1、临床生化检验反应原理临床生化检验反应原理及报告的审核及报告的审核检验科检验科 1PPT课件主要内容主要内容常见的生化反应原理常见的生化反应原理检验报告审核普遍存在的问题检验报告审核普遍存在的问题检验报告审核的建议检验报告审核的建议总结总结2PPT课件终点分析法（平衡法）终点分析法（平衡法） 连续监测法连续监测法比浊测定法比浊测定法一、常见的生化反应原理一、常见的生化反应原理3PPT课件 终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小，对物质进吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小，对物质进行定量的一类分析方法。反应混合物进行一定时
2、间行定量的一类分析方法。反应混合物进行一定时间反应后，达到平衡终点，即在显色反应处于稳定阶反应后，达到平衡终点，即在显色反应处于稳定阶段时，监测其颜色对光的吸收强度，以此计算待测段时，监测其颜色对光的吸收强度，以此计算待测物浓度。分为一点、两点终点法物浓度。分为一点、两点终点法终点分析法终点分析法4PPT课件一点终点法一点终点法 一点终点法：一点终点法的特点是使用一点终点法：一点终点法的特点是使用一种或两种试剂。当样品和试剂混合后，待一种或两种试剂。当样品和试剂混合后，待测物与试剂的物理化学反应达到终点时，测测物与试剂的物理化学反应达到终点时，测定吸光度，计算待测物质的浓度。该法要求定吸光度，
3、计算待测物质的浓度。该法要求试剂本底颜色要深，该法具有代表性的试验试剂本底颜色要深，该法具有代表性的试验有：总蛋白、白蛋白、镁测定有：总蛋白、白蛋白、镁测定5PPT课件TP反应曲线反应曲线6PPT课件Mg反应曲线反应曲线7PPT课件 二点终点法：一般是用双试剂，是自动二点终点法：一般是用双试剂，是自动化生化分析仪常用的一种方法。该方法的化生化分析仪常用的一种方法。该方法的优点是可以消除样品、试剂的颜色、浊度优点是可以消除样品、试剂的颜色、浊度以及一些干扰物质的影响。代表性的试验以及一些干扰物质的影响。代表性的试验有葡萄糖等有葡萄糖等两点终点法两点终点法8PPT课件Cre反应曲线反应曲线9PPT
4、课件 测定底物的消耗或产物生成的速度的化学测定底物的消耗或产物生成的速度的化学方法称为连续监测法（又称动态分析法、速率方法称为连续监测法（又称动态分析法、速率法或动力学法）。在反应速度恒定期（零级反法或动力学法）。在反应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定反应时间内底物应期）来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化。以单位时间酶促反应初速度或产物量的变化。以单位时间酶促反应初速度计算酶活力的大小和代谢物的浓度。计算酶活力的大小和代谢物的浓度。连续监测法连续监测法10PPT课件酶促反应进程曲线酶促反应进程曲线11PPT课件酶促反应进程曲线酶促反应进程曲线12PPT课件典型酶联法反
5、应曲线典型酶联法反应曲线13PPT课件AMY反应曲线反应曲线14PPT课件ALT反应曲线反应曲线15PPT课件 通过检测物质对光的散射或透射强度通过检测物质对光的散射或透射强度来测定物质的方法称比浊法。比浊法可来测定物质的方法称比浊法。比浊法可分为化学比浊法和免疫比浊法，免疫比分为化学比浊法和免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊和散射比浊。全自浊法又分为透射比浊和散射比浊。全自动生化仪常用透射比浊法，常用于特种动生化仪常用透射比浊法，常用于特种蛋白测定。其工作曲线为抛物线。蛋白测定。其工作曲线为抛物线。 比浊测定法比浊测定法16PPT课件比浊测定法比浊测定法注意事项：注意事项：抗原或抗体量（测
6、定物）大大过剩，可出现可抗原或抗体量（测定物）大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差。溶性复合物，造成误差。应维持反应管中抗体蛋白（底物）始终过剩。应维持反应管中抗体蛋白（底物）始终过剩。 易受到脂血的影响。易受到脂血的影响。 17PPT课件二、报告审核中的普遍问题二、报告审核中的普遍问题责任心不强，未对结果进行认真审核责任心不强，未对结果进行认真审核对检测仪器或试剂方法学不够了解对检测仪器或试剂方法学不够了解专业知识欠缺，工作经验不足专业知识欠缺，工作经验不足对仪器检测的结果及室内质控结果过对仪器检测的结果及室内质控结果过于相信于相信18PPT课件三、报告审核的建议三、报告审核的建议结合临床
7、资料审核结合临床资料审核结合分析项目间的内在联系审核（专业知识）结合分析项目间的内在联系审核（专业知识）结合影响检验结果因素审核结合影响检验结果因素审核u检验项目的方法学和线性检验项目的方法学和线性u检验标本的影响检验标本的影响u检验仪器性能影响检验仪器性能影响结合当日检验结果总体趋势审核结果结合当日检验结果总体趋势审核结果19PPT课件结合临床资料结合临床资料 结合病人的性别、年龄、临床诊断、其他结合病人的性别、年龄、临床诊断、其他检查结果审核检查结果审核 例：某病人检测的例：某病人检测的TP为为110g/L，该标本没，该标本没有脂血等影响检测结果的因素有脂血等影响检测结果的因素 临床诊断：
8、多发性骨髓瘤临床诊断：多发性骨髓瘤 另：胰岛素与低血糖、病人输注药物对结果另：胰岛素与低血糖、病人输注药物对结果的影响的影响20PPT课件检验项目间的内在联系检验项目间的内在联系各检测参数间存在大小、比例、逻辑关系各检测参数间存在大小、比例、逻辑关系例：例：HDL-C+LDL-CTC、Dbil Tbil CK-MB CK(M+B) -HBDH LDH(H+M) 原发性甲亢：原发性甲亢：T3、T4 、TSH等等21PPT课件影响检验结果的因素影响检验结果的因素 试剂线性范围：试剂线性范围： 了解检验项目试剂的线性范围，对超过了解检验项目试剂的线性范围，对超过或低于范围的项目，必须进行相应的减量稀
9、释或低于范围的项目，必须进行相应的减量稀释或增量后重新测定。或增量后重新测定。22PPT课件线性范围线性范围 在实际工作中，用连续监测法会遇到检验在实际工作中，用连续监测法会遇到检验结果为结果为0或者负值的情况，此时不能盲目相信或者负值的情况，此时不能盲目相信该结果低就出具低值报告，应查看其反应曲线该结果低就出具低值报告，应查看其反应曲线例：某病人的尿液例：某病人的尿液AMY检测结果为检测结果为0U/L 其反应曲线如下图：其反应曲线如下图：23PPT课件AMY反应曲线反应曲线24PPT课件AMY反应曲线分析反应曲线分析分析：由于测定物质浓度过高分析：由于测定物质浓度过高处理：对测定物质进行十倍
10、左右的稀释再测定，处理：对测定物质进行十倍左右的稀释再测定，直到反应曲线恢复正常结果才可靠直到反应曲线恢复正常结果才可靠25PPT课件影响检验结果的因素影响检验结果的因素检测项目的方法学：检测项目的方法学： 要了解该项目试剂采用的方法学：要了解该项目试剂采用的方法学： 例：某病人在测定心肌酶谱时，其例：某病人在测定心肌酶谱时，其CK:246U/L、 CK-MB:286U/L，标本无溶血等因素影响，标本无溶血等因素影响 其结果中其结果中CK-MBCK26PPT课件检测项目的方法学检测项目的方法学 分析：分析：CK是由是由M和和B两类亚基组成的二聚体，两类亚基组成的二聚体，其构成为其构成为CK-M
11、B(心型心型)约占约占0-3%、 CK-MM(肌肌型型)约占约占97-100%、 CK-BB（脑型）约占（脑型）约占0-1% 27PPT课件检测项目的方法学检测项目的方法学 CK-MB采用的检测方法为免疫抑制法采用的检测方法为免疫抑制法 原理原理:正常人体中，正常人体中，CK同工酶中同工酶中CK-MM CK-MB CK-BB,其中其中CK-BB含量极少，可忽含量极少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略略。免疫抑制法正是建立于忽略CK-BB的基础的基础上。采用抗体抑制其上。采用抗体抑制其M亚基活性，使亚基活性，使CK-MM失失去活性，而去活性，而CK-MB失去一半的活性。单测定失去一半的活性。单测
12、定B亚基的活性，其结果亚基的活性，其结果2即为即为CK-MB活性活性28PPT课件检测项目的方法学检测项目的方法学 原因分析：由于在患轻度或中度脑损伤、脑原因分析：由于在患轻度或中度脑损伤、脑 血管意外及脑手术后血管意外及脑手术后 、新生儿产程窒息造成、新生儿产程窒息造成 脑组织发生实质性损害脑组织发生实质性损害 的病人中，的病人中，CK-BB会会升高，这时该方法测定的升高，这时该方法测定的CK-MB的活性相当的活性相当于是于是CK-MB+2CK-BB的活性之和，造成的活性之和，造成 CK-MB活性假性升高活性假性升高29PPT课件检测项目的方法学检测项目的方法学为什么为什么CK-MB 2CK
13、不可能不可能 该测定该测定CK-MB活性活性=CK-MB+2CK-BB,如果如果CK-BB CK-MM,结果要乘结果要乘2，即，即CK-MB+2CK-BB CK-BB+CK-MB+CK-MM,测定的测定的CK-MB 活性活性 CK活性，但活性，但CK-MB 2CK不可能不可能解决方法：其他方法测定解决方法：其他方法测定CK-MB的质量的质量 30PPT课件检验标本的影响检验标本的影响 标本脂血会使反应浊度增加，透光度下降，标本脂血会使反应浊度增加，透光度下降，吸光度增加，从而造成检验结果不准确。如吸光度增加，从而造成检验结果不准确。如TP、TG、UA显著增高，显著增高，GGT显著下降或为显著下
14、降或为0 标本溶血会使标本溶血会使K+、ALT、AST、LDH等检验等检验结果显著升高结果显著升高抗凝剂的错误使用抗凝剂的错误使用31PPT课件仪器性能影响仪器性能影响 仪器老化、故障、清洗管道堵塞、水质仪器老化、故障、清洗管道堵塞、水质不纯等均会对检验结果造成影响不纯等均会对检验结果造成影响光路老化：表现为光路老化：表现为ALT、AST等项目结果重复等项目结果重复性较差性较差水质不纯、反应杯清洗不干净：表现为无机物水质不纯、反应杯清洗不干净：表现为无机物质结果不准质结果不准32PPT课件检验结果的总体趋势检验结果的总体趋势 即使质控在控，也要注意当日检验结果的即使质控在控，也要注意当日检验结
15、果的总体的分布趋势总体的分布趋势如如K+的参考区间为的参考区间为3.55.5，中值为，中值为4.5，如，如果当日结果大部分甚至全部低于果当日结果大部分甚至全部低于4.5，即使当，即使当日质控在控，任要考虑结果是否偏低，应重新日质控在控，任要考虑结果是否偏低，应重新校准、质控后再测定校准、质控后再测定 如在质控中如在质控中 TC(-1S),HDL (+1S) ,LDL(+1S),虽然在控，如出现大部分虽然在控，如出现大部分HDL+LDL TC，也应考虑重新对三项目校标、质控后再测定也应考虑重新对三项目校标、质控后再测定33PPT课件四、总结四、总结不要盲目相信仪器检测的结果一定准确不要盲目相信仪器检测的结果一定准确检验人员要增强对报告审核的责任心检验人员要增强对报告审核的责任心检验人员应加强对专业知识的学习和掌握检验人员应加强对专业知识的学习和掌握,了了解仪器的性能及各项目的方法学和反应原理解仪器的性能及各项目的方法学和反应原理对检验标本的状态要认真确认对检验标本的状态要认真确认对有疑问或报警的结果要查看反应曲线对有疑问或报警的结果要查看反应曲线加强与临床科室的沟通加强与临床科室的沟通34PPT课件35PPT课件
