1、薄层色谱法在中药检验中的应用及操作要点薄层色谱法在中药检验中的应用及操作要点1薄层色谱方法简述薄层色谱方法简述2薄层色谱法在中药检验中薄层色谱法在中药检验中的应用的应用3薄层色谱操作要点及常见问薄层色谱操作要点及常见问题分析题分析目录CONTENTS定义定义薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，是供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。方法简述 支持物与固定相支持物与固定相仪器与材仪器与材料料支持物：玻璃板、塑料板、铝板支持物：玻璃板、塑料板、铝板固定相：硅胶、键合硅胶、微晶纤维素、聚酰
2、胺、氧化铝固定相：硅胶、键合硅胶、微晶纤维素、聚酰胺、氧化铝点样器与展开容器点样器与展开容器点样器：微升毛细管（手动、半自动、自动）点样器：微升毛细管（手动、半自动、自动）展开容器：平底展开缸、双槽展开缸（推荐）展开容器：平底展开缸、双槽展开缸（推荐）显色与检视显色与检视显色：玻璃喷雾瓶、空气压缩机显色：玻璃喷雾瓶、空气压缩机检视：暗箱检视：暗箱+摄像设备摄像设备方法简述 结果结果 灵活性灵活性 直观性直观性薄层方法的优势薄层方法的优势 薄层色谱独有的特点是分析结果薄层色谱独有的特点是分析结果以直观的彩色图像表达以直观的彩色图像表达 ，“一幅一幅图胜过千言万语图胜过千言万语 各单元操作相互独立
3、，分层各单元操作相互独立，分层次进行和中止次进行和中止 点样器材和方法、展开方式、点样器材和方法、展开方式、显色试剂选择、直观比较或扫描显色试剂选择、直观比较或扫描比较可根据需要灵活变通；比较可根据需要灵活变通； 离线操作，个人占机时间短。离线操作，个人占机时间短。时效性时效性 色谱生成快速色谱生成快速 同板可以同时产生多达同板可以同时产生多达1618个样品色谱个样品色谱方法简述20世纪世纪60年代，薄层色谱取代纸色谱（纸层析）技术作为一种快年代，薄层色谱取代纸色谱（纸层析）技术作为一种快速、简单、灵敏的鉴别手段应用于中药材及中成药的鉴别速、简单、灵敏的鉴别手段应用于中药材及中成药的鉴别鉴别随
4、着仪器设备的不断改进，薄层扫描法作为一种含测方法应用于中药及中药材的含量测定中。含量测定将鉴别和含量测定结合起来，用于某些中药材与其同属近缘植物的鉴别指纹图谱应用在中药检验中的应用鉴别鉴别在检验中的应用在检验中的应用1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13白芷薄层色谱鉴别（以对照品为对照）：1、欧前胡素 2、异欧前胡素 3-13、白芷药材 分为以对照品为对照、以对照药材为对照、以对照品和对照药材联合对照三种方式，在中药及中药材检验中应用广泛。鉴别鉴别在检验中的应用在检验中的应用1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11红参薄层色谱鉴别（以对照药材为对照）：1、红参对照药材
5、 2-11、红参药材 鉴别鉴别在检验中的应用在检验中的应用 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13五味子薄层色谱鉴别（对照品和对照药材联合对照）：1、五味子对照药材 2、五味子甲素 3、五味子醇甲 样品（6、10、13）：未检出样品（4、5、8、12）检出样品（7、9、11）南北五味子混投 可用于药材真伪鉴别、成药中药材投料的辅助鉴别含量测定含量测定在检验中的应用在检验中的应用指纹图谱指纹图谱在检验中的应用在检验中的应用标准物质的选择标准物质的选择供试品的制备供试品的制备薄层板的选择薄层板的选择操作要点及常见问题分析展开展开显色显色影响因素影响因素常见问题分析常见问题分析点
6、样点样对照品 早期。缺点;不能反应药材的整体特征；有些对照品多种植物中共存，无专属性；对照品的分离纯化代价高。对照药材 中国药典1990年版起，开始增加“对照药材”。对照品+对照药材 多用。 对照品对照品or对照药材对照药材or对照品对照品+对照药材对照药材？操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-标准物质的选择标准物质的选择乌梅薄层色谱鉴别（S：熊果酸） 对照品对照品or对照药材对照药材or对照品对照品+对照药材对照药材？操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-标准物质的选择标准物质的选择大叶柴胡北柴胡锥叶柴胡西藏柴胡南柴胡dab2f中药材 选择该味药材的主要活性成分，必要的时候
7、要用多个薄层来鉴别，尽可能全面的反应该味药材的薄层特征。丹参 丹参酮A为丹参中的菲醌类成分，具有扩张冠脉的作用；丹酚酸为丹参中的菲醌类成分，具有扩张冠脉的作用；丹酚酸B为其为其水溶性的活性成分，具有抗氧化、抗自由基、对心脑血管缺血水溶性的活性成分，具有抗氧化、抗自由基、对心脑血管缺血-再灌注损伤具再灌注损伤具有保护作用。为丹参中主要的活性成分。有保护作用。为丹参中主要的活性成分。中国药典2015年版一部中，丹参的鉴别所选用的标准物质为丹参对照药材、丹参酮A、丹酚酸B。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-标准物质的选择标准物质的选择中成药 按照制法选择合适的标准物质。 丹参 当丹参为生
8、粉入药时：同中药材，必要时除杂。 当丹参为水提入药时：样品中主要含的为丹参中水 溶性成分，丹参酮A 的含量会极低，对照制剂选 择丹酚酸B和丹参对照药材。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-标准物质的选择标准物质的选择一般采用溶剂提取法。根据选定的标准物质（或药材中主要活性部位）的结构特性，选择合适的提取溶剂。提取溶剂提取溶剂 水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷（二氯甲烷）、乙醚、水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷（二氯甲烷）、乙醚、正己烷（环己烷）、苯（甲苯）、石油醚。正己烷（环己烷）、苯（甲苯）、石油醚。提取方法提取方法 超声、回流、索式提取、加酸水解、萃取，挥发油提取
9、法、升华法超声、回流、索式提取、加酸水解、萃取，挥发油提取法、升华法操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-供试品的制备供试品的制备石油醚、正己烷（环己烷）、苯（甲苯）正己烷（环己烷）、苯（甲苯） 用于提取油脂、蜡、叶绿素、挥发油、游离甾用于提取油脂、蜡、叶绿素、挥发油、游离甾体及三萜类化合物。体及三萜类化合物。乙醚、三氯甲烷、乙酸乙酯 用于提取游离生物碱、有机酸、黄酮、香豆素等的苷元丙酮、乙醇、甲醇 用于提取苷类、生物碱盐及鞣质等水 用于提取氨基酸、糖类、无机盐等多数药材及部分处方药味较少的中成药采用一种提取方法即可；对于有些成分复杂的药材及多数中成药，多数药材及部分处方药味较少的中成
10、药采用一种提取方法即可；对于有些成分复杂的药材及多数中成药，则需要多种提取方法联合。则需要多种提取方法联合。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-供试品的制备供试品的制备硅胶 正相吸附色谱。具微酸性，适合酸性或中性成分的鉴别，用于生物碱等碱性成分时，需制成碱板或在展开剂中加入碱。应用最为广泛。氧化铝 正相吸附色谱。具碱性，适合中性或碱性成分的鉴别，不适合用于黄酮等酚酸性物质。聚酰胺 氢键吸附色谱。适合黄酮类、醌类等的鉴别。 操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-薄层板的选择薄层板的选择手动点样 最常用的为定量点样毛细管，规格有0.5l、1l、2l、3l、5l、10l等等。操作要
11、点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-点样点样可用点状点样及条带状点样两种方式。要点：1、点样斑点要小，尽量减少溶剂扩散现象。斑点的直径尽量小于0.5cm。2、对于点样量大的样品，多次点样，吹干，对于极性较大的溶剂溶解的供试品（如乙醇、水、含水醇等），每次点样量要少，并及时吹干。3、对于-香附酮、桂皮醛、冰片等本身具有挥发性的成分，吹干时不可用热风。4、当供试品中斑点较多或目标斑点附近有其他干扰斑点时，宜选用条带状点样。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-手动点样要点手动点样要点半自动点样 样品手动吸入，由仪器进行条带状喷雾点样。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-点样点
12、样优点:定量准确，薄层斑点大小一致，可控性和重复性均较好。常和薄层扫描仪联用，用于含量测定。全自动点样 样品制备好后，放入全自动点样仪，样品的吸入和点样等操作均由仪器完成。更为简便快捷。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-点样点样展开缸 一般多用直立式的展开缸。有平底的和双槽的两种。现多采用双槽式展开缸。具有节省溶剂便于预平衡，可控制展开箱相对湿度等优点。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-展开展开展开剂 分为单相展开系统和多相展开系统。单相较少用。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-展开展开吸附色谱常用展开剂极性递增正（环）己烷-苯（甲苯）苯（甲苯）-乙醚苯（甲
13、苯）-乙酸乙酯三氯甲烷-乙醚三氯甲烷-乙酸乙酯三氯甲烷-甲醇丙酮-水甲醇-水一般情况下：由于中药成分复杂、成分较多，要达到较好的分离度，常常需要用三相或四相的展开系统进行展开。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-展开展开常用展开系统 正丁醇-冰醋酸-水：极性较大，用于氨基酸类、苷类的鉴别；三氯甲烷-甲醇-水、三氯甲烷-丙酮、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸：极性中等，适合于萜类皂苷、甾体皂苷、黄酮苷等中等极性的成分分离；环己烷（甲苯）-乙酸乙酯、环己烷（甲苯）-乙醚：极性较小，适合苷元等小极性的成分的分离； 三氯甲烷三氯甲烷-甲醇甲醇-浓氨溶液浓氨溶液 ：适合生物碱类成分的分离。：适合
14、生物碱类成分的分离。展开 将展开剂放入展开缸的一边凹槽内，再将已点好的薄层板放入另一边或两个凹槽中间的棱上饱和15分钟，展开。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-展开展开要点:1、展开剂用量：1020cm的薄层板，大概需要810ml，根据气温及展开剂情况可酌情增减；2、展开缸需洁净、干燥，盖板和展缸之间应用涂有密封油脂，以保证展开缸内环境的稳定性；3、饱和时间：一般为15分钟，可根据季节情况增减；4、展开高度：一般为812cm，可根据标准物质的色谱情况及所用薄层板进行调节，可根据标准物质的色谱情况及所用薄层板进行调节 薄层板展开完成后，针对不同的测定成分的性质，选择合适的显色方式及检
15、视方式，对薄层色谱结果进行判定。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-显色显色不显色：如某些含在日光下有颜色成分的药材，如大青叶、丹参、红花，或含有黄酮类、蒽醌类、苯丙素类成分的药材（在紫外光下有荧光）显色：所测定的某个或某类成分需要先进行衍生化后在进行观察的药材。 常用显色剂 香草醛-硫酸溶液：萜类（挥发油）、苷类 硫酸-乙醇溶液：皂苷类（三萜皂苷、甾体皂苷） 茚三酮乙醇溶液：具有-氨基的成分 1%三氯化铝乙醇溶液：黄酮类 对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液：部分甾体皂苷 三氯化铁乙醇溶液或铁氰化钾-三氯化铁溶液:酚类化合物 碘化铋钾试液、改良碘化铋钾试液、稀碘化铋钾试液:生物碱类 二硝
16、基苯肼乙醇试液：萜类、醌类操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-显色显色 供试品溶液 当供试品溶液杂质较多，色带干扰严重，目标成分与其他斑点的分离度较差。宜选择合适的方法对供试品溶液进行净化。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素1:未经未经Al2O3小柱的人参样品；小柱的人参样品；2:未经未经Al2O3小柱的红参样品；小柱的红参样品；3:经过经过Al2O3小柱的红参样品；小柱的红参样品；（*：与其他皂苷斑点位置重叠的人参皂苷：与其他皂苷斑点位置重叠的人参皂苷Ro） 1 2 3 薄层板 不同厂家生产的薄层板由于所用硅胶的粒度、性质以及粘合剂均有所不同，其色谱行为
17、及重现性也存在一定差异。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素左:Merck HPTLC预制板；中: MN HPTLC预制板；右: 国内某厂 HPTLC预制板；西洋参不同薄层板比较西洋参不同薄层板比较 点样 点样斑点过大、点样量过大使薄层板过载、点样时对点样原点造成机械损伤等均有可能影响到薄层色谱效果。 展开剂 不同展开剂对薄层色谱的结果影响也较大。 操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素 诃子在不同展开剂下的色谱图诃子在不同展开剂下的色谱图 溶剂蒸气 在展开的过程中，展开缸内是一个相对独立的空间，刚加入展开剂时，薄层板上下所处的环境不同，容易影
18、响薄层效果，故一般情况下需要进行预饱和，使薄层板本身及所处的环境均匀一致，则薄层板上各个位置的展开行为才能保持一致性。对于生物碱类，使用硅胶板进行薄层试验时，需用氨蒸气饱和或在展开剂中加入一定量的氨水，此时，不仅要控制饱和时间，也要控制氨水加入量，即展缸内溶剂蒸气的浓度。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素 2ml 3ml 4ml 5ml 6ml 氨试液预平衡用量氨试液预平衡用量未经溶剂蒸气预平衡展开箱预先用溶剂蒸气预平衡未经溶剂蒸气预平衡 温度 温度对层析行为的最明显的影响是分离度和温度对层析行为的最明显
19、的影响是分离度和Rf值。值。 经常遇到的一种情况是同样的试验需要在夏天做，又须在冬天做，或者在南方和北方的试验室重复试经常遇到的一种情况是同样的试验需要在夏天做，又须在冬天做，或者在南方和北方的试验室重复试验，这就遇到温度不同造成的影响，而使结果不易重现。验，这就遇到温度不同造成的影响，而使结果不易重现。 最基本的要求是在薄层色谱记录中同时记录试验时的温度和相对湿度，并考察在高温高湿或低温低湿最基本的要求是在薄层色谱记录中同时记录试验时的温度和相对湿度，并考察在高温高湿或低温低湿的情况下薄层色谱的重现性。的情况下薄层色谱的重现性。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素操
20、作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素 1 2 1、30 2、18 淫羊藿苷薄层色谱 湿度 对于如硅胶、氧化铝这类亲水性吸附剂，以及对疏水性展开溶剂，环境的相对湿度对其影响是对于如硅胶、氧化铝这类亲水性吸附剂，以及对疏水性展开溶剂，环境的相对湿度对其影响是很明显的。很明显的。操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-影响因素影响因素 18% 32% 47% 58% 65% 72% 连翘不同湿度下薄层色谱图 斑点拖尾严重 可能原因 1、供试品溶液杂质太多 2、供试品溶液粘度过高 3、薄层板过载 4、薄层板或展开剂不适合。 解决方案解决方案 1、将供试品溶液进行进一步的净
21、化，如萃取、过柱等；、将供试品溶液进行进一步的净化，如萃取、过柱等； 2、使用合适的方法除去供试品中油脂、叶绿素等极性较小的、使用合适的方法除去供试品中油脂、叶绿素等极性较小的 成分，或稀释供试品溶液；成分，或稀释供试品溶液； 3、降低点样量、降低点样量 4、按照被测物质的性质选择合适的薄层板、按照被测物质的性质选择合适的薄层板操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-常见问题及解决常见问题及解决 边缘效应 可能原因 1、薄层斑点离两边的距离太小 2、展距过大 3、未进行预饱和 解决方案解决方案 1、将两边的边距加大，一般情况下应不小于、将两边的边距加大，一般情况下应不小于1CM 2、将展
22、距控制在合理的范围内（普通板、将展距控制在合理的范围内（普通板8-12cm，高效板，高效板5-8cm） 3、进行预饱和、进行预饱和(15分钟分钟)操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-常见问题及解决常见问题及解决 薄层板展开前沿参差不齐或斑点高度不一致 可能原因 1、未饱和或饱和时间不够 2、展开剂极性太小或展开剂组成中挥发性差异较大致使展开 缸中蒸气不均匀 解决方案解决方案 1、将薄层板和展缸进行充分饱和、将薄层板和展缸进行充分饱和 2、更换展开剂或在展缸的另一个凹槽中垂直放入用展开剂浸、更换展开剂或在展缸的另一个凹槽中垂直放入用展开剂浸 润过的滤纸（滤纸大小与薄层板相同）润过的滤纸
23、（滤纸大小与薄层板相同）操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-常见问题及解决常见问题及解决 用三氯化铝显色时斑点不清晰或未出现斑点 可能原因 反应条件不够（主要用于黄酮类成分的显色） 解决方案解决方案 有时需要加热以促进络合物的生成操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-常见问题及解决常见问题及解决 薄层斑点仍在原点 可能原因 1、展开剂的洗脱能力太低 2、该薄层板不适合该类成分的薄层鉴别 解决方案解决方案 1、提高展开剂的极性，当展开系统为三相或三相以上时，调、提高展开剂的极性，当展开系统为三相或三相以上时，调 两边。两边。 2、换薄层板的类型或将薄层板改性或者在展开剂中加入合
24、适、换薄层板的类型或将薄层板改性或者在展开剂中加入合适 的溶剂。如用硅胶的溶剂。如用硅胶G板对生物碱类进行展开时，一般需将薄板对生物碱类进行展开时，一般需将薄 层板制成碱板或在展开剂中加入氨水或用氨水对展缸及薄层板制成碱板或在展开剂中加入氨水或用氨水对展缸及薄 层板进行预饱和。层板进行预饱和。 操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-常见问题及解决常见问题及解决 薄层斑点模糊 可能原因 1、薄层板含水量过大 2、展开环境湿度过大 解决方案解决方案 1、点板前对薄层板进行活化、点板前对薄层板进行活化 2、在展开环境中放置除湿机或在展缸中放入一小杯浓硫酸、在展开环境中放置除湿机或在展缸中放入
25、一小杯浓硫酸 操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-常见问题及解决常见问题及解决 使用碘化铋钾试液进行显色时底色过重，影响结果判断 可能原因 薄层板上残留的氨 解决方案解决方案 将薄层板多放置一段时间或在烘箱中烘一段时间，再进行显色。将薄层板多放置一段时间或在烘箱中烘一段时间，再进行显色。 操作要点及常见问题分析操作要点及常见问题分析-常见问题及解决常见问题及解决PPT模板下载： 行业PPT模板： 节日PPT模板： PPT素材下载： PPT图表下载： 优秀PPT下载： PPT教程： Word教程： Excel教程： 资料下载： PPT课件下载： 范文下载： 试卷下载： 教案下载： PPT论坛： 感谢您的聆听！ 湖南省药品检验研究院
