1、Detection of hepatitis C virus infection核心抗原检测-丙肝诊断的下一步： QuasispeciesHCV感染宿主后，经感染宿主后，经一定时期，在感染者一定时期，在感染者体内形成以一个优势体内形成以一个优势株为主的相关突变株株为主的相关突变株病毒群，称为准种病毒群，称为准种丙型肝炎流行病学丙型肝炎流行病学Worldwide Prevalence of HCV infectionq全球性的健康问题全球性的健康问题(WHO) q感染人数达感染人数达2.27亿亿q慢性感染者约慢性感染者约1.7亿亿q每年的新感染者达每年的新感染者达3万万q在北欧的发病率约为在北欧
2、的发病率约为0.5%，而在埃及则高达而在埃及则高达20%q估计仍有大量漏报病例（美估计仍有大量漏报病例（美国的国的“隐形杀手隐形杀手”）q中国丙肝流行率中国丙肝流行率?HCV Infection Prevalence in ChinaDai ZC, et al. The viral hepatitis of China: the epidemiological of serous, 1997.60-71. standardized rate: Year 1992-1995 3.2% 38.4 million patients in China at least 我我国国HCV感染感染流行率流行
3、率 3.2% 3千千8百万感染者百万感染者Evolution of anti-HCV antibody assaysCE1E2NS2NS3NS4Bp7NS4ANS5ANS5Bstructural non-structural c22c33c100NS55-1-11st generation EIA2nd generation EIA3rd generation EIA/CIA5-UTR3-UTR1990*1992*1996* Years in which the assays were approved by FDA检测模式的改进检测模式的改进间接法间接法夹心法夹心法竞争法竞争法灵敏度较低重现
4、性不佳不适合定量灵敏度提高重现性提高可用于定量灵敏度/特异性更佳特异性更高适合定量雅培Axysm罗氏Elecsys雅培Architect？HCV Infection Prevalence in ChinaRecent data: Anti-HCV in general population: 0.43%我我国国HCV感染感染流行率流行率 最新数据最新数据 0.43% ？感染者？感染者Press Release, Ministry of Health, P.R. China. (2010).HCV感染绝大部分并未被诊断出来感染绝大部分并未被诊断出来http:/ Schlosser et al.
5、EASL 2009; Vermehren et al. DGVS 2010; Gane. New Zealand Doctor. 2007; http:/www.hepatitiscmsg.org/hep-c-facts-stats.html.Reported Epidemic of Hepatitis C Reported Epidemic of Hepatitis C in China: 2000-2010 in China: 2000-2010 估计估计HCV感染者感染者: 500万万1000万万肝炎类型肝炎类型发病数发病数 发病率发病率 /10/10万万甲肝甲肝 4384143841
6、3.30 3.30 乙肝乙肝1,179,6071,179,607 88.82 88.82 丙肝丙肝 131849131849 9.93 9.93 戊肝戊肝 2027520275 1.53 1.53 未分型未分型 4944849448 3.72 3.72 合计合计14250201425020 107.30 107.30 20092009年病毒性肝炎发病情况年病毒性肝炎发病情况 资料来源：法定传染病报告系统资料来源：法定传染病报告系统中国中国HCV感染的诊断和治疗现况感染的诊断和治疗现况估计HCV感染者: 500万1000万2010年CDC报告发病数: 158,758仅占:1.6%3.2%HCV治
7、疗的治疗的进展进展发现HCV 基因组加用 RBV联合IFN alfa 改善疗效Peg-IFN alfa联合RBV 成为标准治疗用 IFN alfa 治疗24 或者48周 每周三次 结果欠佳Peg-IFN单药 每周一次20111989根据应答指导治疗（RGT）出现新抗病毒药物的研发第一个DAA药物上市对丙肝抗病毒治疗应答良好对丙肝抗病毒治疗应答良好Preliminary Results of China 11Preliminary Results of China 11thth 5-year Plan 5-year Plan high RVRhigh RVR and EVRand EVR pre
8、dict achieving the expected SVRpredict achieving the expected SVR48 weeks Peg-IFN -2a 180 g/week plus ribavirin 800 mg/day (N=362)357533178Chen X-Y, Wei L, et al. Data on file020406080100RVRNull responsecEVReRVRpEVRPatients (%)HCV感染预后感染预后l7580新感染新感染HCV人群会发展成慢性肝炎，人群会发展成慢性肝炎，据估计，经过据估计，经过1020年的慢性病程后，年的
9、慢性病程后，20的患的患者发展为肝硬化，部分患者发展为肝癌者发展为肝硬化，部分患者发展为肝癌1。lHCV的抗病毒治疗效果远远优于的抗病毒治疗效果远远优于HBV，大部分，大部分HCV患者通过抗病毒治疗可获得治愈，其持续病患者通过抗病毒治疗可获得治愈，其持续病毒学应答（毒学应答（SVR）率高）率高2。1.丙型肝炎防治指南丙型肝炎防治指南20102.China Medical Tribune 2010 Mar 25,A15Foster et al. AASLD 2003; Zeuzem et al. Ann Int Med 2004;140:370.Age (years)Sustained viro
10、logic response (%)2025304045355055602030405060708090晚诊断、晚治疗晚诊断、晚治疗 = 低治愈率低治愈率加强加强HCV的筛查：抗的筛查：抗-HCV检测检测Ghany et al. Hepatology 2009;49:1335.EASL Clinical Practice Guidelines: Management of hepatitis C virus infection. J Hepatol, 2011,55:245.HCV筛查静脉吸毒人群高流行区域人群HCV感染者的性伴1992年以前接受过输血手术、器官移植共用注射器、纹身、共用注射器
11、、纹身、纹眉、口腔治疗、侵纹眉、口腔治疗、侵入性诊疗、入性诊疗、1992年以年以前单采浆前单采浆HCV感染者的家庭成员HCV暴露史HCV 感染的血清学感染的血清学症状暴露后时间滴度抗-HCVALT正常01234561234年月HCV-RNAHCV 核心抗原症状 暴露后时间滴度抗-HCVALT正常01234561234年月HCV-RNAHCV 核心抗原急性感染痊愈急性感染进展为慢性感染HCV 感染的血清学感染的血清学症状暴露后时间滴度抗-HCVALT正常01234561234年月HCV-RNAHCV 核心抗原症状 暴露后时间滴度抗-HCVALT正常01234561234年月HCV-RNAHCV
12、核心抗原急性感染痊愈急性感染进展为慢性感染抗抗-HCV抗体检测不能够鉴别既往感染抗体检测不能够鉴别既往感染痊愈者和慢性感染者痊愈者和慢性感染者 早期感染早期感染Diagnosis of HCV infection lSerologylAnti-HCVlScreening testslConfirmatory testslHCV Core antigenlNAT (nucleic acid test)lHCV RNAlQualificationlQuantificationlHCV genotype and sub-genotypelHCV drug resistance急急/慢性慢性HCV感染
13、感染患者患者Hepatitis C VirusVirus first identified in 1989, Flaviviridae family Small, lipid-enveloped virus (50nm)Single, positive-stranded RNA virus-naked HCV genome infectiousEnvelopeCore AgssRNA GenomeHCV 核心抗原检测核心抗原检测l上世纪90年代， HCV 核心抗原检测1,2 l20世纪初: 首个 HCV coreAg assay (trak-C, Ortho)l有用的补充诊断工具，和HCV-R
14、NA均有很好的相关性3 l 2009年： 全自动化学发光HCVcore Ag test(Abbott)l高灵敏度定量检测HCV 总核心抗原3,41Tanaka T et al, J Hepatol 1995;23:7425.2Aoyagi K et al, J Clin Microbiol 1999;37:18028.3Tillmann HL et al, Z Gastroenterol 2005;43:116.4Park Y. et al. J Clin Microbiol 2010HCV core antigen定量与罗氏定量与罗氏 Amplicor HCV RNA的相关性的相关性血清标本
15、(n=735): r=0.887100102104106108100102104106r=0.75 (p0.001, n=118)HCV-RNA (IU/ml)HCV core Ag (fmol/L)100102104106108100102104106 r=0.72 (p0.001, n=54)HCV-RNA (IU/ml)HCV core Ag (fmol/L)100102104106108100102104106r=0.77 (p=0.0036, n=12)HCV-RNA (IU/ml)HCV core Ag (fmol/L)100102104106108100102104106r=0.
16、73 (p0.0001, n=23)HCV-RNA (IU/ml)HCV core Ag (fmol/L)GT1GT2GT3GT allMederacke et al, J Clin Virol 2009HCV 核心抗原和不同基因型HCV-RNA相关性良好The concentrations of serum HCV core antigen were highly correlated with HCV RNA level in HIV- CHC and HIV+ CHC individualsShen T, et al. PLoS ONEMederacke et al, J Clin Vi
17、rol 20090244872960501001502002504C20C dark20C light37C0244872960501001502002504C20C dark20C light37C37C*048960501001502002504C20C dark20C light37C048960501001502002504C20C dark20C light37CTime in hours HCV-RNA HCV core Antigen (% of baseline)血浆血浆全血全血HCV核心抗原核心抗原 37C时，比时，比HCV-RNA 稳定稳定01234510010001000
18、0HCV core Ag in 5 single patients after 1 to 5 thawing/freezing cyclesThawing/freezing cyclesHCV core Ag (fmol/L)HCV 核心抗原核心抗原 5次冻融后比次冻融后比HCV-RNA 稳定稳定Mederacke et al, J Clin Virol 20090102030405060708090100HCV RNAHCV 抗原HCV 抗体第一代抗体检测第三代抗体检测第二代抗体检测HCV RNA 1. 缩短窗口期缩短窗口期感染日：感染日：0HCV RNA：12天天 HCV 抗原：抗原：12
19、15天天抗抗HCV：3070天天402. HCV 核心抗原检测能早期检出急性核心抗原检测能早期检出急性HCV感染感染Morota K et al, J Virol Methods 2009;157:814.Ross RS et al, Jour Clin Microb, Apr. 2010, p. 1161116841Kidney International (2008) 73 (Suppl 109), S6S9China Medical Tribune 2010 Mar 25,A15一般人群透析人群美国法国日本中国316.4201514HCV感染率（）透析人群透析人群HCV HCV 感染发病
20、率高感染发病率高42HCVHCV抗原检测列入透析常规检测项目抗原检测列入透析常规检测项目Anti-HCVHCVAg(Abbott )HCV PCRALTPre-HDPost-HD每每 3 月月若若HD前前PCR阴性无需每年阴性无需每年复查复查每月每月Pre-HDPost-HD每每6月月每每3月月UK1China21.blood borne viruses in haemodialysis,CAPD and renal transplantation 2010,UK2.血液净化标准操作规程(SOP)2010版Anti-HCV- HCVAg- 每每3月月Anti-HCV+HCVAg- 每月每月43
21、Patient 1024601.01062.01063.010602000400060008000R=0.98 (n=4)Time (d)HCV-RNA (IU/ml)HCV core Ag (fmol/L)Patient 2024601.01062.01063.010602000400060008000R=0.98 (n=4)Time (d)HCV-RNA (IU/ml)HCV core Ag (fmol/L)Patient 3024601.01062.01063.010602000400060008000R=0.86 (n=4)Time (d)HCV-RNA (IU/ml)HCV core
22、 Ag (fmol/L)1.01021.01041.01061.01081.01021.01041.01061.0108R=0.99 (n=23)a) Correlation of HCV core Ag in cell culture supernatantsof JFH-1-infected HUH7.5 cells determined by twodifferent assaysHCV core Ag (fmol/L) with Abbott testHCV core Ag (fmol/L)with Ortho test1.01021.01041.01061.01021.01041.0
23、106R=0.92 (n=14)b) Correlation of supernatants with HCV coreAg 100000 fmol/LHCV core Ag (fmol/L) with Abbott testHCV core Ag (fmol/L)with Ortho testMederacke et al, J Clin Virol 2009443. 用于用于抗病毒抗病毒治疗病情监测治疗病情监测Ross RS et al, Jour Clin Microb, Apr. 2010, p. 11611168HCV患者治疗监测患者治疗监测45HCV核心抗原检测的意义核心抗原检测的
24、意义 预测治疗预测治疗HCV core Ag assay could service as a key serological marker for HCV diagnosis and treatment monitoring and outcome prediction:-Screening of patients at high risk, i.e dialysis, IVDU, transplants, immunocompromised/HIV patients, spouses married with HCV patients-Treatment monitoring and pr
25、ediction-DiagnosisDefine Chronic HCV: HCV Core Ag 6 monthsDetection of HCV infection in window periodAcute panelDefine HCV diagnosis: active vs recovered HCV infectionBlood ScreeningA Higher Correlation of HCV Core Antigen with CD4+ TCell Counts Compared with HCV RNA in HCV/HIV-1 Co-infected Patient
26、sTao Shen, Xiangmei Chen, Weidong Zhang, Yuanlin Xi, Guanghua Cao, Yuhong Zhi, Shuiwang Wang, Chunhui Xu, Lai Wei, Fengmin Lu*, Hui Zhuang*1 Department of Microbiology and Infectious Disease Center, Peking University Health Science Center, Beijing, China2 Department of Epidemiology, College of Publi
27、c Health, Zhengzhou University, Zhengzhou, Henan, China3 Shangcai County Peoples Hospital, Shangcai, Henan, China4 Shangcai Center for Disease Control and Prevention, Shangcai, Henan, China5 Institute of Hepatology, Peking University Peoples Hospital, Beijing, ChinaMethodsMethodsHCV核心抗原浓度核心抗原浓度HCVRN
28、A水平水平抗抗HCV抗体浓度抗体浓度ALT、AST外周血外周血CD4+T细胞计数细胞计数354份来自河南上蔡某自然村前有偿献血者份来自河南上蔡某自然村前有偿献血者，血清血清抗抗-HCV和和/或抗或抗-HIV抗体阳性抗体阳性 检测指标：检测指标：Figure 1. The distributional characteristics of HCV- and/or HIV-infected patients involved in this study A：354份样本分为份样本分为5组组：HIV- CHC (129, 36.44%)HIV+ CHC (98, 27.68%)HIV- SVC (6
29、5, 18.36%)HIV+ SVC (44, 12.43%) HIV单感染组单感染组 (18, 5.09%)Study Cohort HCV核心抗原的检测下核心抗原的检测下限达到限达到3fmol/L97.96%的的HIV- 的的CHC患者和患者和96.9%的的HIV+的的 CHC患者可以检测出患者可以检测出HCV核心抗原。核心抗原。HIV- CHC: b(r=0.8083, p0.001）HIV+ CHC（r=0.9524, p0.001）Figure 4：The concentration of HCV core antigen in serum were highly correlate
30、d with HCV RNA level in both HIV-noninfected CHC and HIV-infected CHC patientsResult在在HIV/HCV共感染者，共感染者，HCV核心抗原浓度和核心抗原浓度和HCV RNA载量间载量间呈良呈良好相关好相关性性中国流行中国流行HCV亚型亚型HCV-1b和和HCV-2a在在HCV核心抗原核心抗原浓度和浓度和HCV RNA载量之间载量之间的相关性的相关性没有没有显著差异显著差异。Figure 4：The concentration of HCV core antigen in serum were highly cor
31、related with HCV RNA level in both HIV-noninfected CHC and HIV-infected CHC patientsResult在在HIV/HCV共感染者，共感染者，HCV核心抗原浓度和核心抗原浓度和HCV RNA载量间载量间呈良呈良好相关好相关性性Result-5Figure 6: Correlation analysis between anti-HCV Abs response (S/CO ratio)(A), or HCV viral load (B), or HCV core antigen concentration (C) an
32、d CD4+ T cell counts displayed in HIVinfectedCHC patients with CD4+ T cell counts less than 1000/l.在在HCV/HIV共感染组（共感染组（HIVpos-CHC）内，）内，HCV Abs与与CD4计数（计数（1000/l）之间为显著正相关（之间为显著正相关（r=0.3155, p=0.0033）；HCV核心抗原浓度与核心抗原浓度与CD4计数（计数（1000/l）之间为显著负相关（）之间为显著负相关（r=0.-0.2847, p=0.0083）；HCV RNA载量与载量与CD4计数之间没有相关性（计数
33、之间没有相关性（r=0.-0.1657, p=0.1295）。）。ConclusionConclusionl在在HCV/HIV共感染患者中，共感染患者中，HCV抗体的抗体的S/CO比值明显降低，该结比值明显降低，该结果提示实际工作中判断果提示实际工作中判断HCV抗体阳性的标准要有别于抗体阳性的标准要有别于HCV单感染单感染者。者。l在在HCV感染者中，特别是在感染者中，特别是在HCV/HIV共感染患者中，血浆共感染患者中，血浆HCV核核心抗原浓度检测可作为一个比心抗原浓度检测可作为一个比HCV RNA载量更好的替代物，用于载量更好的替代物，用于反应反应HCV病毒复制水平和判断病毒复制水平和判断HCV复制与复制与HCV/HIV共感染患者中共感染患者中宿主免疫状态之间的关联性宿主免疫状态之间的关联性。此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！
