1、第三章 药物的杂质检查 药药 物的杂质是指药物中存在的无治物的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物稳定性和疗效、甚疗作用、或影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。对药物所含至对人体健康有害的物质。对药物所含杂质进行检查可保证用药的杂质进行检查可保证用药的安全、有效安全、有效，同时也为生产、流通过程的质量保证和同时也为生产、流通过程的质量保证和企业考核提供参考。企业考核提供参考。一、一、概述概述二、二、一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法三、三、特殊杂质检查方法特殊杂质检查方法第一节第一节 概述概述 一、药物的一、药物的纯度纯度及要求：及要求：即药物的即药物的纯净程度纯净程度及要
2、求及要求 杂质是影响药物纯度的主要因素，如超过质量标杂质是影响药物纯度的主要因素，如超过质量标准规定的纯度要求，就可能使药物活性降低，毒准规定的纯度要求，就可能使药物活性降低，毒副作用增加。副作用增加。对杂质的认识：是在防治疾病的实践中逐渐积累对杂质的认识：是在防治疾病的实践中逐渐积累起来的起来的,并随分离检测技术的提高进一步发现药物并随分离检测技术的提高进一步发现药物中新的杂质。中新的杂质。药物的纯度是质量标准中药物的纯度是质量标准中“检查检查”项下杂质检查项下杂质检查来控制，内容：杂质名称、检查项目、来控制，内容：杂质名称、检查项目、检查方法、检查方法、允许的限量允许的限量.药用规格纯度与
3、化学试剂纯度药用规格纯度与化学试剂纯度 药用规格：符合纯度要求的药品，考虑的药用规格：符合纯度要求的药品，考虑的是对生物体引起的生理和毒副作用的杂质是对生物体引起的生理和毒副作用的杂质 化学试剂：对化学使用的目的考虑，对生化学试剂：对化学使用的目的考虑，对生物体引起的生理和毒副作用不考虑。物体引起的生理和毒副作用不考虑。二、杂质的来源与种类（一）来源（一）来源：1.生产过程引入的杂质生产过程引入的杂质：合成药生产过程中：原料不纯、未反应的原料药、合成药生产过程中：原料不纯、未反应的原料药、反应中间体和副产物在精制时未完全除去；所用试反应中间体和副产物在精制时未完全除去；所用试剂、溶剂、还原剂等
4、的残留。剂、溶剂、还原剂等的残留。药物制成制剂过程中：可能产生新的杂质（盐酸药物制成制剂过程中：可能产生新的杂质（盐酸普鲁卡因注射剂在灭菌过程中，可能水解为对氨基普鲁卡因注射剂在灭菌过程中，可能水解为对氨基苯甲酸）苯甲酸）2.储藏过程引入的杂质储藏过程引入的杂质：外界条件（温度、湿度、：外界条件（温度、湿度、日光、空气、微生物等）可导致药品水解、氧化、日光、空气、微生物等）可导致药品水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解、发霉产生分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解、发霉产生杂质杂质（二）杂质的种类（二）杂质的种类 按来源可分为按来源可分为 1.一般杂质：自然界分布广泛、在多种药物一般杂
5、质：自然界分布广泛、在多种药物的生产和储藏过程中容易引入的杂质。的生产和储藏过程中容易引入的杂质。（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等）盐、重金属等）2.特殊杂质：特定药物的生产和储藏过程中特殊杂质：特定药物的生产和储藏过程中容易引入的杂质。容易引入的杂质。（如阿司匹林中游离的（如阿司匹林中游离的水杨酸）水杨酸）按毒性可分为：按毒性可分为：1.信号杂质信号杂质:（如氯化物、硫酸盐）本身（如氯化物、硫酸盐）本身无害，但其含量反映药物的纯度水平，如无害，但其含量反映药物的纯度水平，如含量过多，提示药物的生产工艺不合理或含量过多，提示药物的生产工艺不合
6、理或生产控制存在问题。生产控制存在问题。2.有害杂质：有害杂质：（如重金属、砷盐、氟化物）（如重金属、砷盐、氟化物）对人体有害，在质量标准中应严格控制，对人体有害，在质量标准中应严格控制，以保证用药安全。以保证用药安全。三、杂质的限量 1.杂质的限量杂质的限量：药物中的杂质不可能也没必要完全：药物中的杂质不可能也没必要完全除去。在不影响药物疗效和不发生毒性的前提下，除去。在不影响药物疗效和不发生毒性的前提下，允许药物中有一定量的杂质。允许药物中有一定量的杂质。药物中所含杂质的最药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。其检查多数为限量检查。大允许量，叫做杂质限量。其检查多数为限量检查。2.杂质
7、的限量表示：百分之几（杂质的限量表示：百分之几（%）、）、百万分之几（百万分之几（ppm）杂质的最大允许量杂质的最大允许量 杂质限量（杂质限量（%）=100%供试品量供试品量 3.杂质限量的控制方法杂质限量的控制方法 限量检查限量检查：不要求测定杂质的含量，而只不要求测定杂质的含量，而只检查其是否超过限量检查其是否超过限量，常采用对照法常采用对照法，此外，此外还可采用还可采用灵敏度法灵敏度法和和比较法比较法。定量测定定量测定：测出杂质的准确含量：测出杂质的准确含量药物杂质限量的计算式 标准溶液浓度标准溶液浓度标准溶液体积标准溶液体积 杂质限量（杂质限量（%）=100%供试品量供试品量 C V
8、L=100%S 例题例题 1.对乙酰氨基酚中氯化物的检查对乙酰氨基酚中氯化物的检查 取对乙酰氨基酚取对乙酰氨基酚2.0g，加水，加水100ml,加热加热溶解后冷却，滤过，取滤液溶解后冷却，滤过，取滤液25ml,检查氯检查氯化物，所发生的混浊与标准氯化纳溶液化物，所发生的混浊与标准氯化纳溶液5.0ml（每（每1ml相当于相当于10g的的Cl-）制成的对）制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少。多少。C V L=100%S 0.015 =0.01%2 103 25/1002.葡萄糖中重金属检查葡萄糖中重金属检查 取葡萄糖取葡萄糖4.0g,加水加水23m
9、l溶解后，加醋酸盐溶解后，加醋酸盐缓冲液缓冲液(pH3.5)2ml,检查重金属含量，含重金属检查重金属含量，含重金属不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少毫升（每毫升（每1ml相当于相当于 10g的的Pb）?L S 5 10-6 4.0V=C 10 10-6 =2.0(ml)第二节 一般杂质的检查方法 一、氯化物检查法一、氯化物检查法 (作为信号杂质，反映作为信号杂质，反映 纯净程度和生产过程是否正常纯净程度和生产过程是否正常)1.原理原理：利用：利用氯化物氯化物在在硝酸酸性硝酸酸性溶液中溶液中与与硝酸银试液硝酸银试液作用，生成作用，生成氯化银浑浊液氯化银
10、浑浊液，与一定量与一定量标准氯化钠标准氯化钠在在相同条件相同条件下生成下生成的浑浊比较，的浑浊比较，不得更大不得更大。2.方法：方法：供试 50ml纳氏比色管 （规定量供试品依法溶解+10ml稀硝 酸+水使成40ml）+硝酸银试液1ml+水使成50ml 标准 50ml纳氏比色管 （规定量的标准氯化钠溶液+10ml稀硝 酸+使成40ml）+硝酸银试液1ml+水使成50ml 5min后比较两者浊度，供试不得超过标准。3.讨论：讨论：(1).酸性：（酸性：（硝酸酸性可以避免弱酸银盐硝酸酸性可以避免弱酸银盐如碳酸盐、磷酸盐沉淀如碳酸盐、磷酸盐沉淀而干扰检查）而干扰检查）硝酸硝酸、酸度：加稀硝酸酸度：加
11、稀硝酸10ml(2).标准氯化钠：标准氯化钠：每每ml相当相当10ug的的CL-、浓度以浓度以50ml中含中含50ug-80ug的的CL-（所显（所显示梯度明显，便于比较）示梯度明显，便于比较）.(3).观察前在暗处放置观察前在暗处放置5min（避免单质银避免单质银析出析出），黑色背景从上向下观察、比较。），黑色背景从上向下观察、比较。4.供试品处理：(1).供试液如不澄清：需过滤。滤纸先供试液如不澄清：需过滤。滤纸先用含稀硝酸的水洗涤出去氯化物。用含稀硝酸的水洗涤出去氯化物。(2).供试液如带颜色：按药典规定的方供试液如带颜色：按药典规定的方法处理（法处理（常用内消色法常用内消色法）。）。(
12、3).不溶于水的药物：加水振摇使氯化不溶于水的药物：加水振摇使氯化物溶解滤去不溶物、或加热溶解供试物溶解滤去不溶物、或加热溶解供试品、也可加稀乙醇、丙酮溶解品、也可加稀乙醇、丙酮溶解二、硫酸盐检查法 1.原理原理：药物中存在的微量：药物中存在的微量硫酸盐硫酸盐与与氯化氯化钡钡在在盐酸酸性盐酸酸性介质中生成介质中生成硫酸钡白色沉硫酸钡白色沉淀淀，与一定量的，与一定量的标准硫酸钾标准硫酸钾溶液在相同溶液在相同条件下生成的混浊比较，浊度条件下生成的混浊比较，浊度不得更大不得更大2.方法：（药典规定）方法：（药典规定）供试 50ml纳氏比色管 供试溶液（规定量供试品依法溶解使成40ml+稀盐酸2ml）
13、+25%氯化钡溶液5ml+水使成50ml 标准 50ml纳氏比色管 对照溶液（规定量的标准硫酸钾溶液使成40ml+稀盐酸2ml）+25%氯化钡溶液5ml+水使成50ml 10min后比较两者浊度，供试不得超过标准。3.讨论：讨论：酸度为酸度为50ml中含稀盐酸中含稀盐酸2ml（酸性酸性条件条件可可防止碳酸钡或磷酸钡沉淀生成，但酸度防止碳酸钡或磷酸钡沉淀生成，但酸度不能过大会导致硫酸钡溶解不能过大会导致硫酸钡溶解）；）；标准硫酸钾溶液相当于标准硫酸钾溶液相当于100 ugSO4/ml4.供试品的处理供试品的处理(1).供试品需要过滤：滤纸先用供试品需要过滤：滤纸先用盐酸盐酸的稀的稀溶液洗涤。溶液
14、洗涤。(2).供试品如有色：可采用内消色法处理供试品如有色：可采用内消色法处理三、铁盐检查法铁盐可能会加速药物的氧化和降解，因此要控制其含量铁盐可能会加速药物的氧化和降解，因此要控制其含量硫氰酸盐法（硫氰酸盐法（Ch.P及及USP采用，采用，BP采用巯基醋酸法，这采用巯基醋酸法，这里只讲硫氰酸盐法）里只讲硫氰酸盐法）1.原理：原理：铁盐铁盐在在盐酸酸性盐酸酸性溶液中与溶液中与硫氰酸盐硫氰酸盐生成生成红色红色可溶性可溶性硫氰酸铁配位离子硫氰酸铁配位离子，再与一定，再与一定标准铁溶液标准铁溶液用同用同法处理后所呈的颜色进行比较，法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深颜色不得更深。Fe3+6SCN
15、-Fe(SCN)6 3-H+2.方法：方法：供试 50ml纳氏比色管 供试溶液（规定量供试品依法溶解使成25ml+稀盐酸4ml及过硫酸铵50mg，使成35ml+30%硫氰酸铵3ml并使成50ml）标准 50ml纳氏比色管 对照溶液（规定量标准铁溶液使成25ml+稀盐酸4ml及过硫酸铵50mg，使成35ml+30%硫氰酸铵3ml并使成50ml）比较两者颜色，供试不得超过标准。3.讨论讨论（1）标准铁溶液标准铁溶液是是硫酸铁铵硫酸铁铵配制、需加配制、需加入入硫酸硫酸防止铁盐水解。防止铁盐水解。（2）铁溶液每）铁溶液每1ml相当于相当于10gFe（3）酸性：稀盐酸、）酸性：稀盐酸、50ml溶液中含溶
16、液中含4ml为为宜宜(防止铁离子水解防止铁离子水解)。（4）加入过硫酸铵的目的：）加入过硫酸铵的目的：氧化供试品中的氧化供试品中的二价铁为三价二价铁为三价 防止防止硫氰酸铁分解腿色硫氰酸铁分解腿色。4.供试品处理(1).两管色调不一致：移至分液漏斗，两管色调不一致：移至分液漏斗，加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色（硫氰酸铁配位离子在醇中溶解度大，硫氰酸铁配位离子在醇中溶解度大，可增加颜色深度；同时可排除某些干扰可增加颜色深度；同时可排除某些干扰物质的影响物质的影响）(2).具环状结构的有机药物：需炽灼破具环状结构的有机药物：需炽灼破坏，使铁盐转变为三氧化二铁留
17、于残渣坏，使铁盐转变为三氧化二铁留于残渣再依法检查。再依法检查。四、重金属检查法 重金属：实验条件下能与硫离子作用显色的金属离重金属：实验条件下能与硫离子作用显色的金属离子。如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。子。如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。（影（影响药物的稳定性与安全性）响药物的稳定性与安全性）中国药典对重金属的检查共收载四种方法。中国药典对重金属的检查共收载四种方法。第一法第一法 硫代乙铣胺法硫代乙铣胺法 1.原理：硫代乙酰胺在原理：硫代乙酰胺在弱酸性（弱酸性（pH3.5）条件下水）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黄色到棕黑色
18、黑色的硫化物均匀混悬液，与标准铅溶液经同法处的硫化物均匀混悬液，与标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，不得更深。理后所呈颜色比较，不得更深。CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S H2S+Pb2+PbS +2H+pH3.5 2.方法：方法：除另有规定外，取除另有规定外，取25ml纳氏比色管两只，甲纳氏比色管两只，甲管中加管中加标准铅溶液标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水或各药品项下规定后，加水或各药品项下规定的溶剂稀释使成的溶剂稀释使成25ml，乙管加入按各药品项，乙管加入按各药品项下按规定方法制成的供试液下按规定方法制成的供试液25ml
19、；再在甲乙；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，摇匀，放置放置2min，同置白纸上，自上向下透视，乙，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。3.讨论(1).适宜目视比色浓度：适宜目视比色浓度：25ml溶液相当加入标溶液相当加入标 准铅溶液准铅溶液1-2ml（每每1ml相当相当 于于10 gPb2+）。）。(2).弱酸性：弱酸性：PH 3.0-3.5醋酸盐缓冲液（硫化铅醋酸盐缓冲液（硫化铅 沉淀较完全）。沉淀较完全）。(3).供试品如是强酸溶解、或用过强酸处理过：供试品如是强酸溶解、或用过强酸
20、处理过：在加硫代乙酰胺试液前在加硫代乙酰胺试液前,应先加应先加氨水氨水成呈中性再成呈中性再加加PH 3.5醋酸盐缓冲液调节溶液酸度。醋酸盐缓冲液调节溶液酸度。4.供试品处理 1.溶液如有色：溶液如有色：（1）在对照管中）在对照管中加入少量稀焦糖溶液，加入少量稀焦糖溶液，使之与供试品颜色一致。使之与供试品颜色一致。（2）供试品加硫代乙酰胺试液后用微孔）供试品加硫代乙酰胺试液后用微孔滤膜过滤，加入规定量的标准铅液作对照滤膜过滤，加入规定量的标准铅液作对照液液 2.供试品如有微量高铁盐：高铁氧化硫化供试品如有微量高铁盐：高铁氧化硫化氢析出硫，产生浑浊干扰测定。氢析出硫，产生浑浊干扰测定。加入加入抗坏
21、血酸抗坏血酸0.51.0克克第二法第二法 炽灼后硫代乙铣胺法炽灼后硫代乙铣胺法 适用于在水、乙醇中难溶，或能与重适用于在水、乙醇中难溶，或能与重金属形成配位化合物的有机药物。金属形成配位化合物的有机药物。1.原理：将供试品炽灼破坏后，加硝原理：将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解、破坏完酸加热处理，使有机物分解、破坏完全后，再按第一法进行检查。全后，再按第一法进行检查。2.方法：方法：3.注意事项注意事项：炽灼温度应控制在炽灼温度应控制在500-600，温度，温度越高，重金属损失越多；越高，重金属损失越多；炽灼残渣加硝酸加热后，必须蒸干、除炽灼残渣加硝酸加热后，必须蒸干、除尽氧化氮
22、，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色硫，影响比色 含钠盐或氟的有机物在炽灼时能腐蚀瓷含钠盐或氟的有机物在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而引入重金属，改用铂坩埚或硬质玻坩埚而引入重金属，改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。璃蒸发皿。第三法第三法 硫化钠硫化钠 适用于难溶于稀酸而溶于碱性水溶液的药物适用于难溶于稀酸而溶于碱性水溶液的药物。1.原理：碱性介质中，原理：碱性介质中，硫化钠为显色剂硫化钠为显色剂，使，使Pb2+生成生成PbS微粒的混悬液，与一定量标准铅溶微粒的混悬液，与一定量标准铅溶液同法处理后所呈颜色比较，不得更深。液同法处理后所呈颜色比较，不得更深。2.方法：方法
23、：第四法、微孔滤膜法第四法、微孔滤膜法 适用于重金属含量低的药物适用于重金属含量低的药物 1.原理：使重金属生成的硫化物富原理：使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，与标准铅溶液同集于微孔滤膜上，与标准铅溶液同法处理产生的色斑比较，确定重金法处理产生的色斑比较，确定重金属是否超标。属是否超标。2.装置：装置：2.方法：方法：4.注意事项：注意事项：供试品如有颜色或浑浊，应进行供试品如有颜色或浑浊，应进行预滤，更换滤膜，直至滤膜无污预滤，更换滤膜，直至滤膜无污染。再制备铅斑，检查。染。再制备铅斑，检查。五.砷盐检查法（一）古蔡（一）古蔡(Gutzeit)氏法氏法 原理：金属锌与酸作用产生新生态的
24、氢，原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的的砷化氢砷化氢，遇，遇溴化汞试纸，产生黄色至溴化汞试纸，产生黄色至棕色砷斑，棕色砷斑，与标准砷溶液比较，不得更与标准砷溶液比较，不得更深。深。装置：装置：醋酸铅棉花醋酸铅棉花 C 导气管导气管 A 砷化氢发生瓶砷化氢发生瓶 标准砷斑的制备：在A瓶中 加2ml标准砷溶液 5ml盐酸，21ml水 5ml碘化钾试液酸性氯化亚锡试液5滴 （室温10min）加锌粒2g，立刻连上导气管C 将A瓶置于25-40度水浴45min，取出溴化汞试纸即得。标准砷斑的制备：在A瓶中 加规定量供试品溶液 5ml
25、盐酸，21ml水 （照标准的步骤）注意事项：注意事项：1.标准液标准液 三氧化二砷配制储备液，临用前取储三氧化二砷配制储备液，临用前取储备液新鲜制备标准砷溶液，每备液新鲜制备标准砷溶液，每1ml标液相当于标液相当于1g的的As 2.加入试剂的作用：加入试剂的作用：氯化亚锡与碘化钾氯化亚锡与碘化钾还原五价砷为三价，提高生成还原五价砷为三价，提高生成砷化氢速度；砷化氢速度；氯化亚锡与碘化钾氯化亚锡与碘化钾抑制锑化氢生成，排除干扰；抑制锑化氢生成，排除干扰；醋酸铅棉花醋酸铅棉花吸收产生的硫化氢气体，排除干扰。吸收产生的硫化氢气体，排除干扰。供试品处理供试品处理 1.若是硫化物：若是硫化物：会生成硫化
26、氢，加硝酸处理，氧化成硫酸会生成硫化氢，加硝酸处理，氧化成硫酸盐排除干扰。盐排除干扰。2.若是铁盐：（若是铁盐：（氧化砷化氢干扰测定氧化砷化氢干扰测定）加酸性氯化亚锡，将高价铁离子还原为低加酸性氯化亚锡，将高价铁离子还原为低铁离子铁离子 3.环状有机药物（砷共价结合）：环状有机药物（砷共价结合）：先进行有机破坏，在进行测定。先进行有机破坏，在进行测定。（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag（DDC）法）法）1.原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与微量砷反应，生成具有挥发性的砷化氢；与微量砷反应，生成具有挥发性的砷化氢；砷化氢遇二
27、乙基二硫代氨基甲酸银，使其砷化氢遇二乙基二硫代氨基甲酸银，使其还原产生还原产生红色的胶态银，红色的胶态银，用目视比色法或用目视比色法或在在510nm处测定吸收度，在与一定量标准处测定吸收度，在与一定量标准液用同法处理后得到的有色溶液进行比较。液用同法处理后得到的有色溶液进行比较。2.装置与方法：装置与方法：方法：方法：在砷化氢发生瓶在砷化氢发生瓶A中，供试品溶液（或标准砷中，供试品溶液（或标准砷溶液）的实验条件均同古蔡氏法，加锌粒后立溶液）的实验条件均同古蔡氏法，加锌粒后立即将生成的砷化氢导入盛有即将生成的砷化氢导入盛有Ag(DDC)溶液溶液5ml的的D管中，将管中，将A瓶置瓶置25-40水浴
28、中，反应水浴中，反应45min后，取出后，取出D管，添加氯仿至刻度线，混管，添加氯仿至刻度线，混匀。将供试溶液匀。将供试溶液D管和对照溶液管和对照溶液D管同置白色管同置白色背景，自上向下观察比色，或在背景，自上向下观察比色，或在510nm波长处波长处测定吸收值。测定吸收值。六 溶液颜色检查法 控制有色杂质的含量控制有色杂质的含量（一）目视比色法：（一）目视比色法：（二）分光光度法（二）分光光度法（三）色差计法：（三）色差计法：方法：方法：标准比色液：标准比色液：比色用比色用重铬酸钾重铬酸钾、比色用、比色用氯化钴氯化钴、比色用、比色用硫硫酸铜酸铜液，按一定比例配制成黄绿、黄、橙黄、橙液，按一定比
29、例配制成黄绿、黄、橙黄、橙红和棕红五种不同色调的红和棕红五种不同色调的储备液；再用不同量的储备液；再用不同量的水稀释成水稀释成10个色号标准比色液。个色号标准比色液。检查时，取药品项下规定量的供试品，加水检查时，取药品项下规定量的供试品，加水溶解，置于溶解，置于25ml纳氏比色管中，加水稀释至纳氏比色管中，加水稀释至10ml,与规定色调和色号的标准比色液比较不得与规定色调和色号的标准比色液比较不得更深。更深。（一）目视比色法：（一）目视比色法：方法：方法：取规定量的供试品，加水溶解使成取规定量的供试品，加水溶解使成10ml，必，必要时过滤，滤液于规定波长处测定，吸收度要时过滤，滤液于规定波长处
30、测定，吸收度不得超过规定。不得超过规定。l（二）分光光度法（二）分光光度法 原理：原理：自然界中的每种颜色都可以用红、绿、蓝三原色按适自然界中的每种颜色都可以用红、绿、蓝三原色按适当的比例混合而成。色差计的工作原理是模拟人的视当的比例混合而成。色差计的工作原理是模拟人的视觉系统，利用仪器内部的模拟积分光学系统，把光谱觉系统，利用仪器内部的模拟积分光学系统，把光谱光度数据的三刺激值进行进行积分而得到颜色的数学光度数据的三刺激值进行进行积分而得到颜色的数学表达式，从而计算出对比色的色差。表达式，从而计算出对比色的色差。方法：方法：用水对仪器进行校准，取按各品种项下规定方法分用水对仪器进行校准，取按
31、各品种项下规定方法分别制得的供试品溶液和标准比色液，置仪器上进行测别制得的供试品溶液和标准比色液，置仪器上进行测定，供试品与水的色差值定，供试品与水的色差值E*不得超过相应色调不得超过相应色调的比色液与水的色差值的比色液与水的色差值E*o（三）色差计法：（三）色差计法：七七.易炭化物检查法易炭化物检查法 检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质（而呈色的微量有机杂质（易炭化物易炭化物杂质杂质）.取内径一致的比色管两只：甲管中加各品种取内径一致的比色管两只：甲管中加各品种项下规定的对照液项下规定的对照液5ml;乙管中加浓硫酸乙管中加浓硫酸5ml后，分次缓慢
32、加入规定量的供试品，振摇使后，分次缓慢加入规定量的供试品，振摇使溶解。除另有规定外，静置溶解。除另有规定外，静置15min后，将甲后，将甲乙两管同置白色背景前，平视观察，乙管中乙两管同置白色背景前，平视观察，乙管中所显色不得较甲管更深。所显色不得较甲管更深。方法：方法：供试品为固体时，应先研成细粉，以供试品为固体时，应先研成细粉，以利于溶解、呈色和检出；利于溶解、呈色和检出；需加热才能溶解时，可取供试品与硫需加热才能溶解时，可取供试品与硫酸混合均匀，加热溶解，放冷至室温。酸混合均匀，加热溶解，放冷至室温。注意事项：注意事项：对照液有三类对照液有三类 溶液颜色检查项下的不同色调色号标准比色溶液颜
33、色检查项下的不同色调色号标准比色液液 由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液和比由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液和比色用硫酸铜液按规定方法配置成的对照液色用硫酸铜液按规定方法配置成的对照液 高锰酸钾高锰酸钾八八.溶液澄清度检查法溶液澄清度检查法 严查药品溶液的浑浊程度，可以反映严查药品溶液的浑浊程度，可以反映药物中微量不溶性杂质的存在情况。药物中微量不溶性杂质的存在情况。（特别是注射用原料）（特别是注射用原料）Ch.P采用比浊采用比浊法。法。乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成不溶于水的醛与肼缩合生成不溶于水的甲醛腙甲醛腙白色混浊。白色混浊。
34、原理：原理：方法：方法：室温条件下，将用水稀释至一定浓度的供试品溶室温条件下，将用水稀释至一定浓度的供试品溶液与等量的液与等量的浊度标准液浊度标准液分别置于配对的比浊用玻分别置于配对的比浊用玻璃管中，在浊度标准液制备后璃管中，在浊度标准液制备后5min，在暗室内，在暗室内垂直同置于伞棚灯下，照度为垂直同置于伞棚灯下，照度为1000Lx，从水平，从水平观察、比较，以检查溶液的澄清度。观察、比较，以检查溶液的澄清度。九九.炽灼残渣检查法炽灼残渣检查法 中国药典残渣定义：中国药典残渣定义：有机药物经炭化或挥法性无机药物加有机药物经炭化或挥法性无机药物加热分解后，高温炽灼所产生的非挥发热分解后，高温炽
35、灼所产生的非挥发性的无机杂质的硫酸盐。性的无机杂质的硫酸盐。注意事项：注意事项：取规定重量的供试品，置已炽浊至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽浊至完全炭化，放冷至室温；除另有规定外，加硫酸0.5-1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，在700-800炽浊使完全灰化，移至干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700-800炽浊之恒重。残渣及坩埚重-空坩埚中 炽浊残渣%=100%供试品重方法：方法：十十.干燥失重测定法干燥失重测定法 指药品在规定的条件下，经干燥后所指药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量，以百分率计。减失的量，以百分率计。减失的量：恒重（干燥或炽灼后称重减失的量：恒重（干燥或炽灼
36、后称重差异在差异在0.3mg以下以下）检查对象：主要指水分、也包括挥发检查对象：主要指水分、也包括挥发性物质。性物质。测定方法测定方法（一）常压恒温干燥法：（一）常压恒温干燥法：适用于受热较稳定的药物。将供试品置于适用于受热较稳定的药物。将供试品置于相同条件下已干燥至恒重的扁形称量瓶中，相同条件下已干燥至恒重的扁形称量瓶中，在烘箱内于规定温度下干燥至恒重，由减在烘箱内于规定温度下干燥至恒重，由减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。（二）干燥剂干燥法：（二）干燥剂干燥法：适用于受热分解，或易于挥发的供试品适用于受热分解，或易于挥发的供试品 方法：方法：将供
37、试品至于干燥器中，利用干燥器内将供试品至于干燥器中，利用干燥器内的干燥剂吸收水分，干燥至恒重。的干燥剂吸收水分，干燥至恒重。适用于熔点低、受热不稳定或难驱除水分的药物。方法：在一定温度下，采用减压干燥器或恒温减压干燥箱干燥，压力应控制在2.67kPa以下。（三）减压干燥法（三）减压干燥法：（四（四.）热分析法）热分析法 在程序控制温度的情况下，测定物质物在程序控制温度的情况下，测定物质物理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法称为热分析法。可用于药物的熔点、多晶型、称为热分析法。可用于药物的熔点、多晶型、纯度、溶剂化物、水分及热解产物的测定。纯度、溶剂化
38、物、水分及热解产物的测定。.热重分析法（热重分析法（TGA）是测量物质的质量随温度变化的热分析是测量物质的质量随温度变化的热分析技术。技术。仪器是在程序升温炉中的微量分析组成。仪器是在程序升温炉中的微量分析组成。十一 水分测定法 费休氏法，另有甲苯法。费休氏法，另有甲苯法。原理：利用碘将二氧化硫氧化为三氧化硫时，需原理：利用碘将二氧化硫氧化为三氧化硫时，需要一定量的水分参与反应，根据消耗的碘量来测要一定量的水分参与反应，根据消耗的碘量来测定水分。定水分。I +SO +H O 2HI+SO 供试品中水分含量（供试品中水分含量（%）=100%A 供试品消耗费氏试液的容积（供试品消耗费氏试液的容积（
39、ml）B 空白消耗费氏试液的容积（空白消耗费氏试液的容积（ml）F 每每ml费氏试液相当于水的重量（费氏试液相当于水的重量（mg）费氏试液的配制：费氏试液的配制：测定方法：测定方法：（A-B）FW2223十二十二.有机溶剂残留量测定法有机溶剂残留量测定法 指合成原料药，辅料和制剂的生产过程中指合成原料药，辅料和制剂的生产过程中使用的，但在生产工艺中未除尽的有机溶使用的，但在生产工艺中未除尽的有机溶剂剂 2019版附录中残留溶剂的控制种类及限度版附录中残留溶剂的控制种类及限度与与 人用药品注册技术规范的国际协调会一人用药品注册技术规范的国际协调会一致。致。按有机溶剂毒性的大小分为三类，具体名按有
40、机溶剂毒性的大小分为三类，具体名称及限度见表称及限度见表3-2（p62）十二十二.有机溶剂残留量测定法有机溶剂残留量测定法 中国药典中国药典2019版规定残留溶剂采用气相色谱法测版规定残留溶剂采用气相色谱法测定，可采用填充柱，也可毛细管柱定，可采用填充柱，也可毛细管柱 色谱系统应符合：色谱系统应符合：1.理论塔板数填充柱应大于理论塔板数填充柱应大于1000。毛细管柱应大。毛细管柱应大于于5000 2.分离度大于分离度大于1.5。3.内标法时进样内标法时进样5次、两者的相对次、两者的相对 标准偏差不大于标准偏差不大于 5%，外标法时，待测物外标法时，待测物A的相对的相对 标准偏差不应标准偏差不应
41、大于大于10%测定方法测定方法 1.填充柱采用溶液直接进样法：填充柱采用溶液直接进样法：2.毛细管柱采用顶空进样法毛细管柱采用顶空进样法杂质与药物有着物理性质的差异杂质与药物有着物理性质的差异：如外观、形状、分配和吸收以及对光的吸收如外观、形状、分配和吸收以及对光的吸收等性质上的差异等性质上的差异杂质与药物有着化学性质的差异杂质与药物有着化学性质的差异：两者对某一化学反应的差别，一般杂质与某两者对某一化学反应的差别，一般杂质与某一试剂反应，药物则无。一试剂反应，药物则无。方法的选择方法的选择 利用杂质与药物在物理性质与利用杂质与药物在物理性质与化学性质上的差异选专属性强的分析方法。化学性质上的
42、差异选专属性强的分析方法。第三节第三节 特殊杂质检查方法特殊杂质检查方法一一 色谱分析法色谱分析法 优点：高分离效能，可有效地检查有关物质，广泛用于药物的杂质检查 有关物质：药物中可能存在的的原料、中间体、降解物、异构体、聚合体、副反应产物等，这类物质通常结构未明。（一）薄层色谱法（TLC）杂质对照品法（A）供试品自身稀释对照法（高低浓度法）（B）杂质对造品与供试溶液自身稀释对照法并用（C）对照药物法（D）v杂质对照品法（A）v适用条件：已知杂质且有杂质对造品v方法：根据杂质限量，分别取供试品溶液及一定浓度对造品溶液，点样、展开、斑点定位，供试品的杂质斑点不得深于对造品斑点 样样 对对A v供
43、试品自身稀释对照法（高低浓度法）（B）v适用条件：杂质结构不确定，无杂质对造品v方法：配制一定浓度供试品溶液，再将其稀释至一定浓度作对造液，点样、展开、斑点定位，供试品的杂质斑点不得深于对造品主斑点 样样 对对 B v杂质对造品与供试溶液自身稀释对照法并用（C）v适用条件：多种杂质并存，部分杂质有对造品v方法：见课本硫酸奈替米星的有关物质检查。v对照药物法（D）v适用条件：无杂质对造品，或杂质斑点与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量，用与供试品相同的药物作对造品，其所含待测杂质符合限量要求。v方法：见马来酸麦角新碱中有关物质检查（二）高效液相色谱法（HPLC）内标法加校正因子测定法（A）外标法
44、测定法（B）加校正因子的主成分自身对造测定法（C）不加校正因子的主成分自身对造测定法（D）面积归一化法内标法加校正因子测定法适用于有对造品的杂质校正因子测定液=杂质对照品内标样品测定液=样品同样的内标 分别进样，记录色谱图。C杂=fA杂/A内C内A内内/C内内 A杂杂/C杂杂 校正因子（f）=F=(A内/A对)(C对/C内)C杂=F(A杂/A内)C内对照样品 外标法有杂质对造品，进样量可精确控制C杂=A杂/A对C对杂质对照品样品 加校正因子的主成分自身对照法 测定时不用杂质对造品，建立方法时需要 方法建立：取杂质对照品和药物对照品配成一定浓度的混合溶液，进行色谱分离，记录色谱峰面积，按下式计算
45、杂质相对于药物的浓度校正因子：A对对/C对对 A杂杂/C杂杂 校正因子（f）=将f值载入质量标准中。杂质含量检查：将供试品溶液稀释成与杂质限量相当的溶液作对造液（S）分别进样供试品溶液(X)与对造品溶液 记录X杂质峰面积，乘上相应的校正因子，与自身对照溶液的主成分峰面积比较，计算杂质含量。Ax x As s/Cs s 浓度（Cx）=f 该方法优点：并不需要杂志对造品，消除了杂质与主成分的响应因子不一导致的测定误差。缺点：杂质的定位必须采用相对保留时间不加校正因子的主成分自身对照法适用条件：无杂质对造品的情况方法：以供试品溶液的稀释液作为对造液。分别进样供试品液与对造液，供试品中各杂质的锋面积与
46、对造液主成分锋面积比较，计算杂质含量。A杂总/A自C自/取样100%=杂质%不加校正因子的主成分自身对照法A杂总/A自C自/取样100%=杂质%样品测定液 1 2 3A杂总杂总=A1A2A3自身对照液（1%）峰面积归一化法适用：粗略测量杂质的含量方法：供试液，进样，色谱分离，测定后，计算杂志峰面积总和占总峰面积的百分率A杂总/A总100%=杂%A总=A杂1A杂2A样 杂1 杂2 样 用于测定挥发性特殊杂质。方法与HPLC相似，不同之处有标准溶液加入法 标准加入法：1)A/A(CCXisXX（三）气相色谱法（GC）CCCAAXXXXis 根据药物与杂质对光的选择性吸收性质的差异进行药物的杂质检查
47、二二 光谱分析法光谱分析法（一）紫外分光光度法v利用杂质与药物在紫外区的吸收差异，选用适当波长进行测定。例 1 地恩酚中二羟基蒽醌的检查，后者的氯仿溶液在432nm处有最大吸收（E=495），而样品在该波长处几无吸收。故规定0.01%的样品液在432nm处吸收度不得过0.12。例 2 苯丙醇中苯丙酮的检查，前者由后者还原制得。两者吸收峰重叠，但苯丙醇的A247nm/A258nm 比值（R）与苯丙酮的含量成直线关系，控制该比值即可限制苯丙酮的量(%)。247 258 nm苯乙醇苯乙酮R%0.790.5（二）红外分光光度法v红外分光光度法-主要用于药物中低效或无效晶型的检查。一些多晶型药物的晶型结
48、构不同，导致红外光谱图中某些特征带的频率、峰形和强度出现显著差异，因此可用IR光谱法检查低效或无效晶型。例 甲苯咪唑中A晶型的检查 晶型 640cm-1 662cm-1 A型（无效）强 弱 C型 弱 强当样品中含有A晶型时，两波长处吸收度比值发生变化。中国药典方法：样品25mg和含10%A晶型对照品25mg，同法操作。记录620-803cm范围的IR图谱，计算两波数处吸收度比值R=D640/D662 R样R对，则样品中A晶型含量在10%以下662640（三）原子吸收分光光度法v原子吸收分光光度法由待检元素灯发出的特征谱线通过供试品蒸气时，被蒸气中待检元素的基态原子所吸收，测定辐射光强度减弱的程
49、度，求出供试品中待检元素含量，其遵守一般分光光度法的吸收定律。本法含量测定方法有：标准曲线法，标准加入法 杂质限量检查采用如下方法：供试品溶液 等量供试品待检元素对照品对照溶液 取溶液喷入火焰，调节仪器有合适读数a 同样条件下测定溶液，记录读数b b=供试品中待检元素的量（a-b）=加入的待检元素对照品的量 若 b（a-b），合格 若 b（a-b），不合格 药物杂质与药物化学性质相差较大时，选择合适的试剂，使之与杂质发生化学反应产生颜色、沉淀、气体，药物不发生该反应，从而检查杂质的限量。三三 化学分析法化学分析法 杂质与试剂产生沉淀 例 氯化钠中钡盐的检查 Ba2+SO42-BaSO4 例 洋
50、地黄毒苷中洋地黄皂苷的检查 利用后者能与胆甾醇形成醇中不溶物，取样品10mg，加乙醇2ml溶解，加胆甾醇溶液2ml，振摇混合，10min内不得发生沉淀。根据药物与杂质在形状上的不同，如臭味和挥发性的差异、颜色的差异、溶解行为的差异和旋光性的物理性质上的差异进行检查。四四 物理分析法物理分析法例例1 1 黄凡士林中异性有机物检查（灼烧时有黄凡士林中异性有机物检查（灼烧时有异味）异味）例例2 2 磺胺嘧啶中氧化产物偶氮苯的检查磺胺嘧啶中氧化产物偶氮苯的检查取样品取样品2.0g2.0g，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液10ml10ml溶解，加溶解，加水稀释至水稀释至25ml25ml，溶液应澄清无色，如
