1、GP73与肝癌关系的研究进展与肝癌关系的研究进展福建医科大学附属第二医院福建医科大学附属第二医院 普外科普外科 周文瑞周文瑞肝癌现状n原发性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC是世界范围最常见的恶性肿瘤之一。n我国是全球肝癌发病率最高的国家，每年发病患者数占全球约 55%。n肝癌患者早期无明显症状一旦出现症状就诊，往往已n属于中晚期，失去了有效的治疗时机，因此其早期诊断就显得尤为重要。中华人民共和国卫生部.原发性肝癌诊疗规范(2011年版)J.临床肝胆病杂志,2011,27(11):1141-1159.肝癌现状2012中国肿瘤登记年报肝癌的发病率仅次于肺癌和胃癌，居第
2、三位。其死亡率仅次于肺癌。肝癌的发病率仅次于肺癌和胃癌，居第三位。其死亡率仅次于肺癌。4n超声检查 n放射性核素肝扫描nCT检查n选择性腹腔动脉或肝动脉造影检查 nX线检查 n磁共振成像（MRI）n肝穿刺行针吸细胞学检查n剖腹探查B1.0 的病灶发现困难良、恶性结节鉴别困难影像学动态监测的高成本，患者难以承受肝癌发展至一定阶段时,影像学检查可有相应表现,但往往已发展至疾病中晚期,且对疾病早期诊断概率低肝癌肿瘤标志物n甲胎蛋白（AFP）n高尔基体糖蛋白 73（golgi protein-73，GP73），磷脂酰基醇蛋白聚糖-3（glypican-3，GPC3），鳞状细胞癌抗原免疫球蛋白复合物（S
3、quamous cell carcinoma antigen，SCCA），-L 岩藻糖苷酶（alphalfucosidase，AFU）等。Li X,Wu K,Fan D.Serum golgi phosphoprotein 2 level:a better marker than alpha-fetoprotein for diagnosing early hepatocellular carcinomaJ.Hepatology,2009,50(5):1682.甲胎蛋白（AFP）概述n1956年发现，60年代末应用于临床，是目前全世界应用最广泛的肝癌肿瘤标志物。n正常情况下，来自胚胎的肝细胞和
4、卵黄囊，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失。正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20ug/L。n当肝细胞癌变时，低甲基化作用会使 AFP 的基因表达开放，AFP 表现为表达增加。n原发性肝癌诊疗规范（2011版）：对于AFP400g/L超过1个月，或200g/L持续2个月，排除妊娠、生殖腺胚胎癌和活动性肝病，应该高度怀疑肝癌Debruyne E N,Delanghe J R.Diagnosing and monitoring hepatocellular carcinoma with alpha-fetoprotein:new aspects and applicationsJ.Clin Chi
5、n Acta,2008,395(1-2),19-26.甲胎蛋白（AFP）n2 个问题n假阴性，当 AFP 基因表达调控停止在转录后翻译前时，AFP 的表达量会降低，就会出现假阴性，并且当肝癌较小时，AFP 的表达量低于检测的最低限，易出现假阴性；而当肝癌过大时,AFP 表达延迟或者表达量超过检测的最高限，HCC 患者也可呈现 AFP 阴性。n假阳性，AFP 不仅在 HCC 患者中会升高，在慢性肝炎、肝硬化、胃癌、胚胎癌及其他肿瘤患者中都常有一过性 AFP 增高。甲胎蛋白（AFP）n近年来有报道指出,诊断原发性肝癌,敏感性为39-64%,特异性为76-91%,对早期肝癌具有9-32%阳性预测值。
6、n有近1/3的HCC患者AFP为阴性（敏感性不足），同时20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP（特异性不足）,这给HCC的诊断带来了困难。特异性不足20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP2010 版美国肝病研究学会(AASLD)指南已不再将AFP作为筛查指标。但我国的HCC大多与HBV感染相关，与西方国家HCC致病因素不同（多为HCV、酒精和代谢性因素），结合国内随机研究(RCT)结果和实际情况，目前对HCC的常规监测筛查指标中继续保留AFP。GP73 的概述n又称高尔基体II型跨膜蛋白，分子量73KD，恒定表达于正常肝脏的胆管上皮细胞，肝实质细胞很少或不表达n从GP73的结构来看，G
7、P73是一个岩藻糖基化蛋白，而已经有大量的报道显示岩藻糖基化与HCC的发生密切相关。n2000年，Kladney等首次从巨细胞肝炎肝组织内克隆GP73。GP73 作为肝癌诊断标志物的价值n机制：在正常肝脏组织，GP73 主要表达于汇管区的胆管上皮细胞，在肝细胞则无表达或表达很少。但在肝脏疾病中，其在肝细胞及血清中的含量上调，在肝炎中上调水平低，在肝癌中上调水平高。经研究，这些高表达的 GP73 主要来自于肝细胞，而胆管细胞表达 GP73 则改变不明显。nHu L,Li L,Xie H,et al.The Golgi localization of GOLPH2(GP73/GOLM1)is de
8、termined by the transmembrane and cytoplamic sequencesJ.PLoS One,2011,6(11):e28207.GP73 作为肝癌诊断标志物的价值n2005 年，Block 等用乙型肝炎病毒感染土拨鼠，建立土拨鼠肝癌模型，运用糖蛋白组学手段检测了GP73 在肝癌组和正常组血清中的表达情况，结果发现在肝癌组血清中 GP73 明显增高。n赵秀英等对 372 例样本进行研究，其中健康组 43 例，肝炎肝硬化组 110 例，肝癌组 219 例。健康组 GP73 表达量为22.1 ng/mL，肝炎肝硬化组 GP73 表达量为 81.4 ng/mL，肝
9、癌组 GP73 表达量为 271.5 ng/mL，GP73 的表达在肝癌组明显高于健康组及肝炎肝硬化组。n GP73 可以作为肝癌早期的诊断标志物。GP73 作为肝癌诊断标志物的价值n近年来许多研究者都用实验证明了 GP73 对于肝癌的早期诊断具有较高的敏感性与特异性，GP73 敏感性范围为 69%83%，特异性范围为73%97%。GP73 作为肝癌诊断标志物的价值n研究还发现，GP73 表达水平的提高可能还与肿瘤的侵犯转移密切相关。Sun 等用免疫组化的方法发现，肝癌组织中GP73的表达与血管侵犯、肿瘤分化等密切相关，提示GP73 能增强肿瘤的浸润和转移。n研究还发现 GP73 对于肝癌的术
10、后预测预后也有一定的价值。据资料显示，GP73 在HCC 患者术后一周内维持在一定水平，但术后 1.52年下降明显，低于肝癌组，略高于正常组。GP73 与 AFP 相比较n从总体水平来看，AFP 和GP73对于肝癌诊断的特异性相差不多，但 AFP的敏感性显著低于 GP73，AUROC 值则是 GP73 略高于 AFP。总体上来看，GP73 略优于 AFP。而单看敏感性，GP73 则显著优于 AFP。GP73 与 AFP 相比较nAFP。在诊断早期在诊断早期HCC时，与时，与AFP的敏感度（的敏感度（25%）相比，）相比，GP73水平的敏感度明显更水平的敏感度明显更高（高（62%）（P0.000
11、1）。）。而且，而且，血清血清AFP浓度低于浓度低于20ng/ml的的HCC患者中，有患者中，有57%（32/56）的患者血清）的患者血清GP73阳性。阳性。J.Marrero,P.Romano,Journal of Hepatology,2005 Volume 43,Issue 6,Pages 1007-1012 GP73 与 AFP 相比较GPC-3,GP73和和AFP诊断诊断HCC的的ROC曲线曲线GP73和和AFP鉴别鉴别HCC与肝与肝硬化的硬化的ROC曲线曲线GP73AFPGPC-3GP73AFPJournal of Gastroenterology and Hepatology 2
12、9(2014)597602ROC曲线显示：曲线显示：GP73诊断肝癌及肝癌的鉴别诊断方面的价值优于诊断肝癌及肝癌的鉴别诊断方面的价值优于AFP。北京协和医院北京协和医院 毛一雷毛一雷GP73 与 AFP 相比较n赵秀英等在大样本试验中也发现，对于 149例AFP100 ng/mL。n张亚松等也发现 45 例HCC 患者血清 AFP 13.3 g/L，GP73 检出阳性 25例（55.6%）；33 例 AFP7 g/L，其 GP73 检出阳性17 例（52%）。n研究都证实，GP73 对于 AFP 阴性患者具有较高的检出率，能在一定程度上弥补 AFP的不足。赵秀英,李宁,丁惠国,等.血清高尔基体
13、糖蛋白73在肝细胞癌诊断中的作用J.中华肿瘤杂志,2010,32(12):943-946.中，可以检测出高水平的GP73。张亚松,石玉玲,张喜钦.GP73在肝癌早期诊断中的应用价值J.医学临床研究,2011,28(4):651-653.GP73 与 AFP 相比较nAFP 与 GP73 的不同之处还表现在肿瘤转移，术后预后等方面。n目前的研究认为GP73与肿瘤大小，结节数目，是否多发及临床分期等无密切相关性，与病理分级及合并肝硬化相关。nAFP则与肿瘤大小，临床分期等有相关性。在肝癌较小、癌肿数量少甚至单发或患者肝功能较好时，AFP 升高水平较低甚至不升高，而只有当肝癌发生侵袭时，如癌栓形成，
14、包膜浸润，血管侵犯，肝内转移及肿瘤分化时，血清 AFP 才显著升高。n GP73 则在肝癌早期就显著升高，并且可能起到增强肿瘤转移的作用。Yamamoto K,Imamura H,Matsuyama Y,et al.AFP,AFP-L3,DCP,and GP73 as markers for monitoring treatment response and recurrence and as surrogate markers of clinicopathological variables of HCCJ.J Gastroenterol,2010,45(12):1272-1282.蔡云峰,
15、甄作均,陈焕伟,等.肝癌术后肝再生状态与肝癌复发关系的初步研究J.中国普通外科杂志,2008,17(7):692-696.GP73 与 AFP 相比较n荷兰伊拉斯莫斯大学医疗中心的一项荟萃分析显示，GP73作为一种新作为一种新的血清标志物，其价值优于的血清标志物，其价值优于AFP，可用于肝癌诊断和监测。可用于肝癌诊断和监测。n研究人员通过对PubMed、Embase和Web of Science数据库进行系统性检索，确定了2005年年1月月2010年年10月月间发表的以尿液、血清或唾液中的HCC生物标志物为研究重点的文章。n与与AFP相比相比，GP73对于肝癌的检测对于肝癌的检测优于优于AFP
16、（P=0.006），IL-6与AFP相似（P=0.66），而SCCA弱于AFP（P=0.001）。The sROC with the sensitivity and 1-specificity of GP73,AFP,IL-6,and SCCAHepatol Int 2013 Mar;7(1):59-64.GP73 与 AFP 联合诊断n研究发现GP73 与 AFP 不存在相关性（Spearman 相关分析，P=0.667），在所有 HCC 患者中，41.3%两者仅一个指标升高，54.7%两者皆升高，而仅有 4%两个指标均不升高，两者联合诊断可使 HCC诊断率显著提高。n多中心大样本研究表明，
17、AFP 联合 GP73 检测后，敏感性提高到了 89.2%，特异性提高到了 85.2%（GP73，AFP 单项检测的敏感度分别为 74.6%、58.2%，特异性分别为 97.4%、85.3%）。方玫玫,陈展洪,李星,等.肝癌及肝硬化患者血清中GP73的表达及临床意义J.实用医学杂志,2011,27(20):3716-3718.姚建华.高尔基体蛋白73和甲胎蛋白联检在原发性肝癌诊断中的临床应用J.放射免疫学杂志,2012,25(6):673-675.GP73 与 AFP 联合诊断通过通过Meta-analysis各标志物各标志物ROC曲线下面积曲线下面积 Meta-AnalysisMeta-An
18、alysis共包括在共包括在1999199920122012年间发表的年间发表的4040篇血清标志物检测肝癌篇血清标志物检测肝癌的英文文献显示：的英文文献显示：GP73GP73联合联合AFPAFP诊断肝癌的价值最高诊断肝癌的价值最高 GP73GP73和和 AFP+GP73 AFP+GP73的的诊断肝癌的价值均优诊断肝癌的价值均优于于AFPAFP。International Journal of Molecular Sciences 14（2013）23559-23580肝癌诊断的单一标志物及组合标志物的评价：肝癌诊断的单一标志物及组合标志物的评价：荟萃分析荟萃分析22数据来源：302医院118
19、5例肝癌预警样本阳性率统计三指标联合检测阳性率75.2%肝癌早期多指标联检GP73 与 AFP 联合诊断问题和展望n就是 GP73 的生物学特性，分泌机制，功能等尚未完全明确。n缺乏统一的检测方法很多，大多数人使用ELISA，Western blot，Immunoblot 这三种方法，后两种方法操作起来步骤多，易出错；ELISA 操作简便，经济，但误差大。n缺乏多中心大样本的联合临床研究来评价其临床 应用价值。问题和展望n总之，血清 GP73 是一个较为重要的肝癌标志物，其在诊断方面具有较高的敏感性和特异性，特别是高敏感性能有效弥补 AFP 低敏感性所带来的局限性。虽然目前 GP73 广泛运用于临床还存在很多题，但是随着各界学者以及临床医师对该领域的进一步深入研究，相信在不久的将来，GP73 将广泛应用到HCC 的早期诊断，发病机制，肿瘤药物治疗靶点以及治疗效果等研究中去。谢 谢！
