1、第第 十十 一一 章章RNA的生物合成的生物合成（转录转录）RNA Biosynthesis, TranscriptionE-mail: 转转录录RNADNA 转录转录 (transcription) 生物体以生物体以DNA为模板合成为模板合成RNA的过程的过程 。 也就是把也就是把DNA的碱基序列抄录成的碱基序列抄录成RNA的的碱基序列。碱基序列。复制与转录的异同点复制与转录的异同点 相同点：相同点： 不同点不同点: 复制复制 转录转录 以以DNA作模板作模板 双链复制双链复制 模板链模板链 需需4种种NTP dNTP NTP 碱基配对碱基配对 A=T A=U,T=A 合成方向合成方向53
2、依赖依赖DNA的聚合酶的聚合酶 DDDP DDRP 多聚核苷酸大分子多聚核苷酸大分子 半保留式子代半保留式子代 mRNA、 tRNA、rRNA参与转录的物质参与转录的物质原料原料: : NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) 模板模板: : DNA酶酶: : RNA聚合酶聚合酶(RNA polymerase, RNA-pol) 其他蛋白质因子其他蛋白质因子模板和酶模板和酶Templates and Enzymes第一节第一节一、转录模板一、转录模板 结构基因：结构基因：strucural gene 能转录出能转录出mRNA然后指导蛋白质生成然后指导蛋白质生成 的部分。的部分。 模板链
3、：模板链：template strand 可作为模板转录成可作为模板转录成RNA的一股链。的一股链。也也称作称作有意义链有意义链或或Watson链链。 编码链：编码链：coding strand 相对于模板链的另一股链。相对于模板链的另一股链。也称为也称为反反义链义链或或Crick链链。 模板模板: 转录、翻译的序列比较转录、翻译的序列比较5 GCATTAGCTAGCTACTAGC 3 DNA3 cgtaatcgatcgatgatcg 5 双链双链 转录转录5 GCAUUAGCUAGCUACUAGC 3 mRNA 翻译翻译N Ala Leu Ala Ser Try C 肽肽链链转录的不对称性转
4、录的不对称性 不对称转录不对称转录：asymmetric transcription DNA双链对一个基因而言，一股可转录，双链对一个基因而言，一股可转录，另一股不转录。另一股不转录。 模板链与编码链相对而言模板链与编码链相对而言5 5 3 3 3 3 5 5 模板链模板链编码链编码链编码链编码链模板链模板链结构基因结构基因转录方向转录方向转录方向转录方向二、二、 RNA聚合酶聚合酶 转录酶：依赖转录酶：依赖DNA的的RNA聚合酶聚合酶 DNA dependent RNA polymerase DDRP 原核生物的原核生物的RNA聚合酶聚合酶 大肠杆菌的大肠杆菌的RNA聚合酶聚合酶： 2 其中
5、其中 2称为称为核心酶核心酶：只有转录功能：只有转录功能 亚基：辨别转录起始点亚基：辨别转录起始点 + 2=全酶全酶 受利福平或利福霉素（结核菌药物）的特受利福平或利福霉素（结核菌药物）的特异性抑制。异性抑制。核心酶核心酶 (core enzyme)全酶全酶 (holoenzyme) RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合聚合酶全酶在转录起始区的结合 原核生物的原核生物的RNA聚合酶聚合酶亚基功能决定转录的特异性在转录的全过程起作用酶与 DNA 模板结合的主要成分辨别转录起始点:=4:2:2:0.6利福平或利福霉利福平或利福霉素特异性抑制素特异性抑制真核生物的真核生物的RNA聚合酶聚合酶IIIII
6、I转录产物45s-rRNAhnRNA5s-rRNA,tRNA,snRNA对鹅膏蕈碱的反应耐受极敏感中度敏感RNA聚合酶聚合酶II可认为是真核生物中最重要的可认为是真核生物中最重要的RNA聚合酶聚合酶酿酒酵母的聚合酶酿酒酵母的聚合酶的电泳图谱的电泳图谱羧基末端结构域羧基末端结构域 (carboxyl-terminal domain, CTD)RNARNA聚合酶聚合酶最大亚基的羧基末端有一段共有最大亚基的羧基末端有一段共有序列为序列为( (Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)n)n重复序列片重复序列片段段,n=20-60,n=20-60 这一序列在这一序列在RNA RNA 聚合
7、酶聚合酶中是独一无二的。中是独一无二的。 所有真核生物的所有真核生物的RNARNA聚合酶聚合酶都具有都具有CTDCTD，只是共有序列的重复程度不同。只是共有序列的重复程度不同。 去磷酸化的去磷酸化的CTDCTD在转录起始中发挥作用。在转录起始中发挥作用。三、模板与酶的辨认结合三、模板与酶的辨认结合原核生物一个转录区段可视为一个转录单原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称为位，称为操纵子操纵子(operon)，包括若干个，包括若干个结构基因结构基因及其上游及其上游(upstream)的的调控序列调控序列。 5 3 3 5 结构基因结构基因调控序列调控序列RNA-polRNA聚合酶结合模板聚合
8、酶结合模板DNA的部位，称为的部位，称为启启动子动子(promoter)。三、模板与酶的辨认结合三、模板与酶的辨认结合启动区的保守序列启动区的保守序列原核生物有两个元件原核生物有两个元件-35bp的的辨认位点辨认位点：5-TTGACA-10bp的的Pribnow盒盒: 5-TATAATPu真核生物有多个元件真核生物有多个元件(如如-30的的Hogness或或TATA盒盒)。RNA聚合聚合酶保护法酶保护法目目 录录开始转录开始转录T T G A C AA A C T G T-35 区区(Pribnow box)T A T A A T Pu A T A T T A Py-10 区区1-30-501
9、0-10-40-205 3 3 5 原核生物启动子保守序列原核生物启动子保守序列RNA-pol辨认位点辨认位点(recognition site) 5 5 RNA聚合酶保护区聚合酶保护区结构基因结构基因3 3 TATA盒盒 CAAT盒盒 GC盒盒 增强子增强子 顺式作用元件顺式作用元件 结构基因结构基因-GCGC-CAAT-TATA转录起始转录起始真核生物启动子保守序列真核生物启动子保守序列转录过程转录过程The Process of Transcription 第二节第二节 转录的过程转录的过程（一）转录起始（一）转录起始转录起始需解决两个问题：转录起始需解决两个问题：1. RNA聚合酶必须
10、准确地结合在转录模板的聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。起始区域。2. DNA双链解开，使其中的一条链作为转录双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。的模板。一、原核生物的转录过程一、原核生物的转录过程2. DNA双链解开双链解开1. RNA聚合酶全酶聚合酶全酶( 2)与模板结合与模板结合 3. 在在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物形成转录起始复合物RNApol ( 2) - DNA - pppGpN- OH 3 转录起始复合物转录起始复合物:5 -pppG -OH + NTP 5 -pppGpN - OH 3 + ppi转录起始
11、过程转录起始过程转录起始中的事件转录起始中的事件 解链解链 形成形成转录空泡转录空泡 为首的为三磷酸为首的为三磷酸GTP或或ATP 转录起始复合物转录起始复合物(RNA-聚合酶全酶聚合酶全酶-DNA-pppGpN-OH) 第一个磷酯键形成后，第一个磷酯键形成后， 亚基从转录起亚基从转录起始复合物中脱落下来。始复合物中脱落下来。RNA聚合酶沿聚合酶沿DNA链向前移动。链向前移动。转录空泡转录空泡(transcription bubble)：RNA-pol （核心酶）（核心酶） DNA RNA目目 录录（二）转录延长（二）转录延长1. 亚基脱落，亚基脱落，RNApol聚合酶核心酶变构，聚合酶核心酶
12、变构，与模板结合松弛，沿着与模板结合松弛，沿着DNA模板前移；模板前移； 2. 在在核心酶核心酶作用下，作用下，NTP不断聚合，不断聚合，RNA链链不断延长。不断延长。(NMP) n + NTP (NMP) n+1 + PPi目目 录录转录的延长转录的延长5 3 DNA原核生物转录过程中的羽毛状现象原核生物转录过程中的羽毛状现象核糖体核糖体RNARNA聚合酶聚合酶转录的延长转录的延长 转录的延长是以转录的延长是以5到到3的方向进行的。的方向进行的。 (NMP)n+NTP(NMP)n+1+PPi 以以G=C、A=U、T=A碱基配对。碱基配对。 转录完成部分的转录完成部分的DNA重新形成双链。重新
13、形成双链。 较长的较长的RNA链上有核糖体结合，说明在链上有核糖体结合，说明在某些情况下，某些情况下，转录的同时，翻译已经开转录的同时，翻译已经开始进行了。始进行了。（三）转录的终止（三）转录的终止 转录终止转录终止：是：是RNA聚合酶在模板上的某聚合酶在模板上的某一位置一位置停顿，停顿，RNA链从转录复合物上脱链从转录复合物上脱离出来。离出来。 分为分为依赖依赖Rho因子的转录终止因子的转录终止和和不依赖不依赖Rho因子的转录终止因子的转录终止。1、依赖、依赖Rho因子的转录终止因子的转录终止 Rho因子有因子有ATP酶活力和杂化酶活力和杂化双螺旋解螺旋双螺旋解螺旋酶活力。酶活力。 可使可使
14、RNA-DNA杂化杂化双链的短链变双链的短链变性，从而有利性，从而有利于转录产物从于转录产物从转录复合物中转录复合物中释放出来。释放出来。A T P1. 依赖依赖 Rho因子的转录终止因子的转录终止2. 非依赖非依赖 Rho因子的转录终止因子的转录终止DNA模板上靠近终止处，有些特殊的碱模板上靠近终止处，有些特殊的碱基序列，转录出基序列，转录出RNA后，后，RNA产物形成特殊产物形成特殊的结构来终止转录。的结构来终止转录。2、非依赖、非依赖Rho因子的转录终止因子的转录终止5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU. 3
15、5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU. 3 RNA 5 TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT. 3 DNA UUUU. UUUU.5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU. 3茎环茎环(stem-loop)/发夹发夹(hairpin)结构结构茎环结构使转录终止的机理茎环结构使转录终止的机理5 pppG5 3 3 5 RNA-pol 使使RNA聚合酶变构，聚合酶变构， 使
16、酶不再向下移动，使酶不再向下移动，转录停顿。转录停顿。 DNA和和RNA各自形成自己的局部双链，使杂化链各自形成自己的局部双链，使杂化链 更加更加不稳定，以致转录复合物趋于解体不稳定，以致转录复合物趋于解体，RNA产物释放产物释放。 接着的一串寡聚接着的一串寡聚U，则更是促进则更是促进RNA新链从模板上脱落新链从模板上脱落的的促进因素。促进因素。二、真核生物的转录起始二、真核生物的转录起始（一）转录起始（一）转录起始真核生物的转录起始上游区段比原核生物真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模不直接结合模板，其起始过程比原核生物复杂。
17、板，其起始过程比原核生物复杂。转录起始点转录起始点TATA盒盒CAAT盒盒GC盒盒 增强子增强子顺式作用元件顺式作用元件(cis-acting element)1. 转录起始前的上游区段转录起始前的上游区段 AATAAA切离加尾切离加尾 转录终止点转录终止点 修饰点修饰点 外显子外显子 翻译起始点翻译起始点内内含含子子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚体八聚体2. 转录因子转录因子 能直接、间接辨认和结合转录上游区段能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为的蛋白质，现已发现数百种，统称为反反式作用因子式作用因子(trans-acting factor
18、s)。 反式作用因子中，直接或间接结合反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为聚合酶的，则称为转录因子转录因子(transcriptional factors, TF)。 参与参与RNA-pol转录的转录的TF 蛋白激酶活性，使蛋白激酶活性，使CTD磷磷酸化酸化TFHATPase57（ ） 34（ ）TFE解螺旋酶解螺旋酶30，74TFF促进促进RNA-pol结合及作结合及作为其他因子结合的桥梁为其他因子结合的桥梁33TFB稳定稳定TFD-DNA复合物复合物12，19，35TFA辅助辅助TBP-DNA结合结合TAF*结合结合TATA盒盒TBP* 38TFD功功能能亚基组成，分子量亚
19、基组成，分子量(kD)转录因子转录因子蛋白激酶活性，使蛋白激酶活性，使CTD磷磷酸化酸化TFHATPase57（ ） 34（ ）TFE解螺旋酶解螺旋酶30，74TFF促进促进RNA-pol结合及作结合及作为其他因子结合的桥梁为其他因子结合的桥梁33TFB稳定稳定TFD-DNA复合物复合物12，19，35TFA辅助辅助TBP-DNA结合结合TAF*结合结合TATA盒盒TBP* 38TFD功功能能亚基组成，分子量亚基组成，分子量(kD)转录因子转录因子3. 转录起始前复合物转录起始前复合物(pre-initiation complex, PIC) 真核生物真核生物RNA-pol不与不与DNA分子直
20、接结分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。合，而需依靠众多的转录因子。 POL-TFFAB由由RNA-Pol 催化转录的催化转录的PIC POL-TFFHETBPTAFTFD-A-B-DNA复合物复合物TATAABTBPTAFTATAHECTD-PPIC组装完成，组装完成，TFH使使CTD磷酸化磷酸化4. 拼拼板理论板理论(piecing theory) 一个真核生物基因的转录需要一个真核生物基因的转录需要3至至5个转个转录因子。转录因子之间互相结合，生成有活录因子。转录因子之间互相结合，生成有活性，有专一性的复合物，再与性，有专一性的复合物，再与RNA聚合酶搭聚合酶搭配而有针对性地结合、转录
21、相应的基因。配而有针对性地结合、转录相应的基因。 （二）转录延长（二）转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体。前移处处都遇上核小体。 转录延长过程中可以观察到核小体移位和转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。解聚现象。 RNA-PolRNA-PolRNA-Pol核小体核小体转转录录延延长长中中的的核核小小体体移移位位转录方向转录方向5 -AAUAAA-5 -AAUAAA-核酸酶核酸酶-GUGUGUGRNA-polAAT
22、AAA GTGTGTG转录终止的修饰点转录终止的修饰点5 5 3 3 3 3 加尾加尾AAAAAAA 3 mRNA（三）转录终止（三）转录终止 和转录后修饰密切相关。和转录后修饰密切相关。真核生物转录终止的特点真核生物转录终止的特点 真核生物真核生物mRNA带有聚腺苷酸尾巴的结带有聚腺苷酸尾巴的结构，这是转录之后加上的。构，这是转录之后加上的。 在模板链读码框架的在模板链读码框架的3端之后，常有一端之后，常有一组共同序列组共同序列AATAAA，再下游还有相当再下游还有相当多的多的GT序列，这些序列称为转录终止的序列，这些序列称为转录终止的修饰点。修饰点。转录与复制的相似之处转录与复制的相似之处
23、 都以都以DNA为模板为模板 需要核苷酸作原料，从需要核苷酸作原料，从5到到3延长；延长；生成磷酸二酯键以连接核苷酸生成磷酸二酯键以连接核苷酸 都遵从碱基配对规律都遵从碱基配对规律 都需要依赖都需要依赖DNA的聚合酶的聚合酶 产物都是很长的多核苷酸产物都是很长的多核苷酸转录和复制的区别转录和复制的区别复制转录模板两股链均复制模板链转录原料dNTPNTP配对A-T，G-CA-U,T-A,G-C聚合酶DNA 聚合酶RNA 聚合酶产物半保留式复制mRNA、 tRNA、 rRNA等真核生物的转录后修饰真核生物的转录后修饰Post-transcriptional Modification第三节第三节转录
24、后的修饰转录后的修饰 转录生成的转录生成的RNA，称为称为初级转录产物初级转录产物。 无论在真核生物或原核生物中，初级转无论在真核生物或原核生物中，初级转录产物都经过一定程度的修饰加工，才录产物都经过一定程度的修饰加工，才能表现其功能。能表现其功能。几种主要的修饰方式几种主要的修饰方式1. 剪接剪接(splicing)2. 剪切剪切(cleavage)3. 修饰修饰(modification)4. 添加添加(addition)一、真核生物一、真核生物mRNA的转录后加工的转录后加工（一）首、尾的修饰（一）首、尾的修饰 5 端形成端形成 帽子结构帽子结构(m7GpppGp ) 3 端加上端加上多
25、聚腺苷酸尾巴多聚腺苷酸尾巴(poly A tail)帽子结构帽子结构5 pppGp5 GpppGppppG ppi鸟苷酸鸟苷酸转移酶转移酶5 m7GpppGp甲基转移酶甲基转移酶SAM帽帽子子结结构构的的生生成成5 ppGp磷酸酶磷酸酶 Pi5加帽加帽 转录产物的第一个核转录产物的第一个核苷酸苷酸pppG水解成水解成5-ppG或或5-pG 与另一个三磷酸鸟苷与另一个三磷酸鸟苷生成生成三磷酸双鸟苷三磷酸双鸟苷 第二个鸟嘌呤被甲基第二个鸟嘌呤被甲基化化 加帽出现在加帽出现在hnRNA中，中，说明可能在细胞核中说明可能在细胞核中完成，并在剪接之前。完成，并在剪接之前。3端加上聚腺苷酸尾巴端加上聚腺苷
26、酸尾巴 真核生物真核生物mRNA中中poly A的出现是不依赖于的出现是不依赖于DNA模板的。模板的。 加入加入poly A之前，先由核酸外切酶切去之前，先由核酸外切酶切去3末端一些过剩的核苷酸，然后加入末端一些过剩的核苷酸，然后加入polyA。 3端修饰也是在细胞核中，在剪接之前进端修饰也是在细胞核中，在剪接之前进行的。行的。 poly A的有无与长短，是维持的有无与长短，是维持mRNA作为翻作为翻译模板的活性，以及增加译模板的活性，以及增加mRNA本身的稳定本身的稳定性。性。3端修饰示意图端修饰示意图（二）（二）mRNA的剪接的剪接1. hnRNA 和和 snRNA 核内的初级核内的初级m
27、RNA称为称为杂化核杂化核RNA (hetero-nuclear RNA, hnRNA) snRNA (small nuclear RNA)核内的蛋白质核内的蛋白质小分子核糖核酸蛋白体小分子核糖核酸蛋白体（并接体（并接体, , splicesome）snRNA真核生物结构基因，由若干个编码区和非真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因断裂基因。 断裂基因断裂基因(splite ge
28、ne)CABD编码区编码区 A、B、C、D非编码区非编码区2. 外显子外显子(exon)和内含子和内含子(intron) 外显子外显子在断裂基因及其初级转录产物上出现，在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟并表达为成熟RNA的核酸序列。的核酸序列。 内含子内含子隔断基因的线性表达而在剪接过程中被隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。除去的核酸序列。 鸡卵清蛋白鸡卵清蛋白基因基因hnRNA首、尾修饰首、尾修饰hnRNA剪接剪接成熟的成熟的mRNA鸡鸡卵卵清清蛋蛋白白基基因因及及其其转转录、录、转转录录后后修修饰饰鸡卵清蛋白成熟鸡卵清蛋白成熟mRNA与与DNA杂交电镜图杂交电镜
29、图DNAmRNA真核细胞真核细胞mRNA的剪接的剪接 DNA模板与模板与hnRNA是完全配是完全配对的，而成熟的对的，而成熟的mRNA与与hnRNA或或DNA杂交都只杂交都只是部分配对。是部分配对。 因此真核生物的因此真核生物的基因有基因有断裂性断裂性。3. 内含子的分类内含子的分类 根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子分为子分为4 4类。类。 I I：主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的核生物的 rRNA基因；基因；II II：也发现于线粒体、叶绿体，转录产物是也发现于线粒体、叶绿体，转录产物是mRNA；
30、IIIIII：是常见的形成套索结构后剪接，大多数是常见的形成套索结构后剪接，大多数mRNA基因有此类内含子；基因有此类内含子； IVIV：是是tRNA基因及其初级转录产物中的内基因及其初级转录产物中的内含子，剪接过程需酶及含子，剪接过程需酶及ATP。4. mRNA的剪接的剪接 除去除去hnRNA中的内含子，将外显子连接。中的内含子，将外显子连接。snRNP与与hnRNA结合成为并接体结合成为并接体目目 录录UACUACA - AGUGU4U5U6E1E2U1U2UACUACA - AGUGU6E1E2U1、U4、U5pG-OH(ppG-OH, pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次转酯反
31、应第一次转酯反应第二次转酯反应第二次转酯反应UpAGpU外显子外显子1内含子内含子外显子外显子2G-OHUpUpGpA剪接过程的二次转酯反应剪接过程的二次转酯反应 (twice transesterification) RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工化加工(differential RNA processing)。5. mRNA的编辑的编辑(mRNA editing) 人类人类apo B基因基因 mRNA（14500个核苷酸）个核苷酸）肝脏肝脏apo B100（
32、分子量为（分子量为500 000）肠道细胞肠道细胞apo B48（分子量为（分子量为240 000）mRNA编辑编辑内含子的功能内含子的功能 内含子有利于物种的进化选择内含子有利于物种的进化选择 调节功能调节功能 特殊性编码酶分子特殊性编码酶分子tRNA的转录后加工的转录后加工 初级产物中有初级产物中有5端的端的16个碱基和反密码个碱基和反密码子后的子后的14个碱基需要去除。个碱基需要去除。二、二、tRNA的转录后加工的转录后加工tRNA前体前体RNA pol TGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNARNAaseP、内切酶内切酶tRNA核苷酸转移酶、核苷酸转移酶、连接酶连接酶ADPA
33、TP碱基修饰碱基修饰（2）还原反应）还原反应 如：如：U DHU （3）核苷内的转位反应）核苷内的转位反应 如：如：U （4）脱氨反应）脱氨反应 如：如：A I 如：如：A Am（1）甲基化）甲基化（1 1）（1 1）（3 3）（2 2）（4 4）涉及加工的反应涉及加工的反应 甲基化甲基化 还原还原 核苷内的转核苷内的转位反应位反应 脱氨反应脱氨反应 3端加上端加上CCA-OH三、三、rRNA的转录后加工的转录后加工转录转录45S - rRNA剪接剪接18S - rRNA5.8S和和28S-rRNArDNA内含子内含子内含子内含子28S5.8S18SrRNA的转录后加工的转录后加工 丰富基因丰
34、富基因：染色体上一些相似或完全一：染色体上一些相似或完全一样的纵列串联基因单位的重复。样的纵列串联基因单位的重复。 真核细胞的真核细胞的rRNA基因属于丰富基因。基因属于丰富基因。 45s的转录产物是三种的转录产物是三种rRNA的前体，经的前体，经过剪接后形成核糖体小亚基的过剪接后形成核糖体小亚基的18S rRNA，其余形成其余形成5.8S及及28S的的rRNA。四膜虫四膜虫rRNA的结构的结构四膜虫四膜虫rRNA内含子的二级结构内含子的二级结构四膜虫四膜虫rRNA的剪接采用的剪接采用自我剪接自我剪接方式方式5 -端核苷酸序列端核苷酸序列核酶核酶(ribozyme) 核酶核酶：RNA本身具有催
35、化活性，此种由本身具有催化活性，此种由RNA发挥催化作用的酶，称为核酶。发挥催化作用的酶，称为核酶。 最简单的核酶呈槌头结构。最简单的核酶呈槌头结构。最简单的核酶二级结构最简单的核酶二级结构槌头状结构槌头状结构(hammerhead structure)底物部分底物部分通常为通常为60个核苷酸左右个核苷酸左右同一分子上包括有催化同一分子上包括有催化部份和底物部份部份和底物部份 催化部份和底物部份组催化部份和底物部份组成锤头结构成锤头结构 除除rRNA外，外，tRNA、mRNA的加工也可采用的加工也可采用自我剪接方式。自我剪接方式。 核酶研究的意义核酶研究的意义 核酶的发现，对中心法则作了重要补
36、充；核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战；核酶的发现是对传统酶学的挑战； 对进化的研究有帮助对进化的研究有帮助； 利用核酶的结构设计合成人工核酶利用核酶的结构设计合成人工核酶, ,应用于应用于疾病的治疗。疾病的治疗。人工设计的核酶人工设计的核酶粗线表示合成的核粗线表示合成的核酸分子酸分子细线表示天然的核细线表示天然的核酸分子酸分子X X 表示一致性序列表示一致性序列箭头表示切断点箭头表示切断点附录GOH3 G5 OH5 3 GOH414G 3995 3 3955 3 E1E2I四膜虫四膜虫RNARNA的自我剪接的自我剪接5 3 L19RNA具有催化活具有催化活性的片段性的片段首先发现的核酶：首先发现的核酶：L19 RNA 具催化活性：具催化活性： 核苷酸转移酶核苷酸转移酶 2CpCpCpCpCp Cp6 + Cp4 磷酸二酯酶磷酸二酯酶 CpCpCpCpC Cp4+ pC 磷酸转移酶磷酸转移酶 Cp4Cp Cp4C+UpCpUp 限制性内切酶限制性内切酶 RNA-CUCU RNA+CUCU 反应具有专一性：只催化反应具有专一性：只催化RNA，对，对DNA 有竞争性抑制剂：有竞争性抑制剂：dpC5，Ki=260 mol/L UpCpU
