1、实验实验11 11 培养基的制备培养基的制备一、实验目的n 了解培养基配制原理，学习并掌握培养基制备方法。第1页，共22页。二、实验原理n1.培养基的概念n是根据微生物满足生长的营养需求，人工配制的混合营养基质。n 必需的养分n 适合的环境n不同类的微生物因生理类型不同而表现出不同的营养需求所以不同类的微生物一般采用不同的培养基。n牛肉膏蛋白胨培养基细菌专用n马铃薯糖培养基真菌专用n高氏一号培养基放线菌专用第2页，共22页。2.培养基的分类n（1）按存在的物理状态分 液体培养基（不含凝固剂）半固体培养基（凝固剂琼脂含0.2-0.5%）固体培养基（凝固剂琼脂含1.5-2.0%）。n（2）按照培养
2、基的用途差异分 基础培养基：加富培养基：选择培养基：鉴别培养基第3页，共22页。（3）按组成成分分）按组成成分分n天然培养基天然培养基n合成培养基合成培养基n半合成培养基半合成培养基n琼脂的特性琼脂的特性：成分是多缩半乳糖，绝大多数微生物不成分是多缩半乳糖，绝大多数微生物不能分解利用。能分解利用。96溶解，溶解，45凝固对微生物生长没有凝固对微生物生长没有毒害作用毒害作用n培养基的作用培养基的作用：微生物微生物分离、培养、增殖、保藏分离、培养、增殖、保藏及鉴定及鉴定。第4页，共22页。3.培养基配制原则n选择适宜的营养物质n营养物质浓度及配比合适n控制pH条件n控制氧化还原电位n原料来源的选择
3、n根据培养目的不同调配n灭菌处理第5页，共22页。4.配制培养基的步骤 原料称量、溶解 pH 分装 塞棉塞 包扎 灭菌第6页，共22页。四、作业n2人1组n配制阿须贝培养基2000ml（全班），每组用250ml三角瓶装120ml左右；n装9ml蒸馏水3支 第7页，共22页。实验实验12 12 灭菌和消毒灭菌和消毒 一、实验目的n学习微生物实验的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭菌吸管的准备、无菌水的准备、培养基平板和斜面的准备等），为后续实验做准备。n了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌的方法第8页，共22页。二、实验原理二、实验原理 灭菌灭菌是应用理化方法杀灭物体
4、上是应用理化方法杀灭物体上所有所有微生物微生物 消毒消毒是应用理化方法杀灭物体上是应用理化方法杀灭物体上部分部分微生物微生物（主要是病原微生物）（主要是病原微生物）。三三、灭菌的常用方法灭菌的常用方法 物理法：物理法：高温灭菌高温灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌、紫外线灭菌、过滤除菌 化学法：化学药剂杀菌化学法：化学药剂杀菌第9页，共22页。高温灭菌高温灭菌干热灭菌(dry heat sterilization)n1.火焰灭菌：酒精灯、接种环n2.干燥热空气箱灭菌：干燥热空气箱160-170,2小时（利用热空气灭菌)n适用范围：金属器皿、玻璃器皿第10页，共22页。湿热灭菌(moist heat s
5、terilization)利用饱和热蒸汽灭菌。高压蒸汽灭菌锅采用高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌的一种。利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升以达到高温灭菌目的的方法na 方法：一般121（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。nb 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。nc 注意事项：灭菌开始排净冷空气；灭菌终了，自然缓慢降压回零；灭菌结束，趁热取出物品。第11页，共22页。四四、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌操作步骤操作步骤n(1)灭菌前的准备灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，将内桶放入。入适量的水，将内桶放入。n(2)
6、装放待灭菌物品装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以锅盖，以两两对称两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。n(3)加热排气加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，维持出时，维持3-5min，锅内空气排尽，关上排气阀。，锅内空气排尽，关上排气阀。n(4)升温保压升温保压：压力为压力为1.05kg/cm2,121.3,20-30minn(5)出锅出锅；隔断热源，自然降温，；隔断热源，自然降温，待压力表指针回到零待压力表指针回到零，打开排，打开排气阀，稍等一些时间，
7、再开盖取物。气阀，稍等一些时间，再开盖取物。第12页，共22页。实验实验13 13 微生物的纯系分离微生物的纯系分离 n1 了解土壤微生物的了解土壤微生物的分离纯化及测数分离纯化及测数的的基本原理。基本原理。n2 学习并掌握学习并掌握微生物微生物分离纯化分离纯化技术方法技术方法。n3 学习并掌握学习并掌握微生物平板菌落微生物平板菌落计数的技计数的技术方法术方法。第13页，共22页。二基本原理 土壤是微生物生活的大本营，其中含土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行的方法将各类微生物通过分离进行纯培纯培养养
8、，并能对特定类群进行数量测定。基，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过本原理是通过稀释稀释使菌体细胞充分分散，使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成单细胞得以生长发育形成菌落菌落，可使用，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。样品含有微生物的数量。第14页，共22页。第15页，共22页。三、实验步骤三、实验步骤土壤样品采集 在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样，若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0-20cm，先除
9、去表土1-2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。第16页，共22页。好气性细菌的分离纯化及测数n1.制备土样稀释液n2培养基的准备n3倾注法接种n4保温培养n5分区划线法纯化n6计数第17页，共22页。1 制备土样稀释液n吹吸三次混匀，无菌操作第18页，共22页。2 2 培养基的准备培养基的准备 融化阿须贝培养基，融化后保温在融化阿须贝培养基，融化后保温在4848。并取。并取3 3个无菌培个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明养皿，分别在皿底贴好标签，注明1010-2-2、1010-3-3、1010-4-4。3 3 倾注法接种倾注法接种 先按先按1010-4-4 、1010-3-
10、3 、1010-2-2 的顺序将不同稀释度菌悬液的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中（每个平皿接入接入对应平皿中（每个平皿接入1ml1ml），再向每个平皿倾），再向每个平皿倾注约注约15 ml15 ml的阿须贝培养基（的阿须贝培养基（5050）待冷凝，混合均匀。）待冷凝，混合均匀。4 4 保温培养保温培养 将已经接种的平皿静置将已经接种的平皿静置10min10min后，放入温箱倒置培养后，放入温箱倒置培养7 7日日（3030），观察结果。），观察结果。第19页，共22页。5 菌种纯化n平板划线分离，其划线方法有以下两种：分段划线 连续划线第20页，共22页。第21页，共22页。6 计数：要求30300之间计数。作业：作业：P 10-12P 10-12下次实验：下次实验：14-1514-15第22页，共22页。
