1、12一、多肽合成简史一、多肽合成简史n20世纪早期Emil Fischer 引入肽与多肽的概念。n19201960液相合成少数肽，但是纯度低、副产物多。n1963Bruce Merrifield 建立固相多肽合成方法，solid-phase peptide synthesis (SPPS)。洛克菲洛大学电梯。1984，诺贝尔化学奖。n近40多年来，合成技术迅猛发展，合成超过100个长的肽已不是梦想。3二、多肽固相合成基本原理二、多肽固相合成基本原理n按氨基酸顺序，定向形成肽键，得到目标分子；nC末端的氨基酸固定在树脂上，反应， 过滤洗涤，切割；n主要介绍Fmoc策略（氨基保护基团为Fmoc）4
2、脱保护脱保护Fmoc：9芴甲氧羰基（Fluorenylmethoxycarbonyl）MW：223.254PiP：哌啶、六氢吡啶（Piperidine）MW：85.15；密度：0.86g/ml；熔点：7；沸点：1065 固相载体固相载体nWang 树脂n2-Cl-Trt-氯树脂（Cys、His、Pro）nRink Amide MBHA 树脂67Fmoc的脱除的脱除Fmoc基团的芴环基的吸电子作用使9-H具有酸性，易被较弱碱除去，反应条件很温和 ；哌啶进攻9-H,消除形成二苯芴烯，很容易被二级环胺进攻形成稳定的加成物：FmocPiP（取代度测定的就是其紫外吸收值） 8溶剂溶剂nDCM：二氯甲烷
3、（Dichloromethane） MW：84.94；密度：1.33g/ml；熔点：96.7；沸点：39.8 作用：溶胀树脂、洗涤树脂nMeOH：甲醇（Methanol） MW：32.04；密度：0.79g/ml； 熔点：93.9；沸点：64.8 作用：收缩树脂、洗涤树脂nDMF ：N,N-二甲基甲酰胺（N，N-dimethyformamideL） MW：73.1；密度：0.94g/ml； 熔点：61；沸点：152.8 作用：良好溶剂、溶胀树脂、洗涤树脂9缩合试剂缩合试剂 HBTU NMM HATU苯并三氮唑-N，N， N-甲基吗啡啉 2-(7-偶氮苯并三氮唑)N，N，-四甲基脲 -N，N，N
4、，N-四甲基六氟磷酸酯 脲六氟磷酸酯 MW：379.3 MW：101.2 MW：380.2 密度：0.92The Peptide Quality Standard1011 DIC HOBt N,N-二异丙基 羟基苯骈三氮唑 碳二亚胺MW：126.2 MW：135.1密度：0.812缩合原理缩合原理13HATU/HBTU法法14DIC/DCC法法15缩合终点的判断缩合终点的判断n茚三酮检测（定性）n四氯苯醌检测（定性）n取代度测定（定量）16提高缩合效率的方法提高缩合效率的方法n增加氨基酸投量n延长反应时间n提高反应温度n更换反应液n换用活性更高的缩合试剂n更换反应溶剂（魔鬼溶剂）n超声、微波17副反应副反应n消旋（His、Cys）n重排（AspGly）n内成环（Pro）n封端（HBTU/HATU与树脂上的氨基）18切割切割n三氟乙酸（TFA ）n苯酚（phenol）、水（H2O）、乙二硫醇 （EDT）、三异丙基硅烷（TIS）、茴香硫醚（thioanisole）nCocktail 法19“如果你敢于在自己不熟悉的领域突破框框，从事研究，那么，你有可能获诺贝尔奖 ” R.B. Merrifield20欢迎来到康贝生化！谢谢大家！
