1、脊肌萎缩症 All rights reserved大纲n遗传病理学n临床特征n实验室诊断nMLPA技术n脊肌萎缩症（SMA）是一组常见的常染色体隐性遗传病，以脊髓前角运动神经元（部分为脑干运动神经核）退行性变而导致的进行性、对称性肌萎缩和肌张力减低为特征。nSMA是一组儿童期仅次于DMD，居第二位的常见神经肌肉疾病，其新生儿发病率为1/6,0001/10,000，人群携带者频率约为1/401/60。也是婴儿期最常见的致死性疾病，居所有致死性常染色体隐性遗传病的第二位。遗传病理学n根据发病年龄和进程可将SMA分为四种类型：婴儿型（SMA型），中间型（SMA型），少年型（SMA型）和成年型（SMA
2、型），约占全部近端性脊肌萎缩症的48.8%。nSMN基因有2个拷贝，即靠近端粒的SMN1（又称SMNT）和靠近着丝粒的SMN2（又称SMNC）。一般正常人的两条5号染色体上都有2个同源性很高的SMN1和SMN2基因。少数正常人只有SMN1基因，而无SMN2基因。nSMN1是SMA的主要功能基因，SMN2在同一染色体上可有多份拷贝，携有多份SMN2拷贝的病人的病情常较轻。nSMN基因长度为20kb，含有9个外显子。大约95%以上的SMA患者为SMN1基因7和8号外显子同时缺失的纯合子，或单纯的7号外显子的纯合缺失；另外约5%的SMA患者存在SMN1的点突变。大约96%SMA携带者有一个SMN1基
3、因；正常人群中有约5%存在SMN2的纯合缺失。另外，大量数据表明，SMN2的拷贝数量在修饰SMA表型方面发挥着重要作用，可部分补偿SMN1的缺失。n其他修饰基因有NAIP基因和BTF-p44基因。在50%的型患者、18%的型和型患者中有NAIP的纯合缺失；在73%的型患者、7%的型和型患者中有BTF-p44的纯合缺失。在SMA基因缺失分析中，发现NAIP和BTF-p44基因的缺失并非产生SMA的必要条件，但它们与疾病的严重程度和临床分型有密切关系。SMA不同基因型组合NormalallelesSMAalleles单独的SMN2缺失不致病，但其拷贝数对SMA表型有修饰作用。SMN1、SMN2的缺
4、失组合可有以下四种情况:SMN1和SMN2均缺失；SMN1缺失，存留一个SMN2拷贝；没有SMN2拷贝，SMN1基因转换为SMN2；原有一个SMN2拷贝，加上SMN1基因转换为SMN2，形成两个SMN2基因。n多数SMA 患者的基因型为图中1或2所示的缺失纯合子，SMA 、的基因型为图中3或4的纯合子或双重杂合子。无症状SMA基因携带者，只有一个SMN1拷贝，同时带有0-4个SMN2拷贝。临床特征n主要为躯干及四肢肌肉无力、肌张力低。肌无力呈对称性，下肢明显重于上肢，远端重于近端。腱反射减弱到消失，面部肌肉不受累。肌跳不明显。深浅感觉正常，无智能及括约肌障碍。n儿童期的SMA分3型：SMA型（
5、婴儿重型），患儿出生后6个月内发病，全身性严重肌无力及肌张力减低，无倚托不能坐，常在2岁前死于呼吸肌麻痹、肺部感染。nSMA型（中间型），通常在出生后618个月发病，患儿可独坐，但不能无扶助站立，其生存时间依赖于呼吸肌受累麻痹的程度。nSMA型（慢性型），多于出生18个月后发病，多数仅表现有肌力弱，可以保持独立行走，病情进展缓慢，可活至成年。nSMA型（成年型），一般于30岁以后发病，其寿命和运动能力可正常，一般为良性过程。实验室诊断n一般实验室检查n1.血清肌酸磷酸激酶(CK)测定 血清CK是该病常用的辅助诊断指标。型患者此项指标趋于正常，但其他类型的患者会有一定程度的升高。n2.电生理检查
6、 包括神经传导速度(NCV)和肌电图(EMG)的检测 电生理检查NCV示运动传导速度可减慢，在型减慢，而其他类型正常;感觉传导速度正常。在肌肉失神经支配的情况下，肌电图检查可出现特征性肌肉“自发”收缩，纤颤和束颤。n3.肌肉活体组织检查 肌肉活体组织检查对确诊SMA具有重要意义，其病理表现特征是具有失神经和神经再支配现象。肌肉活检可见成束的肌纤维萎缩，期间散在少数的肥大纤维。n基因检测n1.PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）该方法灵敏度高，且准确快速，可区分SMN1和SMN2，并判断是否存在这两个外显子的缺失。n2.定量PCR 可检测SMA患者的SMN1和SMN2基因拷贝数，
7、能检出SMA携带者，结果也有助于了解患者的预后。采用定量PCR法先确定SMN1基因无缺失后，进一步结合PCR-SSCP可检测出大多数SMN1基因点突变。n3.DHPLC 可用于携带者筛查n4.MLPAnMLPA法是一种半定量检测缺失基因的方法，该方法可同时检测多个缺失、重复或点突变。n试剂盒：SALSA MLPA kit P021-A2 SMAn该试剂盒中含有位于5q11.2-13.3的SMN、NAIP、BTFp44基因的多对探针，此外，该区域以外的多条探针被用来作为参照。可同时检测SMN1第7、8号外显子、SMN2第7、8号外显子的专一序列，以及SMN1及2第1、4、6及8外显子内的相同序列
8、。另外，同时也可检测SMN基因上下游附近的8个区域及位于其他染色体上的22个对照区。n5.其他检测方法 应用PCR限制性内切酶方法，进行SMN基因外显子7、8的缺失检测，可快速诊断儿童型SMA。此外PCR-SSCP分析、单体型连锁分析法也是诊断SMA的有效方法，三者联合使用可相互验证，互为补充，提高产前基因诊断的准确率。n2014.4-2015.9 SMA样本统计normalSMN1 E7、8 hom delnSMN1 E7、8 het delnSMN1 E7 hom delSMN1 E7、8 het dup有文献报道，在中国正常人群中检测到3个SMN1拷贝数的比例为2.4-3.0%。MLPA技术原理及反应步骤
