1、第第19章章 色谱分析方法导论色谱分析方法导论19.1 概述概述历史、色谱分离过程、分类历史、色谱分离过程、分类19.2 色谱流出曲线色谱流出曲线色谱图及相关术语色谱图及相关术语19.3 色谱法基本原理色谱法基本原理描述分配过程参数、峰间距、峰形状和峰宽的理论描述描述分配过程参数、峰间距、峰形状和峰宽的理论描述(塔板理论及速率塔板理论及速率理论理论)19.4 分离度及色谱分离方程分离度及色谱分离方程分离度及色谱分离方程、影响分离的因素分离度及色谱分离方程、影响分离的因素19.5 定性和定量分析定性和定量分析.19.1 概述概述 化学分析方法的基本要求在分析过程中，待测物与潜在的干扰物的化学分析
2、方法的基本要求在分析过程中，待测物与潜在的干扰物的分离是最为重要的步骤！分离是最为重要的步骤！20 世纪中期，大量采用一些经典的分离方法：沉淀、蒸馏和萃取世纪中期，大量采用一些经典的分离方法：沉淀、蒸馏和萃取 现代分析中，大量采用色谱和电泳分离方法。迄今为止，色谱方法现代分析中，大量采用色谱和电泳分离方法。迄今为止，色谱方法是最为有效的分离手段！其应用涉及每个科学领域。是最为有效的分离手段！其应用涉及每个科学领域。历史历史：1903年，俄国植物学家年，俄国植物学家Mikhail Tswett 最先发明。他采用填充有固最先发明。他采用填充有固体体CaCO3细粒子的玻璃柱，将植物色素的混合物细粒子
3、的玻璃柱，将植物色素的混合物(叶绿素和叶黄素叶绿素和叶黄素 chlorophylls & xanthophylls)加于柱顶端，然后以溶剂淋洗，被分加于柱顶端，然后以溶剂淋洗，被分 离的组份在柱中显示了不同的色带，他称之为色谱离的组份在柱中显示了不同的色带，他称之为色谱 。 50年代，色谱发展最快（一些新型色谱技术的发展；复杂组分分析年代，色谱发展最快（一些新型色谱技术的发展；复杂组分分析发展的要求。发展的要求。 1937-1972年，有年，有12个个Nobel奖是有关色谱研究的！奖是有关色谱研究的！.色谱分离基本原理：色谱分离基本原理： 使用外力使含有样品的流动相（气体、液体或超临界流体）通
4、过一固定于使用外力使含有样品的流动相（气体、液体或超临界流体）通过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。样品中各组份在两相中进行不柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。样品中各组份在两相中进行不同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，反之，与固定同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，反之，与固定相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组份最终形成各个单组份的份最终形成各个单组份的“带带(band)”或或“区区(zone)”，对依次流出的各个单组份，对依
5、次流出的各个单组份物质可分别进行定性、定量分析。物质可分别进行定性、定量分析。色谱分类方法：色谱分类方法：1. 按固定相外形分：按固定相外形分： 柱色谱（填充柱、空心柱）、平板色谱（薄层色谱和纸色谱）。柱色谱（填充柱、空心柱）、平板色谱（薄层色谱和纸色谱）。2. 按组份在固定相上的分离机理分：按组份在固定相上的分离机理分： 吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同；吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同； 分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同；分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同； 离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换剂）上的亲和力不同；离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交
6、换剂）上的亲和力不同； 凝胶色谱（尺寸排阻色谱）不同尺寸分子在固定相上的渗透作用。凝胶色谱（尺寸排阻色谱）不同尺寸分子在固定相上的渗透作用。.3. 按两相状态分按两相状态分分类分类流动相流动相固定相固定相色谱方法色谱方法平衡类型平衡类型气相色谱气相色谱气体气体液体（吸附在固液体（吸附在固体上）体上）气液色谱法气液色谱法气气液分配液分配固体固体气固色谱法气固色谱法吸附吸附液相色谱液相色谱液体液体液体（吸附或键液体（吸附或键合在固体表）合在固体表）液液色谱液液色谱液液液分配液分配固体固体液固色谱法液固色谱法吸附吸附离子交换树脂离子交换树脂离子交换色离子交换色谱法谱法离子交换离子交换多孔聚合物多孔聚
7、合物凝胶渗透色凝胶渗透色谱法谱法筛析筛析超临界流超临界流体色谱体色谱超临界流超临界流体体有机物键合到固有机物键合到固体表面体表面超临界流体超临界流体色谱色谱超临界流体超临界流体- -键合相分配键合相分配.19.2 色谱流出曲线（色谱图）色谱流出曲线（色谱图） 混合组分的分离过程及检测器对各组份在不同阶段的响应混合组分的分离过程及检测器对各组份在不同阶段的响应.色谱术语：色谱术语：1）基线：在实验条件下）基线：在实验条件下，色谱柱后仅有纯流动相，色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线进入检测器时的流出曲线称为基线，稳定的基线为称为基线，稳定的基线为一条水平直线。一条水平直线。2）峰高：色谱峰
8、顶点与）峰高：色谱峰顶点与基线的距离。基线的距离。u0tLu 死死时时间间柱柱长长3）保留值）保留值(Retention value, R) a. 死时间死时间(Dead time, t0) ：不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时：不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间，它与色谱柱的空隙体积成正比。由于该物质不与固定相作用，因此，的时间，它与色谱柱的空隙体积成正比。由于该物质不与固定相作用，因此，其流速与流动相的流速相近。根据其流速与流动相的流速相近。根据 t0 可求出流动相平均流速可求出流动相平均流速 . b. 保留时间保留时间tr：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组
9、份随流动相：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间通过柱子的时间t0和组份在固定相中滞留的时间。和组份在固定相中滞留的时间。 c. 调整保留时间调整保留时间 ：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。即份在固定相中的滞留时间。即 由于保留时间为色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关，因此由于保留时间为色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关，因此有时需用保留体积来表示保留值。有时需用保留体积来表示保留值。 d. 死体积死体积V0：色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间空
10、隙：色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间空隙和检测器间隙的总和。勿略后两项可得到：和检测器间隙的总和。勿略后两项可得到：其中，其中，Fco为柱出口的载气流速为柱出口的载气流速（mL/min).rt0rrttt co00FtV . e. 保留体积保留体积Vr：指从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相：指从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。的体积。 f. 调整保留体积调整保留体积 ：某组份的保留体积扣除死体积后的体积。：某组份的保留体积扣除死体积后的体积。 g. 相对保留值相对保留值r2,1：组份：组份2的调整保留值与组份的调整保留值与组份1的调整保留
11、值之比。的调整保留值之比。注意：注意：r2,1只与柱温和固定相性质有关，而与柱内径、柱长只与柱温和固定相性质有关，而与柱内径、柱长L、填充情况及流动、填充情况及流动相流速无关，因此，在色谱分析中，尤其是相流速无关，因此，在色谱分析中，尤其是GC中广泛用于定性的依据！中广泛用于定性的依据！具体做法：固定一个色谱峰为标准具体做法：固定一个色谱峰为标准s，然后再求其它峰，然后再求其它峰 i 对标准峰的相对保留值对标准峰的相对保留值，此时以，此时以 表示：表示： 1, 又称选择因子又称选择因子(Selectivity factor)。corrFtVrVcor0rrFtVVV 1r2r1r2r1 , 2
12、VVttr )s(t)i (tsr . 4) 区域宽度：用于衡量柱效及反映色区域宽度：用于衡量柱效及反映色谱操作条件下的动力学因素。通常有三谱操作条件下的动力学因素。通常有三种表示方法：种表示方法：标准偏差标准偏差 ：0.607倍峰高处峰宽的一半。倍峰高处峰宽的一半。半峰宽半峰宽W1/2：峰高一半处的峰宽。：峰高一半处的峰宽。 W1/2=2.354 峰底宽峰底宽W：色谱峰两侧拐点上切线与：色谱峰两侧拐点上切线与基线的交点间的距离。基线的交点间的距离。W= 4 色谱流出曲线的意义：色谱流出曲线的意义： 色谱峰数色谱峰数=样品中单组份的最少个数；样品中单组份的最少个数； 色谱保留值色谱保留值定性依
13、据；定性依据； 色谱峰高或面积色谱峰高或面积定量依据；定量依据； 色谱保留值或区域宽度色谱保留值或区域宽度色谱柱分离效能评价指标；色谱柱分离效能评价指标； 色谱峰间距色谱峰间距固定相或流动相选择是否合适的依据。固定相或流动相选择是否合适的依据。.19.3 色谱法基本原理色谱法基本原理一、描述分配过程的参数一、描述分配过程的参数 分配系数分配系数(Distribution constant, K)： 描述组份在固定相和流动相间的分配过程或吸附描述组份在固定相和流动相间的分配过程或吸附-解吸过程的参数，称解吸过程的参数，称为分配系数。为分配系数。1.K 只与固定相和温度有关，与两相体积、柱管特性和
14、所用仪器无关。只与固定相和温度有关，与两相体积、柱管特性和所用仪器无关。msccK 溶质在流动相中的浓度溶质在流动相中的浓度溶质在固定相中的浓度溶质在固定相中的浓度.2. 分配比分配比(Retention factor or capacity factor, k)： 在一定温度和压力下，组份在两相间的分配达平衡时，分配在固定相和在一定温度和压力下，组份在两相间的分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比，称为分配比。它反映了组分在柱中的迁移速率。流动相中的质量比，称为分配比。它反映了组分在柱中的迁移速率。又称保又称保留因子、容量因子留因子、容量因子。其中其中Vm V0，Vs为固定相体积。为固
15、定相体积。分配比分配比 k 的求算：的求算：1）组分滞留因子：）组分滞留因子：2）又，）又，3）因此，）因此，(书上的书上的19-10式式)mmssmsVcVcmmk 组分在流动相中的质量组分在流动相中的质量组分在固定相中的质量组分在固定相中的质量k11mmmuuRsmmss 流流动动相相线线速速度度组组分分线线速速度度0rstLu，tLu 0000r0t)1 (VVttttkkttrrr或.3. K 与与 k 的关系：的关系： 称为相比率，它也是反映色谱柱柱型特点的参数。对填充柱，称为相比率，它也是反映色谱柱柱型特点的参数。对填充柱， =635；对毛细管柱，；对毛细管柱， =60600。4.
16、 选择因子选择因子 ：色谱柱对：色谱柱对A、B两组分的选择因子两组分的选择因子 定义如下：定义如下：A为先流出的组分，为先流出的组分，B为后流出的组分。为后流出的组分。 kVVkV/mV/mccKsmmmssmsABABrrKKkk)A(t)B(t .二、峰间距、峰形状和峰宽的理论描述二、峰间距、峰形状和峰宽的理论描述1. 塔板理论塔板理论（Plate theory) 1952年，年，Martin等人提出的塔板理论，将一根色谱柱当作一个由许多塔板等人提出的塔板理论，将一根色谱柱当作一个由许多塔板组成的精馏塔，用塔板概念来描述组分在柱中的分配行为。塔板是从精馏中借组成的精馏塔，用塔板概念来描述组
17、分在柱中的分配行为。塔板是从精馏中借用的，是一种半经验理论，但它成功地解释了色谱流出曲线呈正态分布。用的，是一种半经验理论，但它成功地解释了色谱流出曲线呈正态分布。 塔板理论假定：塔板理论假定：1）塔板之间不连续；）塔板之间不连续；2）塔板之间无分子扩散；）塔板之间无分子扩散；3）组分在各塔板内两相间的分配瞬间达至平衡，达一次平衡所需柱长为理论）组分在各塔板内两相间的分配瞬间达至平衡，达一次平衡所需柱长为理论 塔板高度塔板高度H；4）某组分在所有塔板上的分配系数相同；）某组分在所有塔板上的分配系数相同；5）流动相以不连续方式加入，即以一个一个的塔板体积加入。）流动相以不连续方式加入，即以一个一
18、个的塔板体积加入。 当塔板数当塔板数n较少时，组分在柱内达分配平衡的次数较少，流出曲线呈峰形，较少时，组分在柱内达分配平衡的次数较少，流出曲线呈峰形，但不对称；当塔板数但不对称；当塔板数n50时，峰形接近正态分布。时，峰形接近正态分布。. 根据呈正态分布的色谱流出曲线可以导出计算塔板数根据呈正态分布的色谱流出曲线可以导出计算塔板数n的公式，用以评价一根柱的公式，用以评价一根柱子的柱效。由于色谱柱并无真正的塔板，故塔板数又称子的柱效。由于色谱柱并无真正的塔板，故塔板数又称理论塔板数理论塔板数：可见理论塔板数由组分保留值和峰宽决定。可见理论塔板数由组分保留值和峰宽决定。 若柱长为若柱长为L，则每块
19、理论塔板高度，则每块理论塔板高度H为为 由上述两式知道，理论塔板数由上述两式知道，理论塔板数n越多、理论塔板高度越多、理论塔板高度H越小、色谱峰越窄，则柱越小、色谱峰越窄，则柱效越高。效越高。 但上述两式包含死时间但上述两式包含死时间t0，它与组分在柱内的分配无关，因此不能真正反映色，它与组分在柱内的分配无关，因此不能真正反映色谱柱的柱效。通常以有效塔板数谱柱的柱效。通常以有效塔板数neff 和有效塔板高度和有效塔板高度Heff 表示：表示：2r22/1r)Wt(16)Wt(54. 5n nLH effeff2r22/1reffnLH)Wt(16)Wt(54. 5n .有关塔板理论的说明：有关
20、塔板理论的说明：说明柱效时，必须注明该柱效是针对何种物质、固定液种类及其含量、流动相说明柱效时，必须注明该柱效是针对何种物质、固定液种类及其含量、流动相种类及流速、操作条件等；种类及流速、操作条件等；2. 速率理论速率理论（Rate theory） 1956年，荷兰化学工程师范第姆特（年，荷兰化学工程师范第姆特（van Deemter）提出了色谱过程）提出了色谱过程动力学速率理论：吸收了塔板理论中的板高动力学速率理论：吸收了塔板理论中的板高H概念，考虑了组分在两相概念，考虑了组分在两相间的扩散和传质过程，从而给出了间的扩散和传质过程，从而给出了van Deemter方程：方程： u 为流动相线
21、速度；为流动相线速度； A，B，C为常数，其中为常数，其中 A分别表示涡流扩散系数；分别表示涡流扩散系数； B分子扩散系数；分子扩散系数； C传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。CuuBAH .1）涡流扩散项）涡流扩散项(Multipath term, A) 在填充柱中，由于受到固定相颗粒的阻碍，组份在填充柱中，由于受到固定相颗粒的阻碍，组份在迁移过程中随流动相不断改变方向，形成紊乱的在迁移过程中随流动相不断改变方向，形成紊乱的“涡流涡流”：从图中可见，因填充物颗粒大小及填充：从图中可见，因填充物颗粒大小及填充的不均匀性的不均匀性同一组分运行
22、路线长短不同同一组分运行路线长短不同流流出时间不同出时间不同峰形展宽。峰形展宽。展宽程度以展宽程度以A表示：表示：A=2 dp其中其中dp填充物平均直径；填充物平均直径； 填充不规则因子。填充不规则因子。 可见，使用细粒的固定相并填充均匀可减小可见，使用细粒的固定相并填充均匀可减小A，提高柱效。，提高柱效。对于空心毛细对于空心毛细管柱，无涡流扩散，即管柱，无涡流扩散，即A=0。流动方向流动方向.2）分子扩散项）分子扩散项(Longitudinal diffusion term, B/u) 纵向分子扩散是由于浓度梯度引起的。当样品被注入色谱柱时，它呈纵向分子扩散是由于浓度梯度引起的。当样品被注入
23、色谱柱时，它呈“塞塞子子”状分布。随着流动相的推进，状分布。随着流动相的推进， “塞子塞子”因浓度梯度而向前后自发地扩散因浓度梯度而向前后自发地扩散，使谱峰展宽。其大小为，使谱峰展宽。其大小为B=2 D 称为弯曲因子，它表示固定相几何形状对自由分子扩散的阻碍情况；称为弯曲因子，它表示固定相几何形状对自由分子扩散的阻碍情况；D组分在流动相中的扩散系数。组分在流动相中的扩散系数。.3）传质阻力项）传质阻力项(Mass-transfer term, Cu) 因传质阻力的存在，使分配不能因传质阻力的存在，使分配不能“瞬间瞬间”达至平衡，因此产生峰形展宽。达至平衡，因此产生峰形展宽。气相色谱以气体为流动
24、相，液相色谱以液体为流动相，二者传质过程不完全相气相色谱以气体为流动相，液相色谱以液体为流动相，二者传质过程不完全相同。下面分别作讨论。同。下面分别作讨论。a）气液色谱：传质阻力项）气液色谱：传质阻力项C包括气相传质阻力系数包括气相传质阻力系数Cs和液相传质阻力系数和液相传质阻力系数Cl。Dd)k1(k32Dd)k1(k01. 0CCCl2f2g2p22lg s2fsm2psmmsmDdDd)(CCC b）液液色谱：传质阻力项）液液色谱：传质阻力项C包括流动相传质阻力系数包括流动相传质阻力系数Cm和固定相传质阻和固定相传质阻力系数力系数Cs。.4）流速）流速u 由由van Deemter方程方
25、程 H = A + B/u + Cu以以u对对H作图，可得作图，可得H-u曲线（如图），从该曲线得到：曲线（如图），从该曲线得到：C/B BC2A 涡流扩散项涡流扩散项A与流速与流速u无关；无关；低流速区低流速区(u小小)，B/u大，分子扩散项占主导，大，分子扩散项占主导， 此时选择分子量大的气体如此时选择分子量大的气体如N2和和Ar为载气，可为载气，可 减小扩散，提高柱效；减小扩散，提高柱效； 高流速区高流速区(u大大)，Cu大，传质阻力项占主导，大，传质阻力项占主导， 此时选择分子量小的气体如此时选择分子量小的气体如H2和和He为载气，为载气， 可增加扩散系数，提高柱效；可增加扩散系数，提
26、高柱效； 曲线的最低点对应最佳线速曲线的最低点对应最佳线速uopt( ) 下的下的 最小板高最小板高Hmin( )；板高，板高，H(cm)HminA+B/u+CuCmuCsuAB/u.19.4 分离度及色谱分离方程分离度及色谱分离方程一、分离度一、分离度(Resolution, R) 同时反映色谱柱效能和选择性的一个综合指标。也称总分离效能指标或分同时反映色谱柱效能和选择性的一个综合指标。也称总分离效能指标或分辨率。其定义为：辨率。其定义为： 利用此式，可直接从利用此式，可直接从色谱流出曲线上求出分离度色谱流出曲线上求出分离度R。 R 越大，相邻组分分离越好。当越大，相邻组分分离越好。当R=1
27、.5时，分离程度可达时，分离程度可达99.7%，因此，因此R=1.5通常用作是否分开的判据。通常用作是否分开的判据。W)tt (WW)tt (2)WW(21ttR121212rr21rr21rr .R=1.5R=0.75R=1.0响应信号保留时间保留时间 t, min.)1)(1(4kknR二、色谱分离方程二、色谱分离方程 R 的定义并未反映影响分离度的各种因素。也就是说，的定义并未反映影响分离度的各种因素。也就是说，R 未与影响其大小未与影响其大小的因素：柱效的因素：柱效n、选择因子、选择因子 和保留因子和保留因子 k 联系起来。联系起来。 对于相邻的难分离组分，由于它们的分配系数对于相邻的
28、难分离组分，由于它们的分配系数 K 相差小，可合理假设相差小，可合理假设k1 k2=k，W1 W2=W。因此可导出。因此可导出R与与n（neff）、）、 和和 k 的关系：的关系：上式中 称动力学因素， 称为热力学因素， 称为容量因素。n1kk1.三、分析时间三、分析时间 t 分析时间通常指最后一个组分出峰的时间。分析时间通常指最后一个组分出峰的时间。由以下三式：由以下三式：得到得到 可见，分析时间与可见，分析时间与R， ，k、H/u等参数有关。等参数有关。R增加增加1倍，分析时间则是倍，分析时间则是原来的原来的 4 倍。倍。 实际工作中，实际工作中，即要能获得有效的分离，又要在较短时间内完成
29、分析。即要能获得有效的分离，又要在较短时间内完成分析。)3.().k1k)(1(4nR)2.(.HLn)1.().k1(uL)k1(tt0r 2322rk)k1()1(uHR16t .19.5 19.5 定性和定量分析定性和定量分析一、定性分析一、定性分析二、定量分析二、定量分析定量分析的基础就是色谱峰的面积定量分析的基础就是色谱峰的面积( (高度高度) )与被测组分的量成正比与被测组分的量成正比. .也就是也就是m=fA m=fA 或或 m=fhm=fhf f是绝对校正因子。是绝对校正因子。1.1.峰面积的测量峰面积的测量 )(21065. 185. 015. 02/1WWhAWhA.2.2
30、.定量校正因子定量校正因子1 1）绝对校正因子）绝对校正因子组分组分i i的峰面积和峰高的绝对校正因子分别为：的峰面积和峰高的绝对校正因子分别为：iihiiiAihmfAmf由于绝对校正因子受仪器及操作条件的影响很大，所以常常受到由于绝对校正因子受仪器及操作条件的影响很大，所以常常受到限制，在实际定量分析中常采用相对校正因子限制，在实际定量分析中常采用相对校正因子.2) 相对校正因子相对校正因子是指组分是指组分i与基准组分与基准组分s的绝对校正因子之比。的绝对校正因子之比。siishshihissiisssiiAsAiAismhmhfffmAmAAmAmfff.3）定量方法）定量方法色谱法一般
31、采用外标法、内标法和归一化法进行定量分析。色谱法一般采用外标法、内标法和归一化法进行定量分析。外标法外标法：优点：优点 操作简单，适于工厂控制分析和自动分析。操作简单，适于工厂控制分析和自动分析。 不足不足 准确度受进样量的重现性和操作条件的稳定性影响。准确度受进样量的重现性和操作条件的稳定性影响。内标法内标法：当测定样品中某几个组分或样品中所有组分不可能全部：当测定样品中某几个组分或样品中所有组分不可能全部 出峰时，可采用内标法。出峰时，可采用内标法。%100%100mfAmfAmmwAssssAisiiims、m分别为内标物质量和试样质量，分别为内标物质量和试样质量，Ai、As分别为被测组
32、分和内标分别为被测组分和内标物的峰面积；物的峰面积；fis、fss分别为被测组分和内标物的相对质量校正因子。分别为被测组分和内标物的相对质量校正因子。一般内标物作为基准物，也就是一般内标物作为基准物，也就是fss =1，那么上式就可简化为：，那么上式就可简化为：%100AisssiifmAmAw 优点：准确。缺点：给分离带来困难。 .归一化法归一化法：要求样品中每一组分都出峰。：要求样品中每一组分都出峰。 此法就是将样品中所有组分的含量之和按此法就是将样品中所有组分的含量之和按100%计算，以它们相计算，以它们相应的色谱峰面积或高为定量参数，通过下列公式计算各组分的质量分应的色谱峰面积或高为定量参数，通过下列公式计算各组分的质量分数：数：%1001niAisiAisiifAfAwAisf当各组分的当各组分的 相近似时，计算公式可简化为相近似时，计算公式可简化为%1001niiiAAiw优点：简便、准确、操作条件变化对结果影响较小。优点：简便、准确、操作条件变化对结果影响较小。不足：要求每个组分都有信号。不足：要求每个组分都有信号。.作业：1，7，15。.
