1、1第1页，共31页。2第2页，共31页。3第3页，共31页。4第4页，共31页。5第5页，共31页。6第6页，共31页。7第7页，共31页。(NH4)2SO4+2NaOH2H2O+Na2SO4+2NH3 (3)硫酸铜为催化剂（促进有机含氮化合物分解完全），硫酸铜为催化剂（促进有机含氮化合物分解完全），K K2 2SOSO4 4以提高溶液的沸点（以提高溶液的沸点（290 290 o oC C提高到提高到400 400 o oC C）。收集氨可用）。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。硼酸溶液，滴定则用强酸。8第8页，共31页。9第9页，共31页。10第10页，共31页。11第11页，共31页。12
2、第12页，共31页。13第13页，共31页。14第14页，共31页。15第15页，共31页。16第16页，共31页。17第17页，共31页。18第18页，共31页。19第19页，共31页。20第20页，共31页。21第21页，共31页。22第22页，共31页。23第23页，共31页。24第24页，共31页。25第25页，共31页。26第26页，共31页。27第27页，共31页。28A第28页，共31页。29第29页，共31页。30第30页，共31页。方法方法灵敏度灵敏度时间时间原理原理干扰物质干扰物质说明说明凯氏定氮法凯氏定氮法（Kjedahl法）法）灵敏度低，适用灵敏度低，适用于于0.2 1
3、.0mg氮，氮，误差为误差为 2费时费时810小小时时将蛋白氮转化为氨，将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费准确测定；干扰少；费时太长时太长紫外吸收法紫外吸收法较为灵敏较为灵敏50100m mg，比，比色杯的最小测量色杯的最小测量体积为体积为0.1ml快速快速510分分钟钟蛋白质中的酪氨酸蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在和色氨酸残基在280nm处的光吸收处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；各种各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸核苷酸用于层析柱流出液的检用于层析柱流出
4、液的检测；核酸的吸收可以校测；核酸的吸收可以校正；不消耗样品，测定正；不消耗样品，测定后样品仍能回收利用后样品仍能回收利用双缩脲法双缩脲法（Biuret法）法）灵敏度低灵敏度低120mg中速中速2030分分钟钟多肽键碱性多肽键碱性Cu2生成紫色络合物生成紫色络合物硫酸铵；硫酸铵；Tris缓冲液；缓冲液；某些氨基酸某些氨基酸用于快速测定，但不太用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色灵敏；不同蛋白质显色相似相似Folin酚试剂法酚试剂法（Lowry法）法）灵敏度高灵敏度高15m mg慢速慢速4060分分钟钟双缩脲反应；磷钼双缩脲反应；磷钼酸磷钨酸试剂被酸磷钨酸试剂被Tyr和和Phe还原还原硫酸铵
5、；硫酸铵；Tris缓冲液；缓冲液；甘氨酸；各种硫醇甘氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化同蛋白质变化;标准曲线标准曲线不是严格的直线形式，不是严格的直线形式，且专一性差且专一性差考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法(Bradford法法)灵敏度更高灵敏度更高15m mg,最小测量最小测量体积体积0.1ml快速快速515分分钟钟考马斯亮蓝染料与考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其蛋白质结合时，其l lmax由由465nm变为变为595nm强碱性缓冲液；强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS较好的方法；干扰物质较好的方法；干扰物质少；颜色稳定；少；颜色稳定；颜色深颜色深浅随不同蛋白质变化浅随不同蛋白质变化;标标准曲线有轻微的非线性准曲线有轻微的非线性BCA法法灵敏度非常高灵敏度非常高20200m mg,微量微量BCA为为 0.510m mg较快速较快速40分钟内分钟内在碱性环境下蛋白在碱性环境下蛋白质与质与Cu2+络合并将络合并将Cu2+还原成还原成Cu1+，与，与BCA形成深紫红色形成深紫红色复合物复合物螯合剂；略高浓度的还螯合剂；略高浓度的还原剂原剂抗干扰能力强，抗干扰能力强，蛋白不可逆的变性蛋白不可逆的变性31第31页，共31页。
