1、第二章 中药指纹图谱研究方法学主要内容o 第一节 常用指纹图谱研究的方法与技术o 第二节 指纹图谱研究常用的仪器与设备 第一节 常用指纹图谱研究的方法与技术o 1光谱法（红外、紫外光谱） 信息量少、少用o 2色谱法（兼具分离、检测功能） 信息量大、多用紫外光谱指纹图谱红外光区划分红外光区划分红外光谱红外光谱(0.751000 m)远红外远红外(转动区转动区)(25-1000 m)中红外中红外(振动区振动区)(2.525 m)近红外近红外(泛频）泛频）(0.752.5 m)倍频倍频分子振动转动分子振动转动分子转动分子转动分区及波长范围分区及波长范围 跃迁类型跃迁类型（常用区）（常用区）13158
2、4000/cm-140010/cm-14000400/cm-1红外光谱特点红外光谱特点1）应用范围广：除单原子分子及单核分子外，几乎所有有）应用范围广：除单原子分子及单核分子外，几乎所有有机物均有红外吸收；机物均有红外吸收；2）分子结构更为精细的表征：通过）分子结构更为精细的表征：通过IR谱的波数位置、波峰谱的波数位置、波峰数目及强度确定分子基团、分子结构；数目及强度确定分子基团、分子结构；40003000200010000四 川山 西 野山 西湖南湖北河北安 徽Abs / c m - 1不同丹参粉末的红外图谱光谱法色谱法Gas Chromatography (GC)(气相色谱气相色谱)fin
3、gerprints for some herbal medicinest Top part: (苍术挥发油); Lower part: (厚朴挥发油)气相色谱法（gas chromatography 简称GC）是色谱法的一种。色谱法中有两个相，一个相是流动相，另一个相是固定相。如果用液体作流动相，就叫液相色谱，用气体作流动相，就叫气相色谱。 气相色谱仪允许的条件下可以气化而不分解的物质，都可以用气相色谱法测定。主要用于挥发油的分析主要内容o 第一节 常用指纹图谱研究的方法与技术o 第二节 指纹图谱研究常用的仪器与设备第二节 指纹图谱研究常用的仪器与设备3联用色谱仪器1光谱仪器2色谱仪器1光谱仪
4、器o 紫外分光光度计：主要由光源、单色器、样紫外分光光度计：主要由光源、单色器、样品池（吸收池）、检测器及放大器和记录显品池（吸收池）、检测器及放大器和记录显示系统所组成示系统所组成。o 钨灯丝适宜使用的范围是钨灯丝适宜使用的范围是360nm1000nm；o 氢灯或氘灯适宜使用的范围是氢灯或氘灯适宜使用的范围是150nm360nm。 通常在紫外分光光度计中，装置有紫外通常在紫外分光光度计中，装置有紫外光源光源-氘灯及可见光源氘灯及可见光源-卤钨灯，只需切换光卤钨灯，只需切换光源，就可以用来用来测定可见吸收光谱。因源，就可以用来用来测定可见吸收光谱。因此也称为紫外此也称为紫外-可见分光光度计。可
5、见分光光度计。1光谱仪器o 红外光谱又称分子振动转动光谱，属分子吸红外光谱又称分子振动转动光谱，属分子吸收光谱。收光谱。o 红外光谱仪：T(%)2色谱仪器o HPLC色色谱谱泵泵及及控控制制器器数数据据处处理理及及控控制制进进样样器器色色谱谱柱柱检检测测器器W a te rs 4 8 6实验条件的选择：实验条件的选择：1 1、色谱柱的选择：、色谱柱的选择： C18C18反相柱（反相柱（ ODSODS柱）、柱）、C8C8反相柱、正相分配色谱反相柱、正相分配色谱柱柱( (氨基柱等）氨基柱等）。2 2、流动相的选择：反相键合相为例、流动相的选择：反相键合相为例 （1 1）部分含水溶剂：以水为基础溶剂
6、，再加入一定量可与水互溶的）部分含水溶剂：以水为基础溶剂，再加入一定量可与水互溶的有机极性调节剂（如甲醇、乙腈等）。甲醇有机极性调节剂（如甲醇、乙腈等）。甲醇- -水、乙腈水、乙腈- -水系统。适用水系统。适用于中等极性、弱极性的药物。于中等极性、弱极性的药物。 （2 2）缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的药物（弱酸、弱）缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的药物（弱酸、弱碱、蛋白质、肽类等）。常用缓冲液：磷酸盐、醋酸盐等。碱、蛋白质、肽类等）。常用缓冲液：磷酸盐、醋酸盐等。 （3 3）非水溶剂：用于非极性物质。）非水溶剂：用于非极性物质。洗脱方式：洗脱方式：（1 1）等度洗脱：在同一
7、分析周期内流动相的组成保持恒定。适用于组）等度洗脱：在同一分析周期内流动相的组成保持恒定。适用于组分数较少、性质差别不大的样品。分数较少、性质差别不大的样品。（2 2）梯度洗脱：在同一分析周期内程序控制流动相的组成（溶剂极性、）梯度洗脱：在同一分析周期内程序控制流动相的组成（溶剂极性、pHpH值等）值等） 适用于组分数多、性质差别大的复杂混合物样品。适用于组分数多、性质差别大的复杂混合物样品。检测器：检测器：（1 1）紫外检测器（）紫外检测器（UVUV）：应用最普遍。）：应用最普遍。 灵敏度高、噪音低、线性范围宽等优点。只能用于检测有灵敏度高、噪音低、线性范围宽等优点。只能用于检测有紫外吸收的
8、药物。紫外吸收的药物。 可变波长型可变波长型 、二极管阵列检测器（色谱、紫外光谱图）、二极管阵列检测器（色谱、紫外光谱图）（2 2）蒸发光散射检测器（）蒸发光散射检测器（ELSDELSD）：通用型检测器。）：通用型检测器。 主要用于糖类、生物碱类、三萜类、甾提类等挥发性低的主要用于糖类、生物碱类、三萜类、甾提类等挥发性低的物质。灵敏度稍低，流动相中不能含缓冲盐。物质。灵敏度稍低，流动相中不能含缓冲盐。（3 3）示差折光检测器（）示差折光检测器（RIDRID）：通用型，利用组分与流动相折射率之）：通用型，利用组分与流动相折射率之差进行检测。（用于糖类物质）差进行检测。（用于糖类物质）薄层色谱薄层
9、色谱u薄层色谱的实验成本低、流动薄层色谱的实验成本低、流动相的更换与选择方便、薄层扫描仪相的更换与选择方便、薄层扫描仪的使用效率高。另外，它提供色彩的使用效率高。另外，它提供色彩丰富、直观易认的可见光或荧光色丰富、直观易认的可见光或荧光色谱图像，尤其适合日常分析检验和谱图像，尤其适合日常分析检验和现场检验。选择薄层扫描法对中药现场检验。选择薄层扫描法对中药进行指纹图谱质量控制具有广阔的进行指纹图谱质量控制具有广阔的应用前景。应用前景。实验仪器实验仪器CAMAG Linomat 5 半自动点样仪半自动点样仪CAMAG Scanner3 薄层色谱扫描仪薄层色谱扫描仪 CAMAG 数码摄像系统数码摄
10、像系统甘草聚酰胺薄层扫描图谱甘草聚酰胺薄层扫描图谱聚酰胺薄层聚酰胺薄层气相色谱o Get more data/informationHPLC -DAD 100 200 300 400 500 600 700 800 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 x 10 6 R etention tim e(s) Intensity A B 3D chromatogramHPLC chromatogram of nuclueside of Cordyceps Sinensis (冬蟲草冬蟲草) at one wavelengthHyphenated Instrument (联用仪器联用仪器)Hyphenated Instrument (联用仪器联用仪器)GC instrumentGC chromatogram of peptic powder (平胃散平胃散)Mass spectrum taken at retention time 10.2 minutes考题：1中药指纹图谱的概念及其在中药质量控制当中的意义2简述常用中药指纹图谱常用的仪器和方法，并比较色谱法较于光谱法的优势
