1、中药质量标准研究中药质量标准研究山东大学药学院生药学研究所山东大学药学院生药学研究所 向兰向兰一一.质量标准的定义质量标准的定义药品标准药品标准是国家对药品质量及检验方法所做的是国家对药品质量及检验方法所做的技术规定技术规定，是药品生产、经营、使用、检验和，是药品生产、经营、使用、检验和监督管理部门共同遵循的监督管理部门共同遵循的法定依据法定依据。“金银花金银花”和和“山银花山银花”争议争议二二.质量标准制定的原则质量标准制定的原则 1.从从人民健康安全人民健康安全出发，必须坚持出发，必须坚持质量第一质量第一的原则。的原则。3.体现体现“技术先进技术先进”：对标准中各项限度的制定，即对标准中各
2、项限度的制定，即要结合国内实际，又要考虑国外的先进水平，对检测方法要结合国内实际，又要考虑国外的先进水平，对检测方法的选择应根据的选择应根据“准确、灵敏、简便、快速准确、灵敏、简便、快速”的原则，与国的原则，与国际先进水平接轨，努力将我国的药品质量提高到一际先进水平接轨，努力将我国的药品质量提高到一 个新个新的水平。的水平。2.体现体现“安全有效安全有效”；要从生产、流通、使用、储藏；要从生产、流通、使用、储藏等各个环节了解影响药品标准的因素，有针对性的规定等各个环节了解影响药品标准的因素，有针对性的规定检测项目，切实加强药品内在质量控制。检测项目，切实加强药品内在质量控制。4.体现体现“经济
3、合理经济合理”：强调检测方法的适用性。强调检测方法的适用性。三三.质量标准的分类质量标准的分类1.法定标准法定标准（1）国家标准（药典，部颁标准）国家标准（药典，部颁标准）（2）地方标准）地方标准2.企业标准企业标准四四.质量标准的特性质量标准的特性1.权威性权威性2.科学性科学性3.进展性进展性五五.中药质量标准研究的复杂性中药质量标准研究的复杂性 品种品种 产地产地 采收期采收期 加工加工 炮制炮制 储藏储藏（一）中药材质量影响因素的复杂性（一）中药材质量影响因素的复杂性例例1.大黄大黄 鸡爪大黄鸡爪大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Regel）掌叶大黄掌叶大黄（R
4、heum palmatum L.）药用大黄药用大黄（Rheum officinale Baill.）掌叶大黄掌叶大黄 药用大黄药用大黄 鸡爪大黄鸡爪大黄 HPLC指纹图谱指纹图谱例例2 石榴叶石榴叶鞣花酸鞣花酸00.10.20.30.40.50.60.7大青皮甜类马牙甜三白甜大红袍甜小红袍甜小红袍酸小青皮酸大青皮酸谢花甜马牙酸大红袍酸鞣花酸含量（%）6月7月8月9月10月品种和采收期对石榴叶鞣花酸含量的影响品种和采收期对石榴叶鞣花酸含量的影响炮制时间对石榴叶鞣花酸含量的影响炮制时间对石榴叶鞣花酸含量的影响AU0.000.200.400.60Minutes5.0010.00AU0.000.200
5、.400.60Minutes5.0010.00AU0.000.200.400.60Minutes2.004.006.008.0010.0012.0014.00AU0.000.200.400.60Minutes2.004.006.008.0010.0012.0014.00（二）中药复方配伍的复杂性（二）中药复方配伍的复杂性药效物质基础，含量测定，炮制机理，配伍机理药效物质基础，含量测定，炮制机理，配伍机理（三）中药基础研究工作比较薄弱（三）中药基础研究工作比较薄弱例例3 马齿苋马齿苋现代药物与临床现代药物与临床,2014,29(7):745-748.Phytochemistry,2005,66(
6、21):2595-2601.Rapid Communication Mass Spectrom,2008,22:1415-1422.Phytotherapy Research,2009,23(7):1032-1035.European Journal of Organic Chemistry,2010,21:3975-3984.Helvetica Chimica Acta,2011,94:497-501.J.Chin.Pharm.Sci.,2014,23(8):533-542（四）中药新药质量标准研究的复杂性（四）中药新药质量标准研究的复杂性（1）未在国内上市销售的从）未在国内上市销售的从植物
7、、动物、矿物等物质中提取的有效成分及其制剂。植物、动物、矿物等物质中提取的有效成分及其制剂。（2）新发现的药材及其制剂。新发现的药材及其制剂。（3）新的中药材代用品。新的中药材代用品。（4）药材新的药用部位及其制剂。药材新的药用部位及其制剂。（5）未在国内上市销售的从）未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位中提取的有效部位及其制剂。及其制剂。（6）未在国内上市销售的中药、天然药物复方制剂。）未在国内上市销售的中药、天然药物复方制剂。（7）改变国内已上市销售中药、天然药物给药途径的制剂。改变国内已上市销售中药、天然药物给药途径的制剂。（8）改变国内已上市
8、销售中药、天然药物剂型的制剂。改变国内已上市销售中药、天然药物剂型的制剂。（9）已有国家标准的中药、天然药物。已有国家标准的中药、天然药物。1.中药新药分类方法的多样性中药新药分类方法的多样性中药材中药材质量标准质量标准中药饮片中药饮片（炮制）质量标准（炮制）质量标准中药提取物中药提取物（有效部位）质量标准（有效部位）质量标准制剂制剂质量标准质量标准中药新药五类药中药新药五类药2.中药新药质量标准研究内容的多样性中药新药质量标准研究内容的多样性六六.中药质量标准设计原则中药质量标准设计原则1.制剂用原料研究与质量控制同步制剂用原料研究与质量控制同步2.制备工艺研究与质量控制同步制备工艺研究与质
9、量控制同步（一）同步进行原则（一）同步进行原则1.原料的代表性原料的代表性2.质量标准所制定的指标要有代表性质量标准所制定的指标要有代表性3.质量标准具有可控性质量标准具有可控性4.质量标准所采用的对照物要有可靠性质量标准所采用的对照物要有可靠性（二）样品要有代表性（二）样品要有代表性1.设立对照设立对照2.对照的等量性（取样量，制备条件一致）对照的等量性（取样量，制备条件一致）（三）对照实验原则（三）对照实验原则1.研究过程中质量控制内容要有良好的重复性研究过程中质量控制内容要有良好的重复性2.生产过程中质量控制内容要有良好的重复性生产过程中质量控制内容要有良好的重复性（四）重复性原则（四）
10、重复性原则七七.制定中药新药质量标准的前提制定中药新药质量标准的前提1.处方固定处方固定2.原料稳定原料稳定3.制备工艺稳定制备工艺稳定八八.中药新药质量标准研究的内容及技术要求中药新药质量标准研究的内容及技术要求1.原料药材原料药材质量标准草案及起草说明质量标准草案及起草说明2.原料半成品原料半成品（有效部位或有效部位群）质量标准草案及起草说（有效部位或有效部位群）质量标准草案及起草说明明3.原料成品（中药制剂）原料成品（中药制剂）的质量标准草案及起草说明的质量标准草案及起草说明 (一）中药五类新药一）中药五类新药 国家标准国家标准1.1.原料药材质量标准草案及起草说明原料药材质量标准草案及
11、起草说明 地方标准地方标准无标准无标准 名称名称，来源，来源，性状，鉴别，检查，性状，鉴别，检查，浸出物测定，含量测定，炮制，浸出物测定，含量测定，炮制，功能主治，用法用量，功能主治，用法用量，注意事项，注意事项，贮藏。贮藏。蒲公英药材质量标准蒲公英药材质量标准蒲公英蒲公英PugongyingHERBA TARAXACI 本品为菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.Mazz.、碱地蒲公英Taraxacum sinicum kitag.或同属数种植物的干燥全草。春至秋季花初开时采挖，除去杂质，洗净，晒干。【性状】【性状】本品呈皱缩卷曲的团块。根呈圆锥状，多弯曲，长37
12、cm；表面棕褐色，抽皱；根头部有棕褐色或黄白色的茸毛，有的已脱落。叶基生，多皱缩破碎，完整叶片呈倒披针形，绿褐色或暗灰色，先端尖或钝，边缘浅裂或羽状分裂，基部渐狭，下延呈柄状，下表面主脉明显。花茎1至数条，每条顶生头状花序，总苞片多层，内面一层较长，花冠黄褐色或淡黄白色。有的可见多数具白色冠毛的长椭圆形瘦果，气微，味微苦。【鉴别】【鉴别】（1）本品叶表面观：上下表皮细胞垂周壁波状弯曲，表面角质纹理明显或稀疏可见。上下表皮均有非腺毛，39细胞，直径1734m，顶端细胞甚长，皱缩呈鞭状或脱落。下表皮气孔较多，不定式或不等式，副卫细胞36个，叶肉细胞含细小草酸钙结晶。叶脉旁可见乳汁管。根横切面：木栓
13、细胞数列，棕色。韧皮部宽广，乳管群断续排列成数轮。形成层成环。木质部较小，射线不明显；导管较大，散列。薄壁细胞含菊糖。（2）取蒲公英粉末（过40目筛）1g，置于25ml锥形瓶内，加入10ml 甲醇溶液超声提取30分钟，取出滤过，挥干滤液后，加水10ml溶解，滤过，滤液用醋酸乙酯提取（10ml2），提取液合并，回收醋酸乙酯，残渣加甲醇溶解，并定容至2ml量瓶中，作为供试品溶液。另取绿原酸、咖啡酸对照品，加甲醇制成每1ml含绿原酸、咖啡酸各1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5l，吸取对照品溶液2l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯：甲酸：水 (7：2.5：2.5)的上层溶液为展开剂
14、，展开，取出，晾干，在紫外灯下（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【含量测定】【含量测定】照高效液相色谱法（附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇磷酸盐缓冲液（PH 4.2）（23:77）为流动相；检测波长323nm。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于3500。对照品溶液的制备对照品溶液的制备 精密称取在110干燥至恒重的绿原酸对照品1mg于2ml量瓶、咖啡酸对照品1.5mg于50ml量瓶中，加甲醇溶解并定溶至刻度，摇匀，即得（每1ml中含绿原酸0.5mg、咖啡酸0.03mg）。供试品溶液
15、的制备供试品溶液的制备 取本品粗粉1g同时另取本品粉末测定水份（附录H一法）精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加入含5%甲酸的甲醇溶液10ml，精密称定，超声提取30分钟，补充5%甲酸的甲醇溶液至原重，摇匀，上清液离心，经微孔滤膜过滤后，备用。测定法测定法 分别精密吸取对照品溶液2l与供试品溶液1020l（视含量高低而定），注入液相色谱仪，测定，即得。本品以干燥品计算，含绿原酸（Chlorogenic Acid）和咖啡酸（Caffeic Acid）分别不低于0.1mg/g和0.2mg/g。【炮制】炮制】除去杂质，洗净，切段，晒干。【性味与归经】【性味与归经】苦、甘，寒。平。归肝、胃经。【功能与
16、主治】【功能与主治】清热解毒，消肿散结，利尿通淋。用于疔疮肿毒，乳痈、瘰疬，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛。【用法与用量】【用法与用量】915g；外用鲜品适量捣敷或煎汤熏洗患处。【贮藏】【贮藏】置通风干燥处，防潮，防蛀。名称，汉语拼音，处方，制法，性状，鉴别，名称，汉语拼音，处方，制法，性状，鉴别，检查，含量测定，功能主治，贮藏。检查，含量测定，功能主治，贮藏。2.2.原料半成品（有效部位或有效部位群）原料半成品（有效部位或有效部位群）质量标准草案及起草说明：质量标准草案及起草说明：名称，汉语拼音，处方，制法，性状，名称，汉语拼音，处方，制法，性状，鉴别，检查，含量测定，鉴别，检查
17、，含量测定，功能主治，用法用量，注意事项，功能主治，用法用量，注意事项，规格，规格，贮藏，使用期限。贮藏，使用期限。3.3.原料成品（中药制剂）的质量标准草案及原料成品（中药制剂）的质量标准草案及起草说明：起草说明：（一）名称（一）名称（中文名，汉语拼音，简要说明命名依据）中文名，汉语拼音，简要说明命名依据）（二）处方（二）处方1.处方中药物排列处方中药物排列2.炮制标明炮制标明3.用法定计量单位用法定计量单位4.处方投料药材的重量处方投料药材的重量5.保密品种保密品种6.处方中每味药的质量标准存在的情况处方中每味药的质量标准存在的情况 6.1增补鉴别与含量测定增补鉴别与含量测定 6.2提取物
18、、有效部位应制定标准提取物、有效部位应制定标准 熟地黄熟地黄 160g 山茱萸（制）山茱萸（制）80g山山 药药 80g 泽泽 泻泻 60g茯苓茯苓60g 牡丹皮牡丹皮 60g（三）制法（三）制法内容、辅料、剂型、总量、关键技术、半成品标准 板蓝根冲剂板蓝根冲剂制法制法 将板蓝根碎成小段，热水浸提二次，提取液将板蓝根碎成小段，热水浸提二次，提取液浓缩成稠膏，放冷。将淀粉与稠膏搅拌，随将糖粉浓缩成稠膏，放冷。将淀粉与稠膏搅拌，随将糖粉分三次加入，拌匀，过分三次加入，拌匀，过10目筛，制粒，干燥即得。目筛，制粒，干燥即得。（四）性状（四）性状鉴别药味的确定、鉴别方法的确定、薄层色鉴别药味的确定、鉴
19、别方法的确定、薄层色谱溶剂系统的选择谱溶剂系统的选择（五）鉴别（五）鉴别鉴别方法鉴别方法1.显微鉴别（显微鉴别（分类、查找文献、找出特征点、分类、查找文献、找出特征点、绘图）绘图）3.色谱鉴别（设立阴性对照）色谱鉴别（设立阴性对照）吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶F254展开剂：苯展开剂：苯-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲酸（甲酸（43：7：0.5）显色：在显色：在254nm紫外灯下观察荧光紫外灯下观察荧光2.理化鉴别理化鉴别（六）检查（六）检查胶囊剂：胶囊剂：水分含量水分含量：小于小于9%装量差异装量差异：10%以内。以内。崩解时限崩解时限：各粒均在：各粒均在15分钟内完全崩解。分钟内完全崩解。2.灰分（总灰
20、分和酸不溶性灰分）、炽灼残渣灰分（总灰分和酸不溶性灰分）、炽灼残渣灰分：灰分：升温至升温至500-600，使完全灰化并，使完全灰化并至恒重至恒重炽灼残渣：炽灼残渣：炭化后残炭化后残余物中加硫酸湿润，余物中加硫酸湿润，于于700-800炽灼，使炽灼，使完全灰化并至恒重完全灰化并至恒重1.通则：按照中国药典附录的有关规定，对该类通则：按照中国药典附录的有关规定，对该类剂型所规定的参数进行检查。剂型所规定的参数进行检查。3.重金属及砷盐重金属及砷盐4.农药残留量的检查农药残留量的检查5.毒性药味的限量检查毒性药味的限量检查6.其它物质的检查其它物质的检查1).中药新制剂中原药材是寄生性植物，而寄主较
21、为广泛中药新制剂中原药材是寄生性植物，而寄主较为广泛2).乙醇中甲醇的检查，内服酒剂应检查甲醇乙醇中甲醇的检查，内服酒剂应检查甲醇3).卫生学检查卫生学检查4).中药复方制剂中所用原料（有效部位、有效成分）或半中药复方制剂中所用原料（有效部位、有效成分）或半成品，在提取分离、精致纯化过程中有可能引入有害的有成品，在提取分离、精致纯化过程中有可能引入有害的有机溶剂或树脂残留物，应进行有机溶剂残留量或树脂残留机溶剂或树脂残留物，应进行有机溶剂残留量或树脂残留物的检查。物的检查。（七）浸出物（七）浸出物（八）含量测定（八）含量测定1.指标的选择指标的选择 有效成分有效成分生理活性显著生理活性显著与复
22、方或单方制剂与复方或单方制剂功能主治作用一致功能主治作用一致具代表性具代表性 指标成分指标成分 （或特征性成分）（或特征性成分）有生理活性有生理活性 与某方某药具专属性与某方某药具专属性1.3 大类成分清楚大类成分清楚-有效部位或有效部位群有效部位或有效部位群（总黄酮、总生物碱、总皂苷、总香豆素、总多糖、总鞣质等）（总黄酮、总生物碱、总皂苷、总香豆素、总多糖、总鞣质等）天然产物化学基础研究天然产物化学基础研究1.2 有效成分或指标性成分有效成分或指标性成分1.1 药味：主药（君药、臣药，贵重药、有毒药物）药味：主药（君药、臣药，贵重药、有毒药物）1.4所测成分应归属于某一单一药味，如成药中含有
23、两种以上所测成分应归属于某一单一药味，如成药中含有两种以上药味具相同成分或同系物，最好不选择此指标。但如处于君药味具相同成分或同系物，最好不选择此指标。但如处于君药地位，或其它指标难于选择，也可测定其总含量，但同时药地位，或其它指标难于选择，也可测定其总含量，但同时须分别测定药材原料所含该成分的含量，并规定限量。须分别测定药材原料所含该成分的含量，并规定限量。黄连黄柏枳实枳壳小檗碱橙皮苷川芎当归阿魏酸1.8中西药结合的制剂一般不提倡，除非经拆方实验，中西药结合的制剂一般不提倡，除非经拆方实验，药效学证实复方制剂优于单独中药或西药，此药才能药效学证实复方制剂优于单独中药或西药，此药才能成立。需对
24、中药君药和西药进行含量测定。成立。需对中药君药和西药进行含量测定。1.5 对于因药材原料产地和等级不同而含量差异较大对于因药材原料产地和等级不同而含量差异较大的成分，需注意检测指标的选定和产地的限定。的成分，需注意检测指标的选定和产地的限定。1.6含量过低的成分较难真正体现成药的内在质量。含量过低的成分较难真正体现成药的内在质量。1.7检测成分应尽可能与功能主治相近。检测成分应尽可能与功能主治相近。1.9复方制剂由于某些药味基础工作薄弱，测定干扰难复方制剂由于某些药味基础工作薄弱，测定干扰难以克服或含量极低，无法进行某些含量测定的，可选以克服或含量极低，无法进行某些含量测定的，可选择适宜的溶剂
25、进行浸出物测定。择适宜的溶剂进行浸出物测定。2.2.含量测定方法的选择含量测定方法的选择分光光度法分光光度法薄层扫描法薄层扫描法气相色谱法气相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法1931446中国药典中国药典2000年版一部年版一部*中药成方及单味制剂中药成方及单味制剂(个）个）*（1）分类）分类硅胶色谱法（正向色谱法）硅胶色谱法（正向色谱法）化学健合相色谱法化学健合相色谱法：C18（ODS）反相系统反相系统离子交换色谱法离子交换色谱法凝胶色谱法凝胶色谱法高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC法）法）2.对照品对照品AU0.000.100.200.300.40Minutes2.004.
26、006.008.0010.00AU0.000.050.100.150.20nm200.00250.00300.00350.00253.9366.2COOCHOHOOHOHOO101234567891a4a6a9a4b9by=1E+07x-102931R2=0.99940200000040000006000000800000010000000120000001400000000.20.40.60.811.23.定量方法定量方法*内标法*外标法：4.研究新药的研究新药的HPLC步骤步骤4.1文献资料查询4.2色谱柱4.3流动相4.4尽可能用流动相配制供试品溶液，以避免出现溶剂峰4.5一般要尽可能用
27、紫外检测器4.6应尽可能采用常温分离；如常温效果差，才考虑升高温度。4.7考察色谱柱的最小理论塔板数、分离度、重复性和拖尾因子系统适用性实验系统适用性实验理论塔板数理论塔板数(n)=5.54(tR/Wh/2)2分离度分离度(R)=2(tR2-tR1)/(W1+W2)R 1.5重复性：对照品峰面积重复性：对照品峰面积RSD2.0%脱尾因子（脱尾因子（T）=W0.05h/2d1 T(0.95-1.05)3.含量测定的方法学考察含量测定的方法学考察*标准曲线的制备 对照品溶液的配制、标准曲线方程、线性范围、相关系数*样品供试品溶液的制备 提取方法、提取溶剂、溶剂用量、提取时间、精致纯化除杂方法*精密
28、度实验*重现性实验*稳定性实验*加样回收率实验 加样回收率（%）=（测得量-样品中含量）/添加标准品量*100%4.样品的含量测定5.含量限度的制定九九.中药新药质量标准用对照品研究的技术要求中药新药质量标准用对照品研究的技术要求1.1.化学对照品：化学对照品：来源，确证，纯度，含量，稳定性，包装与贮藏1.有效成分的确定有效成分的确定蒲公英是常用清热解毒药，自古以来均用来治疗疮、疥、疔、痈，临床上用于呼吸道、消化道、泌尿系、妇科及外科的各种急慢性感染。可以认为抗菌活性能代表它的主要药理作用，因此对蒲公英进行了抗菌活性实验。为了寻找抗菌有效成分，从碱地蒲公英中分离到得量较多的五个化合物，进行抗菌
29、活性实验。本实验证明了绿原酸和咖啡酸的抗菌活性。蒲公英的主要药理作用为广谱抗菌作用。因此,绿原酸和咖啡酸是中药蒲公英抗菌的主要有效成分，可作为药材质量标准定量用对照品。例例4 4 蒲公英药材对照品的研究蒲公英药材对照品的研究2.研究和提出蒲公英的对照品研究和提出蒲公英的对照品（1）对照品的结构及确定结构的图谱和数据）对照品的结构及确定结构的图谱和数据 咖啡酸结构解析 绿原酸结构解析 HOHOCCCOOHHH HOOCOOCCH=CHHHHHOHOHOHHHHOHOH 蒲公英甾醇乙酸酯结构解析（2）对照品专属性）对照品专属性 通过对蒲公英化学成分的研究，分离并鉴定出30个化合物。根据中医药的理论
30、和临床应用，采用现代药理学的方法，经过科学试验，确定咖啡酸和绿原酸是蒲公英的主要有效成分，可作为蒲公英质量确定咖啡酸和绿原酸是蒲公英的主要有效成分，可作为蒲公英质量标准定量用的对照品标准定量用的对照品。这两个化合物是首次从蒲公英中分离得到的，但不是蒲公英的专属性成分，其它一些药材也含有咖啡酸或绿原酸，但二者同时存在于药材中的为数就不多。如果把从蒲公英分离到的蒲公英甾醇乙酸酯三种化学成分在一起，就可以组成蒲公英专属性组分。通过文献查阅和系统检索，只有蒲公英一种植物同时存在上述三种化学成分，即绿原酸、咖啡酸和蒲公英甾醇乙酸酯。其它植物目前尚未发现有三种化学成分同时存在的报道。我们暂定这三种三种成分
31、的组合作为蒲公英的专属性成分成分的组合作为蒲公英的专属性成分。本课题组按要求提供蒲公英定量用对照品咖啡酸0.6g，纯度近100%。由于2000年版药典只收载绿原酸为含测指标，因此无需提供绿原酸对照品。此外，还提供蒲公英鉴别用专属性“成分组合”咖啡酸及蒲公英甾醇乙酸酯各0.2g。纯度在90%。（3）对照品及专属性成分组合制备工艺）对照品及专属性成分组合制备工艺（4）对照品纯度及检测方法）对照品纯度及检测方法 咖啡酸及绿原酸纯度测定咖啡酸及绿原酸纯度测定高压液相法高压液相法 蒲公英甾醇乙酸酯纯度测定蒲公英甾醇乙酸酯纯度测定薄层扫描法（由于专属性成分组合供蒲公英TLC鉴别用，故纯度检测采用薄层扫描法。）2.2.对照药材对照药材：品种鉴定，质量，均匀性，稳定性，包装与贮藏3.3.对照品使用说明对照品使用说明谢谢大家！谢谢大家！
