1、全国基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目培训项目常见病原真菌常见病原真菌李若瑜李若瑜北京大学第一医院北京大学第一医院北京大学真菌和真菌病研究中心北京大学真菌和真菌病研究中心病原真菌鉴定的基本流程病原真菌鉴定的基本流程临床临床标本标本PDA,SDA28度培养度培养不能生长不能生长鼻孢子菌、肺孢子菌、鼻孢子菌、肺孢子菌、马拉马拉色菌（厚皮除外）色菌（厚皮除外）芽孢芽孢关节孢子关节孢子念珠菌、隐球菌、念珠菌、隐球菌、红酵母等红酵母等毛孢子菌、地霉毛孢子菌、地霉等等有隔菌丝有隔菌丝无隔菌丝无隔菌丝担子菌、子囊担子菌、子囊菌、半知菌菌、半知菌接合菌等接合菌等区分酵母样或霉样菌落区分酵母样或霉样菌落常见病
2、原真菌常见病原真菌 酵母及酵母样真菌酵母及酵母样真菌_念珠菌念珠菌_隐球菌隐球菌_毛孢子菌毛孢子菌_马拉色菌马拉色菌 霉菌霉菌(丝状真菌丝状真菌)_皮肤癣菌皮肤癣菌_曲霉曲霉_毛霉毛霉_镰刀菌等镰刀菌等双相真菌双相真菌念念 珠珠 菌菌 属属 简介简介 念珠菌大约有念珠菌大约有150个种，个种，65%以上不能在以上不能在37生生长，无致病性长，无致病性 念珠菌属可以感染皮肤、粘膜及内脏器官引起念念珠菌属可以感染皮肤、粘膜及内脏器官引起念珠菌病珠菌病 常见的致病性念珠菌常见的致病性念珠菌白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌
3、、乳酒念念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、乳酒念珠菌珠菌 临床最常见的是白念珠菌临床最常见的是白念珠菌生物学特性生物学特性 念珠菌在环境中和人体内均可寄生存在念珠菌在环境中和人体内均可寄生存在 正常人皮肤、口腔、肠道、肛门、阴道中正常人皮肤、口腔、肠道、肛门、阴道中可分离出本菌可分离出本菌 显微镜下表现为芽孢和假菌丝显微镜下表现为芽孢和假菌丝 假菌丝一般与致病相关假菌丝一般与致病相关 寄生时一般表现为孢子相寄生时一般表现为孢子相 致病性致病性 条件致病菌条件致病菌 白念珠菌致病力强白念珠菌致病力强 念珠菌毒素、菌体形态、黏附性和分泌水解酶念珠菌毒素、菌体形态、黏附性和分泌水解酶与与其致病性密切
4、相关其致病性密切相关临床表现临床表现-浅部念珠菌病浅部念珠菌病 口腔念珠菌病口腔念珠菌病 念珠菌性女阴阴道炎念珠菌性女阴阴道炎 念珠菌性龟头炎念珠菌性龟头炎 皮肤念珠菌病皮肤念珠菌病 念珠菌性甲沟炎及甲床炎念珠菌性甲沟炎及甲床炎 慢性粘膜皮肤念珠菌病慢性粘膜皮肤念珠菌病 念珠菌性角膜炎念珠菌性角膜炎临床表现临床表现-系统性念珠菌病系统性念珠菌病 支气管、肺念珠菌病支气管、肺念珠菌病 消化道念珠菌病消化道念珠菌病 泌尿道念珠菌病泌尿道念珠菌病 念珠菌败血症念珠菌败血症 念珠菌性心内膜炎念珠菌性心内膜炎 念珠菌性脑膜炎念珠菌性脑膜炎常见病原菌常见病原菌 白念珠菌（白念珠菌（Candida albi
5、cans）热带念珠菌（热带念珠菌（C.tropicalis）克柔念珠菌（克柔念珠菌（C.krusei）近平滑念珠菌（近平滑念珠菌（C.parapsilosis)光滑念珠菌光滑念珠菌(C.glabrata)乳酒念珠菌（乳酒念珠菌（C.kefyr）季也蒙念珠菌（季也蒙念珠菌（C.guilliermondii）少见病原菌少见病原菌 链状念珠菌（C.catenulata）西弗念珠菌（C.ciferrii）海默郎尼念珠菌（C.haemulonii）解脂念珠菌（C.lipolytica）葡萄牙念珠菌（C.lusitaniae）挪威念珠菌（C.norvegensis）铁红念珠菌（C.pulcherrima）
6、皱落念珠菌（C.rugosa）产朊念珠菌（C.utilis）维丝念珠菌（C.viswanathii）涎沫念珠菌（C.zeylanoides）都柏林念珠菌(C.dubliniensis组织病理学组织病理学实验室检查实验室检查 直接镜检：可见卵园形发芽孢子及菌丝，如查直接镜检：可见卵园形发芽孢子及菌丝，如查到大量假菌丝，说明念珠菌处于致病状态。到大量假菌丝，说明念珠菌处于致病状态。染色：革兰氏染色，菌丝、芽孢呈蓝色，着色染色：革兰氏染色，菌丝、芽孢呈蓝色，着色不均匀。过碘酸染色，菌丝、芽孢染成红色。不均匀。过碘酸染色，菌丝、芽孢染成红色。用用1:1000吖啶橙染色，在荧光显微镜下，菌体吖啶橙染色，
7、在荧光显微镜下，菌体呈现荧光。呈现荧光。培养：最常用的培养基是沙堡氏培基，当菌落培养：最常用的培养基是沙堡氏培基，当菌落生长后再移种至米粉吐温生长后再移种至米粉吐温80培基或其它鉴定培养培基或其它鉴定培养基中，以便进一步鉴定菌种。基中，以便进一步鉴定菌种。念珠菌直接镜检（念珠菌直接镜检（LPCB）假菌丝和芽孢假菌丝和芽孢致病性酵母菌鉴定原则致病性酵母菌鉴定原则鉴定目的：确定感染及传染源；选择敏感抗真菌药物；哪些酵母菌需要鉴定到种：所有分离自无菌体液，包括脑脊液、血液、尿液、穿刺液及其它体液的酵母菌；分离自所有严重疾患或免疫受损病人或怀疑真菌感染的病人的酵母菌；从任何临床标本中分离出大量的酵母菌
8、；分自若干连续取材的标本，除呼吸道分泌物，也应鉴定至种的水平；芽管试验（芽管试验（Germ-tube test）原理：白念珠菌在有营养的液体环境中35培养，可从酵母细胞生出芽管。结果：白念珠菌可在2h内生成芽管，热带念珠菌和其他念珠菌则否。厚膜孢子形成试验厚膜孢子形成试验（Dalmo plate test）念珠菌显色培养基念珠菌显色培养基CHROMagar CandidaAPI20C酵母鉴定系统酵母鉴定系统ID32C 酵母鉴定系统酵母鉴定系统其它快速同化试剂其它快速同化试剂VITEK全自动微生物鉴定全自动微生物鉴定仪仪 YBC酵母菌鉴定卡。有30个孔的一次性塑料卡，包括26个常规生化反应和4个
9、阴性质控。利用YBC，只有21.3%的酵母需做补充生化试验或形态学检查。白念珠菌白念珠菌 菌落特征菌落特征 沙氏培养基沙氏培养基25中等速度生长，形成酵母样菌落，奶中等速度生长，形成酵母样菌落，奶油样、光滑、闪光，老后有皱褶油样、光滑、闪光，老后有皱褶显色琼脂基上呈绿色菌落显色琼脂基上呈绿色菌落 显微镜特征显微镜特征 玉米粉吐温琼脂：真菌丝和假菌丝，多数假菌丝，假玉米粉吐温琼脂：真菌丝和假菌丝，多数假菌丝，假菌丝连接处产生多数呈簇状、葡萄状小分生孢子，顶菌丝连接处产生多数呈簇状、葡萄状小分生孢子，顶端或侧支产生厚壁孢子端或侧支产生厚壁孢子 血清芽管试验，在血清芽管试验，在371-3371-3小
10、时后，可以产生芽管小时后，可以产生芽管白念珠菌白念珠菌(Candida albicans)酵母菌鉴定程序和路线酵母菌鉴定程序和路线 酵母纯培养 玉米粉吐温琼脂培养基(25)假菌丝（+）假菌丝（-）厚壁孢子（+）厚壁孢子（-）尿素酶试验（+）尿素酶试验（-）白念珠菌 光滑念珠菌 关节孢子（+）关节孢子（-）酵母属 芽孢（+）菌落无胡萝卜色 菌落呈胡萝卜色 芽孢（+）芽孢（-）念珠菌属 红酵母属 丝孢酵母属 地霉菌属 咖啡酸试验 有棕色色素 无棕色色素 新生隐球菌 隐球菌属 血清学试验血清学试验-菌种鉴定菌种鉴定 抗原型别：因子血清（CANDIDA CHECK）：九种因子+蔗糖分解，鉴别7种致病性
11、念珠菌；因子血清（CRYPTO CHECK）：八种因子，可鉴别8种隐球菌及变种分子生物学方法分子生物学方法C.glabrata,C.lusitaniaeC.gulliiermondii,C.kefyrC.tropicalis,C.krusei,C.parapsilosisC.albicansC.dubliniensisC.albicans&C.dubliniensisRAPD methodother five Candida spp.RFLP with Msp Inine Candida spp.PCR in ITS region1.5hrs3hrs2.5hrs4.5hrs5.5hrs小结小结
12、酵母菌鉴定依据酵母菌鉴定依据传统 菌落颜色、外观 镜下细胞形态、大小 有无荚膜 有无假菌丝和菌丝 芽管形成和厚膜孢子形成 碳源同化、发酵 氮源同化、发酵现代现代 辅酶辅酶Q系统系统 同功酶同功酶 血清学血清学 基因分型技术基因分型技术敏感药物敏感药物 两性霉素B 唑类抗真菌药物 棘白菌素类药物 隐隐 球球 菌菌隐球菌属隐球菌属(Cryptococcus)特点特点 本属的共同特征为细胞呈圆形或卵圆形，偶有伸长形或多样形，呈多边芽殖。大部分菌株有荚膜。所有菌种都能同化肌醇并在碳源中生长。糖发酵（）在固体培养基中，大部分菌种呈粘液状，无假菌丝或假菌丝发育不全。不产生子囊孢子。冬孢子或掷孢子。新生隐球
13、菌有性期：属担子菌，新生线黑粉菌临床常见的隐球菌临床常见的隐球菌 Lodder1970年记载隐球菌：17种，6变种。主要致病菌种：新生隐球菌 新生隐球菌新生变种 新生隐球菌格替变种 C.neoformans var.grubii 浅黄隐球菌 浅白隐球菌 罗伦隐球菌致病性隐球菌致病性隐球菌 新生隐球菌新生隐球菌(C.neoformans)三个变种三个变种 新生隐球菌新生变种（新生隐球菌新生变种（C.neoformans var.neoformans）格特变种（格特变种（C.neoformans var.gatii）C.neoformans var.grubii 血清学分类血清学分类 A、B、C、
14、D及及AD型型 新生变种新生变种-D型型 grubii变种变种-A型型 格特变种格特变种-B、C型型 致病性致病性 呼吸道进入体内 健康人具有免疫能力 易感因素 AIDS、糖尿病、淋巴瘤、晚期肿瘤、SLE、器官移植 隐球菌病隐球菌病cryptococcosis 是由隐球菌属中某些种或变种引起的一种深部真菌病。主要侵犯中枢神经系统,预后严重,死亡率高,也可侵犯肺部、皮肤、骨骼等其它脏器。近年来免疫力降低的病人逐年增多,本病发病率也呈上升趋势,特别是在爱滋病病人已成为死亡的主要原因之一。常见临床类型常见临床类型中枢神经系统隐球菌病1.脑膜炎型 2.急性脑膜炎型3.脑炎型 4.肉芽肿型 肺隐球菌病
15、皮肤粘膜隐球菌病 骨隐球菌病 隐球菌败血症生物学性状生物学性状 在SDA培养基上25培养2-5天，可以见到奶油色酵母样菌落，有时黄色或带粉色 显微镜下可见到球形或椭圆形酵母细胞，直径2-5m，第一代培养物有时可见小的荚膜，继代培养不见荚膜 脑脊液直接涂片，细胞有较宽的荚膜。显微镜下有时可见到出芽现象实验室检查实验室检查-病原学检查病原学检查 直接镜检:墨汁染色，新生隐球菌呈圆形或椭圆形的双层厚壁孢子,外有一层宽阔荚膜,边缘清楚完整,菌体内可见出芽（菌体计数：判断预后及疗效的指标）培养：培养基内可加氯霉素,但不可加放线菌酮,因后者抑制本菌生长。生理生化测定：采用自动微生物系统和API鉴定 组织病
16、理学检查及免疫组化 直接镜检直接镜检 脑脊液直接墨汁涂片真菌培养真菌培养 SDA培养基，25培养 组织病理学组织病理学HE PAS 阿申兰阿申兰粘蛋白卡红粘蛋白卡红 免疫组化免疫组化实验室检查实验室检查-其它检查方法其它检查方法 脑脊液检查：中枢神经系统隐球菌病脑脊液压力增高,外观正常或微混,白细胞数增多,早期以中性粒细胞为主,中后期以淋巴细胞为主。糖和氯化物在早期变化不明显,中后期可明显减少。蛋白含量在中后期增高。抗原检查：乳胶凝集试验检测脑脊液及其它体液标本中新生隐球菌荚膜多糖抗原可简便快速有效诊断隐球菌性脑膜炎 乳胶凝集试验乳胶凝集试验 阴性阳性新生隐球菌新生隐球菌(Cryptococc
17、us neoformans)主要侵犯中枢神经系统，也可侵及肺、骨、皮肤，甚至引起败血症。肺是新生隐球菌侵入的主要途径，肺隐球菌病也是隐球菌病的最早表现。该菌的特异性检查为，墨汁涂片，镜下可见圆形或卵圆形厚壁孢子，直径2.5-20um，单芽，也可多芽。菌体外围有一圈透光的荚膜，厚度几乎与菌体相等甚至大于菌体。孢子内有反光颗粒。尿素酶试验阳性。新生隐球菌新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)直接镜检（墨汁染色）直接镜检（墨汁染色）咖啡酸琼脂产生棕色菌落咖啡酸琼脂产生棕色菌落敏感药物敏感药物 两性霉素B 氟康唑 5-氟胞嘧啶 毛孢子菌毛孢子菌毛孢子菌属毛孢子菌属（Trichos
18、poron）过去属于半知菌，又称丝孢酵母，现已归于担子菌，是致病性酵母中重要的一属 可致皮肤感染、肺炎等浅表和深在感染 最近阿萨希毛孢子菌所致的播散性感染有增多趋势 与人类过敏或感染相关的种与人类过敏或感染相关的种*阿萨希毛孢子菌阿萨希毛孢子菌(T.asahii)*星状毛孢子菌星状毛孢子菌(T.asteroids)*皮瘤毛孢子菌皮瘤毛孢子菌(T.inkin)*皮毛孢子菌皮毛孢子菌(T.cutaneum)*粘液毛孢子菌粘液毛孢子菌(T.mucoides)*倒卵形毛孢子菌倒卵形毛孢子菌(T.ovoides)毛孢子菌毛孢子菌生物学特性生物学特性 酵母样菌落 丰富的关节孢子。有或无芽生孢子。可有鹿角菌
19、丝(Appressoria)缺乏发酵碳水化合物的能力，可同化多种碳原 不能利用硝酸盐，尿素酶阳性鉴定方法鉴定方法 形态学 温度试验37 C 放线菌酮抑制试验 生理学API 20C、ID32C 序列测定rDNA基因内转录间区（ITS1区以及2区）形态学观察形态学观察 阿萨希毛孢子菌，皮肤毛孢子菌，皮瘤毛孢子菌，皮炎毛孢子菌菌落外观形态比较相似，呈圆形，表面粗糙，有的呈脑回状 小培养镜下可见关节孢子以及芽生孢子，皮瘤毛孢子菌还可见到鹿角菌丝；阿萨希毛孢子菌阿萨希毛孢子菌(T.asahii)深部感染最常见的毛孢子菌深部感染最常见的毛孢子菌35生长生长7天后天后菌落及显微镜下特征菌落及显微镜下特征阿萨
20、希毛孢子菌：l菌落：SDA上生长速度中等，表面干燥，可见泡状突起，似乎有白色、粉状的覆盖物，边缘有宽而深的裂隙。l镜下：芽生孢子，无侧生分生孢子，关节孢子呈桶形，玻片培养可见附着孢。皮毛孢子菌皮毛孢子菌(T.cutaneum)28生长生长7天后，该菌在天后，该菌在35不能生长不能生长菌落及显微镜下特征菌落及显微镜下特征皮毛孢子菌：l菌落：SDA上中等速度生长，圆形，脑回状，闪光，表面无粉状物。边缘有裂隙。l镜下：芽生孢子很多，反复接种，菌丝增多。关节孢子柱状至椭圆形。皮瘤毛孢子菌皮瘤毛孢子菌(T.inkin)3535生长生长7 7天后天后菌落及显微镜下特征菌落及显微镜下特征皮瘤毛孢子菌：l菌落
21、：SDA上菌落白色，粉状，圆形，细小脑回状，在培养过程中常常使培养基裂开。l镜下：无芽生孢子及侧生孢子，关节孢子长圆柱状，玻片培养可见附着孢，在高糖的培养基中可见多个分生孢子，成八叠球样。温度试验温度试验 37C生长阿萨希毛孢子菌（T.asahii）、皮瘤毛孢子菌（T.inkin）、粘液毛孢子菌（T.mucoides)37C不能生长皮肤毛孢子菌(T.cutaneum)可变卵圆形毛孢子菌（T.ovoides)放线菌酮耐受试验放线菌酮耐受试验 0.1%放线菌酮 可耐受阿萨希毛孢子菌（T.asahii）、粘液毛孢子菌（T.mucoides)、卵圆形毛孢子菌（T.ovoides)不能耐受皮肤毛孢子菌(
22、T.cutaneum)可变皮瘤毛孢子菌（T.inkin）应用API 20C AUX进行鉴定，试验菌株中的阿萨希毛孢子菌能准确鉴定到种，但其它毛孢子菌有时与此交叉，需要采用温度试验或测序方法进行再鉴定；生理学试验生理学试验耐药性及抗菌治疗建议耐药性及抗菌治疗建议 关于该菌属的抗真菌药物敏感性研究十分有限，结果也存在差异。体外药物敏感试验证实该菌属大部分菌种对多烯类药物、三唑类药物如伊曲康唑敏感，棘白菌素类抗真菌药物对该菌属无效。应用二性霉素B、氟康唑或是伊曲康唑治疗失败的事件时有报道，目前多主张联合应用上述药物，或是使用新型三唑类药物如伏立康唑等。马拉色菌属马拉色菌属分类分类马拉色菌属主要有7个
23、种：厚皮马拉色菌（M.pachydermatis）糠秕马拉色菌（M.furfur）球形马拉色菌(M.globosa)合轴马拉色菌(M.sympodialis)钝形马拉色菌(M.obtuse)限制马拉色菌(M.restricta)斯洛菲马拉色菌(M.sloofiae)致病性致病性 临床常可引起花斑癣 马拉色菌毛囊炎 深部感染如败血症生物学特性生物学特性 培养条件 该菌具有嗜脂性，除厚皮马拉色菌可以在沙堡氏培养基上生长外，只在含有长链脂肪酸的培养基上生长。菌落在Dixon 培养基和改良花斑癣培养基上生长良好，并且最佳生长温度为34或37。镜镜 检检 KOH或墨水涂片直接光镜下观察，马拉色菌或墨水涂
24、片直接光镜下观察，马拉色菌属的孢子呈成群、厚壁、圆形或卵圆形，直径约属的孢子呈成群、厚壁、圆形或卵圆形，直径约38m，亦可见芽生孢子，为单极出芽，芽颈，亦可见芽生孢子，为单极出芽，芽颈较宽；菌丝粗短、弯曲或弧形，一端较钝。较宽；菌丝粗短、弯曲或弧形，一端较钝。马拉色菌菌种鉴定试验马拉色菌菌种鉴定试验 沙堡培养试验 吐温试验20、40、80 过氧化氢酶试验 形态学鉴定 七叶苷分解试验 聚乙二醇培养基马拉色菌基本形态特征马拉色菌基本形态特征球形马拉色菌球形马拉色菌糠秕马拉色菌糠秕马拉色菌吐温培养基马拉色菌马拉色菌 七叶苷分解试验七叶苷分解试验各菌在七叶苷培养基上32培养3天合轴马拉色菌和钝形马拉色
25、菌可使培养基完全变黑糠秕马拉色菌使培养基上部变黑球形马拉色菌、限制马拉色菌和斯洛菲马拉色菌不能使培养基变色。耐药性耐药性 目前尚未发现明显耐药性报道。双相型真菌双相型真菌Dimorphic fungi双相型真菌双相型真菌37 C 酵母相酵母相27 C 菌丝相菌丝相定义定义 专指那些在组织内或37培养时呈酵母相，于室温中培养时则呈菌丝相的致病真菌 包括申克孢子丝菌、马内菲青霉、荚膜组织胞浆菌、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌和皮炎芽生菌等 有较严格的地域分布（仅申克孢子丝菌此点不突出）对人体致病力较强（有较大的侵袭性），患者不一定在感染前有免疫受损申克孢子丝菌申克孢子丝菌（Sporothrix sch
26、enckii）属于双相型真菌 可引起孢子丝菌病(sporothricosis)世界范围内广泛分布菌落特征菌落特征 在SDA上，25培养，初为乳白色湿润、光滑、膜样菌落，逐渐变成深褐色至黑色，中央凹陷，周边隆起，有放射状皱褶的绒毛样菌落 在BHI上，37培养，可见白色或灰白色酵母样菌落 菌落特征菌落特征菌丝相菌丝相酵母相酵母相显微镜特征显微镜特征菌丝相菌丝相 分生孢子为单细胞性，有两种类型 一种呈无色，球形或梨形，35个簇集排列在分生孢子梗顶端如花朵样 另一种呈黑色，球形或圆锥形，较大，合轴排列于菌丝四周，称为套袖状分生孢子 显微镜特征显微镜特征菌丝相菌丝相显微镜特征显微镜特征酵母相酵母相 可见
27、大小不等的球形或卵圆形酵母细胞 以出芽方式繁殖，细长厚壁的芽胞呈梭形或雪茄烟样，附着在较大的球形或卵圆形酵母细胞上 马内菲青霉马内菲青霉（Penicilium marneffei）属于双相型真菌 可引起马内菲青霉病（penicilliosis marneffei）主要流行区为东南亚，如泰国北部、越南、香港、台湾及中国的南方 目前已成为HIV阳性患者的主要条件致病菌 菌落特征菌落特征 在SDA上，25培养，生长快，初为白色膜样或绒状，逐渐变为黄色至黄绿色绒状，2周后呈灰绿色粉状，能产生可溶性酒红色色素，培养基呈红色 在BHI上，37培养，呈脑回样皱褶的灰白色膜样酵母菌落，无色素产生 菌落特征菌落
28、特征菌丝相菌丝相酵母相酵母相显微镜特征显微镜特征-菌丝相菌丝相 帚状枝分散，双轮生，少数为单轮生，对称或不对称，有27个梗基，梗基上有36个瓶梗，顶端变窄，也可见单个瓶梗 分生孢子呈椭圆形、球形，长而散乱，不成束显微镜特征显微镜特征酵母相酵母相 可见关节孢子，圆形、椭圆形及两端钝圆有横隔的长形酵母细胞荚膜组织胞浆菌荚膜组织胞浆菌（Histoplasma capsulatum）属于双相型真菌有两个变种，即荚膜组织胞浆菌荚膜变种（H.capsulatum var.capsulatum）和荚膜组织胞浆菌杜波变种（H.capsulatum var.duboisii）可引起组织胞浆菌病(histopla
29、smosis)在北美和拉丁美洲的一些特定区域流行 显微镜特征显微镜特征粗球孢子菌粗球孢子菌（Coccidioides.immitis）属于双相型真菌 可引起球孢子菌病（coccidioidomycosis）流行于美国西南部、墨西哥北部、中美洲和南美洲菌落特征菌落特征显微镜特征显微镜特征菌丝相菌丝相 某些菌丝含有柱状关节孢子，厚壁，呈互生状生长 在关节孢子之间可见由残存的菌丝壁形成的胞间连体，具有特征性显微镜特征显微镜特征酵母相酵母相 可见圆形、厚壁，直径1080m的球形体，内充满大量直径25m的内生孢子 当球形体破裂，内生孢子溢出皮炎芽生菌皮炎芽生菌（Blastomyces dermatiti
30、dis）属于双相型真菌 引起皮炎芽生菌病(blastomycosis)流行于美国中部及东南部、俄亥俄州、密西西比河谷以及加拿大部分区域菌落特征菌落特征菌丝相菌丝相酵母相酵母相显微镜特征显微镜特征菌丝相菌丝相酵母相酵母相皮肤癣菌皮肤癣菌定义定义 是一类嗜角质的丝状真菌 可引起毛发、皮肤和甲板的感染，称皮肤癣菌病（dermatophytosis）约有45种，对人类有致病作用的约有30余种 按照菌落特征及大分生孢子的形态可分为3个属，毛癣菌属、小孢子菌属及表皮癣菌属皮肤癣菌直接镜检皮肤癣菌直接镜检头癣病发直接镜检头癣病发直接镜检发外型发外型发内型发内型黄癣黄癣平皿多点培养法平皿多点培养法每个平皿上接
31、种7-10点，每个患者接种两个平皿皮肤癣菌鉴定皮肤癣菌鉴定-孢子形成形态为依据孢子形成形态为依据 小孢子菌属-大分生孢子纺锤形、壁厚、粗糙、多分隔;毛癣菌属-大分生孢子钝头、棍棒状、腊肠状。表皮癣菌属-大分生孢子钝头、分隔少、香蕉样群生;皮肤癣菌鉴定常用培养基皮肤癣菌鉴定常用培养基 沙氏培养基沙氏培养基（SDA）-常规应用常规应用 PDA（马铃薯琼脂）马铃薯琼脂）-皮肤癣菌皮肤癣菌 皮肤癣菌培养基皮肤癣菌培养基（DTM）-皮肤癣菌皮肤癣菌 BCP-MSG _皮肤癣菌皮肤癣菌 毛癣菌属毛癣菌属(trichophyton)这一属的大分生孢子狭而长，呈棍棒状或腊肠状、壁光滑、多分隔（210隔）、头较
32、钝 可侵犯皮肤、毛发和指趾甲，侵犯毛发可引起发内型或发外型感染红色毛癣菌红色毛癣菌菌落特征菌落特征 生长缓慢到中等快速生长 质地毛状，有时粉状 表面呈白色到淡粉色；背面呈典型酒红色，有时褐色、紫色、黄色或甚至无色红色毛癣菌红色毛癣菌显微镜特征显微镜特征 小分生孢子量多到罕见，单细胞，棒形到梨形，沿菌丝孤立或有时集簇 大分生孢子多分隔，铅笔状或香烟状，常缺乏 红色毛癣菌红色毛癣菌生理学特点生理学特点 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）或玉米土温80琼脂（CMA）产生红色色素 BCP-MSG:系I类反应，14天以内pH无改变，局限性生长 蛋白胨脑心浸液琼脂可生长较多的大分生孢子PDABCP-MSG须癣毛癣
33、菌须癣毛癣菌菌落特征菌落特征 中等快速生长 质地毛状到粉状或颗粒状 表面呈白色到乳油色；背面呈黄色、褐色或红褐色须癣毛癣菌须癣毛癣菌显微镜特征显微镜特征 常存在螺旋菌丝 小分生孢子单细胞，圆到梨形，呈蔟状或未成熟的葡萄状，通常数量多 大分生孢子多分隔，呈棒形，壁薄、光滑、孤立，有28隔须癣毛癣菌须癣毛癣菌生理学特点生理学特点 毛发穿孔试验(+)尿素酶试验(+)BCP-MSG系II类反应，710天培养基明显的碱性化（紫色）和非常丰富的生长+小孢子菌属小孢子菌属(microsporum)这一属的大分生孢子较多，呈纺锤形或梭形、壁粗糙、壁厚、多分隔 可侵犯皮肤和毛发，一般不侵犯甲板，侵犯毛发主要引起
34、发外感染，在发外产生大量孢子，呈镶嵌状或链状排列犬小孢子菌犬小孢子菌菌落特征菌落特征 快速生长 质地毛状到羊毛状 表面颜色白到黄色，背面黄到黄桔色，有时苍白色 犬小孢子菌犬小孢子菌显微镜特征显微镜特征 小分生孢子棒形，不常见 大分生孢子数量多，为尖端细的纺锤形，壁厚，粗糙，有棘状突起，47个隔，孢子末端稍现膨大即“帽样肥大”犬小孢子菌犬小孢子菌生理学特点生理学特点 米饭培养基上生长良好，白色菌丝，黄色色素，可促进大小分生孢子的形成 毛发穿孔试验(+)PDA上为黄色色素 BCP-MSG呈III类反应，无pH的改变表皮癣菌属表皮癣菌属菌落特征菌落特征 生长缓慢 菌落开始时平坦，绒毛状至粉末状，以后
35、中心部逐渐形成不规则的皱襞或脑回状沟 表面呈现出带黄绿色至褐绿色色调，背面呈羚羊皮色到褐色表皮癣菌属表皮癣菌属显微镜特征显微镜特征 菌丝分枝、分隔，可见多数球拍状菌丝及厚壁孢子，有时也产生螺旋菌丝 无小分生孢子 大分生孢子丰富，棒形、两端钝园、壁薄、光滑、孤立或成群，形成在菌丝侧壁或顶端，23个一组 曲曲 霉霉 菌属分类菌属分类 曲霉是一类丝状真菌，在自然界中广泛存在。曲霉属的有性阶段属于子囊菌门、不整子囊菌纲、散囊菌目、散囊菌科、散囊菌属、裸孢壳属和萨托菌属；性期仅在部分曲霉有描述。无性阶段属半知菌、丝孢纲、丝孢目、从梗孢科。菌属分类菌属分类 烟曲霉（A.fumigatus）是最常见的致病曲
36、霉，接下来是黄曲霉（A.flavus）和黑曲霉（A.niger）。棒曲霉（A.clavatus）、灰绿曲霉（A.glaucus）、构巢曲霉（A.nidulans）、米曲霉（A.oryzae）、土曲霉（A.terreus）、焦曲霉（A.ustus）、杂色曲霉（A.versicolor）虽然也有报道引起人类致病，但发生率低。致病性致病性 曲霉引起的人类疾病可分为曲霉引起的人类疾病可分为3大类：大类：机会性感染机会性感染 变态反应性曲霉病变态反应性曲霉病 真菌中毒真菌中毒 免疫受损是曲霉机会性感染的最主要因素。免疫受损是曲霉机会性感染的最主要因素。曲霉的菌落形态曲霉的菌落形态 曲霉菌落呈绒毛状或粉状
37、。大多数曲霉的培养基背面无色或淡黄色。构巢曲霉培养基背面可以呈紫红色、橄榄色；杂色曲霉背面则可呈桔黄色、紫红色。三种最常见人类致病性曲霉菌落形态烟曲霉烟曲霉黄曲霉黄曲霉黑曲霉黑曲霉曲霉的主要形态特征曲霉的主要形态特征 菌丝菌丝-分隔、分枝、无色分隔、分枝、无色/淡色淡色/深色深色 足细胞足细胞-有有 分生孢子梗分生孢子梗-分隔分隔/不分隔不分隔,光滑光滑/不光滑不光滑 顶囊顶囊-烧瓶烧瓶/半球半球 产孢结构产孢结构瓶梗瓶梗/瓶梗瓶梗+梗基梗基 分生孢子分生孢子大小、颜色、纹饰大小、颜色、纹饰 其它其它:子囊果、菌核等子囊果、菌核等曲霉的特殊结构曲霉的特殊结构 曲霉的特殊结构包括：闭囊壳（cle
38、istothecia）壳细胞（Hulle cells）粉孢子（aleuriconidia）菌核（sclerotia）烟曲霉烟曲霉黄曲霉黄曲霉黑曲霉黑曲霉三种最常见人类致病性曲霉镜下形态三种最常见人类致病性曲霉镜下形态耐药性耐药性 近年来，耐伊曲康唑的烟曲霉报道增多，而且出现多药物耐药的烟曲霉临床分离株。对两性霉素B耐药的黄曲霉临床分离株也有报道。土曲霉对两性霉素B天然耐药。构巢曲霉对两性霉素B也常常耐药。接合菌接合菌(Zygomycetes)生物学特性及致病性生物学特性及致病性 接合菌的主要特征为无性型在孢子囊内形成不能游动的静孢子，有性型形成接合孢子 接合菌纲中只有毛霉目和虫霉目两个目的部分
39、种可以致病。由毛霉目的菌引起的病称毛霉病（Mucormycosis），毛霉目和虫霉目引起的病合称为接合菌病。毛霉目的分类位置毛霉目的分类位置 真菌界(fungus kingdom)接合菌门(zygomycota)接合菌纲(zygomycetes)毛霉目(mucorales)犁头霉属、根霉属、根 毛霉属、毛霉属与医学关系与医学关系 在毛霉目中已知可引起毛霉病有8科12属24种左右 由毛霉目的菌引起的病称毛霉病，由毛霉目和虫霉目引起的病称接合菌病，亦称藻状菌病毛霉病毛霉病(mucormycosis)概述概述 是由毛霉目中某些菌种引起人类的一种感染性疾病,一般呈急性快速发展,少数为慢性发展。可累及鼻
40、、脑、肺、胃肠道、皮肤等器官，其共同特征是血管壁破坏，血栓形成，周围组织梗塞，产生黑色坏死性损害。大部分病人有严重的基础疾病,如糖尿病、免疫抑制、饥饿、烧伤或其它严重的外伤。诊诊 断断 较困难,特别是内部器官感染,常常是在尸检中发现。毛霉为空气的污染菌,血、尿、脑脊液中罕见病原体生长,血清学试验和直接ELISA 试验缺乏特异性,常规化验更无意义,因此诊断困难。直接镜检标本中和组织病理切片中见到宽大无分隔或极少分隔菌丝,比培养分离更有意义。真菌镜检阴性,不能除外诊断。糖尿病患者,有急性快速播散的鼻窦炎、眶组织蜂窝织炎、支气管炎、支气管或叶的肺炎,应考虑毛霉病的诊断。组织病理组织病理 主要表现为组
41、织梗塞和坏死 病理变化是组织内菌丝侵入大小动脉血管壁，引起血栓形成和组织栓塞和相邻组织坏死。组织反应常为化脓性，但可以显示一些肉芽肿改变。常见水肿和坏死，有中性粒细胞浸润，但在免疫抑制病人则无此浸润或很少。在少数亚急性和慢性患者，呈肉芽肿改变，有多核巨细胞、淋巴细胞和组织细胞。在血管中及其周围有粗大菌丝。无分隔，个别地方偶见分隔，菌丝一般715m宽，分枝呈直角形，壁较薄。组织病理组织病理直接镜检直接镜检 可见粗大的、无分隔的、不规则、宽约3-18um、分枝较少且呈直角的菌丝 在HE染色清晰,PAS和GMS染色不良 发现菌丝是诊断的基础真菌培养真菌培养 毛霉目中的致病菌在许多真菌培养基上快速生长
42、 对放线菌酮敏感，故培养基内不用此药，可加抗生素抑制细菌生长。活体标本不要研磨以免损坏菌丝，而妨碍生长。置于2530培养，根据镜下特征鉴定菌种。用于毛霉鉴定的培养基主要是PDA和SMA（毛霉合成培养基）毛霉的结构特征毛霉的结构特征虫霉目虫霉目(Entomophthorales)显微镜特征显微镜特征 菌丝宽，有或无分隔。孢子囊梗仅仅从生菌丝宽，有或无分隔。孢子囊梗仅仅从生殖菌丝分化而来，单孢子小孢子囊，弹射样，圆形到殖菌丝分化而来，单孢子小孢子囊，弹射样，圆形到梨形，有一个明显的乳头，小孢子囊表面光滑或绒毛，梨形，有一个明显的乳头，小孢子囊表面光滑或绒毛，即有小的隆凸覆盖。一些小孢子囊芽生，产生
43、许多次即有小的隆凸覆盖。一些小孢子囊芽生，产生许多次生小孢子囊，有时在其周围形成一个小孢子囊冠。生小孢子囊，有时在其周围形成一个小孢子囊冠。耳霉属耳霉属镰刀菌属镰刀菌属Fusarium spp.分类分类 镰刀菌属于有丝分裂孢子真菌、丝孢纲、丝孢目、瘤座孢科。有些种的有性期已被发现，属于子囊菌门、核菌纲、肉座菌目、丛赤壳属、丽赤壳属、赤霉属和隐壳霉属。主要的致病种：主要的致病种：茄病镰刀菌、串珠镰刀菌、层生镰刀菌、茄病镰刀菌、串珠镰刀菌、层生镰刀菌、尖孢镰刀菌、半裸镰刀菌、胶孢镰刀菌、尖孢镰刀菌、半裸镰刀菌、胶孢镰刀菌、单隔镰刀菌、禾谷镰刀菌、梨孢镰刀菌、单隔镰刀菌、禾谷镰刀菌、梨孢镰刀菌、拟枝
44、孢镰刀菌、厚垣孢镰刀菌、雪腐镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、厚垣孢镰刀菌、雪腐镰刀菌、本色镰刀菌、燕麦镰刀菌、木贼镰刀菌、本色镰刀菌、燕麦镰刀菌、木贼镰刀菌、接骨木镰刀菌等。接骨木镰刀菌等。临床意义临床意义 *丝状真菌*种类繁多*在自然界分布广泛，存在于土壤中、植物和农作物上*属于条件致病菌 *可引起眼内炎、角膜炎、溃疡、鼻窦炎、可引起眼内炎、角膜炎、溃疡、鼻窦炎、甲真菌病、皮肤感染、过敏、龟头炎、足菌甲真菌病、皮肤感染、过敏、龟头炎、足菌 肿、关节炎、肺炎、心内膜炎、脑脓肿、肺肿、关节炎、肺炎、心内膜炎、脑脓肿、肺 部感染、真菌血症等。部感染、真菌血症等。*某些种还与大骨节病、食管癌、克山病有关某些种
45、还与大骨节病、食管癌、克山病有关 *有些种还能产生毒素。有些种还能产生毒素。三、生物学特性三、生物学特性病原学检查要点病原学检查要点 镰刀菌的主要鉴别依据：1.菌落的生长速度，形态，颜色；菌落的生长速度，形态，颜色；2.大分生孢子的形态，大小，分隔多少；大分生孢子的形态，大小，分隔多少；3.小分生孢子的有无及形状，着生方式；小分生孢子的有无及形状，着生方式；4.厚壁孢子的有无及多少；厚壁孢子的有无及多少；5.分生孢子梗的长短及瓶梗类型。分生孢子梗的长短及瓶梗类型。茄病镰刀菌茄病镰刀菌Fusarium solani，是临床上最为常见，是临床上最为常见的致病性镰刀菌之一。的致病性镰刀菌之一。耐药性
46、及抗菌治疗的建议耐药性及抗菌治疗的建议 多数抗真菌药物如两性霉素B、伊曲康唑、特比萘芬等对镰刀菌均有较高的MIC值。匹马霉素局部用药对于镰刀菌角膜炎有一定疗效。匹马霉素局部用药对于镰刀菌角膜炎有一定疗效。最近报道伏立康唑等新型抗真菌药物对该菌有较好的最近报道伏立康唑等新型抗真菌药物对该菌有较好的抑制活性，应在临床积累经验。抑制活性，应在临床积累经验。赛多孢霉属赛多孢霉属临床意义临床意义 可引起免疫受损患者感染如：白血病、可引起免疫受损患者感染如：白血病、器官移植或慢性肉芽肿病等，包括肺、鼻器官移植或慢性肉芽肿病等，包括肺、鼻窦、耳、眼、中枢神经系统、骨、关节、窦、耳、眼、中枢神经系统、骨、关节
47、、皮肤、皮下组织及播散性感染，重者危及皮肤、皮下组织及播散性感染，重者危及生命。生命。生物学特性生物学特性 尖端赛多孢子菌尖端赛多孢子菌 是波氏假阿利什霉是波氏假阿利什霉(Pseudallescheria boydii)的无性期。在美国及欧洲是真菌足的无性期。在美国及欧洲是真菌足菌肿的主要病原菌。波氏假阿利什霉世界菌肿的主要病原菌。波氏假阿利什霉世界性分布，在温带、亚热带地区可从土壤、性分布，在温带、亚热带地区可从土壤、粪肥、污水中分离出。粪肥、污水中分离出。菌落形态：菌落形态：在改良在改良SDASDA培养培养710710天波氏假阿利什天波氏假阿利什霉霉/尖端赛多孢子菌表现为白色，绒毛状，尖端
48、赛多孢子菌表现为白色，绒毛状，迅速布满培养皿，呈棕灰至黑色，有时表迅速布满培养皿，呈棕灰至黑色，有时表面有类似喷洒胡椒粉样黑灰至黑色斑点。面有类似喷洒胡椒粉样黑灰至黑色斑点。闭囊壳代表波氏假阿利什霉有性期，最常闭囊壳代表波氏假阿利什霉有性期，最常见于菌落外周。见于菌落外周。五、耐药性及抗菌治疗的建议五、耐药性及抗菌治疗的建议 体外试验表明对伏立康唑敏感，而对体外试验表明对伏立康唑敏感，而对伊曲康唑、氟康唑、两性霉素伊曲康唑、氟康唑、两性霉素B均不敏感。均不敏感。临床经验尚有待积累临床经验尚有待积累。致病性暗色真菌致病性暗色真菌暗色真菌(着色真菌,dematiaceous fungi)一大组细一
49、大组细胞壁（孢胞壁（孢子子/菌丝）菌丝）含有黑色含有黑色素样颜色素样颜色的真菌。的真菌。暗色真菌及其所致的疾病暗色真菌及其所致的疾病 掌黑癣（tinea nigra）黑色毛结节菌病（black piedra）角膜真菌病（keratomycosis）甲真菌病（onychomycosis）皮肤真菌病(dermatomycosis)足菌肿（mycetoma）着色芽生菌病（chromoblastomycosis）暗色丝孢霉病（phaeohyphomycosis）着色芽生菌病着色芽生菌病疣状增殖性损害疣状增殖性损害组织中的硬壳小体组织中的硬壳小体（sclerotic body）涂片中的硬壳小体涂片中的硬
50、壳小体（sclerotic body）着色芽生菌病的致病菌着色芽生菌病的致病菌 卡氏枝孢霉(Cladosporium carrionii)裴氏着色霉(Fonsecaea pedrosoi)紧密着色霉(Fonsecaea compacta)疣状瓶霉(Phialophora verrucosa)播水喙枝孢霉(Rhinocladiella aquarspersa)暗色丝孢霉病暗色丝孢霉病概念概念 一大组暗色真菌引起的人类和低等动物的感染。Ajello 1974提出，1980修订。组织中可见暗色酵母样细胞、假菌丝样体、菌丝等成分，非硬壳细胞。与chromomycosis和chromoblastomyc
