1、探究：探究：培养液中酵母菌培养液中酵母菌 种群数量的变化种群数量的变化探究：培养液中酵母菌种群数量的变化探究：培养液中酵母菌种群数量的变化目的要求目的要求1、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化3、注意样方法的应用、注意样方法的应用4、体会影响种群数量变化的因素、体会影响种群数量变化的因素1、酵母菌的繁殖方式主要是、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是、酵母菌的呼吸方式是:兼性厌氧兼性厌氧(可进行有氧呼吸和无氧呼吸可进行有氧呼吸和无氧呼吸)回顾思考回顾思考:出芽生殖
2、出芽生殖3、酵母菌的培养条件要注意那些问题、酵母菌的培养条件要注意那些问题?比如要用适宜的温度培养比如要用适宜的温度培养,调节好调节好PH值值,溶氧量的控制等。溶氧量的控制等。酿酒和做面包都需要酵母菌。这些酵母酿酒和做面包都需要酵母菌。这些酵母菌可以用液体培养基（培养液）来培养。培菌可以用液体培养基（培养液）来培养。培养液中酵母菌种群的增长情况，与发酵食品养液中酵母菌种群的增长情况，与发酵食品的制作有密切关系。的制作有密切关系。例如：酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下呈例如：酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下呈“S”型增长。温度、养分会影响酵母菌的生长。型增长。温度、养分会影响酵母菌的
3、生长。探究：培养液中探究：培养液中酵母菌种群数量的变化酵母菌种群数量的变化问题问题 培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？温温度会影响酵母菌的生长吗？营养成分会影响酵母菌的生长度会影响酵母菌的生长吗？营养成分会影响酵母菌的生长吗？吗？作出假设作出假设 根据前面所学的知识，针对这一问题作出假设：根据前面所学的知识，针对这一问题作出假设：讨论探究思路讨论探究思路 探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计数板（管、血球计数板（2mm2mm2mm2mm方格）、滴管、显微镜等，都由老方
4、格）、滴管、显微镜等，都由老师提供。师提供。在制订计划前，你需要思考以下问题，并与同学讨论。在制订计划前，你需要思考以下问题，并与同学讨论。一、怎样进行酵母菌的计数？一、怎样进行酵母菌的计数？提示：对一支试管中的培养液提示：对一支试管中的培养液(可定为可定为10ml)中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用抽样检测抽样检测的方法：先将盖玻片放在计数室上，的方法：先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于用吸管吸取培养液，滴于盖玻片盖玻片边缘，让边缘，让培养培养液液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，稍待片自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，稍待片刻，待酵母菌
5、细胞全部刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部沉降到计数室底部，将，将计数板计数板放在载物台的中央，放在载物台的中央，计数计数一个小方格内一个小方格内的酵母菌数的酵母菌数 量，再以此为根据，量，再以此为根据，估算估算试管中试管中的酵母菌总数。的酵母菌总数。介绍介绍:血球计数板的构造血球计数板的构造1、血球计数板：、血球计数板：是显微镜上的外挂物件，可用来测是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞，细菌等一些微小物体的长度，还有就是测量量细胞，细菌等一些微小物体的长度，还有就是测量数量，如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块数量，如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的
6、。玻片中有四条下比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台，中间的平台较宽，其中间又凹的槽，构成三个平台，中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。刻有一个方格网。化化放大后的方格网计数室放大后的方格网计数室 I H G F E D C B A251616252、方格网的构成：、方格网的构成：方格网上刻有方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，计数室通常有两种规格：一种是大方格内分为计数室，计数室通常有两种规格：一种是大方格内分为为16中格，每一中格又分为中格
7、，每一中格又分为25小格；另一种是大方格小格；另一种是大方格内分为内分为25中格，每一中格又分为中格，每一中格又分为16小格。但是不管计小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一每一大方格都是由大方格都是由1625=2516=400个小方格组成。个小方格组成。3、使用方法、使用方法:将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的盖玻片，将稀释后的酵母菌悬液，用吸管加盖专用的盖玻片，将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余吸取一滴置于盖玻片的边缘，使
8、菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内，加盖盖玻片。到血球计数室内，加盖盖玻片。5、单位换算、单位换算:以以1mm1mm为例，大方格的长和宽各为为例，大方格的长和宽各为1mm，深度为，深度为0.1mm，其体，其体积为积为0.1mm3。换算为。换算为1mL：1000/0.1=104即即1mL是是104 个个0.1mm3。4、计数室的规格：、计数室的规格：计数室长计数室长宽有：宽有：1mm1mm,2mm2mm,3mm3mm等等深度均为深度均为0.1mm。如果使用规格为如果使用规格为16格格25格的计数室，要格的计
9、数室，要按对角方位，取左上、右上、左下、右下按对角方位，取左上、右上、左下、右下4个个中格中格(即即100个小格个小格)的酵母菌数。的酵母菌数。如果使用规格为如果使用规格为25格格16格的计数室，除格的计数室，除了取其了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个个对角方位外，还需再数中央的一个中格中格(即即80个小方格个小方格)的酵母菌数（五点取样的酵母菌数（五点取样法）。法）。出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。可作为两个菌体计算。6、如何计数呢？、如何计数呢？规格为规格为25格格16格的计数室，五点取样法格的计数室，五点取样法
10、7、盖玻片下的培养液厚度为、盖玻片下的培养液厚度为0.1mm，请推算出将，请推算出将一个小方格范围内的酵母菌数，换算成一个小方格范围内的酵母菌数，换算成10ml培养液培养液中酵母菌总数的公式。中酵母菌总数的公式。每每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式菌液中所含的酵母菌个数计算公式 （以（以1mm1mm为例）：为例）：（1）16格格25格的血球计数板计算公式格的血球计数板计算公式 酵母细胞数酵母细胞数/ml=(100小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数/100)400 104 稀释倍数稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数 4 106稀释倍数稀释倍数 （2）25格格x16格
11、的血球计数板计算公式格的血球计数板计算公式 酵母细胞数酵母细胞数/ml=(80小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数/80)400 104 稀释倍数稀释倍数即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数 4 106稀释倍数稀释倍数 课本中大方格的长和宽各为课本中大方格的长和宽各为2mm，深度为，深度为0.1mm，其体积为其体积为0.4mm3。换算为。换算为1mL：1000/0.4=2.5103，即即1mL是是 2.5103个个 0.4mm3。则：每则：每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式菌液中所含的酵母菌个数计算公式（2mm 2mm）：（1）16格格25格的血球计数板计算公式格的血球计数板计
12、算公式 酵母细胞数酵母细胞数/ml=(100小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数/100)400 2.5103稀释倍数稀释倍数即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数106稀释倍数稀释倍数（2）25格格x16格的血球计数板计算公式格的血球计数板计算公式:酵母细胞数酵母细胞数/ml=(80小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数/80)400 2.5103 稀释倍数稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数106稀释倍数稀释倍数使酵母菌混合均匀。使酵母菌混合均匀。不需要，因不同时间取样已形成对照。不需要，因不同时间取样已形成对照。需要。尽量减少误差。对每个样品计需要。尽量减少
13、误差。对每个样品计数三次数三次,取其平均值。取其平均值。二、从试管中吸出培养液进行计数之前，建二、从试管中吸出培养液进行计数之前，建议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么？议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么？三、本探究需要设置对照吗？如果需要三、本探究需要设置对照吗？如果需要,请讨论对照组应怎样设计和操作，如果请讨论对照组应怎样设计和操作，如果不需要，请说明理由。不需要，请说明理由。四、需要做重复实验吗？四、需要做重复实验吗？时间时间（d）酵母菌酵母菌细胞数量（细胞数量（106个个/mL）A组 B组 C组A1A2A3平均B1B2B3平均C1C2C3平均1234567五、怎样记录结果？记录表怎样设计
14、？五、怎样记录结果？记录表怎样设计？.只计数相邻两边及其顶角的只计数相邻两边及其顶角的酵母细胞数酵母细胞数 稀释培养液。稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每稀释培养液。稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。倍即可。八、血球计数板的清洁八、血球计数板的清洁 血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内
15、是否残留酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物，若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。菌体或其他沉淀物，若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。六、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当六、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？采取怎样的措施？七、对于压在小方格界线上七、对于压在小方格界线上的酵母菌，应当怎样计数？的酵母菌，应当怎样计数？实验设计实验设计 将将9支试管分成支试管分成ABC三组，每组三组，每组3支。支。A组为实验组为实验组，装培养液组，装培养液10 mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环境温度环境温度28。B组装培养液组装
16、培养液10 mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环环境温度境温度5，与，与A组形成温度条件对照。组形成温度条件对照。C组不装培组不装培养液，只装无菌水养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液酵母菌母液0.1mL,环境温环境温度度28，与，与A组形成营养条件对照。组形成营养条件对照。实验操作：实验操作：(1)、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；(2)、预先设计分装。先每次用、预先设计分装。先每次用10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL培养培养液到液到A组和组和B组试管，用另一支组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL无菌无菌水到水到C组试管。
17、待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，组试管。待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。(3)、用高压蒸汽灭菌锅灭菌；、用高压蒸汽灭菌锅灭菌；(4)、接种菌种：用灭菌干净的、接种菌种：用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取刻度吸管每次吸取0.1mL酵酵母菌母液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免母菌母液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）初始菌数过多。）(5)、培养：将、培养：将 A、C试管置于试管置于 28的恒温箱中培养。将的恒温箱中培养。将 B试管试管置于置于5的恒温箱中
18、培养。（的恒温箱中培养。（5的恒温箱可由某些型号冰箱保的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定温室设定5时代替。）时代替。）(6)、计数和记录：每天取样时间大体一致，每次每组按序号取、计数和记录：每天取样时间大体一致，每次每组按序号取一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进行细胞计数后，立即将数据填到记录表格中。行细胞计数后，立即将数据填到记录表格中。分析结果，得出结论分析结果，得出结论 将所得数值用曲线图表示出来，分析实验结
19、果是否支持你将所得数值用曲线图表示出来，分析实验结果是否支持你所做的假设。所做的假设。酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈“S”型增长，但之后会下降。温度、营养成分会型增长，但之后会下降。温度、营养成分会影响酵母菌种群数量的变化。影响酵母菌种群数量的变化。探究的结论：探究的结论：表达和交流表达和交流 1、向全班汇报本小组、向全班汇报本小组7天的数据，算天的数据，算出每一天全班各组数据的平均值，根据平出每一天全班各组数据的平均值，根据平均值重新画酵母菌种群数量的增长曲线。均值重新画酵母菌种群数量的增长曲线。将这个增长曲线与本小组的曲线进行比较，将这
20、个增长曲线与本小组的曲线进行比较，分析其相似程度，并做出合理的解释。分析其相似程度，并做出合理的解释。2、根据各组平均数据画出的增长曲线、根据各组平均数据画出的增长曲线有没有什么总趋势？如果有，作出说明。有没有什么总趋势？如果有，作出说明。如果设计了无菌水的对照，也画出增长曲如果设计了无菌水的对照，也画出增长曲线。线。3、影响酵母菌的种群数量增长的因素可、影响酵母菌的种群数量增长的因素可能是什么？能是什么？除了本实验中温度、营养以外还包括除了本实验中温度、营养以外还包括酵母菌菌种本身性质、接种时间、酵母菌菌种本身性质、接种时间、p值、值、接种量、溶氧量等影响因素。接种量、溶氧量等影响因素。1取
21、少量酵母菌液放入血球计数板直接计数，测得的数目是（）A活细胞数 B死细胞数 C菌落数 D细胞总数A2、探究酵母菌的种群数量实验中，某学生的部分操作、探究酵母菌的种群数量实验中，某学生的部分操作过程如下：过程如下：（1）把）把酵母菌培养液放置于冰箱中培养，酵母菌培养液放置于冰箱中培养，（2）从静置试管中吸取酵母菌培养液计数，（）从静置试管中吸取酵母菌培养液计数，（3）到）到第七天取样计数，请纠正其错误第七天取样计数，请纠正其错误：（1）_（2）_（3）_.该同学用该同学用25格格x16格格,其中其中长和宽各为长和宽各为2mm,深度为深度为0.1mm的血球计数板计数的血球计数板计数,用五用五点取样
22、法读取酵母菌有点取样法读取酵母菌有40个个,其中稀释了其中稀释了10倍倍,则则1ml菌菌液中所含的酵母菌个数为液中所含的酵母菌个数为_应将静置改为轻轻振荡几次应将静置改为轻轻振荡几次.应放在适宜温度下培养应放在适宜温度下培养.应连续七天取样计数应连续七天取样计数.练习练习:（40/80）106 10 =5 106 2012江苏卷 蓝藻、绿藻和硅藻是湖泊中常见藻类。某课题组研究了不同pH对3种藻类的生长及光合作用的影响，实验结果见图5、图6。请回答下列问题：图5藻类生长代谢会改变培养液pH(1)根据图5和图6分析，3种藻类中pH适应范围最广的是_；在pH为8.0 时，3种藻类中利用CO2能力最强的是_。(2)在培养液中需加入缓冲剂以稳定pH，其原因是_。(3)在实验中需每天定时对藻细胞进行取样计数，请回答以下问题：绿藻蓝藻 取出的样液中需立即加入固定液，其目的是_。在计数前通常需要将样液稀释，这是因为_。将样液稀释100倍，采用血球计数板(规格为1 mm1 mm0.1 mm)计数，观察到的计数室中细胞分布见图7，则培养液中藻细胞的密度是_个/mL。1108维持藻细胞数量不变藻细胞密度过大
