1、各论各论1第二章第二章 含氮类药物的分析含氮类药物的分析包括：芳胺类包括：芳胺类 芳烃胺类芳烃胺类 吡啶类吡啶类 苯并二氮杂苯并二氮杂类类 吩噻嗪类吩噻嗪类 沙坦类沙坦类不包括：酰胺类不包括：酰胺类磺酰胺类磺酰胺类生物碱类生物碱类苯乙胺类苯乙胺类芳氧丙醇胺类芳氧丙醇胺类各论各论2第一节第一节 芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析一、结构与性质一、结构与性质1. 基本结构与代表药物基本结构与代表药物 对氨基苯甲酸酯的基本结构对氨基苯甲酸酯的基本结构 CR1NHOOR2各论各论3COOCH2CH3H2N苯苯佐佐卡卡因因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因HNCOOCH2CH2N(
2、CH3)2C4H9HCl盐酸丁卡因各论各论42. 主要性质：主要性质：（1）芳伯氨基的特性）芳伯氨基的特性重氮化重氮化-偶合反应偶合反应与芳醛缩合为与芳醛缩合为Schiff碱碱易氧化变色易氧化变色注注: 盐酸丁卡因无此性质盐酸丁卡因无此性质各论各论5（2）水解特性）水解特性酯键容易水解，光、热或碱有促进作酯键容易水解，光、热或碱有促进作用，可利用水解产物进行鉴别用，可利用水解产物进行鉴别（3）弱碱性（脂烃胺侧链）弱碱性（脂烃胺侧链）与与生物碱沉淀试剂生物碱沉淀试剂生成沉淀生成沉淀非水溶液滴定法测定含量非水溶液滴定法测定含量（4）光谱特性）光谱特性各论各论6（5）有机碱的溶解特性）有机碱的溶解特
3、性游离碱游离碱油状液体或低熔点固体，油状液体或低熔点固体，难溶于水难溶于水，易溶于有机溶剂，易溶于有机溶剂其盐酸盐其盐酸盐白色结晶性粉末，白色结晶性粉末，易溶易溶于水于水和和乙醇乙醇，难溶于有机溶剂，难溶于有机溶剂各论各论7二、鉴别试验二、鉴别试验1. 芳香第一胺反应芳香第一胺反应 又称重氮化又称重氮化-偶合反应偶合反应原理：原理：+ NaCl + H2O+ NaOH+NaCl + 2H2O+ NaNO2 + 2HClNNClOHHONNNNClNH2各论各论8直接反应直接反应苯佐卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因、对氨基水、对氨基水杨酸钠杨酸钠酸水解后起反应酸水解后起反应贝诺酯贝诺酯盐
4、酸丁卡因盐酸丁卡因无芳伯氨基，在酸性下无芳伯氨基，在酸性下与亚硝酸钠不起重氮化反应，但反应与亚硝酸钠不起重氮化反应，但反应生成生成N-亚硝基化合物亚硝基化合物，呈乳白色沉淀，呈乳白色沉淀。各论各论9盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 Ch.P.（2010）鉴别鉴别 （1）本品显芳香第一胺类的鉴）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录别反应（附录） 取供试品约取供试品约50mg，加稀盐酸加稀盐酸1m1，必要时必要时缓缓缓缓煮沸使溶解煮沸使溶解，放冷，加，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性性-萘酚试液数滴，视供试品不同，萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。
5、生成由橙黄到猩红色沉淀。各论各论10亚硝基化反应：亚硝基化反应：HClNC4H9HCOOCH2CH2N(CH3)2NaNO2NC4H9ONCOOCH2CH2N(CH3)2+ NaCl + H2O+各论各论112. 水解产物的反应水解产物的反应酯键水酯键水酸醇酸醇例子：例子： （1）盐酸普鲁卡因）盐酸普鲁卡因 （2）苯佐卡因）苯佐卡因各论各论12例例 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 Ch.P.（2010） 【鉴别】（鉴别】（1）取本品约）取本品约0.1g，加水加水2ml溶解后，加溶解后，加10氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml，即生即生成成白色沉淀白色沉淀；加热，变为；加热，变为油状物油状物；继续加；继续
6、加热，产生的热，产生的蒸气蒸气能使湿润的红色石蕊试纸能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出盐酸酸化，即析出白色沉淀白色沉淀。 各论各论13盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因COOCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因COOCH2CH2N(C2H5)2H2NNaOHCOONaH2N+ HOCH2CH2N(C2H5)2+ HClCOOHH2NNaOHHClCOOHH2N+ HCl各论各论14 （2）苯佐卡因）苯佐卡因（碘仿反应）（碘仿反应）COOCH2CH3H2N苯苯佐佐卡卡因因+ NaOHCOONaH2N+
7、C2H5OH+ NaOH + I2CHI3 + HCOONa +H2O C2H5OH黄色沉淀、臭气黄色沉淀、臭气各论各论15例例 苯佐卡因苯佐卡因 Ch.P.（2010） 【鉴别】（鉴别】（2）取本品约）取本品约0.1g，加氢加氢氧化钠试液氧化钠试液5ml，煮沸，即有乙醇生煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成成；加碘试液，加热，即生成黄色沉黄色沉淀淀，并发生碘仿的，并发生碘仿的臭气臭气。各论各论163. 制备衍生物测熔点制备衍生物测熔点盐酸盐酸丁卡因丁卡因白色结晶白色结晶过滤过滤洗涤洗涤25%硫氰酸铵硫氰酸铵 5%醋酸钠醋酸钠测熔点（测熔点（131 ）80 干燥干燥各论各论17Ch.P（
8、2010）盐酸丁卡因盐酸丁卡因【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约0.1g，加，加5%醋醋酸钠溶液酸钠溶液10ml溶解后，加溶解后，加25%硫氰酸硫氰酸铵溶液铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在结晶用水洗涤，在80干燥，依法测干燥，依法测定（附录定（附录C），熔点约为），熔点约为131。各论各论184. 氯化物的反应氯化物的反应5. UV苯环的紫外吸收特性苯环的紫外吸收特性 各论各论196. IR盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因注射液注射液的鉴别：取本品（约的鉴别：取本品（约相当于盐酸普鲁卡因相当于盐酸普鲁卡因80mg )，水浴蒸干水浴蒸干，残渣经残渣经减压干燥减
9、压干燥，依法测定。本品的红外，依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集397图）一致。图）一致。7. HPLC法法利用含量测定项下的色谱图进行鉴别，规利用含量测定项下的色谱图进行鉴别，规定保留时间应一致。定保留时间应一致。各论各论20各论各论21三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查1. 盐酸普鲁卡因及其制剂中盐酸普鲁卡因及其制剂中对氨基苯对氨基苯甲酸甲酸的检查的检查杂质来源：杂质来源： 制备或贮藏过程中水解制备或贮藏过程中水解盐酸普盐酸普鲁卡因鲁卡因水解水解对氨基对氨基苯甲酸苯甲酸脱羧脱羧苯胺苯胺（有色、毒性增加）（有色、毒性增加）各论各论22HPLC法
10、法离子对色谱法离子对色谱法 离子对试剂？离子对试剂？外标法外标法各论各论23盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查：取本品，盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含中含0.2mg的的溶液，作为溶液，作为供试品溶液供试品溶液；另取对氨基苯甲酸对照品，精；另取对氨基苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量制成每密称定，加水溶解并定量制成每1ml中含中含1 g的溶液，作的溶液，作为为对照品溶液对照品溶液；取供试品溶液；取供试品溶液1ml与对照品溶液与对照品溶液9ml混合混合均匀，作为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法试均匀，作
11、为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含0.1庚庚烷磺酸钠烷磺酸钠的的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH 值至值至3.0）-甲醇（甲醇（68 32）为流动相；检测波长为）为流动相；检测波长为279nm。取系统适用性试验溶液。取系统适用性试验溶液10 l，注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000，盐酸普鲁，盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。取对照。取对照品溶
12、液品溶液10 l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的成分峰高约为满量程的20%。精密量取供试品溶液与对。精密量取供试品溶液与对照品溶液各照品溶液各10 l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰，按致的色谱峰，按外标法外标法以峰面积计算，不得过以峰面积计算，不得过0.5%。各论各论242. 盐酸丁卡因及其制剂中有关物质的盐酸丁卡因及其制剂中有关物质的检查检查以以对丁氨基苯甲酸对丁氨基苯甲酸为对照品，为对
13、照品，TLC法法检查检查 各论各论25TLC法用于杂质的检查法用于杂质的检查1.杂质对照品法杂质对照品法2.供试品溶液的供试品溶液的自身稀释对照法自身稀释对照法3.杂质对照法与供试品自身稀释对照法杂质对照法与供试品自身稀释对照法并用（两法并用）并用（两法并用）4.母体药物母体药物对照法（对照法（对照药物对照药物法）法）当杂质斑点颜色与主斑点颜色有差异当杂质斑点颜色与主斑点颜色有差异时应用，要求对照药物合格且稳定性时应用，要求对照药物合格且稳定性好好 P96各论各论26ArNH2 ArN N+Cl- HClNaNO2（1）原理）原理1. 亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法适用范围：适用范围：具有芳伯氨
14、基或潜在芳伯氨基的药物具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物四、含量测定四、含量测定各论各论271）加入适量的加入适量的溴化钾溴化钾 溴化钾起溴化钾起催化剂催化剂的作用的作用（2） 测定条件测定条件各论各论282222NaNOHClHNONaClHNOHClNOClH ONH2NH-NON=N-OH-H2ONOCl-HCl互变异构HCl2N Cl 慢慢 快快 快快 各论各论29第一步是控制步骤第一步是控制步骤Ar-NH2 浓度浓度， NOCl ， 反应加快反应加快Ar-NH2+HCl Ar-NH2HCl 成盐反应慢成盐反应慢K2K22HNOHBrNOBrH OHNOHClNOClH O 122K1
15、K2 300倍倍各论各论302）酸的种类及浓度）酸的种类及浓度一般采用一般采用盐酸盐酸酸性，反应酸性，反应mol比比1:2，但实际用过量为，但实际用过量为1:2.56最常用最常用反应速度随酸种类的不同而不同：反应速度随酸种类的不同而不同： HBr HCl H2SO4 ，HNO3价贵价贵各论各论31盐酸为何要过量？盐酸为何要过量？ 加加快快重氮化反应速度重氮化反应速度 重氮盐在酸性溶液中重氮盐在酸性溶液中稳稳定定 防防止生成偶氮氨基化合物止生成偶氮氨基化合物 ClNNAr ArNH2NNAr ArNH HCl 实际用量为实际用量为1:2.56各论各论32酸度不宜过大酸度不宜过大 阻碍芳伯氨基的游
16、离阻碍芳伯氨基的游离 亚硝酸易分解亚硝酸易分解各论各论33 T ， V T ， 亚硝酸逸失，重氮盐分解亚硝酸逸失，重氮盐分解3）温度）温度在室温下（在室温下（1030）进行滴定进行滴定各论各论344）滴定方式与速度控制）滴定方式与速度控制 为了避免滴定过程中为了避免滴定过程中HNO2 的的分解逸失，滴定速度分解逸失，滴定速度先快后慢先快后慢。过快过快 ： 指示剂变色，终点提前指示剂变色，终点提前过慢过慢 ： HNO2 的分解逸失的分解逸失各论各论35滴定方式：滴定方式：滴定管尖端插入液面下滴定管尖端插入液面下2 23 3处，在搅拌下一次性放下大处，在搅拌下一次性放下大部分滴定液，近终点前才提部
17、分滴定液，近终点前才提出滴定管，冲洗管尖，再缓出滴定管，冲洗管尖，再缓缓滴定至终点。缓滴定至终点。各论各论36（3）指示终点的方法）指示终点的方法永停滴定法（永停滴定法（Ch.P.）外指示剂法（外指示剂法（KI-淀粉）淀粉）电位法电位法内指示剂法（中性红）内指示剂法（中性红）终点指示方法终点指示方法各论各论371）永停滴定法（附录）永停滴定法（附录A） 用作重氮化法的终点指示时，调节用作重氮化法的终点指示时，调节R1使加使加于电极上的电压约为于电极上的电压约为50mV。取供试品适量，精。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水水40ml与与盐酸
18、溶液盐酸溶液（12）15ml，而后置电磁搅拌器上，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加搅拌使溶解，再加溴化钾溴化钾2g，插入铂，插入铂铂电极后，铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，处，用亚硝酸用亚硝酸钠滴定液（钠滴定液（0.1mol/L或或0.05mol/L）迅速迅速滴定，随滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓缓缓滴定，至电流计滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。即为滴定终点
19、。各论各论38盐酸普鲁卡因的含量测定盐酸普鲁卡因的含量测定： 取本品约取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附，精密称定，照永停滴定法（附录录A），在），在1525，用亚硝酸钠，用亚硝酸钠滴定液（滴定液（0.1mol/L）滴定。每）滴定。每1ml亚亚硝酸钠滴定液（硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于）相当于27.28mg的的C13H20N2O2HCl各论各论392）电位法）电位法 USP3）外指示剂法）外指示剂法 碘化钾碘化钾-淀粉糊剂或试纸淀粉糊剂或试纸 2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O 4）内指示剂法）内指示剂法 中性红中性红 不可逆指示剂
20、不可逆指示剂各论各论402. 酸碱滴定法酸碱滴定法盐酸丁卡因的水溶液显酸性，可用氢盐酸丁卡因的水溶液显酸性，可用氢氧化钠溶液滴定氧化钠溶液滴定盐酸丁卡因的水溶液显酸性，在反应盐酸丁卡因的水溶液显酸性，在反应体系中加入适量体系中加入适量乙醇乙醇和和盐酸盐酸，用氢氧，用氢氧化钠滴定液滴定，化钠滴定液滴定，电位法电位法指示滴定终指示滴定终点。点。各论各论41第一个等当点：第一个等当点： 2+OHClNa HNaClH O过过第二个等当点：第二个等当点： 根据两个等当点间相应的氢氧化钠滴定根据两个等当点间相应的氢氧化钠滴定液的体积，即可计算药物的盐酸盐的含量。液的体积，即可计算药物的盐酸盐的含量。 2
21、+OBHClNa HBNaClH O各论各论42盐酸丁卡因的含量测定：盐酸丁卡因的含量测定：取本品约取本品约0.25g，精密称定，加乙醇精密称定，加乙醇 50ml 振摇使溶解，加振摇使溶解，加 0.01mol/L 盐酸溶液盐酸溶液 5ml，摇匀，照电位滴，摇匀，照电位滴定法，用氢氧化钠滴定液（定法，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴）滴定，两个突跃点体积的差作为滴定体积。定，两个突跃点体积的差作为滴定体积。每每 1ml 氢氧化钠滴定液（氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当）相当于于 30.08mg 的的C15H24N2O2 HC1。各论各论433. 非水碱量法非水碱量法盐酸丁卡因结构中盐
22、酸丁卡因结构中脂烃胺脂烃胺侧链有弱碱侧链有弱碱性，可用非水碱量法测定性，可用非水碱量法测定注意：注意：溶剂、试剂、滴定剂、终点指示溶剂、试剂、滴定剂、终点指示各论各论44JP盐酸丁卡因的含量测定：盐酸丁卡因的含量测定：取取预先干燥预先干燥过过的本品约的本品约0.2g，精密称定，加，精密称定，加甲酸甲酸2ml与与醋醋酐酐80ml溶解后，在溶解后，在30水浴中加热水浴中加热15min，用高氯酸滴定液（用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，）滴定，电位法电位法指示终点，并将滴定的结果用指示终点，并将滴定的结果用空白空白试验校试验校正。每正。每1ml高氯酸滴定液（高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当
23、）相当于于30.08mg的的C15H24N2O2 HCl。各论各论45注射用盐酸丁卡因的测定注射用盐酸丁卡因的测定对照品法定量对照品法定量5. HPLC法法盐酸普鲁卡因注射液的测定盐酸普鲁卡因注射液的测定分离模式：离子对色谱法分离模式：离子对色谱法定量方法：外标法定量方法：外标法4. UV法法各论各论46一、结构与性质一、结构与性质1.基本结构与代表药物基本结构与代表药物第二节第二节 苯乙胺类药物的分析苯乙胺类药物的分析CH CHNHRH(O)H(O)OH RHX*各论各论47HOCHOHCH2NH CH3肾肾上上腺腺素素HOHOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOH
24、OHHHHO各论各论48HOCHOHCH2NHCH3 HCl盐酸去氧肾上腺素HClCHOHCH2NH C(CH3)3Cl盐盐酸酸克克仑仑特特罗罗ClH2N各论各论492. 主要性质：主要性质：（1）弱碱性）弱碱性有有烃胺烃胺基侧链，具有弱碱性基侧链，具有弱碱性（2）酚羟基特性：）酚羟基特性：与三氯化铁呈色与三氯化铁呈色易被氧化呈色易被氧化呈色易被溴取代（溴量法）易被溴取代（溴量法）各论各论50（3）旋光性：手性碳原子）旋光性：手性碳原子（4）芳伯氨基特性：（盐酸克仑特罗）芳伯氨基特性：（盐酸克仑特罗）（5）光谱特性）光谱特性（6）溶解性：游离碱溶于有机溶剂而）溶解性：游离碱溶于有机溶剂而其盐溶
25、于水其盐溶于水各论各论51二、鉴别试验二、鉴别试验1. 与与FeCl3反应反应 酚羟基酚羟基 紫色或紫红色紫色或紫红色2. 氧化反应氧化反应含含酚羟基酚羟基（特别（特别邻二酚羟基邻二酚羟基），易被），易被碘、过氧化氢和铁氰化钾等氧化呈色碘、过氧化氢和铁氰化钾等氧化呈色3FeOH 各论各论52亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠 3. 与亚硝基铁氰化钠（与亚硝基铁氰化钠（Rimini）反应）反应 脂肪伯氨基脂肪伯氨基无醛无醛丙酮丙酮,NaHCO3红紫色红紫色 此为此为脂肪族伯胺脂肪族伯胺专属反应，如重酒专属反应，如重酒石酸间羟胺，可与含脂肪仲氨基的石酸间羟胺，可与含脂肪仲氨基的肾上肾上腺素腺素区别。区别
26、。HOCHOHCHCH3NH2CH(OH)COOHCH(OH)COOH各论各论53, HClH3COOCH3NH2CH3OH2, H2SO4NH2CH3CH2CH2NH2 , HClHOHOCH OH COOHCH OH COOHCHCH2OHNH2HOHO.重酒石酸间羟胺重酒石酸间羟胺盐酸多巴胺盐酸多巴胺盐酸甲氧明盐酸甲氧明重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素硫酸苯丙胺硫酸苯丙胺CHCHHONH2CH3OHCH(OH)COOHCH(OH)COOH各论各论544. 双缩脲反应双缩脲反应芳环侧链具有氨基醇结构芳环侧链具有氨基醇结构盐酸麻黄碱 蓝紫色 醚层显紫红色盐酸去氧肾上腺素 紫色 醚层不
27、显色CuSO4 OH-乙醚各论各论555. UV与与IR6. TLC与与HPLCTLC法规定主斑点的法规定主斑点的位置位置和和颜色颜色应一应一致。致。HPLC法规定法规定保留时间保留时间应一致。应一致。各论各论56三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查1. 酮体的检查酮体的检查来源：原料剩余，即氢化不完全来源：原料剩余，即氢化不完全肾上腺素肾上腺素氢化氢化肾上腺素酮肾上腺素酮HOCHOHCH2NH CH3肾肾上上腺腺素素HOHOCOCH2NH CH3肾肾上上腺腺素素酮酮HOH2/Pd-C各论各论57氢化还原氢化还原 酮体酮体 药物药物310nm有吸收有吸收方法方法: 规定药物在规定药物在310nm处
28、的吸收度处的吸收度310nm无吸收无吸收原理原理:比较法比较法 P92各论各论581 肾上腺素肾上腺素 2 - 酮体酮体310各论各论59杂质限量检查法杂质限量检查法1. 对照法对照法2. 灵敏度法灵敏度法3. 比较法比较法 P92 阿司匹林阿司匹林 Ch.P（2010）【检查检查】溶液的澄清度溶液的澄清度 取本品取本品0.50g，加温热至约加温热至约45的碳酸钠试液的碳酸钠试液10ml溶解溶解后，溶液应澄清。后，溶液应澄清。 各论各论60例例 中国药典（中国药典（2010年版）规定肾上腺素年版）规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加盐酸溶液（盐酸
29、溶液（92000）制成每）制成每1ml中含中含2.0mg的溶液，于的溶液，于310nm波长处测定，吸波长处测定，吸收度不得超过收度不得超过0.05，已知肾上腺素酮在，已知肾上腺素酮在310nm波长处的百分吸收系数为波长处的百分吸收系数为453，肾，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量。素酮的限量。各论各论61%06. 0%1001010 . 2110014530.05 %100WV100LEAL3%1cm1 各论各论622. 有关物质的检查有关物质的检查来源来源: 原料，中间体，副产物原料，中间体，副产物一般方法：一般方法：TLC法的自身稀释对照
30、法法的自身稀释对照法HPLC法的主成分自身对照法法的主成分自身对照法PC法用于极性较大的药物法用于极性较大的药物各论各论63检查方法检查方法： 纸色谱法（纸色谱法（PC）分离后，甲醇萃）分离后，甲醇萃取，照分光光度法于取，照分光光度法于232nm波长处测波长处测定吸收度，控制吸收度以控制有关物定吸收度，控制吸收度以控制有关物质的量。质的量。例：盐酸苯乙双胍中有关物质的检查例：盐酸苯乙双胍中有关物质的检查各论各论64 取本品取本品1.0g，置，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录刻度，摇匀，照纸色谱法（附录 A）试验，精密吸取）试验，精密吸取
31、0.2ml，分别点于，分别点于两张色谱滤纸条两张色谱滤纸条（7.5cm50cm）上，）上，并以甲醇作并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条空白点于另一色谱滤纸条上，样点直径均上，样点直径均为为0.5 1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以乙酸乙酯内，以乙酸乙酯-乙醇乙醇-水（水（6 3 1）为展开剂，展开）为展开剂，展开至前沿距下端约至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（处，取出，晾干，用显色剂（取10铁氰化钾溶液1ml，加10亚硝基铁氰化钠溶液与10氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15分钟，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张喷其中
32、一张点样纸条（有关双胍点样纸条（有关双胍显红色带，显红色带，Rf值约为值约为0.1），参照此色谱带，在另一张），参照此色谱带，在另一张点样纸条及空白纸条上，点样纸条及空白纸条上，剪取其相应部分剪取其相应部分并向外延伸并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密量取甲醇各，并分剪成碎条，精密量取甲醇各20ml，分别进行，分别进行萃取，照紫外萃取，照紫外-可见分光光度法（附录可见分光光度法（附录 A），在），在232nm的波长处测定吸光度，不得过的波长处测定吸光度，不得过0.48。各论各论65四、含量测定四、含量测定1. 非水碱量法非水碱量法常用于常用于有机碱性药物有机碱性药物的含量测定的含量测定（详将见
33、第四章（详将见第四章）各论各论662. 溴量法溴量法原理：原理：盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素HOHCOHCH2NHCH3 3Br2HOHCOHCH2NHCH3BrBrBr 3HBr各论各论67Br2 + 2KI 2KBr + I2I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6去氧肾上腺素去氧肾上腺素 Br2 Na2S2O3 1 3 6反应摩尔比反应摩尔比T = CM n = 3.395 mg/ml 0.05203.53= 各论各论68 精密称取盐酸去氧肾上腺素精密称取盐酸去氧肾上腺素0.1085g，置碘瓶中，加水置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴使溶解，精密加溴滴定液（定液
34、（0.05mol/L）50ml，再加盐酸，再加盐酸5ml,立立即密塞，放置即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微分钟并时时振摇，注意微开瓶开瓶 塞，加碘化钾试液塞，加碘化钾试液10ml ，立即密塞，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.0982mol/L)滴定，至滴定，至 近终点时，加淀粉指示液，继续近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，消耗滴定液滴定至蓝色消失，消耗滴定液14.35ml，并，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗滴定将滴定的结果用空白试验校正，消耗滴定液液46.46ml。每。每 1ml溴滴定液溴滴定液(0.05mol/L)相相当于当于3.395
35、mg 的的C9H13NO2.HCl。 各论各论69%7 .98%100205. 010001085. 00982. 0395. 3)35.1446.46(%100WTFVV%0）（含量各论各论703. UV-Vis法法酚羟基酚羟基 呈色呈色Fe2+芳伯氨基芳伯氨基 呈色呈色重氮化重氮化-偶合反应偶合反应处测吸光度处测吸光度，与，与放置放置盐酸萘乙二胺溶液盐酸萘乙二胺溶液时时振摇时时振摇氨基磺酸铵氨基磺酸铵放置放置亚硝酸钠亚硝酸钠至至盐酸盐酸合并提取液合并提取液次次盐酸盐酸温热的三氯甲烷温热的三氯甲烷盐酸克仑特罗栓盐酸克仑特罗栓nmminminminmlsol5001013503.各论各论71
36、取本品取本品20粒，精密称定，切成小片，精密粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），），置分液漏斗中，加温热的三氯甲烷置分液漏斗中，加温热的三氯甲烷20ml使溶解，使溶解，用盐酸溶液（用盐酸溶液（9100）振摇提取）振摇提取3次（次（20ml、15ml、10ml），分取酸提取液，置），分取酸提取液，置50ml量瓶中，量瓶中，用盐酸溶液（用盐酸溶液（9100）稀释至刻度，摇匀，滤）稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为过，取续滤液，作为供试品溶液供试品溶液；另取盐酸克；另取盐酸克仑特罗对照品适量，精密称定，加盐酸溶液仑特罗对照品适量
37、，精密称定，加盐酸溶液（9100）溶解并定量稀释制成每）溶解并定量稀释制成每1ml中含中含7.2 g的溶液，作为的溶液，作为对照品溶液对照品溶液。各论各论72 精密量取精密量取对照品溶液对照品溶液与与供试品溶液供试品溶液各各15ml，分别置分别置25ml量瓶中，各加盐酸溶液（量瓶中，各加盐酸溶液（9 100）5ml与与0.1%亚硝酸钠溶液亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置，摇匀，放置3分分钟，各加钟，各加0.5%氨基磺酸铵氨基磺酸铵溶液溶液1ml，摇匀，时，摇匀，时时振摇时振摇10分钟，再各加分钟，再各加0.1%盐酸萘乙二胺盐酸萘乙二胺溶液溶液1ml，摇匀，放置，摇匀，放置10分钟，用盐酸溶液分钟
38、，用盐酸溶液（9100）稀释至刻度，摇匀，照紫外）稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分可见分光光光度法（附录光光光度法（附录IV A），在），在500nm的波长处的波长处分别测定吸光度，计算，即得分别测定吸光度，计算，即得各论各论73（1）偶合剂：）偶合剂：碱性下用碱性下用-萘酚萘酚酸性下用酸性下用N-（1-萘基）萘基）-乙二胺乙二胺 （即：盐酸萘乙二胺）（即：盐酸萘乙二胺）N2+Cl-ClClCHCH2NHC(CH3)3HO+NHCH2CH2NH2NClClCHCH2NHC(CH3)3HONNHCH2CH2NH2各论各论74（2）氨基磺酸铵氨基磺酸铵的作用：的作用：除去过量的亚硝酸，避免其与偶合
39、试除去过量的亚硝酸，避免其与偶合试剂显色剂显色偶合剂偶合剂N-（1-萘基）萘基）-乙二胺遇亚硝酸乙二胺遇亚硝酸也能显色，干扰比色测定，所以在重也能显色，干扰比色测定，所以在重氮化后，应加氨基磺酸铵将剩余的亚氮化后，应加氨基磺酸铵将剩余的亚硝酸分解除去，再加偶合试剂硝酸分解除去，再加偶合试剂N-（1-萘基）萘基）-乙二胺。乙二胺。各论各论754. HPLC法法一般方法：离子对色谱法一般方法：离子对色谱法 离子抑制色谱法离子抑制色谱法例例16盐酸异丙肾上腺素注射液：盐酸异丙肾上腺素注射液：为离子对色谱法，调节溶液为离子对色谱法，调节溶液pH为为3.0，加入离子对试剂加入离子对试剂庚烷磺酸钠庚烷磺酸
40、钠 外标法定量外标法定量各论各论76第三节第三节 芳氧丙醇胺类药物的分析芳氧丙醇胺类药物的分析一、结构与性质一、结构与性质1. 基本结构与代表药物基本结构与代表药物芳氧丙醇胺类药物结构中有芳氧丙醇胺类药物结构中有芳环芳环，并，并具有具有氨基丙醇氨基丙醇侧链，基本结构为：侧链，基本结构为：R1ONR2OHH各论各论77ONCH3OOHCH3H2NH阿替洛尔阿替洛尔HONCH3OHCH3CH3HNOHCl盐酸卡替洛尔盐酸卡替洛尔各论各论78HONCH3OHCH3HCl盐酸普萘洛尔盐酸普萘洛尔HONCH3OHCH3OCH2氧烯洛尔氧烯洛尔各论各论79HONCH3OHCH3H3COCOOHCHOHCH
41、OHCOOH2酒石酸美托洛尔酒石酸美托洛尔HONCH3OHCH3OOH3CCH32OHHOOO富马酸比索洛尔富马酸比索洛尔各论各论802. 主要理化性质主要理化性质（1）弱碱性）弱碱性（2）旋光性）旋光性（3）光谱特征）光谱特征（4）溶解性：游离碱难溶于水，盐可溶）溶解性：游离碱难溶于水，盐可溶于水于水各论各论81二、鉴别试验二、鉴别试验1. 沉淀反应沉淀反应盐酸普萘洛尔注射液的鉴别：盐酸普萘洛尔注射液的鉴别：取本取本品适量，加品适量，加硅钨酸硅钨酸试液数滴，即产试液数滴，即产生淡粉红色沉淀。生淡粉红色沉淀。各论各论822. 与高锰酸钾反应与高锰酸钾反应部分药物分子结构中有部分药物分子结构中有
42、双键双键，具有，具有还还原性原性氧烯洛尔的鉴别：氧烯洛尔的鉴别：取本品取本品0.1g，加乙，加乙醇醇2ml溶解后，滴加溶解后，滴加0.1mol/L高锰酸钾高锰酸钾溶液溶液1ml，高锰酸钾颜色消褪，并产，高锰酸钾颜色消褪，并产生红棕色沉淀。生红棕色沉淀。3.UV4.IR 省略省略5.TLC各论各论833. 紫外光谱紫外光谱富马酸比索洛尔的鉴别：富马酸比索洛尔的鉴别：取本品，加水溶取本品，加水溶解并分别稀释制成每解并分别稀释制成每 1ml 中约含中约含0.1mg 的的溶液（溶液（1）和每）和每 1ml 中约含中约含0.01mg 的溶液的溶液（2），照紫外），照紫外-可见分光光度法（附录可见分光光度
43、法（附录IV A）测定，溶液（）测定，溶液（1）在）在 271nm 的波长处的波长处有最大吸收；溶液（有最大吸收；溶液（2）在）在 223nm 的波长的波长处有最大吸收。处有最大吸收。各论各论844. 红外光谱红外光谱酒石酸美托洛尔的鉴别：酒石酸美托洛尔的鉴别：取本品适量，加水溶取本品适量，加水溶解后，再加氨试液解后，再加氨试液碱化碱化，用二氯甲烷，用二氯甲烷提取提取，静，静置，取适量二氯甲烷液，置水浴上蒸干，置五置，取适量二氯甲烷液，置水浴上蒸干，置五氧化二磷干燥器中放置过夜，氧化二磷干燥器中放置过夜， 依法测定。本品依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集的红外光吸收图谱应与对
44、照的图谱（光谱集685图）一致。图）一致。各论各论85盐酸卡替洛尔滴眼液的鉴别：盐酸卡替洛尔滴眼液的鉴别：取本品，取本品，用水稀释制成每用水稀释制成每l ml 中约含盐酸卡替洛尔中约含盐酸卡替洛尔 5mg 的溶液，的溶液，作为供试品溶液；另取盐酸卡替洛尔对照品适量，加作为供试品溶液；另取盐酸卡替洛尔对照品适量，加水溶解并稀释制成每水溶解并稀释制成每 lml 中约含中约含 5mg 的溶液，作为对的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录照品溶液。照薄层色谱法（附录V B）试验，吸取上）试验，吸取上述两种溶液各述两种溶液各 2 l, 分别点于同一硅胶分别点于同一硅胶 GF254 薄层板上，薄层板上
45、，以三氯甲烷以三氯甲烷-甲醇甲醇-浓氨溶液（浓氨溶液（50 20 1）为展开剂，）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品）下检视。供试品溶液主斑点的溶液主斑点的位置位置和和颜色颜色应与对照品溶液的主斑点一应与对照品溶液的主斑点一致。致。5. 色谱法色谱法各论各论86三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查1. 游离萘酚的检查游离萘酚的检查盐酸普萘洛尔中游离萘酚的检查：盐酸普萘洛尔中游离萘酚的检查：取本品取本品20 mg，加乙醇与，加乙醇与10% 氢氧化钠溶液各氢氧化钠溶液各 2ml，振，振摇使溶解，加摇使溶解，加重氮苯磺酸重氮苯磺酸试液试液lml，摇匀，放
46、，摇匀，放置置3min；如显色，与；如显色，与 -萘酚的乙醇溶液（每萘酚的乙醇溶液（每lml 中含中含 -萘酚萘酚20 g）0.30ml用同一方法制成用同一方法制成的对照液比较，不得更深（的对照液比较，不得更深（0.3%）。）。各论各论872. 有关物质的检查有关物质的检查酒石酸美托洛尔中有关物质的检查酒石酸美托洛尔中有关物质的检查 （TLC法法+HPLC法）法） （1）取本品，加甲醇溶解并定量稀释制成每）取本品，加甲醇溶解并定量稀释制成每lml中约含中约含50mg的溶液，作为的溶液，作为供试品溶液供试品溶液；精密量取适量，用甲醇分别定；精密量取适量，用甲醇分别定量稀释制成每量稀释制成每lml
47、 中含中含0.1mg和和0.25mg的溶液，作为的溶液，作为对照溶液对照溶液（1）和和（2）。照薄层色谱法试验，量取上述。照薄层色谱法试验，量取上述三种溶液三种溶液各各5 1，分别点于同一硅胶分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇薄层板上，以甲醇-乙酸乙酯（乙酸乙酯（10 90）为）为展开剂（层析缸底部放置展开剂（层析缸底部放置2个盛有展开剂体积个盛有展开剂体积30% 的浓氨溶液的浓氨溶液小烧杯，并预先平衡小烧杯，并预先平衡1 h以上），展开后，在空气中晾干以上），展开后，在空气中晾干3h，再，再置碘蒸气缸中放置置碘蒸气缸中放置15h，取出，立即检视，除主斑点与原点外，取出，立即检视，除主斑点与原
48、点外，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照溶液（供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照溶液（2）的主斑点）的主斑点比较，不得更深，且深于对照溶液（比较，不得更深，且深于对照溶液（1）主斑点的杂质斑点不）主斑点的杂质斑点不得多于得多于1个。个。各论各论88（2）取本品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每）取本品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含中含2mg的溶液，作为的溶液，作为供试品溶液供试品溶液；精密量取适量，用流动相定量稀释制成每；精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含中含10 g 的溶液，作为的溶液，作为对照溶液对照溶液。照高效液相色谱法试验。用十八烷。照
49、高效液相色谱法试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸盐缓冲液（取醋酸铵基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸盐缓冲液（取醋酸铵3.9g，加水，加水810ml溶溶解后，加三乙胺解后，加三乙胺2.0ml，冰醋酸，冰醋酸10.0ml，磷酸，磷酸3.0ml，摇匀），摇匀）-乙腈乙腈（824 146）为流动相；流速为每分钟）为流动相；流速为每分钟2ml；柱温；柱温30；检测波长为；检测波长为280nm。另取洒石酸美托洛尔对照品，加流动相溶解并稀释制成每另取洒石酸美托洛尔对照品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含中含2mg 的的溶液，置石英杯中，在距离紫外光灯（溶液，置石英杯中，在距离紫外光灯（254nm）
50、下）下5cm处，放置处，放置3h，作为，作为系统适用性试验溶液。取系统适用性试验溶液系统适用性试验溶液。取系统适用性试验溶液20 l，注入液相色谱仪，酒，注入液相色谱仪，酒石酸美托洛尔峰的保留时间约为石酸美托洛尔峰的保留时间约为7min，相对保留时间约，相对保留时间约0.3处为处为4-(2RS)-2-羟基羟基-3-(1-异丙基异丙基)氨基氨基丙氧基丙氧基苯甲醛（杂质苯甲醛（杂质I）峰，酒石酸美托洛尔峰与）峰，酒石酸美托洛尔峰与杂质杂质I 峰的分离度应大于峰的分离度应大于10.0，理论板数按酒石酸美托洛尔峰计算不低于，理论板数按酒石酸美托洛尔峰计算不低于3000。取对照溶液。取对照溶液20 l，
