1、第二章 蛋白质的结构与功能Structure and Function of Protein生化教研室 陈舒丽protein？含量大含量大 分布广分布广 种类多种类多 功能繁杂功能繁杂 蛋白质的重要性蛋白质的重要性1234 蛋白质的生物活性蛋白质的生物活性催化作用催化作用调节作用调节作用免疫作用免疫作用载体作用载体作用凝血作用凝血作用运动作用运动作用组织更新修复组织更新修复 蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成 1 蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 蛋白质的理化性质及其分离纯化蛋白质的理化性质及其分离纯化 2 3 4第一节蛋白质的分子组成一、蛋白质的元
2、素组成一、蛋白质的元素组成 C、H、O、N（16%）和 S 主要主要 少量少量磷、铁、铜、锌、锰、钴、钼、碘磷、铁、铜、锌、锰、钴、钼、碘蛋白质的含氮量平均为蛋白质的含氮量平均为16 样品中蛋白质的含量样品中蛋白质的含量 (g)(g)=样品含氮量样品含氮量 6.251/16%问题问题1 1样品中蛋白质含量的测定？样品中蛋白质含量的测定？二、二、氨基酸氨基酸（amino acid）氨基酸是蛋白质的基本组成单位氨基酸是蛋白质的基本组成单位自然界自然界300300余种余种人体人体编码编码AAAA：2020种种结构结构均属均属L-L-氨基酸氨基酸甘氨酸除外甘氨酸除外NH2HRCOOHC氨基酸的一般结构
3、（氨基酸的一般结构（L-氨基酸）氨基酸）中心中心碳原子碳原子羧基羧基氨基氨基氢原子氢原子侧链侧链 L-AAL-AA D-AAD-AA 人体人体蛋白质中为蛋白质中为L-L-AA-AA中文名中文名英文名英文名缩写缩写pKapI三字符三字符一字符一字符pK1（-COOH）pK2（-NH3+）pKR（R基）基）甘氨酸glycine Gly G2.349.605.97丙氨酸alanine Ala A2.349.696.01脯氨酸prolinePro P1.9910.966.48缬氨酸valineVal V2.329.625.97亮氨酸leucineLeu L2.369.605.98异亮氨酸isoleuc
4、ineIle I2.369.686.02蛋氨酸methionineMet M2.289.215.74苯丙氨酸phenylalaninePhe F1.839.135.48酪氨酸tyrosineTyr Y2.209.1110.075.66色氨酸tryptophanTrp W2.389.395.89丝氨酸serineSer S2.219.155.68苏氨酸threonineThr T2.119.625.87半胱氨酸cysteineCys C1.9610.288.185.07天冬酰胺asparagineAsn N2.028.805.41谷氨酰胺glutamineGln Q2.179.135.65赖氨酸
5、lysineLys K2.188.9510.539.74组氨酸histidineHis H1.829.176.007.59精氨酸arginineArg R2.179.0412.4810.76天冬氨酸aspartic acidAsp D1.889.603.652.77谷氨酸glutamic acidGlu E2.199.674.253.22（二）氨基酸的分类（二）氨基酸的分类 非极性氨基酸非极性氨基酸 1 2 4 5 不带电荷的极性氨基酸不带电荷的极性氨基酸 带正电荷的碱性氨基酸带正电荷的碱性氨基酸 带负电荷的酸性氨基酸带负电荷的酸性氨基酸 3 芳香族氨基酸芳香族氨基酸非极性疏水性氨基酸非极性疏
6、水性氨基酸不带电荷的极性氨不带电荷的极性氨基酸基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸带正电荷的碱性氨带正电荷的碱性氨基酸基酸酸性氨基酸性氨基酸酸-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3+胱氨酸胱氨酸-HH-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3半胱氨酸半胱氨酸二二 硫硫 键键记忆口诀记忆口诀甘、丙、缬、亮、异，三、四碳烃基甘、丙、缬、亮、异，三、四碳烃基丙、丁羟丝、苏，（半）胱、蛋含有硫丙、丁羟丝、苏，（半
7、）胱、蛋含有硫酸有天冬、谷，碱有精、赖、组酸有天冬、谷，碱有精、赖、组苯、酪、色、脯环，中性天、谷胺苯、酪、色、脯环，中性天、谷胺要点要点编码编码AA 20种种除除G外均为外均为L-型型 P为环状亚为环状亚AA 含羟基含羟基AA：S、T、Y 含硫含硫AA：C、M 芳香芳香AA：F、Y、W 支链支链AA：V、L、I 酸性酸性AA：D、E 碱性碱性AA：R、K、H （三）氨基酸的理化性质（三）氨基酸的理化性质（1 1）两性解离及等电点两性解离及等电点解离程度取决于所处溶液的酸碱度解离程度取决于所处溶液的酸碱度氨基酸是两性电解质氨基酸是两性电解质1 1、物理性质、物理性质:白色晶体，熔点较高，溶白色
8、晶体，熔点较高，溶解度大小不一。解度大小不一。2 2、化学性质、化学性质pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI兼性离子兼性离子 阳离子阳离子阴离子阴离子CHNH2COOHR CHNH2COOHRCHNH3+COO-R CHNH3+COO-RCHNH2COO-R CHNH2COO-RCH COOHRNH3+CH COOHRNH3+等电点等电点(isoelectric point,pI)在某一在某一pH的溶液中，氨基的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的呈电中性。此时溶液的pH值值
9、称称为该氨基酸的为该氨基酸的等电点等电点。2.2.紫外吸收紫外吸收色氨酸、酪氨酸色氨酸、酪氨酸最大吸收峰最大吸收峰 280 280 nmnm，可用于蛋白可用于蛋白质定量分析。质定量分析。3.3.茚三酮反应茚三酮反应 在氨基酸与茚三酮水合物在氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成共热，可生成蓝紫色蓝紫色化合物，化合物，其最大吸收峰在其最大吸收峰在570nm570nm处。处。氨基酸定量分析方法氨基酸定量分析方法肽肽肽键肽键(peptide bond)：一个氨基酸：一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基脱水缩的羧基与另一个氨基酸的氨基脱水缩合而形成的化学键。合而形成的化学键。肽与肽健肽与肽健肽：肽：氨基酸通
10、过氨基酸通过肽键肽键缩合而成的化合物缩合而成的化合物二肽二肽 两分子氨基酸两分子氨基酸三肽三肽 三分子氨基酸三分子氨基酸寡肽寡肽(oligopeptide)：十个以内氨基酸十个以内氨基酸多肽多肽(oligopeptide)：十个氨基酸以上十个氨基酸以上肽：肽：氨基酸通过氨基酸通过肽键肽键缩合而成的化合物缩合而成的化合物NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH-CH-CHOHO OH甘甘氨氨酸酸+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键肽键NH2-CH-C-N-CH-COOHHHHONH2-CH-C-N-CH-COOHHHHO多肽链多肽链(polypeptide
11、chainpolypeptide chain)许多氨许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构基酸之间以肽键连接而成的一种结构氨基酸残基氨基酸残基(residueresidue)肽链中的氨基肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全酸分子因为脱水缩合而基团不全氨基末端（氨基末端（N N末端）末端）自由氨基的一端自由氨基的一端羧基末端（羧基末端（C C末端）末端）自由羧基的一端自由羧基的一端 丝氨酰丝氨酰 -甘氨酰甘氨酰 -酪氨酰酪氨酰 -丙氨酰丙氨酰 -亮氨酸亮氨酸 (ser-gly-tyr-ala-leu)(ser-gly-tyr-ala-leu)肽链书写肽链书写先写骨架先写骨架N NC CC C
12、再写再写氨羧两末端氨羧两末端然后配平然后配平酰胺键酰胺键最后才是最后才是侧链上侧链上肽键肽键(C-N)(C-N)具有部分双键的性质具有部分双键的性质肽单元肽单元（peptide unit）肽键中肽键中4 4个原子个原子C C、O O、N N、H H和与之相邻的和与之相邻的 C C 1 1、C C 2 2位位于同一平面于同一平面顺式肽单元顺式肽单元反式肽单元反式肽单元（二）天然存在的活性肽（二）天然存在的活性肽谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione,GSH)肽类激素及神经肽肽类激素及神经肽抗生素肽抗生素肽谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione,GSH)还原剂还原剂清除清除H2O2结合有害物质
13、结合有害物质GSH生物活性生物活性GSH过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶还原酶NADPH+H+NADP+肽类激素肽类激素促甲状腺素释放激素促甲状腺素释放激素 (TRH)第二节蛋白质的分子结构蛋白质的结构层次图蛋白质的结构层次图分子结构分子结构 一级结构一级结构（基本结构）（基本结构）高级结构高级结构（空间结构）（空间结构）三级结构三级结构四级结构四级结构-螺旋螺旋-折叠折叠-转角转角不规则卷曲不规则卷曲二级结构二级结构蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构(primary structure)肽链中氨基酸的排列顺序肽链中氨基酸的排列顺序,包括包括氨基酸的种类、
14、数量及比例。氨基酸的种类、数量及比例。定义定义主要化学键主要化学键肽键肽键 有些蛋白质有有些蛋白质有二硫键二硫键牛胰核糖核酸酶的一级结构牛胰核糖核酸酶的一级结构二硫二硫键键牛胰岛素的一级结构牛胰岛素的一级结构蛋白质的二级结构蛋白质的二级结构(secondary structure)蛋白质分子中多肽链蛋白质分子中多肽链主链主链骨架骨架原子的局部空原子的局部空间排列，不涉及氨基酸残基侧链的构象。间排列，不涉及氨基酸残基侧链的构象。定义定义主要化学键主要化学键氢键氢键-折叠折叠-转角转角无规卷曲无规卷曲-螺旋螺旋蛋白质二级结构蛋白质二级结构的主要形式的主要形式-螺旋螺旋要点要点1一圈一圈3.6个氨基
15、酸残基，螺距个氨基酸残基，螺距0.54nm 2螺旋稳定靠氢键，与螺旋长轴平行螺旋稳定靠氢键，与螺旋长轴平行呈右手螺旋呈右手螺旋侧链影响螺旋的形成和稳定侧链影响螺旋的形成和稳定34要点要点1顺向平行和反向平行两种构象顺向平行和反向平行两种构象2呈伸展、锯齿状结构呈伸展、锯齿状结构折叠的稳定靠氢键折叠的稳定靠氢键34侧链影响折叠的形成和稳定侧链影响折叠的形成和稳定-折叠折叠(反平行反平行)-折叠折叠(平行平行)（三）（三）-转角转角无规卷曲无规卷曲 没有确定规律性的部分肽没有确定规律性的部分肽链构象。链构象。超二级结构（模体超二级结构（模体motif）多肽链内顺序上相互邻近的多肽链内顺序上相互邻近
16、的二级结构常常在空间折叠中二级结构常常在空间折叠中靠近，彼此相互作用，形成靠近，彼此相互作用，形成规则的二级结构聚集体。规则的二级结构聚集体。基本形式基本形式1-折叠组合（折叠组合（）2-螺旋组合（螺旋组合（）-螺旋螺旋-折叠组合（折叠组合（）3钙结合蛋白钙结合蛋白锌指结构锌指结构蛋白质的三级结构蛋白质的三级结构(tertiary structure)整条肽链中全部氨基酸残基的相对空整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中间位置。即肽链中所有原子所有原子在三维空在三维空间的整体排布。间的整体排布。定义定义结构域结构域(domain)蛋白质形成三级结构时，蛋白质形成三级结构时，肽链中某些
17、局部的超二级结构肽链中某些局部的超二级结构汇集在一起，形成的发挥生物汇集在一起，形成的发挥生物学功能的区域；学功能的区域；是是蛋白质构象蛋白质构象中特定的空间区域。中特定的空间区域。细胞表面蛋白细胞表面蛋白CD4CD4分子分子4 4个相似结构域个相似结构域 肌红蛋白（肌红蛋白（MbMb）的三级结构）的三级结构血红素血红素铁原子铁原子稳定三级结构的化学键稳定三级结构的化学键主要化学键是次级键主要化学键是次级键疏水作用、离子键、氢键疏水作用、离子键、氢键和和 Van der Waals力力蛋白质的四级结构蛋白质的四级结构(quaternary structure)由两条或两条以上具有独立三级结构由
18、两条或两条以上具有独立三级结构的多肽链，通过次级键缔合而成的最的多肽链，通过次级键缔合而成的最高级结构。高级结构。定义定义化学键化学键疏水作用、氢键、离子键、疏水作用、氢键、离子键、范德华力范德华力亚基亚基每条具有独立三级结构的多肽链每条具有独立三级结构的多肽链血红蛋白血红蛋白（Hb）的四级结构的四级结构链链链链血红素血红素蛋白质的分类蛋白质的分类根据组成根据组成结合蛋白质结合蛋白质单纯蛋白质单纯蛋白质蛋白质部分蛋白质部分非蛋白质部分非蛋白质部分根据形状根据形状球状蛋白质球状蛋白质纤维状蛋白质纤维状蛋白质根据功根据功能能调节蛋白调节蛋白酶蛋白酶蛋白运输蛋白运输蛋白结构蛋白结构蛋白根据分布根据分
19、布核蛋白质核蛋白质膜蛋白质膜蛋白质第三节蛋白质结构与功能的关系蛋白质一级结构蛋白质一级结构与功能的关系与功能的关系一级结构是空间构象的基础一级结构是空间构象的基础一级结构是功能的基础一级结构是功能的基础一级结构改变与分子病一级结构改变与分子病牛胰核糖核酸酶的一级结构牛胰核糖核酸酶的一级结构一级结构是空间构象的基础一级结构是空间构象的基础二硫二硫键键 天然状态，天然状态，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、痕量痕量-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态，无活性非折叠状态，无活性分子伴侣分子伴侣(chaperon)(chaperon)是一类帮是一类帮助新生多肽链正确折叠
20、的蛋白质助新生多肽链正确折叠的蛋白质一级结构是功能的基础一级结构是功能的基础结构不同，功能不同结构不同，功能不同血管升压素和催产素血管升压素和催产素结构相似，功能相似结构相似，功能相似胰岛素胰岛素促肾上腺皮质激素和促黑激素促肾上腺皮质激素和促黑激素一级结构改变与分子病一级结构改变与分子病分子病分子病由于基因突变导致蛋白质一级结构由于基因突变导致蛋白质一级结构与正常有所不同，表现出生理功能与正常有所不同，表现出生理功能的异常，而引起的遗传性疾病。的异常，而引起的遗传性疾病。案案 例例镰刀状红细胞性贫血镰刀状红细胞性贫血（a a）正常红细胞）正常红细胞（b b）镰型红细胞）镰型红细胞N-val h
21、is leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽肽 链链HbA 肽肽 链链N-val his leu thr pro val glu C(146)蛋白质的功能依赖于特定的空间结构蛋白质的功能依赖于特定的空间结构胰岛素原转变成胰岛素胰岛素原转变成胰岛素胰岛素原胰岛素原（一条肽链）（一条肽链）胰岛素胰岛素（两条肽链）（两条肽链）C肽肽二、蛋白质空间结构二、蛋白质空间结构与功能的关系与功能的关系肌红蛋白肌红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白的空间构象变化与结合氧血红蛋白的空间构象变化与结合氧O2肌红蛋白肌红蛋白(Mb)(Mb)和血红蛋白和血红蛋白(Hb)(Hb)的氧解离曲线的氧解离曲线
22、协同效应：协同效应：一个亚基与其配体结合后，能影响其一个亚基与其配体结合后，能影响其 中另一个亚基与配体结合能力的现象中另一个亚基与配体结合能力的现象。协同效应协同效应(cooperativity)正协同效应正协同效应(positive cooperativity)促进作用促进作用 负协同效应负协同效应(negative cooperativity)抑制作用抑制作用 某些小分子物质作用于蛋白质的非活某些小分子物质作用于蛋白质的非活性部位后，使其发生构象变化，从而影性部位后，使其发生构象变化，从而影响其功能。响其功能。变构效应变构效应(allosteric effect)蛋白质空间结构改变与疾病
23、蛋白质空间结构改变与疾病 蛋白质构象病（蛋白质构象病（protein conformational protein conformational diseasesdiseases）因蛋白质折叠错误或折叠不能导致构象异常因蛋白质折叠错误或折叠不能导致构象异常变化引起的疾病变化引起的疾病蛋白质构象改变导致疾病的机理蛋白质构象改变导致疾病的机理某些蛋白质错误折叠后相互聚集，形成抗蛋白某些蛋白质错误折叠后相互聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病朊病毒病朊病毒病 朊病毒蛋白构象相关的疾病朊病毒蛋白构象相关的疾病人类朊病毒病人类朊病毒病 库鲁病、脑软
24、化病、新变异型库鲁病、脑软化病、新变异型CJDCJD等等动物的朊病毒病动物的朊病毒病 疯牛病、羊骚痒症等疯牛病、羊骚痒症等朊病毒：朊病毒：不含有核酸，对各种理化作用有不含有核酸，对各种理化作用有很强的抵抗力很强的抵抗力、传染性极强的蛋白质颗粒。传染性极强的蛋白质颗粒。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折叠折叠正常正常致病型致病型朊病毒蛋白朊病毒蛋白(prion protein,PrP)第四节蛋白质的理化性质及其分离纯化 蛋白质蛋白质的理化性质的理化性质蛋白质蛋白质的等电点的等电点(isoelectric point,pI)当蛋白质溶液处于某一当蛋白质溶液处于某一pHpH时，蛋白质解时，蛋白质解离成
25、正、负离子的趋势相等，即成为兼离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的性离子，净电荷为零，此时溶液的pHpH称称为为pIpI（一）两性电离及等电点（一）两性电离及等电点 Pr Pr是两性电解质。在溶液中的带电状况是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的主要取决于溶液的pHpH值。值。PrCOOHNH3+PrCOO-NH3+PrCOO-NH2OH-H+OH-H+pH=pIpHpI利用此性质可进行电泳利用此性质可进行电泳（二）蛋白质的胶体性质（二）蛋白质的胶体性质 胶体稳定因素胶体稳定因素颗粒表面电荷颗粒表面电荷水化膜水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷
26、的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用（三）蛋白质的变性与沉淀（三）蛋白质的变性与沉淀 蛋白质的变性蛋白质的变性(denaturation)(denaturation)在某些在某些理化因素理化因素的作用下，蛋白的作用下，蛋白质的质的空间结构空间结构发生改变或遭受破坏，发生改变或遭受破坏，造成其造成其理化性质理化性质的改变和的改变和生物活性生物活性的的丧失。丧失。变性变性本质本质破坏非共价键和二
27、硫键，不改变蛋白质的破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构一级结构变性因素变性因素物理因素物理因素：高温、紫外线、：高温、紫外线、X X射线、射线、超声波、剧烈振荡等。超声波、剧烈振荡等。化学因素化学因素：强酸、强碱、重金属离子、尿：强酸、强碱、重金属离子、尿素、乙醇等有机溶剂素、乙醇等有机溶剂理化性质变化理化性质变化黏度增大黏度增大吸收光谱改变吸收光谱改变溶解度降低溶解度降低易被蛋白酶水解易被蛋白酶水解 蛋白质变性程度较轻，去除变蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能。恢复其原有的构象和功能。蛋白质的复性蛋白质的复性
28、(renaturation)(renaturation)天然状态，天然状态，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态，无活性非折叠状态，无活性蛋白质变性后，疏水侧链暴露在外，肽链相蛋白质变性后，疏水侧链暴露在外，肽链相互缠绕而聚集，从溶液中析出互缠绕而聚集，从溶液中析出.蛋白质沉淀蛋白质沉淀沉淀本质沉淀本质破坏水化膜破坏水化膜中和电荷中和电荷中性盐中性盐沉淀方法沉淀方法有机溶剂有机溶剂生物碱试剂生物碱试剂重金属离子重金属离子应用应用重金属中毒口服牛奶或生鸡蛋重金属中毒口服牛奶或生鸡蛋 蛋白质变性后的絮状物加热可蛋白质变性后的絮状物加
29、热可变成比较坚固的凝块，不易再溶于变成比较坚固的凝块，不易再溶于强酸和强碱中。强酸和强碱中。蛋白质的凝固作用蛋白质的凝固作用(protein(protein coagulation)coagulation)变性、沉淀、凝固的关系变性、沉淀、凝固的关系变性变性沉淀沉淀容易容易不一定不一定凝固凝固一定一定一定一定应用应用消毒消毒鸡蛋要煮熟吃鸡蛋要煮熟吃疫苗保存疫苗保存（四）蛋白质的光谱吸收与呈色反应（四）蛋白质的光谱吸收与呈色反应 280nm最大吸收峰最大吸收峰OD280 ：W、Y蛋白质的光谱吸收蛋白质的光谱吸收双缩脲反应双缩脲反应蛋白质的呈色反应蛋白质的呈色反应酚试剂呈色反应酚试剂呈色反应考马斯
30、亮蓝反应考马斯亮蓝反应蛋白质蛋白质的分离和纯化的分离和纯化方法方法 盐析盐析 有机溶剂沉淀有机溶剂沉淀 （一）改变蛋白质的溶解度 将硫酸铵、硫酸钠或氯化将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。被破坏，导致蛋白质沉淀。盐析盐析(salt precipitation)低温低温(04 0C)快速快速有机溶剂沉淀有机溶剂沉淀方法方法 离心离心 透析与超滤透析与超滤 凝胶过滤层析凝胶过滤层析（二）根据蛋白质分子大小不同分离（二）根据蛋白质分子大小不同分离利用机械的快速旋转所产生利用机械的快速旋转
31、所产生的离心力，将不同密度的物的离心力，将不同密度的物质分离开来的方法。质分离开来的方法。离心离心（centrifugation）利用透析袋把大分子蛋白质与利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法小分子化合物分开的方法透析透析(dialysis)纯化蛋白质纯化蛋白质浓缩蛋白质浓缩蛋白质作用作用超滤超滤利用超滤膜在一定压力下利用超滤膜在一定压力下使大分子蛋白质滞留，而使大分子蛋白质滞留，而小分子物质和溶剂滤过小分子物质和溶剂滤过凝胶过滤凝胶过滤（gel-filtration chromatography）按照天然蛋白质相对分子质量按照天然蛋白质相对分子质量大小进行分离的技术，又称为大小进
32、行分离的技术，又称为分子筛层析或排阻层析分子筛层析或排阻层析方法方法 离子交换层析离子交换层析 电泳电泳 （三）根据蛋白质电荷性质分离（三）根据蛋白质电荷性质分离离子交换层析离子交换层析（ion exchange chromatography）利用蛋白质两性解离特性和等电点利用蛋白质两性解离特性和等电点作为分离依据作为分离依据电泳电泳(elctrophoresiselctrophoresis）带点粒子在电场作用下向所带电荷相带点粒子在电场作用下向所带电荷相反电极移动的现象反电极移动的现象支持物支持物的不同分为薄膜电泳、凝胶电的不同分为薄膜电泳、凝胶电泳泳几种重要的蛋白质电泳几种重要的蛋白质电泳
33、SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(SDS-PAGE)常用于蛋白质分子量的测定常用于蛋白质分子量的测定等电聚焦电泳等电聚焦电泳 依据蛋白质等电点的差异分离依据蛋白质等电点的差异分离双向凝胶电泳双向凝胶电泳(2-DE)(2-DE)蛋白质组学研究的重要技术蛋白质组学研究的重要技术SDS-PAGESDS-PAGE 可测定蛋白质分子量等电聚焦电泳等电聚焦电泳（isoelectric focusing isoelectric focusing electrophoresis,IFEelectrophoresis,IFE）在具有在具有pHpH梯度的电场中，蛋白质按其梯度的电场中，蛋白质按其等电点不同予以分离等电点不同予以分离等电聚焦的原理等电聚焦的原理双向电泳双向电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）利用不同蛋白质所带电荷和质量的差利用不同蛋白质所带电荷和质量的差异，用两种方法、分两步进行的蛋白异，用两种方法、分两步进行的蛋白质电泳质电泳第一步第一步 按不同的按不同的等电点等电点进行分离进行分离 第二步第二步 按不同按不同质量质量再分离再分离双向电泳的原理双向电泳的原理
