1、ClinClin-Chemistry Technology-Chemistry Technologypicture placeholder全自动生化分析仪检测技术原理全自动生化分析仪检测技术原理1. 分光光度法的工作原理2. 分光光度法的分析类型3. 分光光度法的校准及常见报警4. 间接选择离子检测（ISE）的工作原理5. 间接选择离子检测（ISE）的校准及常见报警分光光度法的工作原理“墨水墨水颜色颜色”的深浅可以间接反映的深浅可以间接反映墨水墨水的浓度的浓度分光光度法的工作原理不同种类的不同种类的“墨水墨水”具有不同的颜色及深浅具有不同的颜色及深浅分光光度法的工作原理构成这个美丽世界的不同的
2、颜色，是由各种波长的光线产构成这个美丽世界的不同的颜色，是由各种波长的光线产生的生的分光光度法的工作原理构成这个美丽世界的不同的颜色，是由各种波长的光线构成这个美丽世界的不同的颜色，是由各种波长的光线产生的产生的400-700nm为人肉眼可见光为人肉眼可见光可见光从最冷色（紫色）到最暖色（红色），波长逐渐升高可见光从最冷色（紫色）到最暖色（红色），波长逐渐升高340nm及以下的紫外波段为人肉眼不可见光及以下的紫外波段为人肉眼不可见光分光光度法的工作原理Q Q：如果需要检测的物质本身是：如果需要检测的物质本身是无色无色的怎么办？的怎么办？无色的待测物质无色的待测物质生化反应生化反应有色的生成物质
3、有色的生成物质众所周知的生活小魔法：众所周知的生活小魔法：淀粉遇上碘酒之后变蓝淀粉遇上碘酒之后变蓝色色分光光度法的工作原理让我们做一个阶段要点的总结让我们做一个阶段要点的总结一、待测物浓度可以由检测其颜色深浅得到。一、待测物浓度可以由检测其颜色深浅得到。二、即使待测物没有颜色，也可设计生化反应生成产色物质二、即使待测物没有颜色，也可设计生化反应生成产色物质，间接计算得到浓度。，间接计算得到浓度。三、不同物质产生不同颜色，从而在不同波长进行检测。三、不同物质产生不同颜色，从而在不同波长进行检测。分光光度法的工作原理那么，生化分析仪是如何检测溶液颜色的深浅的？那么，生化分析仪是如何检测溶液颜色的深
4、浅的？LambertLambert和BeerBeer指出，在产色物质处于一定浓度范围内，且入射光线为单色光的情况下：分光光度法的工作原理朗伯比尔定律：一切分光光度法的基石朗伯比尔定律：一切分光光度法的基石 入射光线强度 出射光线强度 容器光径厚度L L 产色物质浓度c 产色物质摩尔吸光系数A分光光度法的工作原理Q Q：为什么朗伯比尔定律只在一定浓度范围内有效？：为什么朗伯比尔定律只在一定浓度范围内有效？超出一定浓度范围之后，由于分子之间的影响程度加剧，浓度与吸光度不再呈线性关系！分光光度法的工作原理Q Q：为什么朗伯比尔定律计算吸光度只适用于单色光？：为什么朗伯比尔定律计算吸光度只适用于单色光
5、？在复色光的条件下，由于待测物质在各个波段下吸光系数的不同，造成相关曲线也出现不同程度的偏离Absorbance (Abs) is more convenient to calculate concentration than transmittance %.The Abs is directly proportional to concentration.Conc.Conc.T = 0.5T = 0.25T = 0.125Conc. Conc. -Log0.5 =0.3-Log0.25 = 0.60-Log0.125= 0.90Absorbance Absorbance A = - log
6、TA = - log T Transmission% T = I / Transmission% T = I / I I0 0 * * 100 100为什么为什么要采用出射光与入射光比值的对数作为吸光要采用出射光与入射光比值的对数作为吸光度计算方式？度计算方式？T=100%log1000分光光度法的工作原理了解一下分光光度法检测的完整流程（了解一下分光光度法检测的完整流程（前分光前分光）1、光源灯发出全波段光线2、单色器将全波段光线分为不同波长的单色平行光3、单色平行光经过反应杯溶液4、光电信号接收器检测光线强度分光光度法的工作原理再了解一下另一种分光光度法的流程（再了解一下另一种分光光度法的
7、流程（后分光后分光）5、光电信号检测光线强度4、衍射光栅将出射光线分为不同波长的单色光3、平行光经过反应杯溶液1、光源灯发出全波段光线2、光线经凸透镜整理成为平行光分光光度法的工作原理Q Q：后：后分光分光模式相比前分光模式有什么优点？模式相比前分光模式有什么优点？后分光模式进入比色杯时为全波段光线，出射之后再分为多束单波长光线各自检测强度，所以方便仪器得到多个波长下的吸光度。前分光模式进入比色杯时为单色光，要想实现多波长检测则需要两个单色器产生不同波长光线，由切光器控制，交替的通过同一比色杯，不可连续监测。在罗氏仪器上，待测物的12个波长的吸光度都被检测！并选择设定中的2个波长进行计算！分光
8、光度法的工作原理Q Q：那么，为什么：那么，为什么RocheRoche推荐使用推荐使用双波长双波长检测检测模式？模式？在双波长模式下，由于A=A（主波长）-A（副波长），那么电压不稳定等环境影响，都将会由于主副波长都产生了相同程度的影响而被消除。在双波长模式下，一些常见的干扰因素如轻度溶血，将可以由于在主波长和副波长具有相同的吸光度而被间接消除。分光光度法的工作原理让我们再次做一个阶段要点的总结让我们再次做一个阶段要点的总结一、分光光度法的原理基础是朗伯比尔定律。一、分光光度法的原理基础是朗伯比尔定律。二、二、RocheRoche使用的是主流的后分光比色分析技术。使用的是主流的后分光比色分析技
9、术。三、三、 Roche Roche使用使用的双波长分析法能去除多种样本干扰因素。的双波长分析法能去除多种样本干扰因素。1. 分光光度法的工作原理2. 分光光度法的分析类型3. 分光光度法的校准及常见报警4. 间接选择离子检测（ISE）的工作原理5. 间接选择离子检测（ISE）的校准及常见报警分光光度法的分析类型首先，我们首先，我们RocheRoche的检测系统包括哪些组成部分？的检测系统包括哪些组成部分？ 标本及容器 仪器二二 试剂三三 试剂所配套校准品四四 试剂的检验程序五五 质量控制及保养维护程序六六分光光度法的分析类型接下来，检测系统中都存在哪些影响因素需要消除？接下来，检测系统中都存
10、在哪些影响因素需要消除？ 标本及容器（不同样本具有的不同本底吸光度） 仪器（比色杯的本底吸光度、不同比色杯之间的本底亦不同）二二 试剂（试剂具有的本底吸光度）三三分光光度法的分析类型Q Q：样本的本底吸光度应该如何消除？：样本的本底吸光度应该如何消除？早期的分光光度计，只能读取早期的分光光度计，只能读取比色杯中反应终止以后的吸光度，比色杯中反应终止以后的吸光度，所以无法消除样本本底的影响。所以无法消除样本本底的影响。Roche通过设置通过设置2Point End这这一检测方法，可以有效扣除样本带一检测方法，可以有效扣除样本带来的本底吸光度影像。来的本底吸光度影像。A=A（反应达终点）-A（反应
11、启动之前）A=A（反应终点）-A（反应启动前）分光光度法的分析类型Q Q：比色杯的本底吸光度应该如何消除？：比色杯的本底吸光度应该如何消除？Roche通过每天开机时自动执行通过每天开机时自动执行光光密度检查密度检查，更新，更新比色杯的本底吸光度，之后在检测标本时均自动扣除。比色杯的本底吸光度，之后在检测标本时均自动扣除。可以监可以监测总共测总共1212个个波长下的比波长下的比色杯本底！色杯本底！Modular: 15500c501: 14500c701/702/502: 1000 (0.1ABS) , Stored Cell Blank 1000 (0.1ABS) , the the alar
12、m (“Cell?” alarm (“Cell?” or or “CuvetCuvet”) ”) occurs occurs 分光光度法的分析类型Q Q：试剂的本底吸光度应该如何消除？：试剂的本底吸光度应该如何消除？A=A（反应达终点）-A（反应启动之前）A=A（反应终点）-A（反应启动前）即使样本浓度为即使样本浓度为0 0，试剂，试剂本身仍然产生了一定的本底吸本身仍然产生了一定的本底吸光度（称之为光度（称之为S1Abs）Roche将检测将检测到的吸光度到的吸光度变化一律扣除变化一律扣除S1AbsS1Abs，消除了由，消除了由试剂本底造成的这部分吸光度试剂本底造成的这部分吸光度。种类用途措施1
13、样品空白消除样品颜色状态对反应的影响采用2Point End分析类型，反应未启动之前的样本空白会被扣除2试剂空白消除试剂本身颜色对反应的影响作为校准后的S1Abs，样本浓度为0时的试剂空白会被扣除3杯空白检测杯子/光路的清洁程度和状态作为周保养数据保存,会被扣除，此外杯空白异常的比色杯将被弃用分光光度法的分析类型让我们再次做一个阶段要点的总结让我们再次做一个阶段要点的总结分光光度法的分析类型我们已经了解了我们已经了解了2Point End2Point End，那么，那么RocheRoche还有哪些其它还有哪些其它的分析类型？的分析类型？ 一点终点法（仅检测反应终点的吸光度）1Point End
14、1Point End分光光度法的分析类型我们已经了解了我们已经了解了2Point End2Point End，那么，那么RocheRoche还有哪些其它还有哪些其它的分析类型？的分析类型？ 二点钟点法（检测两个不同时间点的吸光度之差，一般为反应终点和反应启动之前）2 Point End2 Point End分光光度法的分析类型我们已经了解了我们已经了解了2Point End2Point End，那么，那么RocheRoche还有哪些其它还有哪些其它的分析类型？的分析类型？ 连续监测速率法（检测一段时间内吸光度的平均变化率，主要为酶促反应）Rate ARate A分光光度法的分析类型我们已经了解
15、了我们已经了解了2Point End2Point End，那么，那么RocheRoche还有哪些其它还有哪些其它的分析类型？的分析类型？ 两点速率法（检测两个不同时间点之间的吸光度之差，除以时间差得到的变化率，不受反应曲线线性不佳的影响，适用于特定项目）2Point Rate2Point Rate分光光度法的分析类型Q Q：如果出现以下的：如果出现以下的Rate ARate A反应曲线，结果是否可信？反应曲线，结果是否可信？此阶段由于样本中待测物浓度太高，反应体系吸光度出现急剧变化。试剂中的底物不足以支持过快的消耗速度，反应体系吸光度变化开始加慢，甚至不再变化。样本浓度会被严重低估。分光光度法
16、的分析类型Q Q：如何避免以上误报情况的发生？：如何避免以上误报情况的发生？绝大多数非配套试剂都无法做到！绝大多数非配套试剂都无法做到！RocheRoche通过设计相应的检测程序参数，可以做到！通过设计相应的检测程序参数，可以做到！通过设置相应的通过设置相应的Abs LimitAbs Limit，当吸光度变化过快，超出此界限，当吸光度变化过快，超出此界限时，仪器将为数据结果加上时，仪器将为数据结果加上ReactReact的标记！的标记！分光光度法的分析类型Abs LimitAbs Limit的设置的设置分光光度法的分析类型Q Q：如果出现以下：如果出现以下的速率法反应的速率法反应曲线，结果是否
17、可信？曲线，结果是否可信？在苦味酸法检测肌酐时，样本中的结合胆红素也会发生杂反应，并在主波长处造成吸光度的下降，对结果产生负干扰。干扰程度与样本中结合胆红素浓度有关！分光光度法的分析类型那么，某些速率法项目也需要扣除样本空白？那么，某些速率法项目也需要扣除样本空白？是的，我们是否能能够像设置可以扣除终点法样本空白是的，我们是否能能够像设置可以扣除终点法样本空白的的2Point End2Point End一样，设置一种能够扣除速率法项目的一样，设置一种能够扣除速率法项目的样本空样本空白白的检测参数？的检测参数？分光光度法的分析类型RocheRoche为此设计了可以扣除样本空白的速率法为此设计了可
18、以扣除样本空白的速率法样本中结合胆红样本中结合胆红素造成的吸光度素造成的吸光度变化被作为空白变化被作为空白被扣除被扣除反应启动后所读取的反应启动后所读取的吸光度变化率，其中吸光度变化率，其中包含了结合胆红素造包含了结合胆红素造成的负影响成的负影响得到了真正由肌酐产生的吸光度变化率！得到了真正由肌酐产生的吸光度变化率！分光光度法的分析类型Rate ARate A的的Blank ReadBlank Read设置设置分光光度法的分析类型让我们再次做一个阶段要点的总结让我们再次做一个阶段要点的总结1Point End可以读取反应终点的吸光度2Point End可以读取终点吸光度，并去除样本空白影响Ra
19、te A可以分析一段时间内吸光度平均变化率，并且通过设置也可去除样本空白的影响；或者提示反应中存在着底物耗尽2Point Rate可以读取两个时间点之间的计算变化率，不受变化率线性的约束，适用于特定项目。1. 分光光度法的工作原理2. 分光光度法的分析类型3. 分光光度法的校准及常见报警4. 间接选择离子检测（ISE）的工作原理5. 间接选择离子检测（ISE）的校准及常见报警分光光度法的校准什么是校准？什么是校准？如果把我们的生化仪系统比作一把用来测量长度的尺子。那么在使用尺子之前，我们必须要先划好这把尺子的刻度。分光光度法的校准那么，我们对于理想的检测结果，有什么样的要求？那么，我们对于理想
20、的检测结果，有什么样的要求？在在不同实验室间、测量系统间，具有不同实验室间、测量系统间，具有可比性可比性在在不同时间检测，不同时间检测，能够能够前后一致前后一致结果结果的的准确性准确性可靠可靠最终目的：不论最终目的：不论使用哪使用哪种方法，在种方法，在世界的哪世界的哪个个地方，在什么时候，都地方，在什么时候，都能得到相同的能得到相同的结果结果。（就像格林尼治标准时间）。（就像格林尼治标准时间）分光光度法的校准如何才能达到我们刚才的要求？如何才能达到我们刚才的要求？在在不同实验室间、测量系统间，具有不同实验室间、测量系统间，具有可比性可比性在在不同时间检测，不同时间检测，能够能够前后一致前后一致
21、结果结果的的准确性准确性可靠可靠所有的实验室均使用统一的校准品进行校准定期对检测系统进行校准，确保任何时间都处于同一种“刻度”下所使用的校准品的浓度真实、可靠！分光光度法的校准对于以上要求，对于以上要求，RocheRoche都可以做到！都可以做到！所有的实验室均使用统一的校准品进行校准定期对检测系统进行校准，确保任何时间都处于同一种“刻度”下所使用的校准品的浓度真实、可靠！cfascfas系列系列制定详细的项目校准周期建议完整的溯源传递链条，保证了检测结果的可追溯性分光光度法的校准全球使用统一的校准品全球使用统一的校准品分光光度法的校准完整的溯源链至参考物质或参考方法完整的溯源链至参考物质或参
22、考方法分光光度法的校准周密详细的校准周期建议周密详细的校准周期建议校准校准品与参考方法品与参考方法/ /参考物质之间的溯源链参考物质之间的溯源链 采用参考方法或参考物质为主校准品赋值 主校准品为商业校准品赋值 客户只需用商业校准品在配套系统上校准即可实现溯源分光光度法的分析类型让我们再次做一个阶段要点的总结让我们再次做一个阶段要点的总结校准是检测样本的前提科学有效的校准是保证检测结果的可比性、再现性和可靠性的基石Roche所提供的校准系统可以达到我们的要求分光光度法的分析类型我们通过校准得到的我们通过校准得到的“尺子尺子”是什么样子的？是什么样子的？以待测物浓度以待测物浓度Concentrat
23、ionConcentration为横坐标为横坐标以以吸吸光光度度为为纵纵坐坐标标只需得到待测物的吸光度，就可以在只需得到待测物的吸光度，就可以在“尺子尺子”上获上获得对应的浓度。得对应的浓度。分光光度法的分析类型我们看到的这把我们看到的这把“尺子尺子”是一把是一把“直直”的。的。我们一般选取的浓度为我们一般选取的浓度为0和浓度接近医学决定水平的和浓度接近医学决定水平的两个点，称之为两点定标（两个点，称之为两点定标（2Point calibration）。）。因为因为“两点决定一条直线两点决定一条直线”，我们仅需两个不同浓度及，我们仅需两个不同浓度及对应的吸光度就可以作出一把对应的吸光度就可以作
24、出一把“尺子尺子”。由于是直线由于是直线，形状位置只需要它在形状位置只需要它在Y Y轴上的轴上的截距（截距（S1AbsS1Abs）以及斜率）以及斜率（K K）就可决定。就可决定。分光光度法的分析类型如果这把如果这把“尺子尺子”是是“弯曲弯曲”的我们如何校准？的我们如何校准？某些特殊项目例如免疫比浊法项目，其浓度与吸光度的变化趋某些特殊项目例如免疫比浊法项目，其浓度与吸光度的变化趋势并非线性，所以需要在不同浓度处制定多个校准点，称之为势并非线性，所以需要在不同浓度处制定多个校准点，称之为全点定标（全点定标（Full calibration）。）。由于是曲线，除了在由于是曲线，除了在Y Y轴上的截
25、距轴上的截距（S1AbsS1Abs）以及斜率）以及斜率（K K）外，还）外，还需有需有A/B/CA/B/C等参数来决定弯曲程度等参数来决定弯曲程度等信息等信息。分光光度法的分析类型RocheRoche可供选择的校准曲线类型非常丰富可供选择的校准曲线类型非常丰富线性的线性的“直尺直尺”。分光光度法的分析类型那么，那么，RocheRoche为每个项目选择校准曲线的原则是什么？为每个项目选择校准曲线的原则是什么？在各个医学决定水平处，检测试剂能在各个医学决定水平处，检测试剂能表现出最佳的灵敏度、精密度和准确度。表现出最佳的灵敏度、精密度和准确度。为此，为此，RocheRoche使用模拟程序测试所有的
26、使用模拟程序测试所有的曲线拟合，来选择一个最适宜的曲线。曲线拟合，来选择一个最适宜的曲线。 The K Factor- End Point AssayThe K Factor- End Point AssayK K 值的计算公式值的计算公式 The K Factor- End Point AssayThe K Factor- End Point AssayK K 值的计算公式值的计算公式 K factor calculation 2 point linearK factor calculation 2 point linear校准工作曲线校准工作曲线分光光度法的分析类型我们已经了解了我们已经了
27、解了“直尺直尺”和和“弯尺弯尺”如何校准如何校准线性（线性（Linear）曲线采用两点）曲线采用两点定标（定标（2Point calibration）。）。非线性（非线性（non-Linear）曲线采用全）曲线采用全点定标（点定标（Full calibration）。）。分光光度法的分析类型是否还有其它校准方式？是否还有其它校准方式？Blank calibration，只使用校，只使用校准液梯度中的准液梯度中的最低浓度最低浓度。常用于每日更新试剂当前的试常用于每日更新试剂当前的试剂空白本底剂空白本底S1Abs，K值不变。值不变。Span calibration，只使用校准液，只使用校准液梯度梯
28、度中在分析参数中预设好的的中在分析参数中预设好的的Span Point浓度浓度。Span Point浓度通常是浓度通常是梯度中梯度中的接的接近医学决定水平或者最高浓度。近医学决定水平或者最高浓度。分光光度法的分析类型SpanSpan校准的更新方式校准的更新方式分光光度法的分析类型让我们再次做一个阶段要点的总结让我们再次做一个阶段要点的总结校准曲线为样本浓度与对应吸光度的相关曲线校准曲线可以分为线性（Linear）和非线性（non-Linear）两种执行校准的方式可以分为2 Point、Full、Blank和Span四种常用的校准方式为2 Point、Full两种分光光度法的分析类型校准如此重要
29、，应有保证它准确可靠的手段！校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！（SD LimitSD Limit）在非线性型在非线性型（non-Linearnon-Linear）校准曲校准曲线上，各个浓度点与理论曲线之间线上，各个浓度点与理论曲线之间的垂距，称之为的垂距，称之为收敛度收敛度。校准时出现校准时出现SDSD？报警，说明有一报警，说明有一个或多个浓度的数据偏离理论值太个或多个浓度的数据偏离理论值太远，但是此次校准仍然是远，但是此次校准仍然是通过通过的。的。 SD SD Limit(Limit(标准差限制标准差限制):):常见校准常见校准失败的原因失败的原因1.1.校准的放置顺序可能有误（多个校
30、准的放置顺序可能有误（多个校准品）校准品）2.2.单个校准品自动稀释后校准单个校准品自动稀释后校准 加样精度问题加样精度问题3.3.比色杯或光源灯老化比色杯或光源灯老化4.4.污染的或蒸发浓缩的校准品污染的或蒸发浓缩的校准品5.5.混匀机构问题混匀机构问题分光光度法的分析类型校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！(Duplicate Limit)(Duplicate Limit)在校准时，每个浓度的校准液都将被在校准时，每个浓度的校准液都将被吸取两次分别检测，然后取两次结果吸取两次分别检测，然后取两次结果的的均值均值用于计算。用于计算。如果两次之间的结
31、果既超出了下图中如果两次之间的结果既超出了下图中设置的设置的5%，又超出了，又超出了30Abs，则会提示，则会提示DUP?，此次校准，此次校准失败失败。 Duplicate Duplicate limit limit : :重复性限制重复性限制,相对范围相对范围%和绝对范和绝对范围围 检查同一个校准品的两次吸光度差异检查同一个校准品的两次吸光度差异Abs1 -Abs1 - Ab2Ab2 校准的时候校准的时候, ,每个校准品会重复做两次每个校准品会重复做两次, ,进行计算进行计算 Dup % (输入值输入值) = |Abs2 - Abs1| *100 |Abs1 + Abs2|/2 Abs (输
32、入值输入值) = |Abs2 - Abs1| Duplicate Duplicate limit limit :常见校准校准失败的原因常见校准校准失败的原因 如果是新试剂，检查试剂复溶如果是新试剂，检查试剂复溶及混匀情况及混匀情况 检查样品针和试剂针检查样品针和试剂针. 样品或试剂上有气泡样品或试剂上有气泡 光源灯或比色杯老化光源灯或比色杯老化 混匀不佳混匀不佳 需要重新校准需要重新校准. 图片图片分光光度法的分析类型校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！(Sensitivity Limit)(Sensitivity Limit)在校准时，取最低浓度的
33、在校准时，取最低浓度的S S1 1和的和的SpanSpan点点的的S SN N，这两点之间的这两点之间的吸光度之差吸光度之差，除以，除以浓度之差浓度之差，得到的比值用于检查。，得到的比值用于检查。浓度之差浓度之差吸吸光光度度之之差差如果出现如果出现Sens?报警，说明校准液的吸报警，说明校准液的吸光度变化太小或者太大，试剂或校准光度变化太小或者太大，试剂或校准液失效都有可能造成，此次校准液失效都有可能造成，此次校准失败失败 Sensitivity Sensitivity limit(limit(灵敏度灵敏度限制限制) ) 该该数值标识出空白和数值标识出空白和 c.f.a.s之间的单位浓度吸光度
34、变化差异之间的单位浓度吸光度变化差异的最大值和最小值的最大值和最小值 . 在终点法的生化项目校准中，最小吸光度变化是必须检测在终点法的生化项目校准中，最小吸光度变化是必须检测的的标准标准 Sen: Sensitivity Sensitivity limit(limit(灵敏度限制灵敏度限制):):常见校准校准失败常见校准校准失败的原因的原因1.1.错误的校准品错误的校准品 蒸发浓缩或蒸发浓缩或配制错误配制错误2.2.旧的或污染的试剂旧的或污染的试剂3.3.污染的空白校准品污染的空白校准品空白和CFAS校准品的测得的吸光度值过于接近分光光度法的分析类型校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！校准
35、如此重要，应有保证它准确可靠的手段！(S1 Abs Limit)(S1 Abs Limit)在校准时，样本浓度为在校准时，样本浓度为0 0时的吸光度即时的吸光度即为为S1AbsS1Abs。S1AbsS1Abs反映了反映了试剂的空白试剂的空白本本底的高低。底的高低。如果出现如果出现S1Abs?报警，此次校准报警，此次校准失败失败。常见于单试剂项目由于被氧化变质。常见于单试剂项目由于被氧化变质，试剂颜色严重加深。，试剂颜色严重加深。分光光度法的分析类型校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！校准如此重要，应有保证它准确可靠的手段！( (CalibCalib Limit) Limit)在校准时，如果
36、本次校准生成的在校准时，如果本次校准生成的K K值和前次相值和前次相比差异超过了比差异超过了20则出现此报警。则出现此报警。此报警仅仅提示两次校准之间存在较大差异此报警仅仅提示两次校准之间存在较大差异，此次校准仍然，此次校准仍然成功成功。分光光度法的分析类型让我们再次做一个阶段要点的总结让我们再次做一个阶段要点的总结因为校准很重要，Roche设置了对校准数据的各种检查SD Limit检查了非线性校准曲线是否有离群点Duplicate Limit检查了校准数据的重复性是否良好Sensitivity Limit检查了校准液的吸光度高低是否达到预估水平S1 Abs Limit检查了试剂的空白本底是否
37、异常Roche能够针对每个项目都通过反复实验，设定其适宜的控制限能够针对每个项目都通过反复实验，设定其适宜的控制限，而开放项目无法做到！，而开放项目无法做到！Calib Limit检查了本次校准K值与前次差异是否超过20%SD LimitSD LimitSensitivity Sensitivity LimitLimitDuplicate Duplicate LimitLimitS1Abs LimitS1Abs LimitCalibCalib Limit Limit让我们练习一下如何分析校准报告中报警的原因！让我们练习一下如何分析校准报告中报警的原因！不是多点校准？常见报警类型常见报警类型潜在
38、原因潜在原因Duplicate LimitDuplicate Limit加样不准加样不准 (样本、试剂样本、试剂)，搅拌，搅拌 (P)(P)，反应杯光，反应杯光源老旧，环境，源老旧，环境， 电压电压Sensitivity LimitSensitivity Limit校准品、水点污染，试剂，校准品单位更改校准品、水点污染，试剂，校准品单位更改未更改数值未更改数值Calibration LimitCalibration Limitcfascfas和水空白，加样不准，系统水，光源灯和水空白，加样不准，系统水，光源灯Standard Deviation Standard Deviation Limit
39、Limit不正确的加样顺序，光路，针不正确的加样顺序，光路，针(加样不精确加样不精确)Standard 1 Absorbance Standard 1 Absorbance 水质，试剂，光源水质，试剂，光源Standard ErrorStandard Error仪器，反应过程，其它校准报警仪器，反应过程，其它校准报警造成造成生化校准报警的潜在可能原因生化校准报警的潜在可能原因校准校准报警报警校准报警校准报警校准报警校准报警校准曲线校准曲线Duplicate LimitDuplicate Limit重复性限制重复性限制不更新不更新Sensitivity LimitSensitivity Limi
40、t灵敏度限制灵敏度限制不更新不更新Calibration LimitCalibration Limit校准限制校准限制更新更新Standard Deviation Standard Deviation LimitLimit标准差限制标准差限制更新更新Standard 1 Absorbance Standard 1 Absorbance Std1Std1吸光度吸光度不更新不更新Standard ErrorStandard Error标准错误伴随标准错误伴随不更新不更新如果校准失败，系统将自动使用之前有效的校准曲线计算标本浓度。如果校准失败，系统将自动使用之前有效的校准曲线计算标本浓度。分光光度法
41、的分析类型其它一些常见的数据报警其它一些常见的数据报警 在已扣除比色杯本底后，吸光度依然33000，多见于样本脂血或比色杯内有大量气泡Abs 速率法项目用于计算的测光点吸光度超过Abs limit，多见于底物耗尽之后React 速率法项目用于计算的区间的反应曲线不平直，未处于零级反应期，多见于光源灯能量衰竭Lin 检测结果不在用户自行设定的复查限内，可用于危机值自动复查的设定Rept/Proz 多点校准的项目在检测样本时的吸光度，甚至大于校准曲线延伸所能达到的最大吸光度。多见于校准曲线不良。Samp? Abs Abs 超出超出ABSABS说明：反应杯空白校正用于计算的吸光度值超过33000。1
42、. 样品浓度过高或者为脂血样品；2. 试剂贮存或处置不当；3. 光度计的光路中有阻塞物。 React React 超出超出ABSABS说明：在速率法测定中，主波长吸光度的变化率超出设说明：在速率法测定中，主波长吸光度的变化率超出设定的限值。定的限值。1. 样品浓度过高样品浓度过高,底物耗尽底物耗尽2. 试剂配制不当或已变质试剂配制不当或已变质3. “综合功能综合功能应用应用分析分析”中的某个吸光度设置值中的某个吸光度设置值不当。不当。“增量减量增量减量”框内的框内的“限限定值定值”行。行。 ProzProz ProzoneProzone错误错误两种两种ProzoneProzone Check
43、Check的方式的方式 加入一定体积的抗原后，如果反应的方向持续不变，说明加入一定体积的抗原后，如果反应的方向持续不变，说明仍有过量的试剂（抗体）仍有过量的试剂（抗体）未发生前带效应未发生前带效应如果反如果反应方向改变，说明发生前带效应。应方向改变，说明发生前带效应。Antigen reAntigen re- -addition methodaddition method 此方法无需额外加入，通过检查反应的速率来确定是否仍此方法无需额外加入，通过检查反应的速率来确定是否仍有过量的试剂而非加入额外的抗原。对于这种方式，前带有过量的试剂而非加入额外的抗原。对于这种方式，前带效应的效应的PC值是通过
44、计算反应速度的变化。值是通过计算反应速度的变化。Reaction Rate methodReaction Rate method两种两种Prozone CheckProzone Check的的方式方式ProzoneProzone Check Check的相关设置的相关设置Antigen re-addition methodReaction Rate method1st entry1st entry前带限制最小值2nd2nd前前带限制最大值3rd3rd测量点测量点1 1 第一个斜率第一个斜率4th4th测量点测量点2 2 5th5th测量点测量点3 3 第二个斜率第二个斜率 6th6th测量点测
45、量点4 4Pull downPull downinsideinside/ / OutsideOutside7th 7th 吸光度差异( (测量测量点点1 1- -2 2) )8th8th吸光度差异( (测量测量点点3 3- -4 4) )抗原再次添加法抗原再次添加法 输入输入区区 1 41 4反应速率法反应速率法 输入输入区区 1 61 6Inside Outside Inside Outside 输入输入区区 7 8 7 8 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 7 8 7 8 SampSamp.?.? 超出超出ABS最大值（非线性曲线）最大值（非线性曲线）样本吸光度值样本吸光度值
46、AbsAbsS3S3S2S2S1S1S4S4S5S5校准品浓度校准品浓度校准曲线校准曲线说明：发现样品吸光度等于或大于吸光度的理论最大值（适用于分析物浓度无限大时）。在报告和数据浏览数据浏览子菜单中，结果字段将保留空白。 原因：样品浓度过高 Photometer CheckPhotometer CheckPerformed dailyChecks integrity of lampWater blank absorbances of cuvette No 1 at all 12 wavelengthsMust lie within defined valuesModularP No.1cell
47、，ModluarD：No.123Cell，C501：无固定cell e.g. all Abs Abs between previous and current values must be 300ModularHitachi 9xxcobas c 501 15500 1300014500 Cell Blank MeasurementsCell Blank MeasurementsStored Cell BlankStored Cell BlankIs measured/updated as a part of the weekly Is measured/updated as a part o
48、f the weekly maintenancemaintenanceStored in the instruments memoryGives information about each individual cell for each wavelengthCompensates for the cuvette wear with timePassing Cell BlankPassing Cell BlankIs measured just before performing a test Is measured just before performing a test Gives c
49、urrent information about the cuvette Gives current information about the cuvette before usebefore useCompared to stored cell blank held in memoryCompared to stored cell blank held in memory如吸光度差距超过如吸光度差距超过0.10.1则相应的比色杯号会被系统记录则相应的比色杯号会被系统记录下来下来Rejects the cell if absorbance reading Rejects the cell if absorbance reading difference is too greatdifference is too greatMakes a comparison only at the wavelength to be Makes a comparison only at the wavelength to be used for the current assay.used for the current assay. Cell Cell Blank MeasurementsBlank MeasurementsDoing now what patients need next
