1、维生素维生素C C注射剂的含量分析注射剂的含量分析钱莺钱莺 沈红霞沈红霞 杨优杨优 郎旭东郎旭东 王勇王勇 实验目的实验目的 根据含量分析，从自主设计的处方中，选出最佳处根据含量分析，从自主设计的处方中，选出最佳处方。方。维生素维生素C C注射液注射液检查检查 PHPH值值:应为应为5.0-7.0 5.0-7.0 颜色颜色:取本品取本品,加水稀释成每加水稀释成每1ml1ml中含维生素中含维生素C50mgC50mg的溶的溶液液,照紫外可见分光光度法照紫外可见分光光度法,在在420nm420nm的波的波 长初测定吸长初测定吸光度光度,不得过不得过0.06.0.06.细菌内毒素细菌内毒素:取本品取本
2、品,依法检查依法检查,每每1mL1mL中含内毒素应小中含内毒素应小于于2.5EU.2.5EU.装量装量 装量差异装量差异 可见异物可见异物 不溶性微粒不溶性微粒 无菌无菌 含量分析方法简介含量分析方法简介 碘量法碘量法 2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 菲林菲林B B近红外分光光度法近红外分光光度法 紫外分光光度法紫外分光光度法 旋光法旋光法 双波长薄层扫描法双波长薄层扫描法*HPLCHPLC法法*实验采用方法 碘量法碘量法 实验方法实验方法 精密称取注射剂适量，加水精密称取注射剂适量，加水50ml50ml稀释至稀释至4mg/mL4mg/mL与丙与丙酮酮2ml,2ml,摇匀摇匀,放
3、置放置5min,5min,加稀醋酸加稀醋酸4ml4ml与与 淀粉指示液淀粉指示液1ml,1ml,用碘滴定液用碘滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定滴定,至溶液显蓝色并至溶液显蓝色并持续持续3030秒不褪色秒不褪色.每每1ml1ml碘滴定碘滴定(0.05mol/L)(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg8.806mg的维生素的维生素C C。2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 实验方法实验方法 精密量取注射液适量（约相当于维生素精密量取注射液适量（约相当于维生素C50mgC50mg），），置于置于100mL100mL容量瓶中，加偏磷酸容量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液醋酸试
4、液20mL20mL，用水，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于维生素维生素C2mgC2mg）置）置50mL50mL锥形瓶中，加加偏磷酸锥形瓶中，加加偏磷酸-醋酸试醋酸试液液5mL5mL，用，用2 2，6-6-二氯靛酚滴定液滴定，至溶液现玫瑰二氯靛酚滴定液滴定，至溶液现玫瑰红色，并持续红色，并持续5S5S不褪；另取偏磷酸不褪；另取偏磷酸-醋酸试液醋酸试液5.5mL5.5mL，加水加水15mL15mL，用，用2 2，6-6-二氯靛酚滴定液滴定，作空白试二氯靛酚滴定液滴定，作空白试验校正。以验校正。以2 2，6-6-二氯靛酚滴定液浓度体积以
5、及相应二氯靛酚滴定液浓度体积以及相应维生素维生素C C滴定度计算。滴定度计算。实验方法实验方法 取两支取两支10 mL10 mL具塞比色管，其中一支加入适量的维生具塞比色管，其中一支加入适量的维生素素C C注射剂注射剂(在稀释后浓度小于在稀释后浓度小于50 mg50 mgL)L)，另一支不另一支不加；然后分别依次加入加；然后分别依次加入2 mL2 mL的的Folin BFolin B试剂，用试剂，用pH3pH3三三氯乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，反应氯乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，反应5 min5 min后，以试后，以试剂空白为参比，使用剂空白为参比，使用l cml cm玻璃吸收池在玻璃吸收池在920
6、 nm920 nm波长处波长处测定吸光度测定吸光度A A值。平行测量值。平行测量3 3次，取平均值。次，取平均值。菲林菲林B B近红外分光光度法近红外分光光度法 菲林菲林B B近红外分光光度法近红外分光光度法 标准曲线制备标准曲线制备 分别准确配制浓度为分别准确配制浓度为0-50.0 mg/L0-50.0 mg/L的维生素的维生素C C系列标准工系列标准工作液，按上述实验方法测定吸光度作液，按上述实验方法测定吸光度 。线性回归做标准曲线。线性回归做标准曲线。根据标准曲线求出维生素根据标准曲线求出维生素C C含量。含量。紫外分光光度法紫外分光光度法 实验方法实验方法 在在10mL10mL比色管中
7、依次加入比色管中依次加入pH=9.5pH=9.5醋酸一醋酸钠缓冲溶醋酸一醋酸钠缓冲溶液液2mL2mL，1 106g/mL06g/mL甲基紫甲基紫2mL2mL；在其中一个比色管；在其中一个比色管中加人一定量的维生素中加人一定量的维生素C C注射液注射液(在稀释后浓度小于在稀释后浓度小于50 50 mgmgL L)，在另一个比色管中不加维生素，在另一个比色管中不加维生素C C注射液；用注射液；用二次蒸馏水定容，摇匀。用水作空白，二次蒸馏水定容，摇匀。用水作空白，1cm 1cm 比色皿于比色皿于265nm 265nm 处，测定吸光度处，测定吸光度 。紫外分光光度法紫外分光光度法 标准曲线制备标准曲线
8、制备 分别准确配制浓度为分别准确配制浓度为0-50.0 mg/L0-50.0 mg/L的维生素的维生素C C系列标准系列标准工作液，按上述实验方法测定吸光度工作液，按上述实验方法测定吸光度 。线性回归做标准曲线。线性回归做标准曲线。根据标准曲线求出维生素根据标准曲线求出维生素C C含量。含量。旋光法旋光法 旋光度与浓度的关系旋光度与浓度的关系 精密称取精密称取105 105 干燥恒重的维生素干燥恒重的维生素C C对照品对照品0.4931g0.4931g，0.7995g0.7995g，1.0184g1.0184g，1.2503g1.2503g，1.5551g1.5551g，2.0261 g2.0
9、261 g，分别置分别置50mL50mL容量瓶中，用容量瓶中，用5 5碳酸氢钠溶液稀释至刻碳酸氢钠溶液稀释至刻度，度，以以5 5 碳酸氢钠溶液为空白，依法测定它们的碳酸氢钠溶液为空白，依法测定它们的旋光度，旋光度，以旋光度对浓度作线性回归。以旋光度对浓度作线性回归。旋光法旋光法 实验方法实验方法 量取维生素量取维生素C C注射液适量，用注射液适量，用5 5碳酸氢钠溶液将样品碳酸氢钠溶液将样品稀释成浓度为稀释成浓度为25 mg/mL25 mg/mL，按上述方法进行测定，按上述方法进行测定，每每个样品测定个样品测定3 3次，代入直线回归方程。计算出含量。次，代入直线回归方程。计算出含量。双波长薄层
10、扫描法双波长薄层扫描法 实验方法实验方法 对照品溶液的制备：取维生素对照品溶液的制备：取维生素C C对照品对照品30mg30mg置置10mL10mL容容量瓶中，加入量瓶中，加入9595 乙醇溶液适量，溶解后用乙醇溶液适量，溶解后用9595乙乙醇稀释至刻度。醇稀释至刻度。扫描条件的确定：双波长反射法锯齿扫描：扫描条件的确定：双波长反射法锯齿扫描：s s254nm254nm，R R320nm320nm，SX=3SX=3。线性关系考察线性关系考察:用微量进样器吸取对照品溶液用微量进样器吸取对照品溶液2.02.0，3.03.0，4.04.0，5.05.0，6.0 L6.0 L点样，展开缸中暗处饱和点样
11、，展开缸中暗处饱和1515分钟，再将点样品的一端浸入展开剂分钟，再将点样品的一端浸入展开剂(氯仿一乙醇一氯仿一乙醇一冰醋酸一水冰醋酸一水=54=54：2727：1010：5)5)中展开，展开约中展开，展开约10cm10cm，取出薄层板，扫描。以对照品质量为横坐标，峰面积取出薄层板，扫描。以对照品质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行直线回归。积分值为纵坐标，进行直线回归。双波长薄层扫描法双波长薄层扫描法 样品的含量测定样品的含量测定 量取维生素量取维生素C C注射液加入注射液加入9595乙醇稀释至乙醇稀释至3mg/mL3mg/mL至刻度，至刻度，振摇，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶
12、振摇，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液液4.0 L 4.0 L，维生素，维生素C C对照品溶液对照品溶液3.0 L 3.0 L，5.0 L 5.0 L，分别点于同一薄层板上，依法展开，扫描，用外标二分别点于同一薄层板上，依法展开，扫描，用外标二点法测定样品中维生素点法测定样品中维生素C C的含量。的含量。HPLCHPLC法法 色谱条件色谱条件 色谱柱：色谱柱：6-mm 6-mm 150-mm 150-mm；流动相：溶解流动相：溶解15.6g15.6g磷酸氢二钠和磷酸氢二钠和12.2 g 12.2 g 磷酸氢二钾磷酸氢二钾于于 2000 mL 2000 mL 水中水中,用磷酸调用磷酸调
13、 到到 2.5 2.5 0.05 0.05；检测波长：检测波长：245-nm 245-nm；流速：流速：1 mL1 mLminmin-1-1;进样量：进样量：20L;20L;HPLCHPLC法法 保留时间确定：用流动相配制维生素保留时间确定：用流动相配制维生素C C标准品浓度为标准品浓度为0.5mg/mL0.5mg/mL定位；定位；有关物质检测：用流动相配制空白辅料溶液，检测有关物质检测：用流动相配制空白辅料溶液，检测辅料是否有干扰；辅料是否有干扰；处方样品测定：用流动相稀释处方注射液到处方样品测定：用流动相稀释处方注射液到0.5mg/mL0.5mg/mL，每次进样，每次进样20L20L，每个
14、处方取样，每个处方取样3 3份，每份，每份进份进6 6针。针。根据回归方程计算含量根据回归方程计算含量 HPLCHPLC法法 标准曲线制备标准曲线制备 取维生素取维生素C C标准品约标准品约221mg221mg，精密称定，置，精密称定，置50mL50mL量瓶中，量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密量取储备液适量，用流动相稀释成每别精密量取储备液适量，用流动相稀释成每1mL1mL含含0.260.260.70 m g0.70 m g的递度标准液，用上述的色谱条件测的递度标准液，用上述的色谱条件测定。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐
15、标，得回归方定。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程。程。(n=6)(n=6)参考文献参考文献李 艳等，旋光法测定维生素c注射液的含量，辽 宁 药 物 与临 床，1999，2(2);11杨婷等.菲林B近红外分光光度法测定维生素C.分析化学研究简报.2005.11(33).1593-1595陆 茜 等，紫外分光光度法测定维生素C含量，江汉大学学报(自然科学版)，2005，33(2),仉玲等，紫外分光光度法测定维生素C注射剂的含量，安徽医药，2001,S(4)肖本富等,高效液相色谱法测定血浆中维生素C的含量苏州大学学报(医学版)2004；24(6)杨辉等,双波长薄层扫描法测定维生素C的含量
16、锦州l矗学院学报，2006，27(3)胡晓艳.HPLC测定力度申泡腾片中维生素C的含量.广东药学.2005.15(1);8-10谭甜有,钟世顺,李丽明.HPLC测定健元片中维生素C含量的方法研究.国际医药卫生导报.2006.12(12):107-109贾湘曼等.分光光度法测定抗坏血酸中草酸盐含量.河北医药.2005.27(9):703-704张元广.维生素C片剂的紫外分光光度法测定.2002.8(3):26-27徐黔江等.间接分光光度法测定抗坏血酸含量.贵阳医学院学报.2001.26(2).129-130国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社,2005 年,二部:670王迎春等.薄层扫描法测定维生素C片剂中维生素C的含量.数理医药学杂志.2001.14(5).166黄胜堂等.片剂中维生素C含量的差示旋光法测定.咸宁医学院学报.1998.12(3).180-182刘文英.药物分析.人民卫生出版社.1980.226-229USP29NF24 Page 194 谢谢。谢谢。
