1、自身抗体检测及应用自身抗体检测及应用彭彭 晓晓 东东第1页，共59页。自身免疫自身免疫(autoimmunity)机体免疫系统针对自身成分发生免疫应机体免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象。象。自身抗体自身抗体(autoantibody)针对自身组织器官、细胞及细胞内成分针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体。的抗体。概概 念念第2页，共59页。自身免疫性疾病自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)因自身免疫反应导致组织器官损伤或功因自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。能障碍所致疾病。第
2、3页，共59页。自身抗体的特性自身抗体的特性自身免疫性疾病的重要标志自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤参与免疫病理性损伤第4页，共59页。检测自身抗体常用的方法检测自身抗体常用的方法间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIFIIF）ELISAELISA免疫印迹法免疫印迹法（Western-blotWestern-blot）酶免疫斑点法酶免疫斑点法第5页，共59页。常检测的自身抗体常检测的自身抗体类风湿因子（类风湿因子（RFRF）抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）抗可提取性核抗原抗体（抗可提取性核
3、抗原抗体（ENAENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAANCA）抗角蛋白抗体（抗角蛋白抗体（AKAAKA）抗心磷脂抗体（抗心磷脂抗体（ACAACA）第6页，共59页。类风湿因子类风湿因子（rheumatoid factor,RF）抗变性抗变性IgG Fc的自身抗体，主要类型是的自身抗体，主要类型是IgM型型 致病机理：致病机理：RF与体内变性与体内变性IgG结合形成免疫复合物，激活结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。第7页，共
4、59页。检测方法：检测方法：1.胶乳颗粒凝集实验胶乳颗粒凝集实验 定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF 2.速率散射比浊法（速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定定量、准确、快速，测定IgM-RF 3.ELISA 定量、准确，可测定不同类型的定量、准确，可测定不同类型的RF第8页，共59页。临床应用：临床应用：（1）RF在在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。患者中均可被检出。疾病疾病阳性率阳性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25第9页，共5
5、9页。（2）RF滴度与滴度与RA患者临床表现呈正相关，患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍并伴有严重关节功能障碍 时通常提示患者预后不良。时通常提示患者预后不良。（3）IgG-RF与与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节患者的滑膜炎、血管炎和关节 症状密切相关，常伴随症状密切相关，常伴随IgM-RF同时出现，同时出现，在正常人及非在正常人及非RA患者中很难检出。患者中很难检出。（4）IgA-RF与与RA患者关节症状的严重程度及骨患者关节症状的严重程度及骨 质破坏有显著相关性。质破坏有显著相关性。临床应用：临床应用：第10页，共59页。抗核抗体抗核抗体（ant
6、inuclear antibody，ANA）以真核细胞（如以真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。的总称。第11页，共59页。分类和命名分类和命名1.以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗抗Sa 抗体等；抗体等；2.以相关疾病命名，如抗以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗抗SS-A、抗抗SS-B 抗体等；抗体等；3.以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆
7、抗体等；4.以抗原的化学性质进行分类命名，如抗以抗原的化学性质进行分类命名，如抗DNA、抗抗RNP、抗组蛋白抗体等。抗组蛋白抗体等。第12页，共59页。抗核抗体检测方法抗核抗体检测方法间接免疫荧光法间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence,IIF）酶免疫斑点法酶免疫斑点法 ELISA 免疫印迹法免疫印迹法 （Western-blot）第13页，共59页。间接免疫荧光法间接免疫荧光法HEp-2细胞细胞肝组织切片肝组织切片荧光标记抗体荧光标记抗体病人血清（待检抗体）病人血清（待检抗体）第14页，共59页。细胞核细胞核 细胞浆细胞浆 细胞骨架细胞骨架 细胞周期细胞周期
8、均质型均质型 核糖体型核糖体型 肌蛋白型肌蛋白型 中心体型中心体型 斑点型斑点型 线粒体型线粒体型 波形纤维蛋白型波形纤维蛋白型 纺缍体型纺缍体型 核仁型核仁型 高尔基体型高尔基体型 细胞角蛋白型细胞角蛋白型 纺缍丝型纺缍丝型 着丝点型着丝点型 溶酶体型溶酶体型 原肌球蛋白型原肌球蛋白型 中间体型中间体型 周边型周边型 颗粒型颗粒型 纽带蛋白型纽带蛋白型 PCNA型型 核点型核点型(dots)结蛋白结蛋白(桥粒桥粒)型型 IIFIIF检测检测ANAANA荧光染色模型荧光染色模型第15页，共59页。斑点型（斑点型（nRNP/SmnRNP/Sm）高滴度的抗高滴度的抗U1-nRNP为为MCTD的特的
9、特征。征。抗抗SmSm抗体对抗体对SLESLE具有高度特异性。具有高度特异性。斑点型（斑点型（SSA/SSBSSA/SSB）抗抗SSA最常出现于最常出现于SS及新生儿红斑及新生儿红斑狼疮狼疮（100%）。）。抗抗SSB抗体几乎仅见于女抗体几乎仅见于女性，可出现于性，可出现于SS和和SLE。第16页，共59页。均质型均质型 抗抗dsDNA抗体抗体 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体(histone)抗抗ssDNA抗体抗体 抗核小体抗体抗核小体抗体(nucleosome)第17页，共59页。抗抗dsDNA抗体抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。特异性抗体，与病情活动度相关。第18页，共59页。周边型周边
10、型 可见于可见于胶原病、胶原病、PBC、CAH等患者等患者 第19页，共59页。核点型（核点型（DOTSDOTS）见于见于SLE、SS、PBC、风湿病。风湿病。抗着丝点型抗着丝点型 PSS局限型标志抗体。局限型标志抗体。第20页，共59页。抗原纤维蛋白型抗原纤维蛋白型 仅见于仅见于5%-10%的的PSS，男性高于女性。，男性高于女性。抗抗RNARNA多聚酶多聚酶型抗体型抗体 仅见于硬皮病患者，阳性率为仅见于硬皮病患者，阳性率为4%。第21页，共59页。抗抗PM-SclPM-Scl（PM-1PM-1）抗体抗体 见于重叠综合征（多发性肌炎见于重叠综合征（多发性肌炎PM/皮肌炎皮肌炎 DM/弥漫性弥
11、漫性PSS）第22页，共59页。抗抗Scl-70Scl-70型型 PSS 弥漫型的标志抗体。弥漫型的标志抗体。第23页，共59页。增殖细胞核抗原增殖细胞核抗原型型（PCNAPCNA）SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。第24页，共59页。抗核糖体抗核糖体P P蛋白蛋白（rib-Prib-P）抗体抗体抗线粒体抗体抗线粒体抗体（AMAAMA）SLE标志抗体标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体第25页，共59页。抗抗Jo-1Jo-1抗体抗体抗高尔基体抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（多发性肌炎（PM）标志抗体标志抗体偶
12、见于偶见于SLE和和SS第26页，共59页。抗肌动蛋白抗体抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎见于自身免疫性慢性活动型肝炎 第27页，共59页。抗抗ENAENA抗体谱抗体谱ENA(extractable nuclear antigen)：可提取核抗原的总称可提取核抗原的总称临床常检测的抗临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：抗体谱主要包括：抗抗Sm 抗抗U1-RNP 抗抗SSA 抗抗SSB 抗抗Jo-1 抗抗Scl-70 抗抗rib-P蛋白蛋白第28页，共59页。检测方法检测方法 双向免疫扩散（双向免疫扩散（ID）对流免疫电泳（对流免疫电泳（CIE）免疫印迹法（免疫印迹法（Western-
13、blot）ELISA 酶免疫斑点法酶免疫斑点法 第29页，共59页。免疫印迹法免疫印迹法 SDS-PAGE电泳电泳转移电泳转移电泳酶免疫检测酶免疫检测第30页，共59页。是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。诊断与鉴别诊断具有重要意义。抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies,ANCA）第3
14、1页，共59页。荧光染色型荧光染色型 靶抗原靶抗原 胞浆型胞浆型(cANCA)蛋白酶蛋白酶3（PR3）杀菌杀菌/通透性增高蛋白（通透性增高蛋白（BPI）核周型核周型(pANCA)髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶（白细胞弹性蛋白酶（HLE）非典型型非典型型(aANCA)兼有两种特性兼有两种特性 ANCAANCA荧光染色型与靶抗原荧光染色型与靶抗原第32页，共59页。周边型抗中性粒细胞胞浆抗体周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCApANCA）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠
15、炎和克罗恩病）第33页，共59页。胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)(cANCA)主要见于主要见于Wegeners肉芽肿及微小多动脉炎肉芽肿及微小多动脉炎第34页，共59页。ANCAANCA临床应用临床应用 髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新与显微镜下多血管炎、坏死性新 月体型肾小球肾炎月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关过敏性肉芽肿性血管炎相关、杀菌杀菌/通透性增高蛋白（通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病主要见于肺部炎症性疾病 并与长并与长 期慢性绿脓杆菌感染有一定关系期慢性绿脓杆菌感染有一定关系 蛋白酶蛋白酶3
16、（PR3）与与Wegeners肉芽肿（肉芽肿（WG）密切相关。密切相关。仅仅cANCA诊断诊断WG的特异性大于的特异性大于90%，联合，联合PR3 可超过可超过95%，活动期几乎活动期几乎100%阳性。阳性。组织蛋白酶组织蛋白酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白乳铁蛋白(LF)可可见于见于SLE、IBD、PBC、PSC等等第35页，共59页。AKA主要见于主要见于RA，阳性率阳性率36%59%，特异性，特异性95%99%，其出现可以先，其出现可以先于临床表现；高滴度可预于临床表现；高滴度可预示较严重的示较严重的RA类型。类型。抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体（AKAA
17、KA）第36页，共59页。主要见于溃疡性结肠炎主要见于溃疡性结肠炎，部分克罗恩病患者也可检出。部分克罗恩病患者也可检出。与与ANCA同时检测，对溃疡性结肠炎诊断的准确性可达同时检测，对溃疡性结肠炎诊断的准确性可达72%。抗小肠杯状细胞抗体抗小肠杯状细胞抗体（AGCAAGCA）第37页，共59页。新患新患1型糖尿病时，该抗体的发生率在型糖尿病时，该抗体的发生率在90%以上。以上。2型糖尿病患者若出现该抗体，则以后可能型糖尿病患者若出现该抗体，则以后可能会发生会发生1型糖尿病。型糖尿病。抗胰岛细胞抗体抗胰岛细胞抗体（AICAAICA）第38页，共59页。ASMA为自身免疫性肝炎为自身免疫性肝炎型的
18、血清学标志抗体型的血清学标志抗体，阳性率大于，阳性率大于90%，高滴度对疾病诊断特异性几乎达到，高滴度对疾病诊断特异性几乎达到100%。抗平滑肌抗体抗平滑肌抗体（ASMAASMA）第39页，共59页。LKM-1 是自身免疫性肝炎是自身免疫性肝炎型的血清学标志型的血清学标志抗肝肾微粒体抗体抗肝肾微粒体抗体（LKMLKM）第40页，共59页。自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎型的血清标志抗体，大约有型的血清标志抗体，大约有25%的自身免疫性肝炎仅该项抗体阳性。的自身免疫性肝炎仅该项抗体阳性。抗可溶性肝抗原抗体抗可溶性肝抗原抗体（SLASLA）第41页，共59页。一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，一
19、组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括主要包括抗心磷脂抗体抗心磷脂抗体、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰丝氨酸抗体。丝氨酸抗体。靶抗原：靶抗原：血浆中的磷脂结合蛋白，最常见血浆中的磷脂结合蛋白，最常见的有的有22糖蛋白糖蛋白、凝血酶原或这些蛋白与心磷脂、凝血酶原或这些蛋白与心磷脂的复合物，特点是都含有磷脂基团。的复合物，特点是都含有磷脂基团。抗磷脂抗体抗磷脂抗体（anti-phospholipid antibody,APLAanti-phospholipid antibody,APLA）第42页，共59页。致病机理：致病机理：抗磷脂抗体与内皮细胞或血小板膜上抗磷脂抗体与内
20、皮细胞或血小板膜上的磷脂结合，可破坏细胞功能，使前列环素释放减少的磷脂结合，可破坏细胞功能，使前列环素释放减少、血小板粘附凝集功能增强，构成血液的高凝状态、血小板粘附凝集功能增强，构成血液的高凝状态、引起血栓形成；与红细胞膜上的磷脂结合，在补体参引起血栓形成；与红细胞膜上的磷脂结合，在补体参与下，可致红细胞膜破裂，发生溶血性贫血。与下，可致红细胞膜破裂，发生溶血性贫血。类型：类型：IgG、A、M型，型，IgG型最常见，其次是型最常见，其次是IgM型，型，IgA型与自身免疫性疾病的关系较小。型与自身免疫性疾病的关系较小。抗磷脂抗体抗磷脂抗体（APLAAPLA）第43页，共59页。抗心磷脂抗体抗心
21、磷脂抗体（ACLAACLA）检测方法：检测方法：常用常用ELISA临床应用：临床应用：在在SLE中总阳性检出率达中总阳性检出率达70%80%，与病情活动，与病情活动 显著显著相关；相关；ACA阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。中枢神经精神系统损伤的几率明显。在在RA患者阳性率为患者阳性率为33%49%。ACA阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性第44页，共59页。部分自身免疫性疾病中部分自身免疫性疾病中 自身抗体的
22、检出率自身抗体的检出率第45页，共59页。自身免疫性疾病自身免疫性疾病ANAANA阳性率（阳性率（%）SLE80100MCTD95100RA2040PSS8595PM/DM3050SS7080溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎26慢性活动性肝炎慢性活动性肝炎3040其它风湿病其它风湿病2050ANAANA在自身免疫性疾病中的检出率在自身免疫性疾病中的检出率 第46页，共59页。疾病类型疾病类型 抗原类型抗原类型阳性率阳性率%SLE dsDNA 3090 U1-nRNP1540 Sm530 SSA2060 SSB1020 PCNA3 核糖体核糖体（rib）520 心磷脂心磷脂2040 新生儿新生儿LE S
23、SA 100药物诱导药物诱导LE 组蛋白组蛋白 95 单链单链DNA80系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮(SLE)第47页，共59页。抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%)U1-nRNP 95100 单链单链DNA 2050混合性结缔组织病（混合性结缔组织病（MCTDMCTD）第48页，共59页。抗原类型抗原类型 阳性率（阳性率（%）IgM-RF 6590抗角蛋白抗体（抗角蛋白抗体（AKA）3659 单链单链DNA 8 组蛋白组蛋白 少见少见类风湿性关节炎类风湿性关节炎（RARA）第49页，共59页。抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）SSA 4095 SSB 4095 ssDNA 3060 唾液腺
24、流出道唾液腺流出道 4060 RF 6080原发性干燥综合征（原发性干燥综合征（SSSS）第50页，共59页。PSSPSS类型类型相对应的抗原相对应的抗原 阳性率（阳性率（%）弥漫型弥漫型 原纤维蛋白原纤维蛋白 510PM-Scl（PM-1）3Scl-702575RNA多聚酶多聚酶4局限型局限型 着丝点着丝点 8095进行性系统性硬化症进行性系统性硬化症（PSSPSS）第51页，共59页。抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）PM-Scl（PM-1）8 Jo-1 2535 Mi-1 10 Mi-2 5 Ku（重叠综合征）重叠综合征）3055 单链单链DNA 4050 PL-7 4 PL-12 3
25、多发性肌炎多发性肌炎/皮肌炎皮肌炎(PM/DM)PM/DM)第52页，共59页。自身免疫性慢性活动性肝炎自身免疫性慢性活动性肝炎(AIH)抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）肌动蛋白（肌动蛋白（Actin）4090 ANA(板层素，板层素，SSA等等)3040 肝肾微粒体（肝肾微粒体（LKM-1）7可溶性肝抗原（可溶性肝抗原（SLA）100 线粒体线粒体2型（型（AMA-M2）510 线粒体线粒体9型（型（AMA-M9）10第53页，共59页。原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化(PBC)抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）线粒体线粒体2型（型（M2）95线粒体线粒体4型（型（M4）55线粒体
26、线粒体8型（型（M8）55线粒体线粒体9型（型（M9）3585核点核点 30板层素板层素 2第54页，共59页。怀疑怀疑SLE，怎么办？怎么办？问题问题第55页，共59页。常规检测程序常规检测程序ANA筛选筛选 ENA抗体谱抗体谱抗胞浆型抗体鉴定抗胞浆型抗体鉴定其它自身抗体其它自身抗体免疫球蛋白、免疫球蛋白、补体等检测补体等检测+第56页，共59页。（）（）95%99%可排除可排除SLE SLE治疗缓解治疗缓解 病情特重（大量病情特重（大量IC沉积消耗抗体）沉积消耗抗体）（）（）低滴度低滴度 常见于常见于RA等其它自身免疫性疾病等其它自身免疫性疾病高滴度可作为诊断高滴度可作为诊断SLE的依据的
27、依据ENA抗体谱检测抗体谱检测 （）（）不能排除不能排除抗抗dsDNA、Sm、rib抗体抗体 （）（）可帮助诊断可帮助诊断ANA初筛初筛第57页，共59页。第58页，共59页。标志抗体标志抗体相关疾病相关疾病dsDNASLESmSLESSBSS着丝点抗体着丝点抗体PSS（局限型）局限型）Scl-70抗体抗体PSS（弥漫型）弥漫型）AKARAJo-1抗体抗体PM/DM高滴度高滴度RNP抗体抗体MCTD肝肾微粒体抗体肝肾微粒体抗体（LKM-1）型自身免疫性肝炎型自身免疫性肝炎平滑肌抗体（平滑肌抗体（SMA）型自身免疫性肝炎型自身免疫性肝炎AMA（M2）PBC常见自身免疫性疾病的标志抗体常见自身免疫性疾病的标志抗体第59页，共59页。
