1、问题Q1：实验室诊断梅毒的两类血清学检测方法：实验室诊断梅毒的两类血清学检测方法是什么？是什么？Q2：为什么需要这两类血清学检测方法？：为什么需要这两类血清学检测方法？梅毒血清学检测分类梅毒血清学检测分类1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）包括：RPR、TRUST等2.梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）包括：TPPA、TP-RT、ELISA、CLIA等非梅毒螺旋体抗原血清学试验(RPR、TRUST)o原理原理（抗心磷脂抗体）：n 人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。n 主要是Ig
2、M和IgG混合抗体。非梅毒螺旋体抗原血清学试验o抗体产生时间 n感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周n一般在感染后57周（或硬下疳出现后23周）产生。（郭红亮，中外健康文摘2010年第20期）o抗体作用n无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。Q3：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法种检测方法原理和方法o 反应原理反应原理n抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见o 抗原基本成分抗原基本成分n心磷脂、卵磷脂和胆固醇o 方法包括：方法
3、包括：n快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)n不加热血清反应素(USR)n甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）n性病研究实验室试验(VDRL)等。检测流程o 操作步骤：将检测试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。测RPR自动旋转仪转速。在RPR纸卡上编上相应的待检样本的编号。检测流程（定性）加样：加样：n吸取50l血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。加抗原加抗原：n将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗原。反应反应：n将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观察结果。检测流程（定量）稀释液准备：稀释液准备：n在圈内加入50l生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。加样加样
4、：n吸取50l血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。重复定性试验后两步。重复定性试验后两步。临床意义o 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。【感染57周（或硬下疳出现后23周）】o 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。假阳性问题o 假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性技术性假阳性技术性假阳性n 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。生物学假阳性生物学假阳性n 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性急性生物学假阳性反应的疾病 风疹风疹 水痘水痘 传染性单核细胞增多症传染
5、性单核细胞增多症 传染性肝炎传染性肝炎 上呼吸道感染上呼吸道感染 肺炎球菌性肺炎肺炎球菌性肺炎 病毒性肺炎病毒性肺炎 牛痘疹牛痘疹慢性生物学假阳性反应的疾病o 系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮 o 自身免疫性溶血性贫自身免疫性溶血性贫血血o 盘状红斑狼疮盘状红斑狼疮 o 结节性多动脉炎结节性多动脉炎 o 类风湿性关节炎类风湿性关节炎 o 桥本氏甲状腺炎桥本氏甲状腺炎 o 风湿性心脏病风湿性心脏病o 干燥综合征干燥综合征o 毒品瘾者毒品瘾者 o 慢性肾炎慢性肾炎o 肝硬化肝硬化o 老年老年 o 麻风麻风 (是唯一产生是唯一产生慢性生物学假阳性的慢性生物学假阳性的感染性感染性 疾病疾病)妊娠的假阳性反
6、应妊娠的假阳性反应 这是一种生理情况下的生物学假阳性这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。，滴度低。假阳性问题o 梅毒假阳性反应的处理梅毒假阳性反应的处理1.技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。2.对急、慢性生物学假阳性反应，应做TPPA等梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）试验进行排除。前带现象o 原理原理n 指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。o 处理处理n 将血清稀释后再进行试验。血清固定o 耐血清性（血清固定）
7、n 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）包括：TPPA、TP-RT、ELISA、CLIA等试验原理试验原理o 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（IgG 和IgM）。o 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。o Q3：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？验在梅毒诊疗中有意义吗？TPPA/TPHAo TPPA试验原理与TPHA试验基本相同n TPPA试验用梅毒螺旋体致
8、敏明胶颗粒n TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞o 特点n 梅毒螺旋体全抗原TP-ELISA/CLIAo 原理原理n ELISA:用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。n CLIA:采用双抗夹心法的原理，使用化学发光底物取代传统的显色底物，增加了检测的灵敏度。o 特点n 本法可用于大规模血清检测。临床应用临床应用o 梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验o 它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。o 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。o 不能作为疗效观察的指标。o 阳性不能区分既往
9、感染和现症感染，应结合RPR/TRUST结果进行诊断。小结o 根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。o 策略一n采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛;再用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行确证。o 策略二n采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛；再用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行诊断是否现正感染。目前我们医院的梅毒血清学检测采用的是策略1，其存在以下不足：1.早期和晚期梅毒的筛查漏检率高。2.判断结果主观性强，不易保存和查阅结果。3.手工操作不适合大批量筛查。随着梅毒筛查的标本量不断增加，为进一步提高工作效率，同时也为降低我们的梅毒筛查漏诊率。从现在起我们将启用策略2作为我们医院的梅毒血清学检测方案。先用化学发光法筛查梅毒特异性抗体，阳性标本再用TRUST判断其是现症感染还是既往感染。梅毒血清学试验结果的临床意义RPRTRUSTTPPATP-ELISA临床意义阴性阴性排除梅毒排除梅毒（一期梅毒的早早期）（一期梅毒的早早期）阳性阳性现症梅毒现症梅毒(梅毒孕妇所生的婴儿除外梅毒孕妇所生的婴儿除外)阳性阴性生物学假阳性生物学假阳性阴性阳性早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后（早期梅毒）（早期梅毒）
