1、第十六章第十六章 免疫球蛋白检测及应用免疫球蛋白检测及应用王飞王飞 第一节第一节 体液中体液中IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM测定的临床应用测定的临床应用 一、血液免疫球蛋白测定的临床测定一、血液免疫球蛋白测定的临床测定 二、尿液免疫球蛋白测定的临床意义二、尿液免疫球蛋白测定的临床意义 三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义 第二节第二节 血清血清IgDIgD和和IgEIgE测定及临床意义测定及临床意义 一、一、IgDIgD测定及临床意义测定及临床意义 二、二、IgEIgE测定及临床意义测定及临床意义 第三节第三节 血清血清IgGIgG亚类测定及临床意义亚
2、类测定及临床意义第四节第四节 M M蛋白测定及临床意义蛋白测定及临床意义一、血液蛋白区带电泳一、血液蛋白区带电泳二、血清免疫球蛋白定量测定二、血清免疫球蛋白定量测定三、免疫电泳三、免疫电泳四、免疫固定电泳四、免疫固定电泳五、本五、本- -周蛋白测定周蛋白测定六、六、-Ig-Ig和和-Ig-Ig定量测定定量测定七、冷球蛋白测定七、冷球蛋白测定 思考题思考题小结小结一、教学目的：一、教学目的： 1 1、掌握、掌握IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、IgDIgD和和IgEIgE的检测方的检测方法及临床意义。法及临床意义。2 2、掌握、掌握M M蛋白、冷球蛋白的特性，检测方法蛋白、冷球蛋白的特性
3、，检测方法及临床意义。及临床意义。3 3、熟悉尿液及脑脊液、熟悉尿液及脑脊液IgIg的检测方法及临床的检测方法及临床意义。意义。4 4、了解血清、了解血清IgGIgG亚类和免疫球蛋白轻链检测亚类和免疫球蛋白轻链检测的方法及临床意义。的方法及临床意义。 v免疫球蛋白（免疫球蛋白（Ig）：抗体活性、化学结构与抗体相似）：抗体活性、化学结构与抗体相似v重链性质，重链性质，Ig分分5类：类：IgG()、IgA()、IgM()、 IgD()、IgE()v轻链性质，轻链性质，Ig分分2型：型：、vIg占血浆蛋白总量：占血浆蛋白总量：20%v检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病检测意义：反应机体的免疫功能
4、、诊断疾病vIg含量：血清含量：血清 IgG、IgA、IgM：g/L、 IgD、IgE：mg/L 体液体液 IgG、IgA、IgM：mg/L 第一节体液中第一节体液中IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM测定测定的临床应用的临床应用 IgGIgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和细是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和细胞外液中的主要抗体，也是机体再次免疫的主要抗体。胞外液中的主要抗体，也是机体再次免疫的主要抗体。 IgAIgA分为血清型和分泌型，是参与黏膜局部免疫的分为血清型和分泌型，是参与黏膜局部免疫的主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管
5、分泌液、初乳、唾液和泪液中。唾液和泪液中。 IgMIgM是分子量最大的免疫球蛋白，是个体发育过程是分子量最大的免疫球蛋白，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液中最早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体。免疫应答中最早出现的抗体。一、血液免疫球蛋白测定的临一、血液免疫球蛋白测定的临床测定床测定（一）年龄（一）年龄 年龄不同其血液中的年龄不同其血液中的IgIg含量有一含量有一定变化。定变化。低低IgIg血症血症:先天性低先天性低IgIg血症（免疫缺陷病）；血症（免疫缺陷病）； 获得性低获得性低IgIg血症血症( (蛋白丢失蛋白丢失).). 高高I
6、gIg血症血症: :多克隆多克隆IgIg增高（感染）；增高（感染）； 单克隆单克隆IgIg增高（免疫增殖病）增高（免疫增殖病）. .高高IgIg血症血症:（二）多克隆高免疫球蛋白血症（二）多克隆高免疫球蛋白血症肝实质性疾病时多种肝实质性疾病时多种IgIg均增高，慢性活动性肝炎，肝均增高，慢性活动性肝炎，肝硬化，肝癌，相一致，恶性肿瘤（细胞瘤，转移癌）。硬化，肝癌，相一致，恶性肿瘤（细胞瘤，转移癌）。常见于各种感染，尤其是慢性细菌性感染，结核，慢常见于各种感染，尤其是慢性细菌性感染，结核，慢性支气管炎，胶原性疾病，结缔组织疾病。性支气管炎，胶原性疾病，结缔组织疾病。（三）单克隆免疫球蛋白增高（三
7、）单克隆免疫球蛋白增高 血清中存在异常增多的单克隆蛋白血清中存在异常增多的单克隆蛋白M M蛋白，理化性蛋白，理化性质十分均一，某类质十分均一，某类IgIg增高增高30g/L30g/L。 多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症，丙球蛋白血症，多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症，丙球蛋白血症，重链病，轻链病。重链病，轻链病。（四）低（四）低IgIg血症血症:1.1.先天性低先天性低IgIg血症（免疫缺陷病）；血症（免疫缺陷病）； 先天性低先天性低IgIg血症血症, ,主要见于体液免疫缺陷和联合免疫主要见于体液免疫缺陷和联合免疫缺陷病，一种是缺陷病，一种是IgIg全缺，如全缺，如BrutonBruton型无型无IgIg
8、血症，血中血症，血中IgG1g/L, IgAIgG1g/L, IgA、IgMIgM为参考值的为参考值的1 1。另一种是缺失一种。另一种是缺失一种或两种或两种 。IgAIgA：常见，呼吸道易反复感染。：常见，呼吸道易反复感染。IgGIgG：化脓性感染：化脓性感染IgMIgM：G G 菌败血症菌败血症2.2.获得性低获得性低IgIg血症血症( (蛋白丢失蛋白丢失).). IgGIgG5g/L,5g/L,主要与下列疾病有关：蛋白丢失过多，严重胃主要与下列疾病有关：蛋白丢失过多，严重胃肠道疾患，肾病综合征，恶性肿瘤骨转移，重症传染病，肠道疾患，肾病综合征，恶性肿瘤骨转移，重症传染病，淋巴系统恶性肿瘤，
9、白血病，中毒性骨髓病等。淋巴系统恶性肿瘤，白血病，中毒性骨髓病等。 二二 尿液免疫球蛋白测定的临床意义尿液免疫球蛋白测定的临床意义 正常人尿液中的正常人尿液中的IgIg含量甚微，当机体的免疫含量甚微，当机体的免疫功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。 尿液：尿液： 肾小球滤膜受损程度：肾小球滤膜受损程度：选择性蛋白尿指数选择性蛋白尿指数 增高有临床意义：增高有临床意义：肾病、免疫增殖病肾病、
10、免疫增殖病 可根据尿内可根据尿内IgIg增高的类型帮助鉴别诊断肾小球增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的种类疾病的种类 选择性蛋白尿时，尿中以选择性蛋白尿时，尿中以IgGIgG为主，非选择性为主，非选择性蛋白尿时，以蛋白尿时，以IgMIgM为主。为主。SPI=SPI=（尿（尿IgG/IgG/血清血清IgGIgG）/ /（尿（尿TRF/TRF/血清血清TRF TRF ）三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义生理情况下，生理情况下，IgIg根据其分子量大小，通过血根据其分子量大小，通过血脑屏障的难易度不同，脑屏障的难易度不同，IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM在脑
11、脊在脑脊液中的浓度递减。病理状态时，脑脊液组分液中的浓度递减。病理状态时，脑脊液组分发生改变。发生改变。 血脑屏障受损程度：血脑屏障受损程度：白蛋白商值、白蛋白商值、CSF-IgGCSF-IgG指数指数 增高有临床意义：增高有临床意义：多发性硬化症、中枢神经系多发性硬化症、中枢神经系 统感染统感染一般以白蛋白商值反映血脑屏障功能，一般以白蛋白商值反映血脑屏障功能，以以IgGIgG指数反映中枢神经系统鞘内合成指数反映中枢神经系统鞘内合成IgGIgG能力。能力。白蛋白商值白蛋白商值CSFCSF中白蛋白中白蛋白/ /血清白蛋白血清白蛋白10001000IgGIgG生成指数生成指数= = （CSFCS
12、F中中IgGIgG* *血清白蛋白）血清白蛋白）/ /（血（血清清IgGIgG* *CSFCSF中白蛋白）中白蛋白）白蛋白商值白蛋白商值 9 9表示血脑屏障无明显损害表示血脑屏障无明显损害9 9 1515为轻度损伤为轻度损伤1515 3333中度损伤中度损伤3333 100100重度损伤重度损伤 100100完全破裂完全破裂脑脊液中脑脊液中IgGIgG增高见于增高见于1.1.中枢神经系统内源性合成增加中枢神经系统内源性合成增加2.2.血中血中IgGIgG增高增高3.3.血脑屏障通透性增高血脑屏障通透性增高第二节第二节 血清血清IgDIgD和和IgEIgE的测定及临床应用的测定及临床应用 正常人
13、血清中正常人血清中IgD含量很低，膜结合型含量很低，膜结合型IgD(mIgD)构成构成BCR，是，是B细胞分化发育成细胞分化发育成熟的标志。熟的标志。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起亲细胞抗体，引起I型超敏反应；与机体抗寄型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。生虫免疫也可能有关。一、一、 血清血清IgDIgD测定及临床意义测定及临床意义 测定方法：测定方法： 放射免疫分析法放射免疫分析法 化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法 免疫比浊法免疫比浊法 酶联
14、免疫吸附法酶联免疫吸附法 IgD IgD：生物功能不详：生物功能不详 增高：增高：妊娠末期、妊娠末期、IgDIgD型骨髓瘤、甲状腺型骨髓瘤、甲状腺炎和大量吸烟者。炎和大量吸烟者。 降低：降低：原发性唔丙种球蛋白血症、肺硅沉原发性唔丙种球蛋白血症、肺硅沉着病和细胞病毒药物治疗后。着病和细胞病毒药物治疗后。二、二、 血清血清IgEIgE测定及临床意义测定及临床意义测定方法测定方法总总IgEIgE测定：测定：放射免疫分析法 化学发光免疫分析法 免疫比浊法 酶联免疫吸附法特异性特异性IgEIgE测定：测定：免疫斑点法 酶联免疫吸附法IgEIgE临床意义：临床意义： 增高：增高：I I变态反应性疾病、寄
15、生变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免疫性疾虫感染、病毒感染、自身免疫性疾病。病。 降低：降低：意义不大意义不大第三节第三节 血清血清IgGIgG亚类测定及临床意亚类测定及临床意义义IgIg亚类：亚类：IgG1IgG1、IgG2IgG2、IgG3IgG3、IgG4IgG4，其含量依次下降，其含量依次下降测定方法：测定方法： 单向免疫扩散法单向免疫扩散法 免疫比浊法（常用）免疫比浊法（常用） 放射免疫分析法放射免疫分析法 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法临床意义：临床意义：IgGIgG亚类的含量随年龄的不同而变化亚类的含量随年龄的不同而变化 免疫缺陷病降低明显免疫缺陷病降低明显 第四节第四节
16、 M蛋白测定及临床意义蛋白测定及临床意义 M蛋白：蛋白： B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白常单克隆免疫球蛋白 临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等 M M蛋白测定蛋白测定蛋白区带电泳：经典方法蛋白区带电泳：经典方法 计算蛋白含量和百分比计算蛋白含量和百分比免疫比浊法：免疫比浊法： 免疫球蛋白定量免疫球蛋白定量 准确性高、快速准确性高、快速免疫电泳：免疫电
17、泳： M M蛋白分型蛋白分型免疫固定电泳：免疫固定电泳： M M蛋白分型及鉴定，分辨蛋白分型及鉴定，分辨 率高率高- -+ +免疫电泳示意图免疫电泳示意图GAMIgG-型M蛋白Marker 免疫固定电泳模式图免疫固定电泳模式图左图为左图为IgGIgG 型型, , 中图为中图为IgGIgG 型，右为正常型，右为正常 SP G AM SP G AM SPG AM 免疫固定电泳示意图免疫固定电泳示意图五五 本本- -周蛋白测定周蛋白测定本本- -周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链。周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链。检测方法：免疫电泳、加热沉淀（简便易行）检测方法：免疫电泳、加热沉淀（简便易行）六六 -
18、Ig-Ig和和-Ig-Ig定量测定定量测定IgIg和和-Ig-Ig定量检测定量检测方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准确、快速）应用：应用：M M蛋白血症的分型及鉴定蛋白血症的分型及鉴定七七 冷球蛋白测定冷球蛋白测定冷球蛋白：冷球蛋白：是血清中的一种病理蛋白质，该蛋是血清中的一种病理蛋白质，该蛋白在白在0 044时发生沉淀，在时发生沉淀，在37 37 又溶解。又溶解。 在低温时产生冷沉淀的机制尚不十分明确在低温时产生冷沉淀的机制尚不十分明确 多数冷球蛋白为免疫复合物，其抗原可以是外源多数冷球蛋白为免疫复合物，其抗原可以是外源 性的，也可以是内源性的性的，也可以是内源性的冷球蛋白的类型及临
19、床意义冷球蛋白的类型及临床意义 I I型：为单克隆冷球蛋白型，大约型：为单克隆冷球蛋白型，大约25%25%，多见，多见于免疫增生性疾病于免疫增生性疾病 型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，大约型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，大约25%;25%;多见于自身免疫性疾病多见于自身免疫性疾病 型：多克隆混合型冷球蛋白，约占型：多克隆混合型冷球蛋白，约占50% ;50% ;多多见于自身免疫性疾病以及感染性疾病见于自身免疫性疾病以及感染性疾病 n免疫球蛋白是由浆细胞所产生能与相应抗原特免疫球蛋白是由浆细胞所产生能与相应抗原特异性结合的球蛋白异性结合的球蛋白n分为分为IgG IgG 、IgAIgA、IgMI
20、gM、IgEIgE和和IgDIgD五类，其相应五类，其相应重链分别称为重链分别称为链、链、链、链、链、链、链和链和链链n轻链分为轻链分为型和型和型，两型轻链无功能差异型，两型轻链无功能差异n免疫球蛋白定量测定方法：免疫球蛋白定量测定方法： 单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、 ELISAELISA、免疫比浊法、放射免疫分析法、免疫比浊法、放射免疫分析法小结小结临床意义：临床意义：n选择性蛋白尿指数来评估肾小球滤过膜破选择性蛋白尿指数来评估肾小球滤过膜破坏程度及观察治疗和预后效果；测定尿液坏程度及观察治疗和预后效果；测定尿液免疫球蛋白含量，来对肾小球疾病类型鉴
21、免疫球蛋白含量，来对肾小球疾病类型鉴别。别。n测定脑脊液蛋白质，对判断测定脑脊液蛋白质，对判断CSFCSF中蛋白质的中蛋白质的来源，区分中枢神经系统疾病类别有着重来源，区分中枢神经系统疾病类别有着重要意义。临床上常通过白蛋白商值和脑脊要意义。临床上常通过白蛋白商值和脑脊液免疫球蛋白指数来反映血脑屏障受损程液免疫球蛋白指数来反映血脑屏障受损程度。度。n血清血清IgGIgG亚类测定对研究免疫缺陷病和超敏亚类测定对研究免疫缺陷病和超敏反应性疾病有重要价值。反应性疾病有重要价值。1.1.免疫应答主要分为哪几个阶段？免疫应答主要分为哪几个阶段？2.2.什么是免疫球蛋白什么是免疫球蛋白? ?其分子基本结构
22、其分子基本结构? ?3.3.免疫球蛋白分类及亚类免疫球蛋白分类及亚类? ?4.4.血清免疫球蛋白测定方法有哪些血清免疫球蛋白测定方法有哪些? ?5.5.比较单向免疫扩散法和速率散射比浊法优缺点。比较单向免疫扩散法和速率散射比浊法优缺点。6.6.免疫球蛋白免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM测定有何临床意义？测定有何临床意义？思考题思考题7.7.免疫球蛋白免疫球蛋白IgGIgG亚类测定有何临床意义？亚类测定有何临床意义？8.8.单向免疫扩散测定中有哪些主要影响因素？单向免疫扩散测定中有哪些主要影响因素？9.9.如何保证速率散射比浊法测定结果准确？如何保证速率散射比浊法测定结果准确？10.10.如何评估肾小球滤过膜破坏程度？如何评估肾小球滤过膜破坏程度？11.11.如何判定血脑屏障受损程度？如何判定血脑屏障受损程度？12.12.如何正确选择测定如何正确选择测定M M蛋白的实验项目蛋白的实验项目? ?
