH3CH3+磷脂酰胆碱磷脂酰胆碱(PC
6、)(PC)(a)(a)全饱和磷脂全饱和磷脂 （紧密排列）（紧密排列）(b)(b)非饱和磷脂非饱和磷脂（不能紧密列）（不能紧密列）磷脂脂肪链的饱和度对磷脂膜排列的影响磷脂脂肪链的饱和度对磷脂膜排列的影响脂质体的组成脂质体的组成（中性磷脂）中性磷脂） POOOOOOORRONH3+ 磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺(phosphatid ethanolamine, PE)特性特性; ; 头部基团小；头部基团小； 非饱和非饱和的的PEPE容易形成非双层结构型容易形成非双层结构型 形成形成六角相六角相（制备特殊脂质体）（制备特殊脂质体）六角相六角相 磷脂酰乙醇胺（磷脂酰乙醇胺（PEPE）鞘磷脂鞘磷脂（sphi
7、ngomyelin,sphingomyelin,SMSM） 特性：特性：酰胺键和羟基基团之间形酰胺键和羟基基团之间形成氢键相互作用，因此，比成氢键相互作用，因此，比PCPC具具有更高秩序的胶相。有更高秩序的胶相。 脂质体的组成脂质体的组成（中性磷脂（中性磷脂）SMSMPOOOON HORNC H3C H3C H3OH+脂质体的组成脂质体的组成 磷脂酸磷脂酸(phosphatidic acid,PA)磷脂酰肌醇磷脂酰肌醇(phosphatidyl inositol,PI)磷脂酰丝氨酸磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl serine, PS)POOOOHOOORROPOOOOOOORROOHO
8、HOHOHHOPOOOOOOORROCOOHNH3C+2 2、负电荷磷脂（、负电荷磷脂（酸性磷脂）酸性磷脂）3 3、胆固醇胆固醇( (cholesterol, cholesterol, ChCh) )膜的另一类重要组成成分。膜的另一类重要组成成分。u存在存在：动物细胞的质膜中含量较高，植物中含量较少。：动物细胞的质膜中含量较高，植物中含量较少。u性质性质：为中性脂质，亦属于：为中性脂质，亦属于双亲性双亲性分子，但亲油性大于亲水性。分子，但亲油性大于亲水性。u在脂质体中的状态在脂质体中的状态：作为两性分子，能嵌镶入膜，羟基团朝向亲水面，：作为两性分子，能嵌镶入膜，羟基团朝向亲水面，脂肪族的链朝向
9、并平行于磷脂双层中心的烃链。胆固醇本身不形成脂脂肪族的链朝向并平行于磷脂双层中心的烃链。胆固醇本身不形成脂质双层结构，但它能以高浓度方式掺入磷脂膜。质双层结构，但它能以高浓度方式掺入磷脂膜。u在脂质体中的作用在脂质体中的作用：主要与磷脂相结合，阻止磷脂凝集成晶体结构。：主要与磷脂相结合，阻止磷脂凝集成晶体结构。减弱膜中类脂与蛋白质复合体之间的连接，像减弱膜中类脂与蛋白质复合体之间的连接，像“缓冲剂缓冲剂”一样起着调一样起着调节膜结构节膜结构“流动性流动性”的作用。的作用。 脂质体的组成脂质体的组成脂质体的组成脂质体的组成胆固醇与磷脂的排列示意图胆固醇与磷脂的排列示意图4 4、正电荷脂质、正电荷
10、脂质硬脂酰胺硬脂酰胺( (sterylamine,SAsterylamine,SA) )、胆固醇衍生物。、胆固醇衍生物。 普遍应用于基因的传递系统普遍应用于基因的传递系统 5 5、大豆甾醇及其葡萄糖苷、大豆甾醇及其葡萄糖苷 为纯天然品，较安全，价格便宜。为纯天然品，较安全，价格便宜。大豆甾醇葡萄糖苷大豆甾醇葡萄糖苷(SG)(SG) 是从提炼豆油残渣中分离出来的甾醇葡萄糖苷的是从提炼豆油残渣中分离出来的甾醇葡萄糖苷的混合物混合物。 能提高脂质体的能提高脂质体的肝靶向性肝靶向性。大豆甾醇（大豆甾醇（soybean soybean sterol,SSsterol,SS） 是是SGSG去葡萄糖残基的水
11、解产物。与去葡萄糖残基的水解产物。与ChCh结构相似，能提高脂质结构相似，能提高脂质体稳定性，其膜稳定作用大于体稳定性，其膜稳定作用大于ChCh。脂质体的组成脂质体的组成二、脂质体的结构二、脂质体的结构双分子结构双分子结构：磷脂分子磷脂分子的亲水端呈的亲水端呈弯曲的弧形，形似弯曲的弧形，形似“手杖手杖”，与，与胆固醇分子胆固醇分子的亲水基团相结合，形的亲水基团相结合，形成成“U”U”形结构。两个形结构。两个“U”U”形结构相对形结构相对排列，则形成双分子结构。排列，则形成双分子结构。第二节第二节 脂质体的组成、结构、理化性质与分类脂质体的组成、结构、理化性质与分类卵磷脂与胆固醇在脂质体中的排列
12、形式卵磷脂与胆固醇在脂质体中的排列形式脂质体的结构脂质体的结构类似生物膜类似生物膜，在脂质体的水相和脂质双分，在脂质体的水相和脂质双分子层组成的膜内可以子层组成的膜内可以包裹多种物质包裹多种物质。包裹物质包裹物质脂溶性药物脂溶性药物 定位于双分子层脂质膜间定位于双分子层脂质膜间两性化合物两性化合物 定位在水相与膜内部交界磷脂上定位在水相与膜内部交界磷脂上水溶性药物水溶性药物 包裹在水相包裹在水相不能不能包裹物质包裹物质在水相和有机溶剂中都不溶的物质在水相和有机溶剂中都不溶的物质 在两种介质中溶解性都非常好的物质在两种介质中溶解性都非常好的物质 脂质体的结构脂质体的结构单室脂质体单室脂质体多室脂
13、质体多室脂质体三、脂质体的理化性质三、脂质体的理化性质第二节第二节 脂质体的组成、结构、理化性质与分类脂质体的组成、结构、理化性质与分类理化性质理化性质相变温度相变温度膜的通透性膜的通透性膜的流动性膜的流动性 脂质体荷电性脂质体荷电性1 1、相变温度相变温度( (phase transition temperature, Tc) 脂质体脂质体升高温度升高温度至至一定温度一定温度膜的物理性质改变膜的物理性质改变膜的横切面增加膜的横切面增加、双分子层双分子层厚度减少厚度减少、膜流动性加膜流动性加 脂质双分子层中酰基侧链排列改变脂质双分子层中酰基侧链排列改变 有序排列变为无序排列有序排列变为无序排列
14、 相变温度相变温度TcTc脂质体的理化性质脂质体的理化性质（相变温度）（相变温度） 决定决定TcTc的因素的因素（1 1）磷脂的种类。磷脂都具有特定的）磷脂的种类。磷脂都具有特定的TcTc值。值。（2 2）极性基团的性质。）极性基团的性质。（3 3）酰基侧链的长度和不饱和度。）酰基侧链的长度和不饱和度。 酰基侧链长酰基侧链长 TcTc高高 链的饱和度高链的饱和度高 TcTc高高 脂质体的理化性质脂质体的理化性质（相变温度）（相变温度）TcTc以下时，为以下时，为“胶晶态胶晶态”（脂肪链全反式，排列紧密，刚性和厚度增加）（脂肪链全反式，排列紧密，刚性和厚度增加）TcTc以上时，为以上时，为 “
15、“液晶态液晶态” （脂肪链伸缩、弯曲、外扭）（脂肪链伸缩、弯曲、外扭）磷脂发生相变时，磷脂发生相变时， “ “胶晶态胶晶态” “液晶态液晶态” “” “液态液态”共存，共存，出现相分离，使膜的流动性增加，易导致内容物泄漏。出现相分离，使膜的流动性增加，易导致内容物泄漏。脂质体的理化性质脂质体的理化性质（相变温度）（相变温度）相变温度与脂质体膜稳定性相变温度与脂质体膜稳定性脂质体的理化性质脂质体的理化性质（相变温度）（相变温度）2 2、膜的通透性、膜的通透性(1)(1)半通透性脂质体膜半通透性脂质体膜： 不同离子穿膜和分子扩散过膜速率不同。不同离子穿膜和分子扩散过膜速率不同。 (2)(2)膜两侧
16、的渗透压膜两侧的渗透压： 导致分子量较小的物质渗漏或磷脂膜破裂导致分子量较小的物质渗漏或磷脂膜破裂(3)(3)对于在水中和有机溶剂中溶解度都非常高的分子，对于在水中和有机溶剂中溶解度都非常高的分子， 磷脂膜是一种非常弱的屏障。磷脂膜是一种非常弱的屏障。 脂质体的理化性质脂质体的理化性质3.3.膜的流动性膜的流动性 TcTc时膜的流动性时膜的流动性增加增加： 包裹在脂质体内的药物具有最大释放速率。包裹在脂质体内的药物具有最大释放速率。 胆固醇胆固醇可调节膜的流动性：可调节膜的流动性： a.a.高于高于TcTc时，减少膜的流动性时，减少膜的流动性 b.b.低于低于TcTc时，增加膜的流动性时，增加
17、膜的流动性4 4、荷电性荷电性n含酸性脂质的脂质体荷负电含酸性脂质的脂质体荷负电n含碱基的脂质体荷正电含碱基的脂质体荷正电n不含离子的脂质体显电中性不含离子的脂质体显电中性 脂质体的理化性质脂质体的理化性质脂质体分类脂质体分类按按结构类型结构类型分分类类单室（层）脂质体单室（层）脂质体多室（层）脂质体多室（层）脂质体（MLVsMLVs) )多囊脂质体多囊脂质体（MVLsMVLs) )小单室（层）脂质体小单室（层）脂质体(SUVs(SUVs） 大单室（层）脂质体大单室（层）脂质体( (LUVsLUVs）1 1、按结构类型分类、按结构类型分类单室（层）脂质体单室（层）脂质体，是由，是由一层一层双分
18、子膜形成的囊泡。双分子膜形成的囊泡。小小单室（层）脂质体（单室（层）脂质体（SUVsSUVs）u最小粒径最小粒径 20 nm20 nm 80nm - 80nm - 纳米脂质体纳米脂质体u包封容积低包封容积低 u体内循环时间长体内循环时间长大大单室（层）脂质体单室（层）脂质体( (LUVsLUVs) )u一般粒径一般粒径100nm 100nm 1000nm1000nmu对对水溶性药物水溶性药物的包封率高，包封容积大。的包封率高，包封容积大。u如果粒径较大如果粒径较大( (500nm)500nm)，膜不稳定。，膜不稳定。 脂质体的分类脂质体的分类（按结构类型分类）（按结构类型分类）2 2多室（层）
19、脂质体多室（层）脂质体( (MLVsMLVs),), 双分子脂质膜与水交替形成的双分子脂质膜与水交替形成的多层多层结构的囊泡。结构的囊泡。 一般由五层、或更多层的同心板组成。一般由五层、或更多层的同心板组成。u较少层数较少层数( (两到四层两到四层) )的又称为的又称为寡层脂质体寡层脂质体。u粒径一般为粒径一般为100nm100nm5 5m m。u包封容积相对较低。包封容积相对较低。脂质体的分类脂质体的分类（按结构分类）（按结构分类）3 3多囊脂质体多囊脂质体 (multivescular liposomes,MVLs)u由许多非同心囊泡构成，每个囊泡中包裹着被装载药物的水溶液。由许多非同心囊
20、泡构成，每个囊泡中包裹着被装载药物的水溶液。 u粒径为粒径为5 55050m m 。u适用于包裹适用于包裹水溶性水溶性物质物质。u载药量比单层脂质体载药量比单层脂质体 和多层脂质体高得多和多层脂质体高得多u具有缓释作用。具有缓释作用。 脂质体的分类脂质体的分类（按结构分类）（按结构分类）多囊脂质体的结构多囊脂质体的结构脂质体的分类脂质体的分类按按结构性能结构性能分类分类特殊性能脂质体特殊性能脂质体（特殊的脂质材料制成）（特殊的脂质材料制成）普通脂质体普通脂质体( (一般脂质材料制成一般脂质材料制成 )热敏感性脂质体热敏感性脂质体pHpH敏感脂质体敏感脂质体多糖被复的脂质体多糖被复的脂质体免疫脂
21、质体免疫脂质体长循环脂质体长循环脂质体光敏脂质体光敏脂质体 磁性脂质体磁性脂质体脂质体的分类脂质体的分类按按荷电性荷电性分类分类正电荷脂质体正电荷脂质体 负电荷脂质体负电荷脂质体 中性脂质体中性脂质体 脂质体的分类脂质体的分类按按给药途径给药途径分类分类静脉静脉给药脂质体给药脂质体口服口服给药脂质体给药脂质体肺部吸入肺部吸入给药脂质体给药脂质体眼部眼部用药脂质体用药脂质体黏膜黏膜给药脂质体给药脂质体外用外用脂质体和脂质体和经皮给药经皮给药脂质体脂质体局部注射局部注射用脂质体（肌注、关节腔、脊髓腔、肿瘤内等）用脂质体（肌注、关节腔、脊髓腔、肿瘤内等）免疫诊断免疫诊断用脂质体用脂质体基因工程和生物
22、工程基因工程和生物工程用脂质体用脂质体第三节第三节 脂质体的制备方法脂质体的制备方法薄膜薄膜分散分散法法 制备方法制备方法逆相蒸发法逆相蒸发法 溶剂注入法溶剂注入法冷冻干燥法冷冻干燥法 pHpH梯度法梯度法 前体脂质体法前体脂质体法 干膜超声法干膜超声法 薄膜薄膜- -振荡分散法振荡分散法 薄膜薄膜- -匀化法匀化法 薄膜薄膜- -挤压法挤压法乙醇注入法乙醇注入法乙醚注入法乙醚注入法 一一. .薄膜分散法薄膜分散法膜材膜材 有机溶剂（氯仿等）有机溶剂（氯仿等） （脂溶性药物）（脂溶性药物） 膜材溶液膜材溶液减压旋转减压旋转蒸发蒸发除去溶剂除去溶剂 器壁上形成器壁上形成薄膜薄膜 加入缓冲液（加入
23、缓冲液（水溶性药物水溶性药物） 振摇振摇 大大多层脂质体多层脂质体 多层脂质体多层脂质体 各种机械方法分散各种机械方法分散脂质体的制备方法脂质体的制备方法1 1干膜超声法干膜超声法 超声波仪超声波仪（探针型和水浴型）超声处理（探针型和水浴型）超声处理 脂质体混悬液脂质体混悬液 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶柱层析（分离除去未包入的药物）柱层析（分离除去未包入的药物） 脂质体混悬液脂质体混悬液 2 2薄膜薄膜- -振荡分散法振荡分散法 干膜干膜 加入缓冲溶液加入缓冲溶液 液体快速混合器液体快速混合器振荡（振荡（252min252min） 脂质体脂质体3 3薄膜薄膜- -匀化法匀化法 将薄膜将薄膜- -振荡
24、分散法制备的较大粒径脂质体振荡分散法制备的较大粒径脂质体 组织捣机组织捣机或或高压乳匀机高压乳匀机匀化匀化 较小粒径的脂质体。较小粒径的脂质体。 此法较适合工业生产。此法较适合工业生产。 脂质体的制备方法脂质体的制备方法（薄膜法）（薄膜法）脂质体的制备方法脂质体的制备方法膜材膜材 W/OW/O型乳剂型乳剂 溶于有机溶剂（氯仿、乙醚溶于有机溶剂（氯仿、乙醚） 加入待包封药物的加入待包封药物的水溶液水溶液* 胶态胶态 短时超声短时超声 减压蒸发有机溶剂减压蒸发有机溶剂 脱落凝胶液脱落凝胶液滴加缓冲液滴加缓冲液继续减压蒸发继续减压蒸发 旋转旋转充氮气至充氮气至气气味消失味消失 水性混悬液水性混悬液
25、超速离心超速离心或或凝胶色谱法凝胶色谱法 除去未包入的药物除去未包入的药物 大单层脂质体大单层脂质体 工艺流程工艺流程二、二、逆相蒸发法逆相蒸发法三、三、溶剂注入法溶剂注入法1 1、乙醇注入法乙醇注入法 脂质乙醇液脂质乙醇液 细针头细针头快速快速注入到缓冲液中注入到缓冲液中 SUVsSUVs。 （残存的乙醇用透析法除去）（残存的乙醇用透析法除去）优点：简单快速优点：简单快速, ,脂质浓度受限。缺点脂质浓度受限。缺点: : 水相包封率极低，乙醇难除。水相包封率极低，乙醇难除。 2 2、乙醚注入法乙醚注入法 脂质乙醚液脂质乙醚液 细孔针头细孔针头慢慢慢慢注入注入55556060的缓冲液中的缓冲液中
26、 乙醚蒸发乙醚蒸发 单层脂质体单层脂质体( (直径直径5050200nm)200nm)。 优点：脂质浓度不受限，水相包封率高；优点：脂质浓度不受限，水相包封率高； 缺点：制备时间长。缺点：制备时间长。 脂质体的制备方法脂质体的制备方法四、四、冷冻干燥法冷冻干燥法 磷脂磷脂 高度分散在缓冲盐溶液中高度分散在缓冲盐溶液中 超声波处理超声波处理 冷冻干燥（干燥物）冷冻干燥（干燥物） 分散到含药物的水性介质中分散到含药物的水性介质中 脂质体脂质体 冷冻温度、速度及时间等因素影响脂质体的包封率和稳定性。冷冻温度、速度及时间等因素影响脂质体的包封率和稳定性。 加入冻结保护剂，能降低冻融过程对脂质体的损害。
27、加入冻结保护剂，能降低冻融过程对脂质体的损害。 甘露醇甘露醇 、D-D-葡萄糖葡萄糖此外还有：此外还有：pHpH梯度法梯度法和和前体脂质体法前体脂质体法等。等。脂质体的制备方法脂质体的制备方法一、脂质体的粒径和分布一、脂质体的粒径和分布n脂质体的粒径大小和分布均匀程度，直接影响脂质体在机脂质体的粒径大小和分布均匀程度，直接影响脂质体在机体组织的行为和处置。体组织的行为和处置。n粒径粒径100nm100nm，在血液循环时间长；，在血液循环时间长；n粒径粒径200nm200nm，在血液循环时间短（易被巨嗜细胞作为外，在血液循环时间短（易被巨嗜细胞作为外来异物吞噬）。来异物吞噬）。第四节第四节 脂质
28、体的质量研究脂质体的质量研究 检测方法检测方法1、光学显微镜法、光学显微镜法2、电子显微镜法、电子显微镜法3、激光散射法（、激光散射法（尘粒计数法）4、电感应法、电感应法（库尔特计数器）5、光感应法光感应法（如粒度测定仪）负染法负染法冰冻蚀刻法冰冻蚀刻法1 1、光学显微镜法光学显微镜法 将脂质体混悬液稀释（约将脂质体混悬液稀释（约5 5倍），取倍），取1 1滴放入载玻片上或滴入细胞滴放入载玻片上或滴入细胞计数板内，放上盖玻片，观察脂质体粒径大小和数目，然后按其大小计数板内，放上盖玻片，观察脂质体粒径大小和数目，然后按其大小分档计数，以视野见到的粒子总数，求出各档次百分数。分档计数，以视野见到的
29、粒子总数，求出各档次百分数。 仅适用于大的脂质体。仅适用于大的脂质体。 2 2、电子显微镜法电子显微镜法 用负染法和冰冻蚀刻法，用负染法和冰冻蚀刻法，用于分析小脂质体用于分析小脂质体。负染法：负染法：用溶液悬浮脂质体用溶液悬浮脂质体，样品滴在有支持膜的铜网上，滤纸吸去样品滴在有支持膜的铜网上，滤纸吸去多余的液体，再滴多余的液体，再滴重金属染料，重金属染料，滤纸吸去多余液体，自然干燥滤纸吸去多余液体，自然干燥30min30min，用电镜观察脂质体的结构和粒径分布。用电镜观察脂质体的结构和粒径分布。 脂质体的质量研究脂质体的质量研究（粒径和分布）粒径和分布）3 3、激光散射法、激光散射法（尘粒计数
30、法）（尘粒计数法） 将脂质体混悬液稀释后雾化，定量喷到计数仪散射腔，将脂质体混悬液稀释后雾化，定量喷到计数仪散射腔，自动计数仪记录各档次粒子的粒径、数目，计算分布概率或自动计数仪记录各档次粒子的粒径、数目，计算分布概率或绘制粒径分布图。绘制粒径分布图。 此外，还有此外，还有电感应法电感应法（库尔特计数器）、（库尔特计数器）、光感应法光感应法（粒（粒度测定仪）等度测定仪）等 脂质体的质量研究脂质体的质量研究（粒径和分布）粒径和分布） 二、脂质体的包封率二、脂质体的包封率（重量包封率重量包封率） 1 1、包封率：、包封率：是指包入脂质体内的药物量与投料量的重量百分比。是指包入脂质体内的药物量与投料
31、量的重量百分比。 方法：测定脂质体中的药量，经色谱柱或离心分离测定介质中未包方法：测定脂质体中的药量，经色谱柱或离心分离测定介质中未包入的药量，计算。入的药量，计算。脂质体的质量研究脂质体的质量研究（包封率）包封率）包封率包封率脂质体中包封的药量脂质体中包封的药量脂质体中包封与未包封的总药量脂质体中包封与未包封的总药量=100%100% 2 2、影响脂质体包封率的因素、影响脂质体包封率的因素 脂质体的结构类型脂质体的结构类型 脂质体的结构类型不同，其包封率也不同。脂质体的结构类型不同，其包封率也不同。 顺序：顺序：LUVsLUVs( (大单）大单）MLVMLV（多层）（多层）SUVsSUVs（
32、小单）（小单） 脂质体制备方法脂质体制备方法 处方拟订后，制备方法就可决定结构类型。故制备方法也处方拟订后，制备方法就可决定结构类型。故制备方法也与包封率有关，顺序为：与包封率有关，顺序为：乙醚注入法逆相蒸发法干膜法乙醇注入法超声法乙醚注入法逆相蒸发法干膜法乙醇注入法超声法 冷冻干燥法的冷冻过程使包封率下降。冷冻干燥法的冷冻过程使包封率下降。脂质体的质量研究脂质体的质量研究（包封率）包封率） 类脂膜的组成与电性类脂膜的组成与电性膜的组成膜的组成 与脂质体的结构密切相关，因此，对包封率有影响。与脂质体的结构密切相关，因此，对包封率有影响。 如如 PCPC中加入中加入ChCh可提高包封率；可提高包
33、封率；脂质材料与脂质体表面的电性对离子型药物的包封率影响很大脂质材料与脂质体表面的电性对离子型药物的包封率影响很大 如：如水相离子型药物的电性与脂质体表面的电性相反时，如：如水相离子型药物的电性与脂质体表面的电性相反时， 可能由于静电结合的原因，包封率高。可能由于静电结合的原因，包封率高。 脂质体的质量研究脂质体的质量研究（影响（影响包封率的因素）包封率的因素） 药物的性质和浓度药物的性质和浓度 膜材固定、制备方法固定的脂质体，其包封率则由膜材固定、制备方法固定的脂质体，其包封率则由被包封的药物的性质决定。被包封的药物的性质决定。溶解性：脂溶性的药物包封率高；溶解性：脂溶性的药物包封率高；电性
34、：药物的电性与脂质体膜的电性相反时，药物包封率高；电性：药物的电性与脂质体膜的电性相反时，药物包封率高；分子量：分子量大的比分子量小的药物包封率高；分子量：分子量大的比分子量小的药物包封率高；一般情况下，药物浓度增加，包封率下降。一般情况下，药物浓度增加，包封率下降。 脂质体的质量研究脂质体的质量研究（影响（影响包封率的因素）包封率的因素）三、脂质体的包封容积三、脂质体的包封容积 包封容积为每摩尔脂质形成脂质体后所包裹溶液的体积。包封容积为每摩尔脂质形成脂质体后所包裹溶液的体积。测定方法：用脂质体包封水溶性的荧光标记物，直接测定水测定方法：用脂质体包封水溶性的荧光标记物，直接测定水相的体积。相
35、的体积。四、脂质体的药脂包封比率四、脂质体的药脂包封比率 指一定重量的脂质所包封药物重量百分比。指一定重量的脂质所包封药物重量百分比。 脂质体的质量研究脂质体的质量研究药脂包封比率药脂包封比率=100%100%脂质体中包封的药量脂质体中包封的药量处方中类脂的总量处方中类脂的总量五、脂质体的渗漏率五、脂质体的渗漏率 渗漏率表示脂质体在贮存期间包封率的变化情况，是渗漏率表示脂质体在贮存期间包封率的变化情况，是脂质体不稳定性的重要指标。脂质体不稳定性的重要指标。（在膜材中加入一定量的胆固醇，能够加固脂质双层膜，（在膜材中加入一定量的胆固醇，能够加固脂质双层膜，减少膜的流动性，可降低渗漏率。）减少膜的
36、流动性，可降低渗漏率。）脂质体的质量研究脂质体的质量研究渗漏率渗漏率=贮存后渗漏到介质中的药量贮存后渗漏到介质中的药量贮存前包封的药量贮存前包封的药量100%100%六、磷脂的氧化程度六、磷脂的氧化程度 采用氧化指数为指标。采用氧化指数为指标。氧化指数氧化指数=A=A233nm233nm /A /A215nm 215nm 氧化指数氧化指数0.20.2避免脂质氧化的措施：避免脂质氧化的措施：用纯化的脂质和新鲜蒸馏的有机溶剂。用纯化的脂质和新鲜蒸馏的有机溶剂。制备过程中避免高温。在无氧条件下制备。制备过程中避免高温。在无氧条件下制备。用氮气使水溶液脱氧。脂质体在惰性气体中保存。用氮气使水溶液脱氧。
37、脂质体在惰性气体中保存。加入抗氧化剂，减少膜氧化脂质水平。加入抗氧化剂，减少膜氧化脂质水平。尽量使用饱和脂质。尽量使用饱和脂质。去除残余有机溶剂。去除残余有机溶剂。 脂质体的质量研究脂质体的质量研究-榄香烯脂质体的质量研究榄香烯脂质体的质量研究-榄香烯脂质体榄香烯脂质体透射电镜照片透射电镜照片 Size distribution(s)51050100500 1000Diameter (nm)20406080% in class-榄香烯脂质体榄香烯脂质体粒度分布图粒度分布图 -榄香烯脂质体榄香烯脂质体电位电位 三批样品平均三批样品平均包封率包封率 室温（室温（2525）4 4周后渗漏周后渗漏10
38、0%100%稳定性稳定性考察考察 冰箱（冰箱（44）4 4周后渗漏约周后渗漏约5%5% 第五节第五节 特殊性能脂质体特殊性能脂质体热敏感性脂质体（温度敏感脂质体）热敏感性脂质体（温度敏感脂质体） pHpH敏感脂质体（酸敏感脂质体）敏感脂质体（酸敏感脂质体） 多糖被复的脂质体（糖基脂质体）多糖被复的脂质体（糖基脂质体） 免疫脂质体免疫脂质体 长循环脂质体（长效脂质）长循环脂质体（长效脂质） 光敏脂质体光敏脂质体 磁性脂质体磁性脂质体 特殊性能脂质体特殊性能脂质体一、热敏感性脂质体一、热敏感性脂质体（温度敏感脂质体）。（温度敏感脂质体）。设计原理：当温度提高到某特定温度（相变温度设计原理：当温度提
39、高到某特定温度（相变温度TcTc）时，脂质体膜由时，脂质体膜由“胶晶态胶晶态”转变到转变到“液晶态液晶态” ” ，磷脂，磷脂的的酰基链的紊乱度和活动度增加，酰基链的紊乱度和活动度增加，膜的流动性增加膜的流动性增加，脂质，脂质体所包封的体所包封的药物释放率增大药物释放率增大，低于，低于TcTc时，药物的释放相时，药物的释放相对缓慢。对缓慢。 选用不同长度碳链的脂质，如二棕榈酰磷脂酰胆碱选用不同长度碳链的脂质，如二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)(DPPC)和二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)(DSPC)，按一定比例混合，按一定比例混合, ,通过适当方法制成通过适当方法制成相变温度稍高
40、于体温的脂质体相变温度稍高于体温的脂质体。应用。应用时，通过适当的技术使靶部位温度与热敏感脂质体的相时，通过适当的技术使靶部位温度与热敏感脂质体的相 变温度相同，导致脂质体迅速释放内含药物。变温度相同，导致脂质体迅速释放内含药物。特殊性能脂质体特殊性能脂质体热敏感脂质体释放药物示意图热敏感脂质体释放药物示意图特殊性能脂质体特殊性能脂质体二、二、pHpH敏感脂质体敏感脂质体（酸敏感脂质体）（酸敏感脂质体）。 组成组成：不饱和的磷脂酰乙醇胺（：不饱和的磷脂酰乙醇胺（PEPE）和脂肪酸。）和脂肪酸。 特性特性：pH7.4pH7.4时稳定，在低时稳定，在低pHpH时不稳定，时不稳定，pHpH6.56.
41、5的酸性的酸性条件下，与相应的膜发生融合，释放包裹的药物到胞浆。条件下，与相应的膜发生融合，释放包裹的药物到胞浆。 原理原理：脂质体中含有不饱和的：脂质体中含有不饱和的PEPE，在生理环境下可形成，在生理环境下可形成六角相，需加入某些脂肪酸制成稳定的脂质体。当六角相，需加入某些脂肪酸制成稳定的脂质体。当pHpH6.56.5时，脂肪酸的羟基质子化，脂质形成六角相，引起膜的融合。时，脂肪酸的羟基质子化，脂质形成六角相，引起膜的融合。 特殊性能脂质体特殊性能脂质体pHpH敏感脂质体示意图敏感脂质体示意图 病理组织的病理组织的pHpH比正常组织低（如感染比正常组织低（如感染部位、原发肿瘤和转移肿瘤组织
42、），炎症部位、原发肿瘤和转移肿瘤组织），炎症反应后反应后60h60h的的pHpH降低至降低至6.56.5。细胞内吞空泡。细胞内吞空泡的的pHpH范围为范围为5.05.06.56.5。 脂质体主要通过内吞被细胞摄取，脂脂质体主要通过内吞被细胞摄取，脂质体达到的细胞内位点是溶酶体，在溶酶质体达到的细胞内位点是溶酶体，在溶酶体，脂质体逐渐被破坏，多数情况下药物体，脂质体逐渐被破坏，多数情况下药物不能直接到达细胞浆不能直接到达细胞浆. . 而而pH-pH-敏感脂质体敏感脂质体在内吞体酸性环境下不在内吞体酸性环境下不稳定稳定，脂质体膜即与内吞体膜融合，将内，脂质体膜即与内吞体膜融合，将内容容物物释放至胞
43、浆。释放至胞浆。特殊性能脂质体特殊性能脂质体（pHpH敏感脂质体敏感脂质体）三、多糖被复的脂质体三、多糖被复的脂质体（掺入糖基脂质体）。（掺入糖基脂质体）。 在脂质体双分子层中掺入多糖或糖脂的脂质体。在脂质体双分子层中掺入多糖或糖脂的脂质体。特点：特点：1 1、糖基不同可改变脂质体的组织分布：、糖基不同可改变脂质体的组织分布： 如半乳糖如半乳糖为肝实质细胞所摄取；为肝实质细胞所摄取； 甘露糖甘露糖为为NKNK细胞所摄取；细胞所摄取； 胆固醇氨基甘露糖衍生物胆固醇氨基甘露糖衍生物具有高度的向肺性。具有高度的向肺性。2 2、能抑制给药后在血流中某些崩解过程，使脂质体稳定。、能抑制给药后在血流中某些
44、崩解过程，使脂质体稳定。特殊性能脂质体特殊性能脂质体四四、长循环脂质体长循环脂质体（长效脂质）（长效脂质）。1.1.含有神经节苷脂含有神经节苷脂GMGM1 1的脂质体的脂质体（隐蔽脂质体）（隐蔽脂质体） 在脂质体膜上掺入神经节苷脂在脂质体膜上掺入神经节苷脂GMGM1 1，引入了唾液酸残基。，引入了唾液酸残基。特点：特点：增强了膜的稳定性增强了膜的稳定性; ;降低了血浆成分诱发的脂质体溶解的敏感度降低了血浆成分诱发的脂质体溶解的敏感度; ;降低了脂质体内容物的泄漏率降低了脂质体内容物的泄漏率; ;减少了网状内皮细胞对脂质体的摄取减少了网状内皮细胞对脂质体的摄取; ;延长了脂质体的体内循环时间。延
45、长了脂质体的体内循环时间。缺点：缺点：GMGM1 1的价格昂贵，而且难以大量提取或合成。的价格昂贵，而且难以大量提取或合成。 特殊性能脂质体特殊性能脂质体2 2 、PEGPEG衍生物脂质体衍生物脂质体 脂质体被脂质体被PEGPEG衍生物（衍生物（PEG-DSPEPEG-DSPE二硬脂酸磷脂酰乙醇二硬脂酸磷脂酰乙醇胺胺,PEG-PE,PEG-PE）修饰。）修饰。 极性的极性的PEGPEG基：增强了脂质体膜的亲水性，基：增强了脂质体膜的亲水性，减少了血浆蛋白与脂质体膜的相互作用，减少了血浆蛋白与脂质体膜的相互作用，阻止了脂质体的凝聚和融合，阻止了脂质体的凝聚和融合，避免了网状内皮系统细胞对脂质体的
46、摄取，避免了网状内皮系统细胞对脂质体的摄取，也延长了脂质体的体内循环时间。也延长了脂质体的体内循环时间。特殊性能脂质体特殊性能脂质体（长循环脂质体）（长循环脂质体）PEGPEG修饰脂质体结构示意图修饰脂质体结构示意图特殊性能脂质体特殊性能脂质体（长循环脂质体）（长循环脂质体）五、光敏脂质体五、光敏脂质体 将光敏感物质的药物包裹在脂质体内进行光学治疗。将光敏感物质的药物包裹在脂质体内进行光学治疗。 当一定的波长照射时，脂质体膜与囊泡物质间或脂质体之间当一定的波长照射时，脂质体膜与囊泡物质间或脂质体之间发生融合作用而释放药物。发生融合作用而释放药物。六、免疫脂质体。六、免疫脂质体。 掺入抗体形成被
47、抗体修饰的具有免疫活性的脂质体。掺入抗体形成被抗体修饰的具有免疫活性的脂质体。 将抗体结合于脂质体表面，可以提高人体的免疫机能，加快将抗体结合于脂质体表面，可以提高人体的免疫机能，加快免疫应答，增强脂质体结合于靶细胞和释药的能力。免疫应答，增强脂质体结合于靶细胞和释药的能力。 特殊性能脂质体特殊性能脂质体七、磁性脂质体七、磁性脂质体 将药物和磁铁性物质包入脂质体。将药物和磁铁性物质包入脂质体。 应用于体内后，利用体外磁场的效应，引导药物在体内定向应用于体内后，利用体外磁场的效应，引导药物在体内定向移动和定位集中，在磁场区释放药物，从而起到靶区局部浓集作移动和定位集中，在磁场区释放药物，从而起到
48、靶区局部浓集作用或靶区截流作用。用或靶区截流作用。 磁性药物制剂可因响应外磁场作用而定位于预期的位置，犹磁性药物制剂可因响应外磁场作用而定位于预期的位置，犹如如“磁性导弹磁性导弹”，把网状内皮系统的干扰降到最低程度。，把网状内皮系统的干扰降到最低程度。 脂质体虽然对肿瘤细胞具有靶向性，但注射给药后，常富脂质体虽然对肿瘤细胞具有靶向性，但注射给药后，常富集于网状内皮系统，不可避免的被网状内皮系统的巨噬细胞所集于网状内皮系统，不可避免的被网状内皮系统的巨噬细胞所清除，清除，磁性脂质体可克服。磁性脂质体可克服。 特殊性能脂质体特殊性能脂质体超微磁粉的制备方法：超微磁粉的制备方法： FeCl FeCl
49、3 3和和 FeClFeCl2 2分别溶于水中，过滤后分别溶于水中，过滤后混合，加入适量分散剂（如葡聚糖，防止磁化过混合，加入适量分散剂（如葡聚糖，防止磁化过程黏结），经超声、搅拌等过程，制成程黏结），经超声、搅拌等过程，制成磁流体磁流体（FeFe3 3O O4 4黑色胶体），干燥后为超微磁粉。黑色胶体），干燥后为超微磁粉。特殊性能脂质体特殊性能脂质体（磁性脂质体）（磁性脂质体）第六节第六节 脂质体的作用机理及影响因素脂质体的作用机理及影响因素一一. . 脂质体的作用机理脂质体的作用机理作用机理作用机理吸附吸附脂质交换脂质交换内吞内吞/ /吞噬吞噬融合融合扩散扩散磷酸酯酶消化磷酸酯酶消化1 1
50、吸附吸附（adsorptionadsorption） 吸附是脂质体作用的开始。吸附是脂质体作用的开始。n脂质体通过脂质体通过静电疏水的作用静电疏水的作用，非非特异性吸附到细胞表面；特异性吸附到细胞表面；n通过脂质体通过脂质体特异性配体特异性配体与细胞表面结合，而与细胞表面结合，而特异特异吸附到细吸附到细胞表面胞表面; ; 吸附在细胞表面的脂质体仅在吸附在细胞表面的脂质体仅在蛋白溶解酶蛋白溶解酶作用下才能与作用下才能与细胞脱离。吸附使细胞周围药物浓度增高，药物可慢慢地细胞脱离。吸附使细胞周围药物浓度增高，药物可慢慢地渗到细胞内渗到细胞内。 脂质体的作用机理脂质体的作用机理2 2脂质交换脂质交换（
