1、灰树花工厂化栽培和开发研究技术总结 nA 前言 nB 材料与方法nC 结果与讨论前言n灰树花（Crifola frondosa）是经常发生于我国东北地区、高寒地带的一种优质食用菌，有独特的营养和风味。灰树花子实体形似盛开的莲花，扇形菌盖重重叠，又名舞茸、粟子蘑、莲花菇。鲜嫩的子实体香味浓郁，味道鲜美，口感极佳，其营养丰富，富含灰树花多糖、维生素、多种必需氨基酸和微量元素，经常食用可预防和治疗肝脏系统及胃肠道疾病。同时在日本从子实体提取的灰树花多糖用作抗癌药品。所以灰树花是一种具有很高开发价值的珍稀食药用菌。日本料理盛行此菇。灰树花野生量极少，几乎不能形成商品。1974年日本进行人工栽培获得成功
2、，80年代研究成功了工厂化周年性栽培。我国最早于1983年由浙江庆元引种栽培，目前仍保留在依靠自然条件栽培，一年一次的手工操作家庭作坊式生产水平。由于受气温影响，产量不稳定，杂菌污染，严重导致成品率低、品质差，无法同国际的同行业进行竞争。目前国内尚无工厂化栽培灰树花的先例。本项目旨在开发研究灰树花在食用菌新品种，通过引种和DNA种性鉴定及生物育种技术，选育出适于工厂化栽培的灰树花品种，研究制订安全、卫生的标准化工厂化生产工艺。通过对鲜菇保鲜技术的研究、延长鲜菇的贮藏时间，保证产品的质量。同时进行灰树花在品种生产示新，实现新时期农民增收。材料与方法n一、供试供试灰树花品种资源品种资源 n二、灰树
3、花品种品种DNA提取及提取及RAPD反应反应n三、培养料配方 n四、栽培容器 n五、灰树花菇生育条件菇生育条件 n六、原材料、产品的重金属和农药残留 测定 供试供试灰树花品种资源品种资源 n供试杏鲍菇品种资源分别从日本、韩国、美国、台湾、福建、等国家及地区收集、引进，共11个品种，编号为“灰1号”至“灰11号”。n保藏培养基：马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂19-20克，水1000毫升，磷酸二氢钾或磷酸氢二钾2克。灰树花品种品种DNA提取及提取及RAPD反反应应 n选择“灰2号”、“灰3号”、“灰4号”、“灰9号”、“灰14号”菌种，编号依次为1,2,3,4,5。n菌株经PDY液体培
4、养后，过滤收集各个菌株的菌丝体，采用CTAB 方法提取各菌株的DNA，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，稀释后进行RAPD。DNA marker 选用上海鼎国生物技术发展中心DGL2000，共采用32个上海生工生物技术公司的RAPD随机引物进行RAPD 扩增，其中共有21个引物有扩增条带。以其中的18个随机扩增引物扩增的数据统计片段的有无，用NT-SYS程序中的Simqual软件算出菌株间遗传相关性；用平均连锁聚类分析方法(Unweighted Pair Group Method Arithmetic Clustering UPGMA)进行聚类分析，构建树状图谱。培养料配方试验n一、木屑 32.5%;棉籽
5、壳 32.5%;麸皮15%;玉米粉10%;泥土10%n二、木屑 37.5%棉籽壳37.5%;麸皮15%;玉米粉10%;保水剂适量 n三、玉米芯25%;棉籽壳25%;木屑25%;麸皮15%;玉米粉10%;保水剂适量 栽培容器试验n大袋：4132cmn中袋：4124cmn小袋：4817cmn大瓶：1100毫升n小瓶：850毫升灰树花菇生育条件试验菇生育条件试验培养条件培养条件 生育条件生育条件n温度：22-23 Cn湿度：70-75%nCO2：2500 ppmn光照：无n培养时间：3035天n温度：22-23 Cn湿度：85-90%nCO2：1500 ppmn光照：300LUX左右n培养时间：15
6、20天原材料、产品的重金属和农药残留测定 结果n随机抽取灰树花栽培的主要原材料玉米芯、棉籽壳、米糠、木屑送上海市产品质量监督检验所测重金属铅、汞、砷及农药残留六六六、滴滴涕含量，同时跟踪检测用上述原料栽培的灰树花产品的重金属铅、汞、砷及农药残留六六六、滴滴涕含量。结果与分析n一、灰树花品种资源的收集、选育n二、灰树花工厂化栽培生产培养料配方研究n三、灰树花工厂化栽培容器研究n四、灰树花生长发育过程中所需的生活条件 n五、灰树花工厂化生产病虫害防治技术研究 n六、灰树花产品安全卫生质量及保鲜技术n七、灰树花品种生产示范灰树花品种资源的收集、选育 表1：不同灰树花品种栽培比较品种菌丝形态发菌时间(
7、天)原基分化形成率（%）产量(克/瓶)灰2号菌丝浓白、健壮22951059灰3号菌丝浓白、健壮2293909灰4号菌丝异常浓白、粗壮288581灰9号菌丝纤细、淡20800图一：随机引物7扩增的灰树花不同品种的DNA指纹图谱n从左到右依次DNA marker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5n分子量标记依次为2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp 图二：随机引物8扩增的灰树花不同品种的DNA指纹图谱 n从左到右依次DNA marker，菌株5,菌株4,菌株3,菌株2,菌株1n分子量标记依次为2kb，1600bp，1000bp，750bp,500
8、bp，250bp,100bp 图三：随机引物42扩增的灰树花不同品种的DNA指纹图谱 n从左到右依次DNA marker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5n分子量标记依次为2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp 图四：不同灰树花品种DNA遗传相关性聚类树状图谱灰树花工厂化栽培生产培养料配方研究表表2：不同培养料配方的灰树花产质量：不同培养料配方的灰树花产质量配配 方方发菌时间发菌时间(天天)产量产量（克（克/瓶）瓶）生物学效率生物学效率（%）配方一配方一22130337配方二配方二22149505配方三配方三24133344灰树花工厂化栽培容器
9、研究 表表3:不同大小的聚丙烯塑袋栽培灰树花的产量不同大小的聚丙烯塑袋栽培灰树花的产量容器容器湿料重湿料重(Kg)含水量含水量(%)干料重干料重(Kg)单产袋单产袋(g)生物学效率生物学效率(%)大袋大袋2.5630.925254.827.5中袋中袋1.5630.555294.053.0小袋小袋0.7630.259131.250.7表表4:不同大小的聚丙烯塑瓶栽培灰树花的产量不同大小的聚丙烯塑瓶栽培灰树花的产量容器容器毫升毫升湿料重湿料重Kg含水量含水量%干料重干料重Kg单产袋单产袋Kg生物学效生物学效%11000.58630.21510749.78500.46630.1709254.1灰树花
10、生长发育过程中所需的生活条件 n温度：菌丝体生长：23+1；原基形成子实体生长（开片）1617n湿度：菌丝体生长：培养料含水量 63+2%；空气相对湿度 70%左右。原基形成：空气相对湿度 8085%；子实体生长（开片）：空气相对湿度 8590%nCO2 浓度：菌丝体生长 3000ppm以下；原基形成子实体生长（开片）1000ppm以下，原基形成：子实体生长（开片）：1000ppm以内。CO2浓度过高，开片不良，易造成鹿角状畸形子实体。n光照：菌丝体生长不需要光照；菌丝体长满容器后 50100勒克司，弱光诱导7天左右。原基形成 300勒克司左右；子实体生长（开片）5001000勒克司。光照不足
11、，光照色泽淡，产量低。灰树花工厂化生产病虫害防治技术研究n通过采用脉动式真空高压蒸汽灭菌技术，彻底杀灭培养基质中的病原菌，大大改善了固体培养料灭菌的效果使菌种生产成品率大大提高。n采用低温等离子空气灭菌技术及空气层流净化技术，在生产工序中主要的场所，科学合理放置5台等离子动态空气洁净器，不仅能直接达到灭菌除尘的目的，并能去除空气中有害、有毒气体和异物，在机器开启的情况下，能够进行正常作业，无须采用熏蒸和其他化学消毒方法。不仅保证了接种的成品率，而且保障操作人员安全卫生。n因为灰树花的工厂化生产在国内尚无先例，我们经过反复试验证明：在灰树花黑色蜂窝状原基形成之前，是感染空气中细菌和绿霉菌污染的关
12、键时间，为此我们利用灰树花生育阶段的生长优势并给以最适应灰树花生长发育的条件，在灰树花菌丝体生长阶段完成之后，适时进行弱诱导，使之菌丝垫形成特色并充分扭结成黑色蜂窝状原基后，打开瓶盖给予充足的空气。栽培过程中,通过调节栽培室空气湿度控制工艺，有效地降低了10%左右的杂菌侵染率。灰树花产品安全卫生质量及保鲜技术表表5 主要材料及产品检验结果主要材料及产品检验结果材料材料序号序号检验项目检验项目技术要求技术要求检验结果检验结果单项判定单项判定棉棉籽籽壳壳 1铅铅 mg/kg/0.14/2汞汞 mg/kg/0.01/3砷砷 mg/kg/0.02/4六六六六六六 mg/kg/0.0005/5滴滴涕滴滴
13、涕 mg/kg/0.001/木木 屑屑 1铅铅 mg/kg/1.44/2汞汞 mg/kg/0.01/3砷砷 mg/kg/0.08/4六六六六六六 mg/kg/0.0005/5滴滴涕滴滴涕 mg/kg/0.001/灰灰 树树 花花 1铅铅 mg/kg2.00.28合格合格2汞汞 mg/kg0.20.01合格合格3砷砷 mg/kg1.00.13合格合格4六六六六六六 mg/kg0.20.0005合格合格5滴滴涕滴滴涕 mg/kg0.10.001合格合格6甲胺磷甲胺磷 mg/kg不得检出不得检出未检出未检出合格合格7敌敌畏敌敌畏 mg/kg/0.01/8毒死蜱毒死蜱 mg/kg/0.01/9溴氰菊酯溴氰菊酯 mg/kg/0.005/灰树花品种生产示范 n选择上海郊区的南汇汇仑食用菌公司作为生产示范基地，分别于2019年和2019年进行了袋栽灰树花工厂化生产技术示范。生产示范试验基地菇房设施采用了彩钢板夹芯保温菇房，并配备了温度、湿度、光照、通气自动控制系统，超声波加湿器，制冷及加热系统。栽培容器采用透气聚丙烯塑料袋。进行了二次生产示范试验。试验选用“灰3号”菌种，配方2，生产2760袋。在适宜灰树花生长的温度、湿度、光照、通气条件下培养、出菇，示范试验结果灰树花原基分化率为90%，平均每袋产量达到250克，达到了预期目标。
