1、制剂车间微生物知识培训2010年9月GMP要求要求药品生产质量管理规范药品生产质量管理规范中明确规定：中明确规定：洁净室区内的人员数量应严格控制。其洁净室区内的人员数量应严格控制。其工作人员（包括维修、辅助人员）应定工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行期进行卫生和微生物学卫生和微生物学基础知识、洁净基础知识、洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净室区的临时外来人员应进行室区的临时外来人员应进行指导和监督。指导和监督。GMP要求要求l医药工业洁净室（区）必须以尘粒和微生物为医药工业洁净室（区）必须以尘粒和微生物为环境控制对象。环境控制对象。 l二者相比，微生
2、物更难以控制，其基本特点为：二者相比，微生物更难以控制，其基本特点为：1 1、存在范围广。、存在范围广。2 2、生长速度快。、生长速度快。3 3、生存能力强。、生存能力强。微生物是什么？l一切肉眼看不见或看不清楚的微小一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物。生物。l形体微小、单细胞或个体结构简单形体微小、单细胞或个体结构简单的多细胞、甚或无细胞结构的低等的多细胞、甚或无细胞结构的低等生物。生物。l是生物的一大类，形体微小、构造是生物的一大类，形体微小、构造简单、繁殖迅速，广泛分布在自然简单、繁殖迅速，广泛分布在自然界中，是一群在化学显微镜或电子界中，是一群在化学显微镜或电子显微镜下放大几千倍，甚至
3、上万倍显微镜下放大几千倍，甚至上万倍才能看得到的微小生物。才能看得到的微小生物。 常见微生物的种类常见微生物的种类 微生物细胞结构微生物细胞结构微生物的种类微生物的种类微生物按其微生物按其结构、化学组成及生活习性结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类等差异可分成三大类 真核细胞型真核细胞型原核细胞型原核细胞型非细胞型非细胞型如如 酵母菌、霉菌等酵母菌、霉菌等如：如：细菌细菌、支原体、衣原体、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌立克次体、螺旋体和放线菌 如如病毒病毒 真真核核微微生生物物 细胞较大细胞较大 细胞核的分化程度较高，有核膜、细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体核仁和染色
4、体 ，胞质内有完整的细胞，胞质内有完整的细胞器器 可自身进行新陈代谢、繁殖相关活可自身进行新陈代谢、繁殖相关活动动真核微生物特点真核微生物特点真核单细胞真核单细胞酵母菌酵母菌真核多细胞真核多细胞青霉青霉黑曲霉黑曲霉细菌结构细菌结构真菌结构真菌结构细菌的分类细菌的分类革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌 外毒素外毒素 内毒素内毒素 细菌的特殊结构细菌的特殊结构荚膜荚膜 荚膜是细菌细胞壁外面胶状的黏荚膜是细菌细胞壁外面胶状的黏液层液层 。 荚膜的厚度因细菌的种荚膜的厚度因细菌的种类而不同。除掉荚膜对细菌的生类而不同。除掉荚膜对细菌的生活没有什么影响，但荚膜具有抗活没有什么影响，但荚膜
5、具有抗吞噬作用和抗干燥作用。这也就吞噬作用和抗干燥作用。这也就解释了为什么我们在消毒时需要解释了为什么我们在消毒时需要用用75%75%的酒精的酒精，就是因为这个浓度，就是因为这个浓度的酒精可以更好的透过荚膜实现的酒精可以更好的透过荚膜实现杀菌作用杀菌作用细菌的特殊结构细菌的特殊结构芽孢芽孢芽孢芽孢 在温度逐渐降低或营养缺乏在温度逐渐降低或营养缺乏, ,某些细菌某些细菌能在菌体内形成一个折光性很强的不易着能在菌体内形成一个折光性很强的不易着色小体，称为芽胞。芽胞是处于休眠状态色小体，称为芽胞。芽胞是处于休眠状态的细菌，当环境适宜时，可恢复生长繁殖。的细菌，当环境适宜时，可恢复生长繁殖。 芽胞在自
6、然界分布广泛，芽胞的抵抗芽胞在自然界分布广泛，芽胞的抵抗力强，对热力、干燥、辐射、化学消毒剂力强，对热力、干燥、辐射、化学消毒剂等理化因素均有强大的抵抗力，用一般的等理化因素均有强大的抵抗力，用一般的方法不易将其杀死。杀灭芽胞最可靠的方方法不易将其杀死。杀灭芽胞最可靠的方法是法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌。病毒病毒T4T4噬菌体噬菌体 蝌蚪形病毒蝌蚪形病毒病毒病毒流感冒病毒流感冒病毒 丝状有被膜的病毒丝状有被膜的病毒病毒病毒蛋白质外壳蛋白质外壳DNA病毒病毒细胞内寄生生细胞内寄生生注意： 革兰氏阴性菌因有内毒素镶嵌在细胞表面，当菌体破裂时会将毒素释放出来，这一部分是可以通过0.22m的过滤器的，
7、除去此类毒素的可靠方法为活性炭吸附体积小，面积大；体积小，面积大；吸收多，转化快（吸收多，转化快（2000倍体重倍体重/h）；）；生长旺，繁殖快（生长旺，繁殖快（20min分裂一次）；分裂一次）；易变异，适应强；易变异，适应强；分布广，种类多（分布广，种类多（10万种以上）万种以上） 微生物具有以下特点微生物详细分类l真菌真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹）：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹）l细菌细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌l放线菌放线菌：l支原体支原体：肺炎支原体：肺炎支原体l衣原体衣原体：沙眼：沙眼l立克次体立克次体：斑疹伤寒：斑疹伤寒l螺旋体螺旋
8、体：梅毒：梅毒l病毒病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流感病毒。流感病毒。微生物五大共性l体积小，面积大；体积小，面积大；l吸收多，转化快；吸收多，转化快；l生长旺，繁殖快；生长旺，繁殖快；l适应强，易变异；适应强，易变异；l分布广，种类多。分布广，种类多。常见污染药物制剂的微生物1.1.葡萄球菌：可引起局部感染葡萄球菌：可引起局部感染2.2.大肠杆菌：胆道及尿道感染大肠杆菌：胆道及尿道感染3.3.绿脓杆菌：化脓性感染、中耳炎、肺炎绿脓杆菌：化脓性感染、中耳炎、肺炎4.4.枯草杆菌：结膜炎枯草杆菌：结膜炎5.5.酵母菌：使糖分解，药液产生有机酸酵母菌：
9、使糖分解，药液产生有机酸6.6.霉菌：使制剂霉坏、酸败变质霉菌：使制剂霉坏、酸败变质洁净车间内微生物在哪里？空气空气 水水人员人员器具器具1. 空气中的微生物 灰尘灰尘“微生物的飞行器微生物的飞行器”。 微生物不是凭空存在的，微生物不是凭空存在的，99%99%的微生物的微生物都附在颗粒上。控制空气中的微粒数，都附在颗粒上。控制空气中的微粒数，就是控制了微生物数量。就是控制了微生物数量。 灰尘、微粒具有沉降和粘附的趋势，所灰尘、微粒具有沉降和粘附的趋势，所以同一区域内，地面是微粒相对集中的以同一区域内，地面是微粒相对集中的地方，也是微生物相对较多的地方，墙地方，也是微生物相对较多的地方，墙壁也容
10、易粘附灰尘。壁也容易粘附灰尘。98版GMP洁净度洁净度级别级别尘粒最大允许数尘粒最大允许数/ /立方米立方米微生物最大允许数微生物最大允许数0.5m0.5m5m5m浮游菌浮游菌/ /立方立方米米沉降菌沉降菌/ /皿皿100100级级3,5003,5000 05 51 110,00010,000级级350,000350,0002,0002,0001001003 3100,000100,000级级3,500,0003,500,00020,00020,0005005001010300,000300,000级级10,500,00010,500,00060,00060,0001,0001,0001515
11、Air lock两扇门不能同时打开Air Lock仓库or外包间洁净区走廊洁净区走廊Or DISP高效过滤器高效过滤器高效过滤器高效过滤器气流lAir lockAir lock（缓冲间）的作用：（缓冲间）的作用： 控制空气对流，减少外界脏空气中的微粒、控制空气对流，减少外界脏空气中的微粒、灰尘进入车间。灰尘进入车间。 必须保持缓冲间门的关闭，不得同时开启。必须保持缓冲间门的关闭，不得同时开启。空气自净和微粒的沉降与粘附l空气自净有死角空气自净有死角l顶送顶回（洁净走廊），地面顶送顶回（洁净走廊），地面l顶送侧回（清洗间，操作间），对面的墙角，顶棚。顶送侧回（清洗间，操作间），对面的墙角，顶棚。
12、l微粒沉降和粘附微粒沉降和粘附l不能用脚踏在垫仓板和料桶上。不能用脚踏在垫仓板和料桶上。l不得跑跳、大声喧哗。不得跑跳、大声喧哗。l不靠在墙上或其他物体上。不靠在墙上或其他物体上。2 水 水是生命之源，有水的地方就有生命水是生命之源，有水的地方就有生命水微生物的乐园水微生物的乐园水体是微生物广泛分布的第二个天然环境。水体是微生物广泛分布的第二个天然环境。 水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。水水l药品生产质量管理规范药品生产质量管理规范第四章第四章设设备备第三十四条中明确规定：第三十四条中明确规定：纯化水纯化水、注射用水的制备、
13、储存和分配应能防止注射用水的制备、储存和分配应能防止微生物的滋生和污染微生物的滋生和污染。储罐和输送管道。储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀。管道的设计所用材料应无毒、耐腐蚀。管道的设计和安装应避免死角、盲管。储罐和管道和安装应避免死角、盲管。储罐和管道要规定清洗、灭菌周期要规定清洗、灭菌周期。制药工业对水质的要求l药厂的水源：城市自来水、井水等达到饮用水药厂的水源：城市自来水、井水等达到饮用水标准的水源。标准的水源。l口服制剂：片剂、颗粒剂、糖浆口服制剂：片剂、颗粒剂、糖浆l容器清洗：饮用水容器清洗：饮用水l容器最终淋洗：纯化水容器最终淋洗：纯化水l小容量注射剂：小容量注射剂：1 15ml
14、5mll配制容器清洗：纯化水配制容器清洗：纯化水l容器最终淋洗：注射用水容器最终淋洗：注射用水 l1. 混合器内部最后淋洗：混合器内部最后淋洗：2. 直接接触物料的部件最后直接接触物料的部件最后淋洗：淋洗：纯水纯水纯水管的放置l纯水由于去除了水纯水由于去除了水中的余氯，有机物，中的余氯，有机物，特别容易滋长微生特别容易滋长微生物。物。必须放在干净必须放在干净处保存。处保存。l纯水管中不能有积纯水管中不能有积水。水。否则再使用时，否则再使用时，微生物会污染整根微生物会污染整根管道。管道。 3 人洁净室中最大的微生物污染源1 1、人在代谢过程中会释放和分泌、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。污染物
15、。 2 2、人体表面、衣服能沾染、携带、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。污染物。3 3、人在洁净室内的各种动作也会、人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。产生微粒和微生物。人体内外微生物的分布1 1、皮肤：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉、皮肤：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉棒杆菌、棒杆菌、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌等等2 2、口腔：唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉、口腔：唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉棒杆菌等棒杆菌等3 3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻
16、咽。甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、球菌、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等。变形杆菌等。4 4、下呼吸道：包括气管、支气管和肺、下呼吸道：包括气管、支气管和肺 。健康人的下呼吸道是无菌的。健康人的下呼吸道是无菌的。 5 5、胃肠道：、胃肠道：大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌、产气杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌、粪、产气杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌、粪链球菌、梭杆菌属、螺旋体属、乳杆菌属、梭菌属、拟杆菌属中链球菌、梭杆菌属、螺旋体属、乳杆菌属、梭菌属、拟杆菌属中的一些种的一些种6 6、泌尿生殖道：常见的有嗜酸乳杆菌、类白喉棒杆菌
17、、葡萄球菌、泌尿生殖道：常见的有嗜酸乳杆菌、类白喉棒杆菌、葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌链球菌和大肠杆菌如何阻断人体污染源药品生产质量管理规范药品生产质量管理规范中明确规定：进入中明确规定：进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触药品。得裸手直接接触药品。药品生产质量管理规范药品生产质量管理规范中明确规定：无菌中明确规定：无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。阻留人体脱落物。 我们的更衣流程1.一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对而一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾
18、、颗粒及微生物。相对而言，脚底是最脏的部分。言，脚底是最脏的部分。2.脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。3.一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生物。物。洗手一定要用洗手液和充足的流水洗手一定要用洗手液和充足的流水。4.二更二更二次更鞋：阻断一更、二更内沉降在地板上的颗粒和微生物。二次更鞋：阻断一更、二更内沉降在地板上的颗粒和微生物。洁净区工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。洁净区工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生
19、物发散，洁净区内不能脱下洁净区内不能脱下口罩口罩带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整的保证发套完整的包裹头发。包裹头发。穿洁净服：阻断体表皮肤的微生物发散。穿洁净服：阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开洁洁净区内不能解开洁净服。净服。手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。75%的酒精能杀灭的酒精能杀灭99%的微生物。的微生物。平时的卫生习惯l勤洗澡、洗头，勤换内衣勤洗澡、洗头，勤换内衣l去除皮屑、头屑等人体脱落物，保持体表洁净。去除皮屑、头屑等人体脱落物，保持体表洁净。l勤剪头发勤剪头发l工作时，头
20、皮不容易出汗，易被帽子全部包裹。工作时，头皮不容易出汗，易被帽子全部包裹。l勤剪手指甲勤剪手指甲l指甲内能够藏污纳垢，有很多的致病微生物。指甲内能够藏污纳垢，有很多的致病微生物。l勤换鞋勤换鞋l准备两双鞋经常交替穿着，保证鞋内干燥无异味。准备两双鞋经常交替穿着，保证鞋内干燥无异味。4.器具l清洗：清洗：最后淋洗用水，纯水最后淋洗用水，纯水。l清洗后按要求包装并有清洁标签，清洗后按要求包装并有清洁标签，注明清洁日期、有效期至和清洗人注明清洁日期、有效期至和清洗人l储存有效期，储存有效期，l部件部件，包括不锈钢桶、，包括不锈钢桶、BarBar、筛网、筛网等，等，1 1天天灭菌与消毒 l灭菌：有物理
21、或化学方法，杀死物体上的所有微生灭菌：有物理或化学方法，杀死物体上的所有微生物，包括致病的或非致病的微生物以及细菌的芽胞，物，包括致病的或非致病的微生物以及细菌的芽胞，称为灭菌。灭菌后的物品即为无菌状态。称为灭菌。灭菌后的物品即为无菌状态。l消毒：用化学或物理方法杀灭物体上的病原微生物，消毒：用化学或物理方法杀灭物体上的病原微生物，称为消毒。称为消毒。l防腐：阻止微生物生长繁殖以防止物品的腐败，亦防腐：阻止微生物生长繁殖以防止物品的腐败，亦称抑菌。称抑菌。l无菌：不含活菌。无菌：不含活菌。 灭菌与消毒的方法 l 物理因素：温度、辐射、干燥、声波、渗透压和过物理因素：温度、辐射、干燥、声波、渗透
22、压和过滤等。滤等。 l（1）热力灭菌法:分为干热灭菌法和湿热灭菌法l 干热灭菌法:利用烘箱中的热空气灭菌，通常在160持续12小时，可杀死细菌芽胞。此法只适用于玻璃器皿、磁器、小金属用具等耐热物品的灭菌。l 湿热灭菌法l a 煮沸法：在100沸水中煮沸5分钟，可杀死细菌营养型，但杀不死细菌的芽胞。煮沸法常用于外科器械如刀、剪、镊子、注射器等的消毒湿热灭菌法湿热灭菌法lc 流通蒸汽灭菌法：流通蒸汽的温度通常不超过100，加热1530分钟，可杀死细菌营养型，杀不死芽胞。l d 间歇灭菌法：利用反复多次的蒸汽灭菌，适用于不耐高温的某些培养基的灭菌。l e 高压蒸汽灭菌法：利用密闭的高压蒸锅，在加压下
23、产生的高温短时间杀菌的方法。灭菌效果好，是实验室和生产中最常用的灭菌法。一般采用1kg/cm2(或15磅/时2)121.3，1530分钟可达到灭菌目的，含糖培养基或注射液可用0.56kg/cm2(或8磅/时2)113，2030分钟灭菌。 灭菌与消毒的方法 l 紫外线l 紫外线中波长200300nm者具有杀菌作用，波长265266nm杀菌力最强。紫外线杀菌力强而稳定，但穿透力差，即使是薄玻璃也能滤掉大部分，所以紫外线只适用于室内及物体表面消毒。l（3） 过滤除菌l 过滤除菌是利用滤器机械地除去液体或空气中细菌的方法。不耐热的物品如毒素、抗毒素、病毒、酶溶液、维生素、抗生素等均采用过滤除菌法，达到
24、除去液体中细菌的目的。l 细菌滤器有贝克菲滤器、蔡氏滤器、玻璃滤器（G5和G6滤孔最小，能阻止细菌通过）及膜滤器（0.220.45m滤膜能除掉细菌）。 灭菌与消毒的方法 l 化学方法l 消毒剂：具无选择性毒性，即消毒剂不但能杀死病原菌，同时对人体组织细胞也有损害作用，只能外用。常用的消毒剂如下：l（1）重金属盐类：红汞、硫柳汞、苯汞等。l（2）氧化剂：0.1%高锰酸钾、3%过氧化氢、过氧乙酸l（3）酚类：35%来苏尔消毒地面、家具、器具表面；12%来苏儿消毒手和体表；0.5%酚作为生物制品的防腐剂。 灭菌与消毒的方法 l（4）醇类：7075%乙醇、苯氧乙醇l（5）醛类：3740%的甲醛溶液（福
25、尔马林）、戊二醛l（6）环氧乙烷：气体灭菌剂l（7）表面活性剂： 0.1%新洁尔灭 微生物与产品变质微生物与产品变质l微生物广泛存在于自然界，因而液体制剂中可能有微生物污染。这些微生物若遇到适宜的条件，就能生长繁殖，一方面可造成料液变质，失去疗效；另一方面对病人可引起不良反应，甚至引起继发感染或危及生命。为了防止由微生物引起的药物变质，生产环境、条件、操作等应符合GMP要求，保证液体制剂的卫生学标准。微生物与药物变质微生物与药物变质l根据药物不同的剂型，如出现下列情况之一，即可认为该药物已为微生物所损害：l（1）有致病菌存在。l（2）微生物的总数超过一定的限量（口服及外用药物；注射剂及其他无菌制剂不得有活微生物的存在）。l（3）有微生物的代谢产物，如热原质等的存在。防止药物微生物污染的措施防止药物微生物污染的措施 l药物中微生物的来源：原料、制造过程所应用的设备、空气、水、操作人员及最后包装使用的容器等。l（1）加强药物的生产管理l（2）使用合适的防腐剂与抑菌剂l（3）合理的储存Test我们在洁净区中如何做到防止：我们在洁净区中如何做到防止：空气污染空气污染 水污染水污染人员污染人员污染器具污染器具污染
