1、药物分析实验注意事项药物分析实验注意事项2010-01-27主要内容主要内容一、一、中国药典中国药典凡例简介凡例简介二、实验操作一些注意事项二、实验操作一些注意事项三、实验原始记录注意事项三、实验原始记录注意事项四、有效数字和数值的修约及其运算四、有效数字和数值的修约及其运算五、玻璃仪器的洗涤、校正、使用五、玻璃仪器的洗涤、校正、使用一、一、中国药典中国药典凡例简介凡例简介中国药典中国药典中国药典中国药典是我国监督管理药品质量的法定是我国监督管理药品质量的法定技术标准。技术标准。 全称：中华人民共和国药典全称：中华人民共和国药典 简称：中国药典简称：中国药典 写法写法：中国药典中国药典（200
2、52005年版）年版） 缩写缩写：Ch.P (Chinese Pharmacopoeia)Ch.P (Chinese Pharmacopoeia)中国药典的历史中国药典的历史第一部中国药典是第一部中国药典是1953年版随后出版的年版随后出版的有有1963年版、年版、1977年版、年版、1985年版年版以后每以后每5年出版新一版中国药典。年出版新一版中国药典。目前执行的是目前执行的是2005年版。年版。2010版已经发行。版已经发行。中国药典中国药典的内容分为四部分。的内容分为四部分。索引索引正文正文附录附录凡例凡例凡例：凡例：解释和使用解释和使用中国药典中国药典正确进行正确进行质量检验的基本原
3、则，它把中国药典的正质量检验的基本原则，它把中国药典的正文、附录及与质量检定有关的文、附录及与质量检定有关的共性问题共性问题加加以规定，以避免在全书中重复说明。凡例以规定，以避免在全书中重复说明。凡例中有关规定中有关规定具有法定的约束力具有法定的约束力。中国药典中国药典凡例凡例Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）1.溶解度溶解度：药品在溶剂中的溶解能力，可供：药品在溶剂中的溶解能力，可供药品精制或制备溶液时参考。药品精制或制备溶液时参考。溶解术语溶解术语溶质量溶质量/g(mL)/g(mL)溶剂量溶剂量/mL/mL极易溶解极易溶解1 11mL1mL易溶易溶1
4、1 1 1 10mL10mL溶解溶解1 11010 30mL30mL略溶略溶1 13030 100mL100mL微溶微溶1 1100100 1000mL1000mL极微溶解极微溶解1 110001000 10000mL10000mL几乎不溶几乎不溶1 110000mL10000mL测定方法：测定方法：252，5（每隔）（每隔）30”（振摇）（振摇） 30之内看不到溶质颗粒或液滴之内看不到溶质颗粒或液滴中国药典中国药典凡例凡例Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）2.温度温度的表示方法的表示方法 水浴温度水浴温度 98 100 热水热水 70 80 微温或温水微
5、温或温水 40 50 室温室温 10 30 冷水冷水 2 10 冰浴冰浴 0 放冷放冷 至室温至室温中国药典中国药典凡例凡例Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）3.贮藏贮藏 药品贮藏与保管的基本要求药品贮藏与保管的基本要求避光避光用不透光的容器包装用不透光的容器包装密闭密闭容器密闭，防灰尘、异物进入容器密闭，防灰尘、异物进入密封密封容器密封，防止风化、吸潮、挥发或异物容器密封，防止风化、吸潮、挥发或异物 进入进入熔封熔封or严封严封将容器熔封或适当材料严封，防止空气、将容器熔封或适当材料严封，防止空气、 水分侵入污染水分侵入污染阴凉处阴凉处不超过不超过20
6、凉暗处凉暗处避光，不超过避光，不超过20冷处冷处210 常温常温1030 一、一、中国药典中国药典凡例凡例Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）4.药材和药品的药材和药品的干燥方法干燥方法药材产地加工及炮制规定的干燥方法如下：药材产地加工及炮制规定的干燥方法如下：（1）烘干、晒干、阴干均可的，用）烘干、晒干、阴干均可的，用“干燥干燥”；(2) 不宜用较高温度烘干的，则用不宜用较高温度烘干的，则用“晒干晒干”或或“低温干燥低温干燥”（一般不超过（一般不超过60）；）；(3) 烘干、晒干均不适宜的，用烘干、晒干均不适宜的，用“阴干阴干”或或“晾干晾干”；(4) 少
7、数药材需要短时间干燥，则用少数药材需要短时间干燥，则用“曝晒曝晒”或或“及时干及时干燥燥”。制剂中的干燥系指烘干，不宜高温烘干的用制剂中的干燥系指烘干，不宜高温烘干的用“低温干低温干燥燥”。一、一、中国药典中国药典凡例凡例Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）5. . 药品的药品的含量含量（%），）， 除另有规定外，均按重量计。如规定上限为除另有规定外，均按重量计。如规定上限为100以上时，系指用本版药典规定的分析方法测定以上时，系指用本版药典规定的分析方法测定时可能达到的数值，它为药典规定的限度允许偏时可能达到的数值，它为药典规定的限度允许偏差，并非真实含量
8、；如未规定上限时，系指不超差，并非真实含量；如未规定上限时，系指不超过过101.0。 一、一、中国药典中国药典凡例凡例含量百分比含量百分比 固体百分比：重量的比例；固体百分比：重量的比例； 溶液百分比：溶液溶液百分比：溶液100mL中溶质若干克；中溶质若干克； 乙醇百分比：乙醇百分比：20容量的比例；容量的比例； 乙醇未标浓度，乙醇未标浓度，95%；无水乙醇；无水乙醇100%；Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）6.6.对照品、对照药材、对照提取物、标准品对照品、对照药材、对照提取物、标准品一、一、中国药典中国药典凡例凡例 对照品、对照药材、对照提取物、标准
9、品系指用于对照品、对照药材、对照提取物、标准品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质。均由国务院药鉴别、检查、含量测定的标准物质。均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。 对照品除另有规定外，均按干燥品（或无水物）进对照品除另有规定外，均按干燥品（或无水物）进行计算后使用，标准品按效价单位（或行计算后使用，标准品按效价单位（或g）计。）计。 对照品对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质。仪器性能的标准物质。 标准品标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含系指用于生物检定、抗
10、生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。表示。Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）精密称定精密称定称取重量准确至所取重量的千分之一称取重量准确至所取重量的千分之一 (1）7.称样称样（精确度）（精确度）称定称定称取重量准确至所取重量的百分之一（称取重量准确至所取重量的百分之一（1%）称约称约称取量不超过规定量的称取量不超过规定量的10%精密量取精密量取量取体积的准确度应该符合国家标准中对量取体积的准确度应该符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求该体积移液管的精密度要求量取量取可用量筒或量取体积的有效
11、数位选用量具可用量筒或量取体积的有效数位选用量具一、一、中国药典中国药典凡例凡例 其精确度可根据数值的有效数位来确定,如 称取“0.1g”系指称取量可为0.060.14g； 称取“2g”系指称取量可为1.52.5g； 称取“2.0g”系指称取量可为1.952.05g； 称取“2.00g”系指称取量可为1.9952.005g。根据修约取舍规则Ch.P凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语）8. 溶液的滴溶液的滴 20 20 时，时，1.0mL1.0mL水水=20d=20d 溶液（溶液（110110） 固体固体1.0g1.0g或液体或液体 1.0mL1.0mL溶质加溶剂使溶
12、质加溶剂使成成10mL10mL，溶剂未标明，均指水溶液，溶剂未标明，均指水溶液 一、一、中国药典中国药典凡例凡例 恒重：指连续两次称重的差异不超过恒重：指连续两次称重的差异不超过0.3mg。干燥至恒重的第二次称重应在继。干燥至恒重的第二次称重应在继续干燥续干燥1小时小时后进行；炽灼至恒重的第二次后进行；炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼称重应在继续炽灼30分钟分钟后进行。后进行。 标准中规定标准中规定“按干燥品（无水物）计算按干燥品（无水物）计算”时，应取样品另做干燥失重（水分），并时，应取样品另做干燥失重（水分），并在结果计算时扣除。在结果计算时扣除。一、一、中国药典中国药典凡例凡例Ch.P
13、凡例中的一些共性问题（常用术语）凡例中的一些共性问题（常用术语） 空白试验：指不加供试品，按同法操作所空白试验：指不加供试品，按同法操作所得结果。得结果。 试验温度：未注明者，指室温（试验温度：未注明者，指室温（1030）。对于温度对结果有显著影响者，）。对于温度对结果有显著影响者，应以应以252为准。为准。二、实验操作中的一些二、实验操作中的一些注意事项注意事项1、坩埚恒重应注意的问题、坩埚恒重应注意的问题 （1）坩埚应编码标记，盖子与坩埚编码应一致。）坩埚应编码标记，盖子与坩埚编码应一致。（用玻璃棒蘸取（用玻璃棒蘸取FeCl3 试液涂划）试液涂划） （2）空坩埚恒重时，洁净坩埚在炉内，将坩
14、埚）空坩埚恒重时，洁净坩埚在炉内，将坩埚盖子斜盖于坩埚上，盖子斜盖于坩埚上，1、坩埚恒重应注意的问题、坩埚恒重应注意的问题 （3）从高温炉中取出时的温度、先后次序、均）从高温炉中取出时的温度、先后次序、均应前后一致；同一干燥器内同时放置的坩埚最好应前后一致；同一干燥器内同时放置的坩埚最好不超过不超过4个，否则不易达到恒重。个，否则不易达到恒重。 （4）停止加热时，应该将高温炉门开一小缝，）停止加热时，应该将高温炉门开一小缝，待温度降至待温度降至300度，再取出坩埚置干燥器内，盖度，再取出坩埚置干燥器内，盖好坩埚盖，放冷至室温（一般需好坩埚盖，放冷至室温（一般需45分钟），再精分钟），再精密称定
15、。密称定。马福炉1、坩埚恒重应注意的问题、坩埚恒重应注意的问题 （5）精密称定坩埚重量（准确至）精密称定坩埚重量（准确至0.1mg）。）。再以同样条件重复操作，直至恒重，备用。再以同样条件重复操作，直至恒重，备用。 （6）炽灼至恒重，除另有规定外，系指在）炽灼至恒重，除另有规定外，系指在规定温度下连续两次炽灼后的重量差异在规定温度下连续两次炽灼后的重量差异在0.3mg以下，以下， （7）第二次炽灼时间不少于）第二次炽灼时间不少于30分钟。分钟。1.装干燥剂的方法装干燥剂的方法 2.干燥器的开启方法干燥器的开启方法 3.干燥器的搬动方法干燥器的搬动方法 （8）坩埚放冷后干燥器内易形成负压，应坩埚
16、放冷后干燥器内易形成负压，应小心开启干燥器，以免吹散坩埚内的轻质小心开启干燥器，以免吹散坩埚内的轻质残渣，残渣，2、浸出物测定注意事项 本法根据采用溶剂不同可分为：本法根据采用溶剂不同可分为：水溶水溶性性浸出物、浸出物、醇溶性醇溶性浸出物及浸出物及挥发性醚挥发性醚浸出物等三种测定法。浸出物等三种测定法。 （1）浸出物测定，供试品应测定）浸出物测定，供试品应测定2份，份，2份份的平均相对偏差应小于的平均相对偏差应小于 5%。 （2）凡以干燥品计算，操作时同时取供试）凡以干燥品计算，操作时同时取供试品测定水分含量，计算时扣除水分的量。品测定水分含量，计算时扣除水分的量。凡未规定水分检查的制剂，浸出
17、物含量可凡未规定水分检查的制剂，浸出物含量可不以干燥品计。不以干燥品计。回回 流流 冷冷 凝凝 管管注意回流结束时，用滤纸擦干冷凝管外壁，注意回流结束时，用滤纸擦干冷凝管外壁，避免增重避免增重2、浸出物测定注意事项 （3）对于浸出物含量较高的供试品，）对于浸出物含量较高的供试品，在水浴上蒸干时应注意，先蒸至近干，在水浴上蒸干时应注意，先蒸至近干，然后旋转蒸发皿使浸出物均匀平铺于然后旋转蒸发皿使浸出物均匀平铺于蒸发皿中，最后再蒸干。蒸发皿中，最后再蒸干。3、对照品使用保存注意事项 含量测定时，称量对照品一般10mg以上。先配成母液，在稀释成需要浓度。 对照品，特别是已经开口的对照品，最好放入干燥
18、器中保存。原因：吸潮，有水分，称量不准。4、薄层色谱注意事项 （1）铺板器铺板，如果板面不均匀，可手动振板使之水平 （2） （3） 记录与计算记录与计算 1 薄层板的种类。 2 展开剂的溶剂组成及比例、展距、显色剂、显色条件、点样位置。 3 展开时的环境温度及相对湿度。 4 薄层色谱图像一般可采用手绘，色谱图大小应与实物大小一致，如需放大或缩小，应注明比例关系。主斑点位置及颜色应标注；必要时可采用摄像设备拍摄，以光学照片或电子图象的形式保存。5、高效液相使用注意事项 （1）反相色谱流动相中，增加有机相比例，）反相色谱流动相中，增加有机相比例，出峰时间缩短；降低流速，出峰时间延长；出峰时间缩短；
19、降低流速，出峰时间延长；升高柱温，出峰时间缩短。升高柱温，出峰时间缩短。 （2）进口的）进口的HPLC溶剂可以不再过滤，因溶剂可以不再过滤，因生产工艺中已用生产工艺中已用0.2m的的过滤装置过滤过过滤装置过滤过了。了。 （3）溶剂滤头，不用时要保存在有机相中。）溶剂滤头，不用时要保存在有机相中。5、高效液相使用注意事项 （4）清洁溶剂过滤器：取下后，先用水冲）清洁溶剂过滤器：取下后，先用水冲洗残留溶剂，然后将其放入洗残留溶剂，然后将其放入35%浓硝酸中浓硝酸中浸泡浸泡1小时，然后用纯水彻底清洗，如果用小时，然后用纯水彻底清洗，如果用其他溶剂超声清洗，适用于不锈钢滤器，其他溶剂超声清洗，适用于不
20、锈钢滤器，瓷滤器不建议超声清洗。瓷滤器不建议超声清洗。 （5）建议定期清洗溶剂过滤器，每三个月）建议定期清洗溶剂过滤器，每三个月至少一次至少一次流动相流动相:粘度粘度 （2）流动相）流动相:有缔合倾向的溶剂（特别有缔合倾向的溶剂（特别是水和乙腈，水和甲醇），它们的粘度是水和乙腈，水和甲醇），它们的粘度随组成的变化是不规律的。例如：水：随组成的变化是不规律的。例如：水：乙腈（乙腈（35：65），水：甲醇（），水：甲醇（50：50）时，其粘度最大时，其粘度最大,压力最高，应避免使用。压力最高，应避免使用。反相反相HPLC 极性极性:固定相固定相 流动相流动相 固定相固定相 - 极性强极性强 流动相
21、流动相(己烷己烷, 庚烷庚烷)- 极性极性弱弱 极性小物质先出峰极性小物质先出峰正相色谱正相色谱 20%反相色谱反相色谱80%正相色谱正相色谱 20%反相色谱反相色谱80%主流固定相与流动相固定相与流动相反相色谱法中应注意：反相色谱法中应注意： 尽量不使用乙酸盐缓冲溶液，因为它和尽量不使用乙酸盐缓冲溶液，因为它和带阳离子的溶质会形成非极性络合物。带阳离子的溶质会形成非极性络合物。 不使用卤化物，以免腐蚀液相色谱仪。不使用卤化物，以免腐蚀液相色谱仪。 对水的质量要求很高。一般应用新鲜的对水的质量要求很高。一般应用新鲜的高纯水。乐百氏也可以用。高纯水。乐百氏也可以用。 每次试验用水都应更换新鲜的水
22、，因水每次试验用水都应更换新鲜的水，因水易变质，不能长时间不更换。易变质，不能长时间不更换。正相色谱法正相色谱法 采用采用极性固定相极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈如聚乙二醇、氨基与腈基键合相基键合相)；流动相为相对；流动相为相对非极性的疏水非极性的疏水性溶剂性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷），常烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。烷等以调节组分的保留时间。 常用于分离中等极性和极性较强的化合常用于分离中等极性和极性较强的化合物物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。等）。 常用的
23、有硅胶柱。常用的有硅胶柱。 高效液相色谱仪高效液相色谱仪( HPLC) 目前常见的目前常见的HPLC仪生产厂家仪生产厂家国外国外有有Waters公司、公司、Agilent公司（原公司（原HP公司）、岛津公司等，公司）、岛津公司等， 国内有国内有大连依利特公司、上海分大连依利特公司、上海分析仪器厂、北京分析仪器厂等。析仪器厂、北京分析仪器厂等。 美国美国AgilentAgilent美国美国WatersWaters美国戴安美国戴安日本岛津日本岛津美国美国VARIANVARIAN 日本岛津日本岛津 Waters高效液相色谱仪高效液相色谱仪 日本岛津高效液相色谱仪日本岛津高效液相色谱仪开机前的准备工作
24、开机前的准备工作 1、将试验要求的、将试验要求的流动相流动相配制好。配制好。 2、流动相要、流动相要过滤脱气过滤脱气。 3、装好装好试验要求的试验要求的色谱柱色谱柱。日常维护日常维护 流动相应经过流动相应经过0.45um或更小孔径的滤器或更小孔径的滤器过滤，如果使用滤膜，注意有机膜与水过滤，如果使用滤膜，注意有机膜与水膜的区别膜的区别(聚四氟乙烯能适用于所有溶剂聚四氟乙烯能适用于所有溶剂) 注意不同检测器流通池耐压问题，尽量注意不同检测器流通池耐压问题，尽量避免使用避免使用pH9.5的流动相，以防腐蚀流的流动相，以防腐蚀流通池石英窗，避免使用可能析晶的流动通池石英窗，避免使用可能析晶的流动相，
25、防止流通池堵塞相，防止流通池堵塞色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱开机顺序：开机顺序： 1、打开主机，检测器，色谱工作站等电源、打开主机，检测器，色谱工作站等电源开关。开关。 2、将配制好的流动相放入流动相通道内，、将配制好的流动相放入流动相通道内，旋开排液（或灌液）旋钮，将流动相管路旋开排液（或灌液）旋钮，将流动相管路中存放的老溶剂替换掉。中存放的老溶剂替换掉。 3、关上排液（或灌液）旋钮，逐渐将流速、关上排液（或灌液）旋钮，逐渐将流速升高。平衡至少升高。平衡至少30分钟后准备进样。分钟后准备进样。替换掉管路中存放的老溶剂替换掉管路中存放的老溶剂替换掉管路中存放的老溶剂替换掉管路中存放的老溶剂 六通阀
26、六通阀/定量环进样器定量环进样器仪器：手动进样器仪器：手动进样器- -六通阀六通阀/ /定量环定量环手动进样器工作原理手动进样器工作原理 装填状态装填状态样品注入样品注入手动进样器手动进样器 液相色谱中，用液相色谱中，用定量定量环进样时环进样时，注射器的，注射器的抽取量抽取量不得少于环容不得少于环容积的积的5倍倍 。 高效液相色谱中高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法常遇见的问题及处理方法 基线噪音大可能由那些原因引起基线噪音大可能由那些原因引起 可能原因是：可能原因是：泵压不稳泵压不稳，流动池有，流动池有气泡气泡，流动池被污染，对紫外检测器可将流动流动池被污染，对紫外检测器可将流动池移走即可
27、确认。池移走即可确认。 色谱柱色谱柱污染污染，系统管路，系统管路污染污染。 灯能量灯能量不足不足，光学系统老化或污染，参，光学系统老化或污染，参数设计不合理。数设计不合理。 外界因素影响，如电源，温度和湿度，外界因素影响，如电源，温度和湿度，震动，等。震动，等。峰面积重现性不好峰面积重现性不好1. 首先观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是首先观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是否有规律。否有规律。 若压力不稳定，若压力不稳定，请检查造成压力不稳请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。过高导致盐
28、析，主动阀比例阀内漏，等。 2. 若压力稳定但峰面积呈无规律变化，若压力稳定但峰面积呈无规律变化，请检查样请检查样品是否足够，确认样品的稳定性，必要时重新配品是否足够，确认样品的稳定性，必要时重新配制。检查进样阀是否漏液。等。制。检查进样阀是否漏液。等。 3. 若压力稳定且若压力稳定且峰面积呈规律变化，峰面积呈规律变化，多数为色谱多数为色谱柱未平衡好。柱未平衡好。保留时间不稳定保留时间不稳定1. 首先观察保留时间是否有规律的变化，首先观察保留时间是否有规律的变化，并同时观察压力是否稳定，并同时观察压力是否稳定，若压力稳定若压力稳定而保留时间呈有规律变化，而保留时间呈有规律变化，多数是色谱多数是
29、色谱柱未平衡好，特别是含有的流动相，需柱未平衡好，特别是含有的流动相，需较长的时间去平衡。较长的时间去平衡。2. 若压力稳定而保留时间无规律变化，若压力稳定而保留时间无规律变化，请请检查溶剂过滤头及真空腔是否有堵塞。检查溶剂过滤头及真空腔是否有堵塞。再平衡色谱柱足够时间，如仍然不佳，再平衡色谱柱足够时间，如仍然不佳，可更换一色谱柱。可更换一色谱柱。3. 若压力不稳定，若压力不稳定，请检查造成压力不稳定请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。漏，等。一、一、 保留时间缩短保
30、留时间缩短 1.1.流速增加流速增加2.2.样品超载样品超载3.3.键合相流失键合相流失4.4.流动相组成变化流动相组成变化5.5.温度增加温度增加1.1.检查泵检查泵, ,重新设定流速重新设定流速2.2.降低样品量降低样品量3.3.流动相流动相PHPH值保持在值保持在3 37.57.5 检查柱的方向检查柱的方向4.4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.5.柱恒温柱恒温二、二、 保留时间延长保留时间延长 1.1.流速下降流速下降2.2.硅胶柱上活性点硅胶柱上活性点变化变化3.3.键合相流失键合相流失4.4.流动相组成变化流动相组成变化5.5.温度降低温度降低1.1.管路泄漏管路泄漏,
31、 ,更换泵密封圈更换泵密封圈, ,排排除泵内气泡除泵内气泡2.2.用流动相改性剂用流动相改性剂, ,如加三乙如加三乙胺胺, ,或采用碱至钝化柱或采用碱至钝化柱3.3.流动相流动相PHPH值保持在值保持在3 37.57.5检查柱的方向检查柱的方向4.4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.5.柱恒温柱恒温三三 、 出现肩峰或分叉出现肩峰或分叉 1.1.样品体积过大样品体积过大2.2.样品溶剂过强样品溶剂过强3.3.柱塌陷或形成短柱塌陷或形成短路通道路通道4.4.柱内烧结不锈钢柱内烧结不锈钢失效失效5.5.进样器损坏进样器损坏1.1.用流动相配样用流动相配样, ,总的样品体积总的样品体积小
32、于第一峰的小于第一峰的15%15%2.2.采用较弱的样品溶剂采用较弱的样品溶剂3.3.更换色谱柱更换色谱柱, ,采用较弱腐蚀性采用较弱腐蚀性条件条件4.4.更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢, ,加在线过滤加在线过滤器器, ,过滤样品过滤样品5.5.更换进样器转子更换进样器转子四、四、 鬼峰鬼峰 1.1.进样阀残余峰进样阀残余峰2.2.样品中未知物样品中未知物3.3.柱未平衡柱未平衡4.4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)(TFA)氧化氧化( (肽谱肽谱) )5.5.水污染水污染( (反相反相) )1.1.每次用后用强溶剂清洗阀每次用后用强溶剂清洗阀, ,改进阀和样品的清洗改进阀和样品的清洗2.2.处理样
33、品处理样品3.3.重新平衡柱重新平衡柱, ,用流动相作用流动相作样品溶剂样品溶剂 ( (尤其是离子对尤其是离子对色谱色谱) )4.4.每天新配每天新配, ,用抗氧化剂用抗氧化剂5.5.通过变化平衡时间检查水通过变化平衡时间检查水质量，用质量，用HPLCHPLC级的水级的水五、五、 基线噪声基线噪声 1.1.气泡气泡( (尖锐峰尖锐峰) )2.2.污染污染( (随机噪声随机噪声) )3.3.检测器灯连续检测器灯连续噪声噪声4.4.电干扰电干扰( (偶然噪偶然噪声声) )5.5.检测器中有气检测器中有气泡泡1.1.流动相脱气流动相脱气, ,加柱后加柱后背压背压2.2.清洗柱清洗柱, ,净化样品净化
34、样品, ,用用HPLCHPLC级试剂级试剂3.3.更换氘灯更换氘灯4.4.采用稳压电源采用稳压电源, ,检查检查干扰的来源干扰的来源( (如水如水浴等浴等) )5.5.流动相脱气流动相脱气, ,加柱后加柱后背压背压六、六、 峰拖尾峰拖尾 1.1.柱超载柱超载2.2.峰干扰峰干扰3.3.硅羟基作用硅羟基作用4.4.柱内烧结不锈钢柱内烧结不锈钢失效失效5.5.柱塌陷或形成短柱塌陷或形成短路通道路通道6.6.死体积或柱外体死体积或柱外体积过大积过大7.7.柱效下降柱效下降1.1.降低样品量降低样品量, ,增加柱直径采用较高增加柱直径采用较高容量的固定相容量的固定相2.2.清洁样品清洁样品, ,调整流
35、动相调整流动相3.3.加三乙胺加三乙胺, ,用碱致钝化柱增加缓冲用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相液或盐的浓度降低流动相PHPH值值, ,钝钝化样品化样品4.4.更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢, ,加在线过滤器加在线过滤器, ,过过滤样品滤样品5.5.更换色谱柱更换色谱柱, ,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件6.6.连接点降至最低连接点降至最低, ,对所有连接点作对所有连接点作合适调整合适调整, ,尽可能采用细内径的连尽可能采用细内径的连接管接管7.7.用较低腐蚀条件用较低腐蚀条件, ,更换柱更换柱, ,采用保护采用保护柱柱七、七、峰展宽峰展宽 1.1.进样体积过大进样体积过大2.2
36、.在进样阀中造成峰在进样阀中造成峰扩展扩展3.3.数据系统采样速率数据系统采样速率太慢太慢4.4.检测器时间常数过检测器时间常数过大大1. 1. 用流动相配样用流动相配样, ,总的样总的样品体积小于第一峰的品体积小于第一峰的15%15%2.2.进样前后排出气泡以进样前后排出气泡以降低扩散降低扩散3.3.设定速率应是每峰大设定速率应是每峰大于于1010点点4.4.设定时间常数为感兴设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的趣第一峰半宽的10%10%七、七、峰展宽峰展宽5.5.流动相粘度过流动相粘度过高高6.6.检测池体积过检测池体积过大大7.7.保留时间过长保留时间过长8.8.柱外体积过大柱外体积过大9.
37、9.样品过载样品过载5.5.增加柱温增加柱温, ,采用低粘度流动采用低粘度流动相相6.6.用小体积池用小体积池, ,卸下热交换器卸下热交换器7.7.等度洗脱时增加溶剂含量也等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱可用梯度洗脱8.8.将连接管径和连接管长度降将连接管径和连接管长度降至最小至最小9.9.进小浓度小体积样品进小浓度小体积样品6紫外紫外-可见分光光度计使用注意可见分光光度计使用注意 (1)使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在如透光率相差在0.3%以下
38、者可配对使用，否则测以下者可配对使用，否则测定样品溶液前必须加以校正。定样品溶液前必须加以校正。 (2)装样品溶液的体积以池体积的装样品溶液的体积以池体积的五分之四五分之四为度，为度，使用挥发性溶液时应加盖。使用挥发性溶液时应加盖。 (3)吸收池放入样品室时应注意每次吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同放入方向相同。 (4)吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3：1 ）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结
39、晶会损坏吸时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。钾吸附于吸收池表面。吸收池吸收池6紫外-可见分光光度计使用注意 (5)测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用的波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质）测定其吸光度，应符合下表规定，并不得物质）测定其吸光度，应符合下表规定，并不得在溶剂的截止使用波长以下测定。在溶剂的截止使
40、用波长以下测定。 注意：用注意：用比色法比色法测定时，由于显色时影响测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，显色深浅的因素较多，应取供试品与对照应取供试品与对照品或标准品同时操作品或标准品同时操作。除另有规定外，比。除另有规定外，比色法所用的空白系指同体积的溶剂代替对色法所用的空白系指同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。在规定的相应试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度6紫外-可见分光光度计使用注意 (6)配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转
41、配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于移稀释时所取容积一般应不少于5ml ,含量测定时含量测定时供试品应称取供试品应称取2 份份. (7)供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光度以在外，供试品溶液的吸光度以在0.3-0.7之间为宜之间为宜.吸光度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪吸光度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。 (8)用于制剂含量测定时，应注意供试液与对照液用于制剂含量测定时，应注意供试液与对照液的的 PH值是否一致
42、，如值是否一致，如PH 值对吸收有影响，则应值对吸收有影响，则应调溶液的调溶液的PH 值一致后再测定吸光度。值一致后再测定吸光度。7、 pH值测定法使用注意事项pH值测定法简述 ： pH值测定法是测定水溶液中氢离子活度的一种方法。 pH值即水溶液中氢离子活度(以每1000毫升中摩尔数计算)的负对数 。 pH -logH+ 在25 时，水溶液的pH值等于7为中性，小于7为酸性，大于7为碱性。pH值测定法简述 ： 常用的对氢离子敏感的电极(简称指示电极)有：pH玻璃电极、氢电极、醌氢醌电极与锑电极等； 参比电极有甘汞电极、银氯化银电极等。 最常用的电极为玻璃电极与饱和甘汞电极。现已广泛使用将指示电
43、极与参与电极组合为一体的复合电极。复合电极。 复复 合合 电电 极极复复 合合 电电 极极复复 合合 电电 极极pH值测定法简述 ： pH值测定法各国药典均有收载。 除另有规定外，水溶液的pH值应以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极为参比电极的酸度计进行测定。 酸度计应定期检定，确保精密度和准确度符合要求 。 酸 度 计 酸度计是专为应用玻璃电极，测定pH值而设计的一种电子电位计。 它是基于由溶液与电极组成的电池的电动势与pH值的关系，即在25时，电池电动势每变化0059V 时(由Nernst方程演算得出的值) ，相当于pH值变化1个单位的原理设计而成。 酸 度 计 酸度计主要由pH测量电池(由
44、一对电极与溶液组成)和pH指示器(电位计)两部分组成。 玻璃电极的电位随溶液中的氢离子浓度变化而发生变化，称为指示电极； 甘汞电极为参比电极，具有稳定的已知电位，作为测定时的比较标准。 酸酸 度度 计计酸 度 计 玻璃电极是在一支厚玻璃管下端接一个玻璃电极是在一支厚玻璃管下端接一个特殊材料玻璃球膜，其下端薄膜的厚度特殊材料玻璃球膜，其下端薄膜的厚度约为约为02mm 。 由于玻璃球膜表面情况不完全相同，常由于玻璃球膜表面情况不完全相同，常可测出几毫伏到可测出几毫伏到30毫伏的电位差，这就毫伏的电位差，这就是常说的玻璃电极的不对称电位。是常说的玻璃电极的不对称电位。 pH计计上的上的定位调节定位调
45、节主要是为了主要是为了消除不对称电消除不对称电位位而设计的。而设计的。 甘汞电极是由汞、甘汞糊和氯化钾溶液甘汞电极是由汞、甘汞糊和氯化钾溶液组成。组成。 pH值测定方法 1、测定之前，按各品种项下的规定，选择两种、测定之前，按各品种项下的规定，选择两种标准缓冲液标准缓冲液(pH值相差约值相差约3个单位个单位)，使供试液的，使供试液的pH值处于二者之间。值处于二者之间。 2、开机通电预热数分钟，调节零点与温度补偿、开机通电预热数分钟，调节零点与温度补偿(有的可能不需调零有的可能不需调零)，选择与供试液，选择与供试液pH值较接近值较接近的标准缓冲液进行校正的标准缓冲液进行校正(定位定位)，使仪器读
46、数与标，使仪器读数与标示示pH值一致；再用另一种标准缓冲液进行核对，值一致；再用另一种标准缓冲液进行核对，误差应不大于土误差应不大于土002pH单位。单位。 pH值测定方法 如大于此偏差，则应仔细检查电极，如已损坏，应更换；否则，应调节斜率，使仪器读数与第二种标准缓冲液的标示pH值相符合。重复上述定位与核对操作，直至不需调节仪器，读数与两标准缓冲液的标示pH值相差不大于002pH单位。 pH值测定方法 按规定取样或制备样品，置小烧杯中，用供试液淋洗电极数次，将电极浸入供试液中，轻摇供试液平衡稳定后，进行读数。 对弱缓冲液对弱缓冲液(如水如水)的测定要特别注意，先用邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液校正仪
47、器后，更换供试液进行测定，并重新取供试液再测，直至pH值的读数在1分钟内改变不超过土005单位为止；然后再用硼砂标准缓冲液校正仪器，再如上法测定； 二次pH值的读数相差应不超过01，取二次pH读数的平均值为其pH值。 不同温度时标准缓冲液的不同温度时标准缓冲液的pH值值温度温度草酸三氢草酸三氢钾钾标准缓冲标准缓冲液液邻苯二甲酸邻苯二甲酸氢钾氢钾标准缓冲液标准缓冲液磷酸盐磷酸盐标准缓冲标准缓冲液液硼砂硼砂标准缓冲标准缓冲液液氢氧化钙氢氧化钙标准缓冲标准缓冲液（液（25）0510152025303540455055601.671.671.671.671.681.681.681.691.691.70
48、1.711.721.724.014.004.004.004.004.004.014.024.034.044.064.084.096.986.956.926.906.886.866.856.846.846.836.836.836.849.649.409.339.289.239.189.149.109.079.049.018.998.9613.4313.2113.0012.8112.6312.4512.2912.1311.9811.8411.7111.5711.45pH值测定注意事项 1、配制标准缓冲液与供试液用水，应是新沸放、配制标准缓冲液与供试液用水，应是新沸放冷除去二氧化碳的蒸馏水或纯化水冷
49、除去二氧化碳的蒸馏水或纯化水pH值应在值应在5.5-7.0)，并应尽快使用，以免二氧化碳重新溶入，并应尽快使用，以免二氧化碳重新溶入，造成测定误差。造成测定误差。 2、 标准缓冲液最好新鲜配制，在抗化学腐蚀、标准缓冲液最好新鲜配制，在抗化学腐蚀、密闭的容器中一般可保存密闭的容器中一般可保存23个月，如发现有混个月，如发现有混浊、发霉或沉淀等现象，不能继续使用浊、发霉或沉淀等现象，不能继续使用。 pH值测定注意事项 3、供试液的、供试液的pH值大于值大于9.5时，应选用适宜的无钠时，应选用适宜的无钠误差的玻璃电极误差的玻璃电极(如锂玻璃电极，或称高碱玻璃电如锂玻璃电极，或称高碱玻璃电极）进行测定
50、。一般在测定强碱溶液时，操行应极）进行测定。一般在测定强碱溶液时，操行应尽量快，以免与溶液接触，侵蚀玻璃膜，用完后尽量快，以免与溶液接触，侵蚀玻璃膜，用完后立即用水冲洗。立即用水冲洗。 有些电极反应速度较慢，尤其测定某些弱电解质有些电极反应速度较慢，尤其测定某些弱电解质(如水如水)时，必须将供试液轻摇均匀，平衡稳定后时，必须将供试液轻摇均匀，平衡稳定后再进行读数。再进行读数。 pH值测定注意事项 4、仪器读数开关、玻璃电极的导线插头与电极架均应保持干燥，潮湿易引起漏电，接触不良易使读数不稳。pH值测定注意事项 5、注意操作环境温度，温度对电极电位影响较、注意操作环境温度，温度对电极电位影响较大
