药典常用定量分析方法概述课件.ppt

1、盐城卫生职业技术学院盐城卫生职业技术学院第四章第四章 药典中常用药典中常用定量分析方法概述定量分析方法概述药物分析技术药物分析技术Technology ofof Pharmaceutical Analysis学习目标学习目标 在回顾总结常见定量分析方法的基础上，在回顾总结常见定量分析方法的基础上，介绍了常见定量分析方法在介绍了常见定量分析方法在中国药典中国药典现行现行版中的应用，通过本章的学习，为理解好掌握版中的应用，通过本章的学习，为理解好掌握后面药物的含量测定打下坚实基础。后面药物的含量测定打下坚实基础。 重量分析法重量分析法 酸碱滴定酸碱滴定(非水酸碱滴定法非水酸碱滴定法) 配位滴定配位

2、滴定 容量分析法容量分析法 沉淀滴定沉淀滴定 分分 氧化还原滴定氧化还原滴定 纸色谱纸色谱PCPC 析析 电化学分析法电化学分析法 平面色谱平面色谱 化化 经典色谱经典色谱 薄层色谱薄层色谱TLC 学学 色谱分析色谱分析 柱色谱法柱色谱法(CC) 气相色谱法气相色谱法(GC) 现代色谱现代色谱 *高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC) 高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法(HPCE) 紫外紫外可见分光光度法可见分光光度法(UVVis) 红外分光光度法红外分光光度法IR 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法(AAS) 光谱分析光谱分析 原子发射分光光度法原子发射分光光度法(AES) 或波谱分析或波

3、谱分析 荧光分析法荧光分析法(Fluor) 核磁共振法核磁共振法(NMR) 质谱法质谱法(MS)电导法电导法 电位法电位法 伏安法伏安法 电化学分析法电化学分析法 电解法电解法 极谱法极谱法 续前按任务分按任务分 定性分析定性分析 定量分析定量分析 结构分析结构分析：鉴定组成：鉴定组成：测定含量：测定含量：研究结构：研究结构知识要求知识要求 掌握常见定量分析方法的基本原理，在药物掌握常见定量分析方法的基本原理，在药物分析中的测定方法及分析结果的计算。分析中的测定方法及分析结果的计算。 熟悉常见定量分析方法在使用中的注意事项。熟悉常见定量分析方法在使用中的注意事项。 了解其他定量分析方法及高效液

4、相色谱仪、了解其他定量分析方法及高效液相色谱仪、紫外紫外-可见分光光度计等仪器的结构。可见分光光度计等仪器的结构。能力要求 熟练应用常见定量分析技术对药物进行定熟练应用常见定量分析技术对药物进行定量分析。量分析。 学会使用定量分析仪器并能对分析数据进学会使用定量分析仪器并能对分析数据进行处理。行处理。Ch4-1 化学分析法化学分析法 重量分析法重量分析法 酸碱滴定法酸碱滴定法 氧化还原滴定法氧化还原滴定法 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 沉淀滴定法沉淀滴定法 配位滴定法配位滴定法Ch4-1-1 重量分析法重量分析法 通过称量被测组分的质量来确定被测通过称量被测组分的质量来确定被测组分百分含量的分

5、析方法组分百分含量的分析方法Ch4-1-2 酸碱滴定法酸碱滴定法 容量分析法（滴定分析法）：将一种已知准容量分析法（滴定分析法）：将一种已知准确浓度溶液（滴定液）滴加到待测物质的溶确浓度溶液（滴定液）滴加到待测物质的溶液中，直到化学反应按计量关系完全作用为液中，直到化学反应按计量关系完全作用为止，然后根据所用滴定液的浓度和体积计算止，然后根据所用滴定液的浓度和体积计算出待测物质含量的一种分析方法。出待测物质含量的一种分析方法。 酸碱滴定法（中和法）：以酸、碱中和反应酸碱滴定法（中和法）：以酸、碱中和反应为基础的滴定分析法。以酸（碱）性滴定液为基础的滴定分析法。以酸（碱）性滴定液滴定到被测物质，

6、以酸碱指示液或仪器指示滴定到被测物质，以酸碱指示液或仪器指示终点，根据酸（碱）滴定液的浓度好消耗的终点，根据酸（碱）滴定液的浓度好消耗的体积，计算出被测物质的含量。体积，计算出被测物质的含量。电离理论电离理论电子理论电子理论质子理论质子理论应用应用 直接滴定法：直接滴定法： Ca Ka1 10-8 的弱酸的弱酸 Cb Kb1 10-8 的弱碱的弱碱 剩余滴定法剩余滴定法非水溶液滴定法非水溶液滴定法non-aqueous titration method 非水溶液酸碱滴定法是以非水溶剂作为滴定介非水溶液酸碱滴定法是以非水溶剂作为滴定介质，不仅可增大有机物的溶解度，还可改变溶液的质，不仅可增大有机

7、物的溶解度，还可改变溶液的酸碱性，克服在水溶液中滴定的困难，从而扩大酸酸碱性，克服在水溶液中滴定的困难，从而扩大酸碱滴定的应用范围。碱滴定的应用范围。 酸碱滴定一般是在水溶液中进行，以水为溶剂既酸碱滴定一般是在水溶液中进行，以水为溶剂既价廉又安全，但是也会受到一定的局限性。如价廉又安全，但是也会受到一定的局限性。如: : 弱酸或弱碱在水溶液中没有明显的滴定突跃；弱酸或弱碱在水溶液中没有明显的滴定突跃； 有机酸或碱在水中溶解度较小；有机酸或碱在水中溶解度较小； 还有一些多元酸或多元碱，混合酸（碱），由还有一些多元酸或多元碱，混合酸（碱），由于它们的离解常数较接近，在水中不能分步或分别滴于它们的离

8、解常数较接近，在水中不能分步或分别滴定。定。 （1）非水酸量法non-aqueous acidimetry（2）非水碱量法non-aqueous alkalimetry Ch4-1-3 氧化还原滴定法氧化还原滴定法 以氧化还原反应为基础的滴定分析方法。以氧化还原反应为基础的滴定分析方法。利用I2的氧化性和I-的还原性建立的滴定分析方法注：pH 9 时，不受酸度影响，应用范围更为广泛电对反应 I2 + 2e 2I- VII5335. 02 I2 + I - I3- （助溶）I3- + 2e 3 I- VII5345. 03测定物：具有还原性物质 可测：S2-，Sn()，S2O32-，SO32-酸

9、度要求：弱酸性，中性，或弱碱性弱酸性，中性，或弱碱性(pH小于小于9) 强酸性介质：I-发生氧化导致终点拖后； 淀粉水解成糊精导致终点不敏锐 强碱性介质：I2发生歧化反应 3II 测定物：具有氧化性物质较高可测：MnO4-，Cr2O7-，CrO4-，AsO43-，BrO3-， IO3-，H2O2，CLO-，Cu2+酸度要求：中性或弱酸性中性或弱酸性 强酸性介质：S2O32-发生分解导致终点提前； I-发生氧化导致终点拖后 碱性介质： I-与S2O32-发生副反应，无计量关系1碘的挥发碘的挥发预防：预防： 1）过量加入KI助溶，防止挥发 增大浓度，提高速度2）溶液温度勿高3）碘量瓶中进行反应（磨

10、口塞，封水）4）滴定中勿过分振摇2碘离子的氧化碘离子的氧化（酸性条件下）预防：预防：1）控制溶液酸度（勿高）2）避免光照（暗处放置）3）I2完全析出后立即滴定4）除去催化性杂质（NO3-，NO，Cu2+）1NaS2O3溶液溶液A配制：配制：不稳定原因不稳定原因 a水中溶解的CO2易使NaS2O3分解 S2O32- + CO2 + H2O HSO3- + HCO3-+ S b空气氧化：2S2O32-+ O2 SO42- + S c水中微生物作用： S2O32- Na2SO3 + S配制方法：配制方法：煮沸冷却水，加入NaCO3使 pH=910， 放置78天，过滤B标定标定 K2CrO7基准物标定

11、法基准物标定法 I2标液比较法标液比较法72272232232210006OCrKOCrKOSNaOSNaMmVC322223222OSNaIIOSNsVVCC2碘标准溶液碘标准溶液A配制配制: 避光，防止I-I2（注：不可用分析天平称）B标定：标定：As2O3基准物质标定法基准物质标定法NaS2O3标准溶液比较法标准溶液比较法IIHAsOAsOHpH32438控制32322210002OAsOAsIIMmVC2322222321IOSNaOSNaIVVCC 要求：室温；弱酸性；新鲜配制 加入时间： 直接碘量法滴定前加入（终点：无色深蓝色） 间接碘量法近终点加入（终点：深蓝色消失）变色原理：注

12、：间接碘量法中淀粉指示剂过早加入，强烈吸附I2， 造成终点拖后 1直接碘量法：直接碘量法： 指示剂加入时间：滴定前加入指示剂加入时间：滴定前加入 终点：无色终点：无色深蓝色深蓝色例：例：Vc的测定的测定2间接碘量法间接碘量法 指示剂加入时间：近终点加入指示剂加入时间：近终点加入 终点：深蓝色消失终点：深蓝色消失1）剩余碘量法）剩余碘量法(返滴定法返滴定法)例：葡萄糖的测定例：葡萄糖的测定2）置换碘量法）置换碘量法例：例：CuSO4的含量测定的含量测定注：无须知道CI2%1001000)(21%1001000)(21%32232232222SMVVCSMVCVCOSNaOSNaOSNaII葡萄糖

13、回滴空白葡萄糖葡萄糖注：注： CuI易水解，故以易水解，故以HAc为介质为介质 CuI强烈吸附强烈吸附I2造成终点提前，滴定时应用力振摇造成终点提前，滴定时应用力振摇 或加入或加入KSCN转化转化CuI沉淀为沉淀为CuSCN，同时释放，同时释放I2%1001000)(%43223224SMVCCuSOCuSOOSNaOSNaCh4-1-5 沉淀滴定法沉淀滴定法 通过本章的学习，能熟练运用铬酸钾指示剂通过本章的学习，能熟练运用铬酸钾指示剂法、铁铵矾指示剂法、吸附指示剂法和电位滴定法、铁铵矾指示剂法、吸附指示剂法和电位滴定法的原理测定难溶性银盐化合物的含量。这为后法的原理测定难溶性银盐化合物的含量

14、。这为后期进行药物分析课程的学习奠定基础。期进行药物分析课程的学习奠定基础。吸附指示剂法吸附指示剂法：利用沉淀对有机染料吸附而改变颜色利用沉淀对有机染料吸附而改变颜色 来指示终点的方法来指示终点的方法吸附指示剂：一种有色有机染料，被带电沉淀胶粒吸吸附指示剂：一种有色有机染料，被带电沉淀胶粒吸 附时因结构改变而导致颜色变化附时因结构改变而导致颜色变化原理：原理：（吸附指示剂） XAgNO3 滴定条件及注意事项滴定条件及注意事项 a）控制溶液酸度，保证）控制溶液酸度，保证HFL充分解离：充分解离：pHpKa 例：荧光黄例：荧光黄pKa 7.0选选pH 710 曙红曙红pKa2.0 选选pH 2 二

15、氯荧光黄二氯荧光黄pKa 4.0选选pH 410 b）防止沉淀凝聚）防止沉淀凝聚 措施措施加入糊精，保护胶体加入糊精，保护胶体 c）卤化银胶体对指示剂的吸附能力）卤化银胶体对指示剂的吸附能力 对被测离子的吸对被测离子的吸附能力附能力( 反之终点提前反之终点提前 ，差别过大终点拖后，差别过大终点拖后) 吸附顺序：吸附顺序：I-SCN-Br -曙红曙红CL-荧光黄荧光黄 例：例： 测测CL荧光黄荧光黄 测测Br曙红曙红D避免阳光直射避免阳光直射E被测物浓度应足够大被测物浓度应足够大F被测阴离子被测阴离子阳离子指示剂阳离子指示剂 被测阳离子被测阳离子阴离子指示剂阴离子指示剂适用范围：适用范围： 可直

16、接测定CL-，Br-，I-，SCN-和Ag +电位滴定法电位滴定法原理原理：是一种容量分析中确定终点或选择、是一种容量分析中确定终点或选择、核对指示剂变色域的方法。核对指示剂变色域的方法。 应用标准溶液滴定待测物溶液过程中应用标准溶液滴定待测物溶液过程中, ,借借助指示电极参比电极和电位计来监测滴定助指示电极参比电极和电位计来监测滴定时电极电位的变化率时电极电位的变化率, , 发生发生“突跃突跃”的最大的最大点就是滴定的终点点就是滴定的终点, ,以替代一般指示剂用变色以替代一般指示剂用变色来指示终点的方法。来指示终点的方法。 应用应用酸碱滴定法：酸碱滴定法：PHPHV V（含非水）（含非水）沉

17、淀滴定法：沉淀滴定法：PAgPAgV V 络合滴定法：络合滴定法：PMPMV V氧化还原滴定法：氧化还原滴定法：E EV V2.2.终点指示方法终点指示方法 E EV V(1)E-V(1)E-V曲线法曲线法曲线上的转折部分的中心（斜率最曲线上的转折部分的中心（斜率最大处）即为滴定终点。大处）即为滴定终点。(3)(3)2 2E/E/V V2 2V V（二阶导数）（二阶导数）2 2E/E/V V2 2 0 0 V V2 2E/E/V V2 2曲线零点所对应的曲线零点所对应的V V值值(2)(2)E/E/V VV V曲线法（一阶导数法）曲线法（一阶导数法） E/E/V V V VE/E/V V的最大

18、值即峰顶处的的最大值即峰顶处的E/E/V V值对应的值对应的V V为滴定终点。为滴定终点。学习目的学习目的Ch4-1-6 配位滴定法配位滴定法 学习目标学习目标知识目标知识目标 掌握掌握EDTAEDTA的性质和与金属离子配位反应的特点；金属指示剂的性质和与金属离子配位反应的特点；金属指示剂的变色原理、具备条件和常用金属指示剂；的变色原理、具备条件和常用金属指示剂；EDTAEDTA滴定液的配制和滴定液的配制和标定。标定。 熟悉影响配位反应平衡的因素；配位滴定酸度条件的选择及熟悉影响配位反应平衡的因素；配位滴定酸度条件的选择及配位滴定法在药物分析中的应用。配位滴定法在药物分析中的应用。 了解副反应

19、和副反应系数及条件稳定常数的意义。了解副反应和副反应系数及条件稳定常数的意义。能力目标能力目标 熟练应用掌握熟练应用掌握EDTAEDTA滴定液的配制、标定和直接测定金属离子滴定液的配制、标定和直接测定金属离子的含量的操作技能和计算。的含量的操作技能和计算。 学会用返滴定法测定铝盐的操作技术和计算。学会用返滴定法测定铝盐的操作技术和计算。 氮测定法氮测定法凯氏定氮法药物分析凯氏定氮法药物分析 杜马氏法元素定量分析杜马氏法元素定量分析 范斯莱克法生化分析范斯莱克法生化分析 （氨基氮测定）（氨基氮测定）1 1、原理、原理 含氮供试品与浓硫含氮供试品与浓硫酸共热，供试品中所含酸共热，供试品中所含氮转变

20、成氨，并与硫酸氮转变成氨，并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，用氢氧化钠碱化后，铵，用氢氧化钠碱化后，释出氨，随水蒸气馏出，释出氨，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用标准酸液或吸收后，用标准酸液或标准碱液滴定，用空白标准碱液滴定，用空白试验校正。试验校正。凯氏定氮法分为凯氏定氮法分为3个步骤个步骤(1) 消解消解 (凯氏烧瓶中进行凯氏烧瓶中进行) 将样品、将样品、Con.H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凯氏烧瓶放入凯氏烧瓶中一起加热，有机含中一起加热，有机含N化合物中的化合物中的N全部转变成全部转变成NH3并以并以铵盐的形式固定铵盐的形式固定

21、(NH4)2SO4、NH4HSO4。H2SO4：氧化剂和炭化剂。：氧化剂和炭化剂。 SO2和和SO3 消解一般在通风橱中进行消解一般在通风橱中进行K2SO4：提高：提高H2SO4沸点沸点 缩短消解时间缩短消解时间CuSO4：催化剂，使消解速度加快：催化剂，使消解速度加快消解产物：消解产物：(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4、NHNH4 4HSOHSO4 4(2) (2) 蒸馏与吸收蒸馏与吸收用用40%40%的的NaOHNaOH溶液溶液水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4+2NaOH+2NaOHNaNa2 2SOSO4 4+2NH+2NH3 3 +2H+2H

22、2 2O ONHNH4 4HSOHSO4 4+NaOH+NaOHNaHSONaHSO4 4+NH+NH3 3 +H+H2 2O O(3) (3) 测定测定 直接滴定法吸收液：吸收液：2%2%硼酸溶液硼酸溶液滴定液：滴定液：0.005mol/L H0.005mol/L H2 2SOSO4 4液液每每1ml1ml的的0.005mol/L H0.005mol/L H2 2SOSO4 4液液= =0.1401mg0.1401mg的的N N指示剂：甲基红指示剂：甲基红- -溴甲酚绿混合指示剂溴甲酚绿混合指示剂终点颜色：灰紫色终点颜色：灰紫色NHNH3 3+H+H3 3BOBO3 3NHNH3 3.H.H

23、3 3BOBO3 32NH2NH3 3.H.H3 3BOBO3 3+H+H2 2SOSO4 4(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4+2H+2H3 3BOBO3 3 剩余滴定法剩余滴定法用标准盐酸或硫酸作吸收液。用标准盐酸或硫酸作吸收液。将蒸馏出来的将蒸馏出来的NHNH3 3吸收于定过量吸收于定过量的标准酸溶液中，过量的酸用的标准酸溶液中，过量的酸用标准碱溶液滴定。标准碱溶液滴定。永停滴定法永停滴定法1.1. 原原 理理 测量时测量时, , 把两个相同的铂电极插入滴定溶液中把两个相同的铂电极插入滴定溶液中, ,在两个电极间外加小电压（在两个电极间外加小电压（1010- -200mv200

24、mv）, , 进行滴定，进行滴定，根据电流变化情况确定终点。根据电流变化情况确定终点。可逆电对：可逆电对：I I2 2/I/I 两个铂电极间外加一个小电压两个铂电极间外加一个小电压, , 接正端的电极发生氧化反应：接正端的电极发生氧化反应：2I2III2 22e,2e,接负端的电极发生还原反应：接负端的电极发生还原反应：I I2 22e2I2e2I , ,即发即发生电解。生电解。 只有两个电极上都发生反应只有两个电极上都发生反应, ,他们之间才会有电流通过。他们之间才会有电流通过。 I I2 2/ I/ I, ,在溶液中与双铂电极组成电池在溶液中与双铂电极组成电池 , ,给一个很小的外加给一个

25、很小的外加电压就能产生电解电压就能产生电解, ,有电流通过有电流通过, ,称为可逆电对。称为可逆电对。可逆电对与不可逆电对可逆电对与不可逆电对电对的氧化态和还原态浓度相等时电流最大电对的氧化态和还原态浓度相等时电流最大; ;不相等时电流的大小决定于浓度低的那个氧化态和还原不相等时电流的大小决定于浓度低的那个氧化态和还原态的浓度。态的浓度。不可逆电对：不可逆电对：S S4 4O O6 62 2与与S S2 2O O3 32 2(S(S4 4O O6 62 2/ S/ S2 2O O3 32 2) ) 在此电对的溶液中同时插入两个铂电极在此电对的溶液中同时插入两个铂电极, , 给一个很小的外加电压

26、给一个很小的外加电压, ,只能发生单向反应：只能发生单向反应：2S2S2 2O O3 32 2 S S4 4O O6 62 22e2e；不能发生逆向反；不能发生逆向反应：应：S S4 4O O6 62 22e 2S2e 2S2 2O O3 32 2，不产生电解，不产生电解, ,无电流通过无电流通过, ,这种电对叫做不可逆电对。这种电对叫做不可逆电对。三三 永停滴定法永停滴定法永停滴定法永停滴定法: : 利用上述现象确定滴定终点的方法。利用上述现象确定滴定终点的方法。2. 2. 指示终点的方法指示终点的方法滴定剂属可逆电对滴定剂属可逆电对, ,被测物属不可逆电对被测物属不可逆电对 如：如：I I

27、2 2滴定滴定NaNa2 2S S2 2O O3 3终点前：终点前：a.a.溶液中只有溶液中只有S S4 4O O6 62 2/ S/ S2 2O O3 32 2电对电对, ,虽有外加电压虽有外加电压, , 也不能产生也不能产生电解。电解。b.b.溶液中虽有溶液中虽有I I, ,阳极上有阳极上有I I氧化成氧化成I I2 2的可能性的可能性, , 无无I I2 2 , ,故电故电解反应同样不能发生。解反应同样不能发生。所以所以, ,终点前电流计指针一直在终点前电流计指针一直在0 0电流位置上不动。电流位置上不动。 第第二二节节 药药典常用典常用分析分析方法方法三三 永停滴定法永停滴定法 终点时

28、：达到终点有稍过量的终点时：达到终点有稍过量的I I2 2, ,溶液中有溶液中有I I2 2/ I/ I可可逆电对逆电对, ,电极上产生电解反应电极上产生电解反应, ,有电流通过有电流通过, ,电流计电流计指针开始偏转并不再返回指针开始偏转并不再返回0,0,指示滴定终点到达。指示滴定终点到达。终点后：随终点后：随I I2 2浓度的逐渐增加浓度的逐渐增加, ,电解浓度逐渐增大。电解浓度逐渐增大。 i iv v滴定剂为不可逆电对滴定剂为不可逆电对, ,被测物为可逆电对如被测物为可逆电对如NaNa2 2S S2 2O O3 3滴定滴定I I2 2终点前：即存在终点前：即存在I I2 2/ I/ I的

29、可逆电对的可逆电对, ,有电流通过有电流通过, ,滴定越接近终滴定越接近终点点,I,I2 2的浓度逐渐变小的浓度逐渐变小, , 电流逐渐变小。电流逐渐变小。终点时：由于终点时：由于I I2 2浓度为浓度为0, 0, 电解电流变为电解电流变为0,0,指针突然下降并停留指针突然下降并停留在在0 0电流的位置保持不动电流的位置保持不动, ,指示滴定终点到达。指示滴定终点到达。终点后：溶液中只有终点后：溶液中只有S S4 4O O6 62 2/ S/ S2 2O O3 32 2的不可逆电对的不可逆电对, ,无电解发无电解发生生, ,电流降到最低点并不在变化电流降到最低点并不在变化 i i v v滴定剂

30、与被滴定剂均为可逆电对滴定剂与被滴定剂均为可逆电对 如如CeCe4 4滴定滴定FeFe2 2滴定前：溶液中只有滴定前：溶液中只有FeFe2 2, , 无无FeFe3 3存在存在, ,阴极上不可能有还原反阴极上不可能有还原反应应, , 无电解反应无电解反应, ,无电流通过。无电流通过。滴定时：当滴定时：当CeCe4 4FeFe3 3 Fe Fe3 3/ Fe/ Fe2 2可逆可逆 电流不断电流不断; 当当【FeFe3 3】= =【FeFe2 2】时】时, ,电流达到最大值电流达到最大值, , 继续加入继续加入CeCe4 4 , , 【FeFe2 2】 , ,电流电流。终点时：电流降至最低点。终点

31、时：电流降至最低点。 阳极【阳极【O O】：】：FeFe2 2FeFe3 3e e 阴极【阴极【H H】：】：FeFe3 3eFeeFe2 2 第第二二节节 药药典常用典常用分析分析方法方法三三 永停滴定法永停滴定法 终点后：终点后：CeCe4 4过量，溶液中有过量，溶液中有CeCe4 4/ Ce/ Ce2 2可逆可逆电对，电对，【CeCe4 4】不断】不断 电流又开始上升。电流又开始上升。 阳极【阳极【O O】：】：CeCe2 2CeCe4 42e2e 阴极【阴极【H H】：】：CeCe4 42eCe2eCe2 2 i iv v 第第二二节节 药药典常用典常用分析分析方法方法三三 永停滴定法

32、永停滴定法 3. 3. 应应 用用(1)(1)重氮化滴定法的终点指示重氮化滴定法的终点指示(2)(2)在用在用Karl FisherKarl Fisher法测定微量水法测定微量水 分时的终点指示（自习）分时的终点指示（自习） 二、二、光学分析法及其分类光学分析法及其分类（一）光学分析法（一）光学分析法 依据物质发射的电磁辐射或物质与电磁辐射相互依据物质发射的电磁辐射或物质与电磁辐射相互 作用而建立起来的各种分析法的统称作用而建立起来的各种分析法的统称。（二）分类：（二）分类： 1光谱法：利用物质与电磁辐射作用时，物质内部光谱法：利用物质与电磁辐射作用时，物质内部 发生量子化能级跃迁而产生的吸收

33、、发射或散射发生量子化能级跃迁而产生的吸收、发射或散射 辐射等电磁辐射的强度随波长变化的定性、定量辐射等电磁辐射的强度随波长变化的定性、定量 分析方法分析方法 2非光谱法：利用物质与电磁辐射的相互作用测定非光谱法：利用物质与电磁辐射的相互作用测定 电磁辐射的反射、折射、干涉、衍射和偏振等基电磁辐射的反射、折射、干涉、衍射和偏振等基 本性质变化的分析方法本性质变化的分析方法 分类：折射法、旋光法、比浊法、分类：折射法、旋光法、比浊法、射线衍射法射线衍射法3光谱法与非光谱法的区别：光谱法与非光谱法的区别：Ch4-2 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 紫外紫外- -可见吸收光谱（可见吸收光谱（

34、Ultraviolet and Ultraviolet and Visible Spectroscopy, UV-VISVisible Spectroscopy, UV-VIS）统称为电子）统称为电子光谱。光谱。 紫外紫外- -可见吸收光谱法是利用某些物质的分可见吸收光谱法是利用某些物质的分子吸收子吸收200200800nm800nm光谱区的辐射来进行分析测光谱区的辐射来进行分析测定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛用于有机和无机物质的定性和定量测定。用于有机和无机物质的

35、定性和定量测定。 原理：根据原理：根据LambertLambertBeerBeer定律定律 A = E CLE E：吸收系数：吸收系数 C:C:单位浓度单位浓度 L:L:液层厚度液层厚度吸收系数有两种：吸收系数有两种：摩尔吸收系数（摩尔吸收系数（）：指在一定波长下）：指在一定波长下, ,溶液浓度溶液浓度为为1mol/L1mol/L厚度为厚度为1 1时的吸收度时的吸收度. .百分吸收系数（百分吸收系数（ ）：指在一定波长下）：指在一定波长下,溶液浓度为溶液浓度为1%（W/V）厚度为）厚度为1的吸收度的吸收度.%11Ecm与与E E关系关系E= E= 吸收物质的摩尔质量（分子量）吸收物质的摩尔质量

36、（分子量）强吸收度：强吸收度：=10=104 4 10105 5 弱吸收度：弱吸收度：1099.599.5) )或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于大于0.20.2；进行回收率试验。；进行回收率试验。回收率一般在回收率一般在99.799.7100.3100.3之间之间。 2. 2. UV法法：用适当浓度的精制品进行测定，其用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于一般不大于1。制剂的。制剂的测定测定，回收率一般应在，回收率一般应在98102之间。之间。 线性：线性：吸光度吸光度A一般在一般在0.20.7，浓度点，浓度点n5。用浓度用浓

37、度c对对A作线性回归处理，得一直线方程，作线性回归处理，得一直线方程，r应大于应大于0.999(n5)，方程的截距应近于零。，方程的截距应近于零。 3. HPLC法：要求法：要求RSD2，回收率回收率98102之间。之间。 线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点点n应为应为57，用浓度，用浓度c对峰高对峰高h或被测物的响应值之或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，比进行回归处理，建立回归方程，r应大于应大于0.999，截，截距应趋于零。距应趋于零。专属性专属性：要考查辅料、有关物质或降解产物对主药：要考查辅料、有关物质或降解产物对主药的

38、色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除生物样品分析时，常用生物样品分析时，常用RSD表示精密度，并可细表示精密度，并可细分为批内（或日内）精密度及批间（或日间）精密度。分为批内（或日内）精密度及批间（或日间）精密度。批内精密度：是同一次测定的精密度。所得批内精密度：是同一次测定的精密度。所得RSD应应争取达到争取达到5以内，但不能超以内，但不能超10。 批间精密度：是不同次测定的精密度。所得批间精密度：是不同次测定的精密度。所得RSD应控制在应控制在15以内。以内。 附录附录药物制剂人体生物利用度和生物等药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则效性试验

39、指导原则规定一般规定一般RSD应小于应小于15%，在在LOQ附近附近RSD应小于应小于20%。 第二节第二节 定量分析方法特点定量分析方法特点 一、一、 容量分析法容量分析法（一）（一） 容量分析法的特点容量分析法的特点（二）（二） 容量分析法的计算问题容量分析法的计算问题 1 滴定度滴定度 2 滴定度（滴定度（T）的计算）的计算 3 百分含量计算百分含量计算 （1） 直接滴定法直接滴定法含量含量%=VT W100%=VTFW100% （2 2）回滴定法（剩余滴定法）回滴定法（剩余滴定法 ）含量含量%=（VAFAVBFB）T W100%100% 二二、 光谱分析法光谱分析法（一）紫外（一）紫外

40、-可见分光光度法可见分光光度法 1特点特点 紫外紫外-可见分光光度法是根据物质分子对波长为可见分光光度法是根据物质分子对波长为200nm760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的光这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的光谱分析方法。主要特点如下：谱分析方法。主要特点如下： （1）灵敏度高，可达）灵敏度高，可达10-4g/ml10-7g/ml 。 （2）准确度高，相对误差为）准确度高，相对误差为2% 5%5%。 （3）仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。）仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。 2郎伯郎伯-比耳定律比耳定律 3仪器校正和检定仪器校正和检定 4对溶剂的要求对溶剂的要求 5测定

41、法测定法（二）（二） 荧光分析法荧光分析法 1特点特点 2荧光分析仪荧光分析仪 3含量测定含量测定 三、三、 色谱分析法色谱分析法 色谱分析法（又称层析法）根据其分离原理可分为：吸附色色谱分析法（又称层析法）根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等。又可根据分离方谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等。又可根据分离方法分为：纸色谱、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效法分为：纸色谱、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。液相色谱法等。（一）（一） 高效液相色谱法高效液相色谱法 1对仪器的一般要求对仪器的一般要求系统适用性实验系统适用性实验 （1）色谱柱

42、的理论塔板数（）色谱柱的理论塔板数（n） （2）分离度）分离度 . 测定法测定法 （1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量：）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量：AS/CS AR/CR Ax校正因子（校正因子（f）= =含 量 （含 量 （ C）=f=f A S/C S （2）外标法测定供试品中主成分含量：）外标法测定供试品中主成分含量： 外标法可分为标准曲线法和外标一点法。外标法可分为标准曲线法和外标一点法。 1）标准曲线法：）标准曲线法： 2）外标一点法：）外标一点法： (二二) 气相色谱法气相色谱法 1. 对仪器的一般要求对仪器的一般要求 2. 系统适应性实验系统适应性实验 3.

43、 测定法测定法 第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。 一、一、 准确度准确度 （一）含量测定的准确度（一）含量测定的准确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率（度，一般以回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内建立。）表示。准确度应在规定的范围内建立。回收率的计算可按下式：

44、回收率的计算可按下式： 回收率回收率%=测定平均值测定平均值-空白值空白值 加入量加入量 100%(二二) 数据要求数据要求二二 、 精密度精密度 精密度系指在规定的测定条件下，同一个均匀样品，经过多精密度系指在规定的测定条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得的结果之间的接近程度。次取样测定所得的结果之间的接近程度。(一一) 精密度表示方法精密度表示方法 1. 偏差偏差(deviation，d ) . .标准偏差标准偏差(standard deviation ，SD )S=（XiX）2n13. 相对标准偏差相对标准偏差(relative standard deviation,RSD ),

45、也称变异也称变异系数系数(coefficient of varation,CV )RSD=标准偏差标准偏差 平均值平均值100%=S X 100%(二二) 重复性、中间精密度及重现性重复性、中间精密度及重现性 1. 重复性重复性 在相同的条件下，由一个分析人员测定所得结果的在相同的条件下，由一个分析人员测定所得结果的 精密度称为重复性。精密度称为重复性。2中间精密度中间精密度 同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度，称为中间精密度。同设备测定结果的精密度，称为中间精密度。3重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度

46、，在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。称为重现性。 (三三) 数据要求数据要求三、专属性三、专属性 专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方能准确测定出被测物的特性。能存在下，采用的方能准确测定出被测物的特性。(一一) 鉴别反应鉴别反应(二二) 含量测定和杂质测定含量测定和杂质测定四、四、 检测限检测限 检测限（检测限（limit of detection，LOD）是试样中被测物能被检）是试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。测出的最低浓度或量。LOD是一种限度检验效能指标，即反映是一种限度检验效

47、能指标，即反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白（本底）值的高低。它无需定量测定，只要指出高于或低于该（本底）值的高低。它无需定量测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。根据所采用的方法来确定检测限。规定的浓度或量即可。根据所采用的方法来确定检测限。(一一) 常用的方法常用的方法1. 非仪器分析目视法非仪器分析目视法2. 仪器分析时的测定法仪器分析时的测定法（二）数据要求（二）数据要求五、定量限五、定量限 定量限（定量限（limit of quantitation ，LOQ）是指样品中被测）是指样品中被测物能被定量

48、测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。 六、线性六、线性 线性线性 系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。度直接呈正比关系的程度。 七、范围七、范围 范围是指能到达一定精密度、准确度和线性、测试方法适用范围是指能到达一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限浓度或量的区间。的高低限浓度或量的区间。八、耐用性八、耐用性 耐用性耐用性 系指在测定条件有小的

49、变动时，测定结果不受影响系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。的承受程度，为常规检验提供依据。 1用于鉴别试验用于鉴别试验 2用于原料药中杂质测定或制剂中的降解产物测定的方法用于原料药中杂质测定或制剂中的降解产物测定的方法 3用于原料药中主成分或制剂中有效组分含量测定及溶出用于原料药中主成分或制剂中有效组分含量测定及溶出度测定度测定 第四节第四节 生物样品分析方法的基本要求生物样品分析方法的基本要求一、常用样品的种类、采集和储贮藏一、常用样品的种类、采集和储贮藏 生物样品包括各种体液和组织，但实际上最常用的是比生物样品包括各种体液和组织，但实际上最常用的是

50、比较容易得到的血液（血浆、血清、全血）尿液、唾液。较容易得到的血液（血浆、血清、全血）尿液、唾液。(一一) 血样血样 血浆（血浆（plasma）和血清（）和血清（serum）是最常用的生物样品。）是最常用的生物样品。(二二) 唾液唾液(三三) 尿液尿液二、生物样品分析前处理技术二、生物样品分析前处理技术(一一) 去除蛋白质去除蛋白质1加入与水相混溶的有机溶剂加入与水相混溶的有机溶剂2加入中性盐加入中性盐3加入强酸加入强酸4加入含锌盐及铜盐的沉淀剂加入含锌盐及铜盐的沉淀剂5酶解法酶解法（二）缀合物的水解（二）缀合物的水解（三）分离、纯化与浓集（三）分离、纯化与浓集1液液-液提取法液提取法(liq